Summary
هنا نظهر بروتوكولا لتوحيد إجراءات أخذ العينات نموذج الخنزير الراسخة لاحتشاء عضلة القلب الحاد من أجل زيادة قيمتها متعدية الجنسيات في فهم الفسيولوجيا المرضية لإصابة احتشاء عضلة القلب الاسكيمية/الاكسجينيه واختبار المرشحين المخدرات الرواية.
Abstract
احتشاء عضلة القلب الاسكيمية ضخه (أنا/R) يساهم الإصابة إلى النصف تقريبا من منطقة نخرية بعد احتشاء عضلة القلب. حتى الآن هناك لا المخدرات المعتمدة لمنع أو الحد من احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R. الدراسة وفهم الآليات الفيزيولوجية المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R أمر ضروري لتطوير علاجات ناجحة. التجارب على الحيوانات الكبيرة خطوة هامة في أساليب متعدية الجنسيات. أنشئ نموذج الخنزير من احتشاء عضلة القلب الحاد والموصوفة بأنفسنا والآخرين. نحن تهدف إلى زيادة تحسين قيمة النموذج بالتركيز بالتفصيل على تقنيات أخذ العينات لاستخدامها في التجارب المستقبلية. وعلاوة على ذلك، نؤكد على خطوات صغيرة ولكن الهامة التي يمكن أن تؤثر في نوعية النتائج النهائية. لمحاكاة الحالة السريرية من احتشاء عضلة القلب أنا/R الإصابة، قسطرة تدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI) تم إدراجه في اليسار الأمامي تنازلي الشريان التاجي (الفتى) من خنزير أنيسثيتيزيد. ° ° ° هذا نموذج يقلد احتشاء عضلة القلب الحاد والعلاج PCI في البشر مع إمكانية تحديد المنطقة في دقة المخاطر فضلا عن نخرية-والأنسجة الدماغية قابلة للحياة. هنا استخدمت النموذج للتحقيق في تأثير مثبط تربين الببتيد من فكسييا. يمكن أيضا تعديل النموذج للسماح بوقت أطول لضخه لدراسة آثار لاحقة من احتشاء عضلة القلب.
Introduction
مرض القلب الاقفاري، خاصة الحادة احتشاء عضلة القلب (ميتشيغن)، هو السبب الرئيسي للوفاة في البلدان المتقدمة النمو 1. اليوم، هي المعالجة المعيارية لمي التدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI)، معاملة قثطرة البالون. واحدة من العوامل الحاسمة التي تؤثر على نوعية الحياة والتشخيص للمرضى بعد المعالجة PCI مي الحاد هو حجم احتشاء. الحد الحجم يمكن أن يكون لها تأثير كبير على المريض البقاء على قيد الحياة والتشخيص 2. احتشاء عضلة القلب الاسكيمية/ضخه (أنا/R) إصابة تأثيراً كبيرا على حجم احتشاء ذلك هو أحد الأهداف الرئيسية في أبحاث القلب والأوعية الدموية لمنع أو الحد من احتشاء عضلة القلب أنا/R الإصابة 3. آليات الضبط أنا/R الإصابة لا تزال قيد التحقيق 4. تفعيل الشلالات البلازما وخلايا بطانية هي السمات المميزة لانا/R إصابة 5. تفعيل نظام التخثر هو وضوح تشارك 6،7. في الآونة الأخيرة، وقد تبين دور فكسيي، باعتباره ببتيد المنبع أوائل المشاركين في مرحلة الاتصال تنشيط تتالي تخثر الدم، في فكسيي ضرب نموذج الفئران من دماغي أنا/R إصابة 8. التحقق من هذه النتائج في نموذج الخنزير خطوة هامة في الترجمة السريرية. ولذلك، نحن تختبره مثبط فكسييا (80 كاتشين مبطلات) تربين رواية في سياق احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R في دراسة تجريبية.
النماذج الحيوانية، والتي تحاكي الحالة السريرية للعلاجات MI و PCI الحادة، ضرورية لتحسين فهمنا الفسيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R واختبار خيارات العلاج الجديدة. الخنازير وتمثل نموذجا حيوانية جيدة السريرية احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R. وهذا ليس فقط لأن قلوبهم متشابهة جداً إلى قلوب البشر فيما يتعلق بالتشريح وتداول التاجية، ولكنها أيضا تظهر الاستجابات الفيزيولوجية المرضية مشابهة لاحتشاء عضلة القلب الاسكيمية وضخه 9،من10. نماذج أخرى مثل الفئران والجرذان لا تفي بهذه المعايير وتظهر اختلافات كبيرة إذا ما قورنت بقلوب البشر 11،12، بينما الكلاب على سبيل المثال، لديك العديد من الأوعية التاجية الجانبية أكثر مقارنة بالبشر 13.
نموذج الخنزير احتشاء عضلة القلب الحاد قد استخدمت على نطاق واسع في أبحاث القلب والأوعية الدموية للتحقيق بما فيها مرض القلب الاقفاري احتشاء عضلة القلب أنا/R إصابة 14،15،،من1617. هذا الأخير هو شرط تحريضية، بسبب التقليل من التي تتصل التفاعل ستيرنوتومي أو ثوراكوتومي المستخدمة في جراحة الصدر المفتوحة أمر ضروري. الطراز الصدر مغلقة باستخدام إعداد الأوعية ج-ذراع سريرية ويتغلب على هذه المشكلة. وعلاوة على ذلك، واحد من أهم النقاط أن لدينا بروتوكول ينص تمييز دقيق بين الدماغية (منطقة الخطر، AAR) والمناطق غير الدماغية البطين الأيسر (منطقة ليست في خطر، ANR) حيث يمكن لحجم احتشاء (الأنسجة الدماغية نخرية، أحمق) ستحدد بدقة. هدفنا لهذه الورقة أن تحدد بوضوح منهجية استنساخه من الخنزير احتشاء عضلة القلب أنا/نموذج الإصابة R، لا سيما فيما يتعلق بأخذ عينات أنسجة عضلة القلب، التي تسمح بإجراء تحليل أكثر دقة للآليات الجزيئية لانا/الإصابة R، الحصول على صورة أوضح عن آثار العلاج بالعقاقير الجديدة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1-الحيوانات:
جميع الحيوانات يعاملون وفقا للمبادئ التوجيهية للقوانين الوطنية السويسرية. تمت الموافقة على الدراسة باللجنة التجارب الحيوانية المحلية بكانتون برن (إذن لا. أن يكون 25/16).
استخدام الخنازير بيضاء كبيرة لكلا الجنسين (~ 30 ± 5 كغم). تقسيم الحيوانات عمياء إلى مجموعتين، مجموعة واحدة تلقي مثبط (80 كاتشين مبطلات) تربين من فكسييا أو العلاج للاختيار والآخر عنصر تحكم غير نشط.
2-الجراحة (الشكل 1)
- التخدير والتحضير للحيوان:
- بسرعة الحيوانات من أجل ح 12 قبل البدء التجربة.
- قبل التداوي الحيوان مع 20 مغ/كغ الكيتامين و 2 مغ/كغ إكسيلازيني عن طريق حقن العضلي في الرقبة، باستخدام حقنه 10 مل. تسجيل وزن الحيوان والجنس.
- حمل التخدير عن طريق حقن 0.5 ملغ/كغ الميدازولام والاتروبين 0.05 مغ/كغ في الوريد إذني. التنبيب الحيوان مع أنبوب داخل رغامى.
- المحافظة على التخدير بالتهوية الميكانيكية باستخدام جهاز تنفس اصطناعي (/air2س 1:3، سيفوراني 1.5%)، أنبوب مجرى الهواء 7-8 مم، وعامل تصفية. ضبط جزء الأوكسجين من وحي (2من قوة المراقبة الدولية) بنسبة 35 في المائة وحجم المد إلى 6-10 مل/كغ.
- ويتم تقييم عمق التخدير كافية في غياب الاستجابات الحركية أو اللاإرادي للأنف معسر. وتم رصد ردود الفعل بالبيبرال ولهجة الفك بشكل مستمر، وكذلك استهداف نغمة استرخاء الفك وعدم وجود ردود الفعل بالبيبرال. تم رصد درجة الحرارة الأساسية بصورة مستمرة وكفلت صيانة نورموثيرميا (38-38.5 درجة مئوية) مع الاحترار السلبي (عزل البطانيات وزجاجات الحارة).
- تشريح مجاناً، كما سبق وصفها كودستال وخطواته الزملاء 3-1 إلى 3-318الشرايين السباتي في كلا الجانبين وكانولاتي لهم مع غمد 7F. كانولاتي حبل الوريد الأيسر مع غمد 7F لأخذ عينات من الدم الوريدي.
- إدارة جرعة بلعه من 250 مسكن شيفتشنكو ميكروغرام عن طريق الخط الوريدي المركزي تليها 250 ميكروغرام/ح تسريب الوريدي مستمر استخدام مضخة لضخ. مراقبة درجة حرارة الجسم ومعدل ضربات القلب وإيقاع مع 3-يؤدي رسم قلب (ECG)، الضغط الوريدي الشرياني والوسطى خلال التجربة بأكملها.
- استخدام أنابيب جمع الدم القياسية، سحب عينات الدم الأساس التالية من خط وريدي: 5 مل سيتراتيد البلازما ومل 2.9 يدتا البلازما في الأنابيب الخاصة بكل منها. الطرد المركزي فورا في 2,000 ز س لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية. تأخذ مل 2.9 الدم في أنبوب مصل والسماح يتجمد لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة قبل سينتريفوجينج كما هو موضح أعلاه.
- أنابيب ميليلتر 200 الكوة البلازما أو المصل إلى 500 ميليلتر وتخزين جميع العينات في-80 درجة مئوية لمزيد من التحليل.
- سحب 0.5 مل دم من الخط الشرياني باستخدام المحاقن تحليل غاز الدم الخاصة (بغا) لقياس بغا باستخدام آلة بغا وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.
- سحب 0.5 مل دم من خط وريدي استخدام المحاقن قياسية 2 مل ونقل على الفور إلى خرطوشة قانون استخدام إبرة 30 جرام. إدراج خرطوشة معبئة في آلة القانون لقياس الوقت التخثر وفقا لإرشادات الشركة المصنعة. انظر الشكل 2 للنقاط الزمنية.
- إدارة 5000 مشاركة الهيبارين غير المجزأ مع الاسبيرين وحدة دولية في خط وريدي استخدام المحاقن 2 مل والسماح للحيوان لتحقيق الاستقرار لمدة 20 دقيقة قبل البدء بالتجربة مي.
- قانون مراقبة كل 30-45 دقيقة كما هو مذكور في 2.1.11. حقن الهيبارين غير المجزأ مع الاسبيرين 2500 وحدة عن طريق الوريد إذا كان قانون s < 180.
- تجربة احتشاء عضلة القلب
- استخدام معدات التنظير ذراع C قياسية (برنامج تصوير الأوعية التاجية، زاوية 0° 12 لقطة في الثانية، ~ 70 كيلو فولت)-أو بدلاً من ذلك نظام الأوعية مخصصة-القيام بالتدخل التاجي.
- استخدام التوجيه الفلوري لإدراج قسطرة ضغط (5F، 120 سم) عبر غمد الموضوعة سابقا في الشريان السباتي الأيسر. دفع إلى البطين الأيسر. قم بتوصيل القسطرة الضغط إلى اقتناء نظام لتسجيل ضغط البطين الأيسر. يحتاج نظام حيازة لحساب بشكل مستمر وتسجيل معدل ضربات القلب، وضعت الضغط، dP/dt الحد الأقصى (contractility البطين الأيسر) و dP/dt الحد الأدنى (استرخاء البطين الأيسر) خلال التجربة بأكملها. تسجيل قيم الأساس لمدة 10 دقائق.
- إدراج 6F (100 سم، EB3.75) القسطرة التوجيهية عبر غمد الموضوعة سابقا في الشريان السباتي الحق. مسبقاً للشريان التاجي الأيسر إلى الشريان التاجي تنازلي الأيسر الأمامي (الفتى) تحت إرشاد الأشعة السينية. حقن المتوسطة التباين باستخدام المحاقن 20 مل عبر القسطرة التوجيهية لإجراء تصوير الأوعية التاجية أساس.
ملاحظة: تم حقن متوسطة التباين بالضغط اليدوي ولكن نظام حاقن طاقة مخصصة يمكن استخدامها كذلك. - تقييم حجم اللاعب على رصد الأشعة السينية لتحديد الحجم المناسب للقسطرة التدخل التاجي عن طريق الجلد (PCI). استخدام البالونات PCI بطول 15-25 مم وأقطار بين 2 و 3.5 مم تبعاً لحجم الفتى. تجميع القسطرة PCI وجويديويري التاجية (و 014/ي 175 سم). قم بتوصيل القسطرة PCI مع الجهاز التضخم قبل مليئة بمتوسط التباين.
ملاحظة: يمكن قياس القطر الفتى مباشرة على جهاز معايرة باستخدام مسطرة وثم يتم تحديد حجم البالون المشروع تبعاً لذلك. - إدراج نظام المجمعة من 2.2.4 في التجويف القسطرة التوجيهية. المضي قدما في جويديويري إلى الفتى حتى تصل إلى خارج الفرع الثاني قطري للاعب.
- استخدام التوجيه الفلوري لدفع القسطرة PCI حتى يصل إلى حوالي منتصف اللاعب. اختر الموقع حظر اللاعب اعتماداً على تشريح التاجية، عادة بعد الثاني، وفي بعض الأحيان بعد أول فرع قطري (الشكل 3) كي يكون نسب مماثلة من AAR البطين الأيسر (LV).
ملاحظة: يعتمد اختيار الموقع حظر على طول فروع قطري، ومن ثم المنطقة من الأنسجة والتي تزود بالدم عن طريق فرع كل منهما. في حالة فترة طويلة، ستكون أول فرع قطري سيوصف الموقع حظر فقط بعد هذا. في حالة فرع قطري أول أقصر، يتم حجب بعد قطري الثانية. - إزالة جويديويري ثم قم بزيادة الضغط في الجهاز التضخم إلى 7-10 بار تضخيم البالون للقسطرة PCI وحمل احتشاء عضلة القلب الاسكيمية 1 h. تدريجيا زيادة قوة المراقبة الدولية2 إلى 50-60% بين 15 و 40 دقيقة من الاسكيمية. إبقاء حجم المد 6-10 مل/كجم.
ملاحظة: هذا الإجراء سيتم تقليل حدوث extrasystoles وتقليل تواتر فيبريليشنز بطيني. - سجل تسلسل فيديو s 5-10 بينما الحقن المتوسطة التباين عن طريق القسطرة التوجيهية وعائية البالون للقسطرة PCI في مكان فقط بعد بدء تشغيل الاسكيمية؛ كرر بعد 10 دقائق من الاسكيمية للتحقق من انسداد كامل للاعب القاصي على البالون للقسطرة PCI.
- مراقبة الحيوانات عن كثب الفور الكشف عنها وعلاجها (2.2.10) عدم انتظام ضربات القلب. اكستراسيستوليس عادة ما يحدث، وزيادة في تواتر (> 3 في الدقيقة) بين 20 و 40 دقيقة بعد الاستقراء من احتشاء عضلة القلب الاسكيمية. في حالة حدوث ذلك، بلطف تدليك الرقبة على جانبي أسفل الخد. في معظم الحالات سيكون هذا كافياً لإعادة ضربات قلب منتظمة، ربما بحفز baroreceptors تحفيزه العصب الموجود في الشريان السباتي المشترك.
- في حالة عدم انتظام ضربات القلب التقدم إلى رجفان بطيني، استخدام الرجفان ثنائية الطور خارجي، إلى إعادة تأسيس إيقاع الجيوب الأنفية. قم بتطبيق الضغط على الصدر 5-10 استخدام منصات الرجفان فورا قبل تطبيق الصدمة من أجل ملء التاجية مع الدم المؤكسج وصدمة ثم مع 150 ي (بالنسبة للحيوانات 30 كغم).
- كرر إذا لزم الأمر وزيادة الطاقة إلى 175 ي بعد الصدمة 3rd . استخدام إعدادات الطاقة أعلى لأثقل الحيوانات.
- كرر خمس دقائق قبل نهاية الوقت الاسكيمية أخذ عينات من الدم المذكورة في 2.1.8-2.1.13. حقن مادة اختبار (مثبط فكسييا تربين أو التحكم 4 مغ/كغ، ونفعل ذلك هذا أعمى) عن طريق الوريد من خلال الخط الوريدي المركزي وتدفق الخط مع 20 مل المالحة.
- سحب عينة واحدة من سيترات البلازما (كما ورد في 2.1.8 و 2.1.9) 4 دقيقة بعد الحقن المادة في 2.2.12.
- القيام صورة وعائية (2.2.3) للتأكد من انسداد الفتى، ثم تنكمش البالون للقسطرة PCI وإزالة هذه القسطرة من القسطرة التوجيهية. تأكيد نضح الفتى القاصي إلى موقع الانسداد بواسطة وعائية فورا بعد الانكماش وإزالة البالون للقسطرة PCI، 10 دقيقة بعد ذلك، كلما كانت علامات احتشاء عضلة القلب الاسكيمية مرئية بتخطيط القلب لمدة أكثر من 5 دقائق، وقبل مباشرة إعادة انسداد للاعب.
- تسمح ضخه من عضلة القلب الاقفاري ح 2. أخذ عينات البلازما والمصل في دقيقة 10، 30 و 60 و 115 من ضخه (2.1.8 و 2.1.9). شاشة بغا في 115 و 60 دقيقة (2-1-10).
- أعد إدخال القسطرة PCI جنبا إلى جنب مع جويديويري لنفس الموقف كما تستخدم الاسكيمية. تضخيم البالون للقسطرة PCI قبل وتأكيد انسداد الفتى بصورة وعائية (2.2.3). إزالة القسطرة الضغط من البطين الأيسر وإيقاف التسجيل.
- حقن 100 مل 2% "أزرق إيفانز" في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS، درجة الحموضة 7.4) إلى الخط الوريدي المركزي. حوالي 30 ثانية لاحقاً، عندما يتحول الحيوان كله أزرق، حقن 40 مل 20% بوكل euthanize الحيوان. وأكد وفاة غياب إشارات تخطيط القلب وموجات النبض.
3. تقنيات أخذ العينات
-
استخراج وتشريح وأخذ عينات من القلب (الشكل 4)
- نفذ ستيرنوتومي لفضح القلب. يتبع البروتوكول الموصوفة سابقا قبل كودستال والزملاء، والخطوات من 8-2 و 8-318. قطع مفتوحة في تامور خلال تفقده للتشوهات التي قد تنشأ من التهاب التامور سابق، واستبعاد الحيوان من إجراء المزيد من التقييم.
- انكماش وإزالة المشروع فضلا عن القسطرة التوجيهية. المكوس القلب لمزيد من التحليل. قطع في الوريد الأجوف وإزالة الدم باستخدام مضخة شفط، ثم قطع جميع السفن الكبيرة التي تربط القلب بالجسم.
- شطف قلب الداخل والخارج مع المحلول الملحي في درجة حرارة الغرفة. وزن القلب كله.
- ضمن 30-40 دقيقة، مقطعة شرائح حوالي 3-5 مم من القمة إلى تينديناي حدث للصمام التاجي، عمودي على محور طويل باستخدام سكين حادة في القلب.
- كن حذراً دائماً وضع القلب في نفس اتجاه مع الجانب البطني مواجهة بغية الحفاظ على التوجه لعينات قطع (الشكل 5).
- تصوير شرائح القلب باستخدام كاميرا رقمية وحيدة عدسة العاكسة.
- قص بعيداً البطين الأيمن (تجاهل كغير مطلوبة). تصوير شرائح البطين الأيسر، وتزن كل شرائح للوزن الكلي البطين الأيسر.
- التفريق بين "الأزرق إيفانز" الإيجابية و "الأزرق إيفانز" الأنسجة سلبية في جميع الأقسام. تشريح شرائح فصل الأنسجة غير الدماغية (الأزرق إيفانز إيجابية) باستخدام مشرط السكتة (إيفانز الأزرق السلبية).
- أولاً تحليل المقاطع السلبية "الأزرق إيفانز" (المنطقة الدماغية في خطر، AAR). تزن كل منها ووضعها جميعا في وعاء من بلاستيك.
- تغطي الشرائح تماما مع 100-150 مل (وفقا لحجم القلب) تيترازوليوم ثلاثي فينيل كلوريد الحل (2 ز عقاري، ز 16 ديكستران، الوزن الجزيئي 48000-90000، في برنامج تلفزيوني، طازج 200 مل) حيث أن القطع القلب يمكن أن تتحرك بحرية داخل الحل. تغطية الحاوية واحتضان لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية بينما تهز برفق.
- أثناء هذا 20 دقيقة حضانة وقت تزن "الأزرق إيفانز" القطع إيجابية (منطقة ليست في خطر، ANR)، أخذ عينات لتضمين الأنسجة-تك (اختر الجزء القاصي أكثر من الضرر) وتخزينها في-80 درجة مئوية لمزيد من التحليل. نقل الباقي إلى 4% فورمالدهايد حل وتخزين في درجة حرارة الغرفة لأقسام علم الأنسجة.
- إزالة قطعة من الجمعية من الحل عقاري. النسيج الملون الأحمر هو الأنسجة الدماغية قابلة للتطبيق (فيت) والأنسجة غير الملون الأنسجة الدماغية نخرية (أحمق). قطع قطعة صغيرة 2 (كتل من 2-3 مم) من كل أحمق وفيت، بتضمينها في الأنسجة-تك وتخزينها في-80 درجة مئوية لمزيد من التحليل. ينبغي أن تكون هذه العينات نفس الوزن.
- إصلاح باقي القطع (جميع شرائح المستمدة من AAR) التي تعلق عليها إلى أسفل في حاوية الستايروفوم وتغطي تماما مع 4% فورمالدهايد حل أجل 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة في غطاء دخان. يجب أن تبقى القطع المسطحة للوثائق الفوتوغرافية في الخطوة التالية.
- وفي اليوم التالي تصوير جانبي القطع مع كاميرا عالية الدقة مع نفس إعداد التكبير/التصغير والمسافة من الأنسجة (التكبير نفسه). إضافة أشرطة مقياس تلقائي لكافة الصور. كافة أشرطة بحاجة إلى أن يكون بنفس الطول.
ملاحظة: ينبغي توصيل الكاميرا ذات الدقة العالية للبرامج التي تلقائياً بإضافة شريط مقياس لكل صورة.
-
حساب AAR وحجم احتشاء
- % AAR البطين الأيسر = (وزن AAR في ز/الوزن من البطين الأيسر في ز) * 100.
- استخدام برنامج إيماجيج لحساب المساحة الكلية لكل من الجمعية واحمق (كلا الجانبين لكل قطعة) استناداً إلى الصور الفوتوغرافية.
- ضبط شريط المقياس بتحديد طول شريط المقياس باستخدام خط مستقيم من زاوية الأداة. اختر من قائمة تحليل > "ضبط مقياس" وإدراج المسافة المعروفة ووحدة من شريط مقياس. اختر "العالمية" حيث سيتم تطبيق نفس المقياس على كافة الصور.
- وضع علامة على مساحة السطح كله من الأنسجة باستخدام أداة التحديد اليد الحرة لحساب الجمعية. كن حذراً لا يقوموا بتضمين الجانب (الارتفاع) من الأنسجة و/أو الأنسجة الدهنية (الشكل 6-ج).
- تعيين القياس عن طريق اختيار "المجال" و "عرض التسمية" من تحليل > "تعيين قياسات" القائمة. قياس المساحة السطحية من تحليل > التدبير.
- كرر الخطوة 3.2.5 لتدبير أحمق (مارك الأنسجة غير الملون فقط). ملاحظة: لا تشمل الأنسجة الدهنية (الشكل 6-د) في حساب أحمق. كرر الخطوة في الجانب الآخر من الأنسجة.
- حساب متوسط AAR واحمق لكل قطعة من الأنسجة.
- استخدام القيم التي تم الحصول عليها من 3.2.7 لحساب أحمق كنسبة مئوية من الصابة AAR AAR:% = (Σ متوسط المساحة السطحية لأحمق في سم2/Σ متوسط المساحة السطحية للجمعية في سم2) * 100.
- اثنين من المحققين مختلفة ينبغي تكرار الأسلوب أعلاه. هامش مقبول من الفرق هو < 10%.
-
علامات الاسكيمية
- استخدام عينات البلازما يدتا، التي تم تخزينها مسبقاً في-80 درجة مئوية (2.1.9) لقياس مستوى تروبونين القلب-الأول باستخدام مقايسة لوميناكس من نوع plex واحد كما سبق وصف 19.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
الحيوان واحد توفي قبل الأوان قبل إقامة فكسييا الببتيد المانع أو السيطرة بسبب خطأ فني (الانخفاض المفاجئ لضغط الدم أثناء وقت الاسكيمية، قبل إضافة مادة الاختبار). تم استبعاد الحيوان واحدة من مجموعة مثبطات فكسييا بسبب أي ضرر الاسكيمية/ضخه لوحظ نتيجة التشريح الشاذ الشريان تنازلي الأمامي الأيسر (الفتى). وكان جزء كبير من البطين الأيسر، بما في ذلك القمة، perfused بعلامة سيركوفليكس الشريان في هذا الحيوان. كانت الحيوانات المدرجة في التحليل النهائي n = 2 في مجموعة مثبطات ببتيد فكسييا تربين (يعني وزن 27.5 ± 2.5 كجم) و n = 3 الحصول عنصر تحكم غير نشط تربين ببتيد (يعني الوزن ± 29 0.8 كجم).
الأشعة السينية تصوير الفيديو/يستخدم تصوير الأوعية التاجية من قلب خنزير لتصور موقف القسطرة الضغط وأن تقرر أين كتلة اللاعب (الشكل 3A). ويبين الشكل 3B موقف القسطرة، عرقلة تدفق الدم القاصي إلى فرع قطري الثانية. مقارنة بين الشكل 3 ألف و 3 باء يسمح أيضا تقدير التي ستكون جزءا من عضلة القلب التي توفرها الفتى الدماغية. في نهاية فترة ضخه ح 2 يعيد القسطرة PCI وتضخم في نفس الموضع كما كان خلال الاسكيمية. الأزرق إيفانز بعد ذلك يتم حقن الوريد تحديد دقة AAR (الشكل 5A). بعد ختان القلب، هو شرائح البطين الأيسر إلى أقسام 3-5 مم سميكة من ذروة حتى الصمام التاجي، عمودي على محور طويل. واضح يتم تحديدها AAR ووكالة الاستخبارات الوطنية "الأزرق إيفانز" تلطيخ على الشرائح. مناطق أخذ العينات AAR و ANR مبينة في الشكل 5B.
ويبين AAR، معبراً عنه بنسبة مئوية من الوقف، لا توجد فروق معتد بها إحصائيا بين مجموعة فكسييا العلاج والسيطرة على المجموعة (6A الشكل). يظهر حجم احتشاء (أحمق/AAR) لم توجد فروق بين المجموعات أما (استخدام غير حدودي مان-ويتني اختبار, p > 0.05، الشكل 6B). تشير هذه البيانات إلى أن المانع فكسييا وحدها، في تركيز المستخدمة ومدة التطبيق، لا يمكن أن تحمي القلب من احتشاء عضلة القلب أنا/R الإصابة. الرقم 6 ودال 6 إظهار كيفية وضع علامات الحدود AAR واحمق من أجل دقة وتكاثر قياس المساحات السطحية منها.
أن استراتيجية أخذ عينات الدم يسمح بالإفراج عن تروبونين القلب علامة تلف عضلة القلب--أنا يمكن رصدها على مر الزمن. تقريبا لا يوجد فرق بعد ساعة واحدة من الاسكيمية مع خط الأساس بينما بعد ضخه هناك زيادة مستمرة مع مرور الوقت كما هو موضح في الشكل 7. تروبونين--أنا، الاختلافات بين المجموعات ليست أيضا هامة في هذه التجارب.
الشكل 1 . نظرة عامة على جدول زمني التجريبية. الجدول الزمني التخطيطي للخطوات الهامة في نموذج إصابة احتشاء عضلة القلب الاسكيمية/ضخه. الأساس التصور الشريان التاجي، ابتداء من وقت الاسكيمية، ورصد عدم انتظام ضربات القلب وحقن مادة اختبار خطوات هامة في هذه التجربة. ويضمن استخدام التوقيت الدقيق في جميع التجارب إمكانية تكرار نتائج. ينبغي أن يتم يوثانيزينج بالحيوان والختان من القلب خلال 15-20 دقيقة بعد الانتهاء من المرحلة ضخه ح 2. بوكل: كلوريد البوتاسيوم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . التسلسل الزمني لأخذ عينات من الدم والتحليل- وترد النقاط الزمنية لأخذ عينات من الدم جنبا إلى جنب مع نوع من تخثر الدم المستخدمة. يمكن أخذ عينات إضافية وفقا للتجربة وتحليلها يمكن قياسها. قانون: تفعيل تخثر الوقت، بغا: الدم تحليل الغاز، الرايت: درجة حرارة الغرفة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . تصوير الأوعية التاجية. رأي الفلوري (A) التاجية اليسرى عند خط الأساس، نقطة الأسهم الصفراء للأول والفروع الثانية قطري، السهم الأبيض يشير إلى قمة القلب الفتى المغطى (ب) عرض منطقة لا تدفق البطين الأيسر (LV)، السهم الأحمر يشير إلى جهاز الكمبيوتر أنا القسطرة (ج) إعادة الإغلاق للاعب في نهاية ضخه مع البالون للقسطرة PCI إعادة إدراجها إلى نفس الموقع في اللاعب كما أثناء الاسكيمية. CX: علامة سيركوفليكس الشريان التاجي، الفتى: ترك الشريان التاجي الأمامي تنازلي، MC: القسطرة ميلار، إدراجها في البطين الأيسر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 . الهيكل التخطيطي لعينات الأنسجة. التوقيت الدقيق لتشريح القلب وأخذ العينات من مناطق مختلفة لمزيد من التحليل. يبدأ الجدول الزمني في 205 دقيقة بعد بداية الاسكيمية، 20 دقيقة بعد انتهاء التجربة الحيوانية. من المهم أن احتضان مقاطع الأنسجة في عقاري في فترة أقصاها 40 دقيقة بعد يوثانيزينج الحيوان. تتم الإشارة إلى أخذ العينات من وكالة الاستخبارات الوطنية، فيت واحمق كمربعات بيضاء. حضانة الجمعية في 4% فورمالدهايد يتيح تمييز واضح بين أحمق وفيت لتحديد دقيق لحجم احتشاء. AAR: منطقة الخطر، ANR: المنطقة ليست في خطر، LV: البطين الأيسر، أحمق: الأنسجة الدماغية نخرية، الشركة الشرقية للأخشاب: تك الأنسجة، RV: البطين الأيمن، عقاري: ثلاثي فينيل كلوريد تيترازوليوم، فيت: الأنسجة الدماغية قابلة للحياة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 5 . التمايز في الموقع بين المنطقة المعرضة للخطر (AAR) وليس في خطر ANR. (أ) ممثل الصورة من قلب كله فقط بعد ستيرنوتومي في نهاية التجربة. (ب) ممثل صورة تظهر 3-5 مم شرائح سميكة البطين الأيسر بعد التشريح. AAR ووكالة الاستخبارات الوطنية بوضوح، يتبين من الأسهم الصفراء، ويظهر السهم الأبيض في مجال أخذ العينات ANR. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 6 . حجم الاسكيمية واحتشاء. (أ) وزن نسبة مئوية AAR البطين الأيسر (LV). (ب) النسبة المئوية مساحة أحمق للجمعية. (ج) صورة تمثيلية لحساب AAR. (د) صورة تمثيلية لحساب أحمق. يظهر السهم الأبيض منطقة فيت أخذ العينات والسهم الأسود يظهر في مجال أخذ العينات أحمق. تم حساب البيانات باستخدام البرمجيات إيماجيج. تظهر القيم كتجربة النقاط لكل فرد مع الإشارة إلى ± يعني مجموعة مراقبة التنمية المستدامة., n = 3 وفكسييا المانع تعامل المجموعة، ن = 2. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 7 . علامة تلف عضلة القلب. تروبونين القلب-أنا التركيز على مر الزمن في بيكوغرام/مل لكل من عنصر التحكم ومثبط فكسييا تعامل المجموعة. وجمعت الدم من حبل الوريد إلى يدتا البلازما أنابيب خط الأساس، ونهاية الاسكيمية والعديد من النقاط الزمنية خلال تروبونين ضخه والقلب-أنا تم قياسه بواسطة تعليق واحد-من نوع plex الصفيف (بيو-من نوع Plex). تظهر البيانات بشكل تجربة النقاط لكل فرد مع الإشارة إلى ± يعني مجموعة مراقبة التنمية المستدامة., n = 3 ومجموعة فكسييا معاملة، ن = 2. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
احتشاء عضلة القلب أنا/الإصابة R له تأثير كبير على حجم احتشاء النهائي الذي يترجم مباشرة إلى تشخيص المريض بعد احتشاء عضلة القلب الحاد3. فهم الفسيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا الإصابة R هو الخطوة الأولى للحد من أو منع ذلك. احتشاء عضلة القلب أنا الإصابة R هو شرط حاد الذي يحدث مباشرة بعد ضخه السفن المغطى. أنا/R الإصابة يؤدي إلى تنشيط الاستجابة المناعية الفطرية والأضرار الخلوية يحدث في موقع ضخه و الأنسجة المحيطة بها20. دراسة أجريت مؤخرا أظهرت تحسنا في نتائج العصبية في نموذج الفئران من الدماغ أنا/الإصابة R عندما تعامل مع مثبط فكسييا8. ومع ذلك، في الدراسة التجريبية الحالية وجدنا أي تأثير مثبط فكسييا تربين في عضلة القلب أنا/الإصابة R. مثبط فكسييا المستخدمة رواية وبه الدوائية في الخنازير ليست معروفة بعد. ولذلك، قد يكون سبب عدم ملاحظتها لتأثير الجرعات غير الملائم أو التطبيق. وهذا يحتاج إلى تناولها في دراسات المتابعة.
توحيد نموذج حيوان ضروري للتحقيق بعمق في الفسيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا/R الإصابة وتقديم حلول مناسبة في العيادات. التحقيق في الفسيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب أنا الإصابة R يستلزم أخذ العينات جيدة والممثل من أجل دراسة الآليات الخلوية الكامنة وراءها. الصدر مغلقة الخنزير احتشاء عضلة القلب أنا نموذج الإصابة R يوفر أسلوب قابل لإعادة الإنتاج، التي هي قريبة من الحالة السريرية، ومفيدة للمساعدة في فهم الآليات الخلوية واختبار علاجات جديدة رواية. وقد وصف متغيرات النموذج الحالي قبل لأغراض14،،من1718المذكورة أعلاه.
لدينا بروتوكول احتشاء عضلة القلب الحاد في الخنازير لا تحتاج المعالجة المسبقة مع ديجوكسين كما هو موضح سابقا18،21. كنا تدليك الجيب السباتي للحد من عدم انتظام ضربات القلب، والرجفان ثنائية الطور من أجل كارديوكونفيرسيون في حالة رجفان بطيني. استخدام تدليك الجيب السباتي المعروف سريرياً للتأثير على الرجفان الاذيني22، ولكن حتى الآن لم قد ثبت لمنع أو تأخير ظهور رجفان بطيني في مي، سواء في البشر أو في نماذج خنزير. وعلاوة على ذلك، يساعد استخدام سيفوفلوراني للحد من عدم انتظام ضربات البطين، فضلا عن معدل الوفيات في نموذج الخنزير من احتشاء عضلة القلب الحاد23.
للتأكد من إمكانية تكرار نتائج والحد من مخاطر تجلط الدم أثناء التجربة، تم حقن جرعات متعددة من الهيبارين يرتكز على قياس المتكررة للقانون، بدلاً من استخدام ثابت جرعات الهيبارين كما ذكرها على سبيل المثال كودستال وآخرون18. كمية الخاضعة للإدارة الهيبارين يساعد على التحقيق في سلسلة التخثر في سياق أنا/الإصابة R. الأزرق إيفانز يسمح تحديد دقيق للعائلة/AAR حقن الوريد "الأزرق إيفانز" بعد إعادة انسداد الفتى في الموقع المحدد أثناء التعريفي الاسكيمية تحت إشراف الفلوري يؤدي إلى تلطيخ الأزرق الخنزير كله بما في ذلك الجزء غير الدماغية من القلب بتأثير الحد الأدنى على وكالة الاستخبارات الوطنية عضلة القلب والمفرج. الأزرق إيفانز من المواد السامة للخلايا معروفة24. في التجارب الحالية كان حاسما للحفاظ على استمرارية طبقة الخلايا البطانية في ANR في المفرج القلب من أجل استخدام فإنه كفرد داخل التحكم حتى 100 مل الأزرق إيفانز كان حقن عناصره وتضعف مع تقليل الدم كله لها سمية. سابقا، في وضع مماثل، والخلايا 50 مل 2% "الأزرق إيفانز" كان حقنها مباشرة في التاجية يزيد من خطر ما سيتوتوكسيسيتي للقلب25. الخطوة الهامة التالية تم تشريح القلب مباشرة إلى شرائح 3-5 ملم من ذروة حتى الصمام التاجي (الموضع الدقيق في كل الحيوان) واستخدام هذا الأسلوب لجعل حساب دقيق للجمعية كنسبة مئوية من البطين الأيسر.
وصف الأسلوب الحالي يقدم التفاصيل الدقيقة التي لا تم وصفها سابقا. حضانة عقاري الملون المقطع في 4% فورمالدهايد لمدة 24 ساعة ويوفر تمييزاً واضحا بين قابلة للتطبيق (أحمر) وأنسجة نخرية (أبيض)، مما يزيد من إمكانية تكرار نتائج العينات لتلطيخ كذلك الجزيئية وأخيراً. استراتيجية أخذ عينات الدم ما يزيد على 2 ح ضخه يتيح الكشف عن الجزيئات المعرب عنها حديثا في المراحل المبكرة جداً من ضخه (10 و 30 دقيقة)، فضلا عن لاحقة (60 و 120 دقيقة). الدم الصحيح وأخذ عينات الأنسجة والتخزين أيضا حاسمة بالنسبة لتحليل البلازما تتالي علامات مثل التعبير عن تكملة وتخثر البروتينات.
يمكن تعديل البروتوكول الحالي وقت أطول في ضخه، من بضع ساعات إلى أيام. يسمح هذا الباحث للتحقيق في آثار لاحقة أنا/R الضرر على القلب ويمكن أيضا اختبار أدوية جديدة وتقييم آثارها. الحد البروتوكول الحالي هو استخدام القسطرة الضغط-نصيحة لقياس وظيفة القلب. يمكن الحصول على المزيد من البيانات الموثوقة عن وظيفة القلب باستخدام نظام قياس ضغط حجم التكرار الحلقي. يوفر الأسلوب الحالي في ملخص مفصلة الخطوات الهامة اللازمة لزيادة إمكانية تكرار نتائج الصدر مغلقة الخنزير احتشاء عضلة القلب أنا هو نموذج الإصابة R عندما المقصود باستخدام نموذج دراسة التغيرات الخلوية والجزيئية في السياق دراسة عضلة القلب أنا/R إصابة الفيزيولوجيا المرضية أو دراسة الخيارات العلاجية الرواية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.
Acknowledgments
المؤلفون أن نشيد البروفيسور كريستيان هينس لتوفير مثبطات فكسييا والتحكم في كل منها. ونعترف أيضا امتنان بيسلاك أولجيغا والدكتور دانييل متلر نيتيلبيك كاي وحدة الجراحة التجريبية، وإدارة "البحوث الطبية الحيوية"، جامعة برن للدعم التقني. سيلين جيلود ماتياس راوش من الإدارة للتشخيص، وإينتيرفينشونال، وطب الأشعة، مستشفى جامعة بيرن، إينسيلسبيتال قدمت الدعم مع معدات الأشعة السينية والتقنيات. تم تمويل هذا المشروع من "مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية"، المشروع رقم 320030_156193. ونود أيضا أن نشكر السيد حسان هاني من الاتصالات والتسويق، مستشفى جامعة بيرن، إينسيلسبيتال لتسجيل لدينا تجربة الفيديو.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ABL 90 Flex, blood gas analyser | Radiometer | - | Blood gas analysis (BGA) |
| ACT Plus | Medtronic | - | Activated clotting time |
| Atropin | Sintetica | - | Atropinum Sulfas, 0,5mg/ml |
| Balance (20-500 Kg) | NAGATA Scale, Tiwan | HTB/HTR | Alternative products can be used |
| Balance (21-4200 g) | Mettler toledo, Switzerland | MS4002SDR | Alternative products can be used |
| Blood collection tubes: EDTA, citrate and serum | S-Monovette, Nuembrecht, Germany | 05.1167.001, 05.1071.001 and 05.1557.001 respectively |
Alternative products can be used |
| BV Pulsera mobile C-arm | Philips | - | Alternative products can be used |
| Centrifuge | Labcare, UK | ALC PK120R | Alternative products can be used |
| Defibrillator Lifepak 12 | Medtronic | - | Alternative products can be used |
| Dextran from Leuconostoc mesenteroides | Sigma-Aldrich, Germany | D3759 | Average M.wt 48000-90000 |
| Digital single lens reflex camera | Sony, Thailand | DSLR-A500/A550 | Alternative products can be used |
| Dissecting forceps | Alternative products can be used | ||
| EMPIRA RX PCI dilatation catheter | Cordis, Johnson&Johnson, USA | 85R15300S | Diameter 3 mm, length 15 mm, Alternative products can be used |
| EMPIRA RX PCI dilatation catheter | Cordis, Johnson&Johnson, USA | 85R15350S | Diameter 3.5 mm, length 15 mm, Alternative products can be used |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich, Germany | E2129 | Toxic |
| Fabius GS premium respirator | Dräger, Lübeck, Germany | - | Anesthesia work station, Alternative products can be used |
| Fentanyl | Inselspital ISPI | - | Fentanyl 2500mcg/50ml |
| Formaldehyde | Pathology Institute, Bern University | SI148701 | Alternative products can be used |
| FXIIa inhibitor | Provided by Prof. Christian Heinis' laboratory in EPFL | Novel bicyclic peptide | |
| Galeo, coronary guidewire | Biotronik, Germany | 125497 | Alternative products can be used |
| Guidance catheter | Boston Scientific, Florida, USA | 34356-06 | 6F (100 cm, EB3.75). Alternative products can be used |
| Heparin Sodium | Drossapharm, Basel, Switzerland | - | Liquemin, 25000 U.I./5 ml |
| High end electrosurgery | BOWA, Germany | ARC 400 | Electrical source for blood suction. Alternative products can be used |
| Hydro-Guardmini breathing filter | Intersurgical, Lithuania | 1745000 | Filters |
| Image J | National Institute of Health, USA | 1.47v | Alternative products can be used |
| Inflation device, Atrion QL2530 | Atrion medical product, Alabama, USA | 96402 | Alternative products can be used |
| IntelliVue MP 70 | Philips, Boeblingen, Germany | - | Monitor (ECG, heart rate, blood presure and body temperature). Alternative products can be used |
| KCl | Sintetica SA | - | Potassium chloride 15% |
| Ketamine | Vetoquinol | - | Narketan, 1ml/100mg |
| LR-ACT | Medtronic | 402-01 | ACT special syringes |
| Midazolam | Roche | - | Dormicum, 5mg/ml |
| Monopolar scalpel | Alternative products can be used | ||
| Needle holder | Alternative products can be used | ||
| High resolution camera, PathStand Macro Imaging Stand for Grossing | Spotimaging, USA | 1080 p HD resolution. Alternative products can be used | |
| PBS | In-house preparation | - | Alternative products can be used |
| Peripheral venous cannula, 18 G | Alternative products can be used | ||
| PowerLab 4/35 data acquisition system | Adinstruments, Spechbach, Germany | - | |
| Rotamax120T | Heidolph, Germany | 544-41200-00 | Shaker. Alternative can be used |
| Rüschelit-Super Safety Clear Tube | Teleflex, Dublin, Irland | 112480 | Air way tubing, Alternative products can be used |
| Safe Pico Aspirator Syringes | Radiometer | 956-622 | BGA special syringes |
| Saline | Sintetica Bioren | - | NaCl 0,9%. Alternative products can be used |
| Sevorane 1.5% | AbbVie AG | - | Sevorane 250ml 100% |
| Sheath | Cordis, Johnson&Johnson, USA | 504-607 A | AVANTI + / 7 F, Alternative products can be used |
| Space infusion pump | B.Braun Medical AG, Germany | - | For infusion of fentanyl. Alternative products can be used |
| SPR-350 (Millar catheter) | Adinstruments, Texas, USA | 840-8166 | MIKRO-TIP, 5F, 120 cm |
| Sternotomy saw | Alternative products can be used | ||
| Sutures | ETHICON, Johnson&Johnson, USA | Y3110H | Monocryl 3-0 SH-1 Plus. Alternative products can be used |
| Syringes (20, 10 and 5 mL) | CODAN,Baar, Switzerland | 62.7602, 62.6616, 62.5607 respectively |
Used to inject anesthetic materials intramuscularly or directly into the central venous line. Also to inject heparin or FXIIa or the respective control. Alternative products can be used |
| Thorax spreader | Alternative products can be used | ||
| Tissue-tek | SAKURA, Netherlands | 4583 | O.C.T. compound |
| Vascular forceps | Alternative products can be used | ||
| Xenetix 300 contrast media | Guerbet, Zürich, Switzerland | - | Lobitridol, 300 mg iodide/ml |
| Xylazine | Vetoquinol | - | Xylapan, 20mg/1 mL |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium choride | Sigma-Aldrich, Austria | T8877 | |
| 500 μL tubes (eppendorf) | Trefflab, Switzerland | 96.08185.9.03 | Alternative products can be used |
References
- Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update. Circulation. 133, e338-e360 (2016).
- Miller, T. D., et al. Infarct size after acute myocardial infarction measured by quantitative tomographic 99mTc sestamibi imaging predicts subsequent mortality. Circulation. 92, 334-341 (1995).
- Ovize, M., et al. Postconditioning and protection from reperfusion injury: where do we stand? Position Paper from the Working Group of Cellular Biology of the Heart of the European Society of Cardiology. Cardiovasc Res. 87, 406-423 (2010).
- Neri, M., Riezzo, I., Pascale, N., Pomara, C., Turillazzi, E. Ischemia/Reperfusion Injury following Acute Myocardial Infarction: A Critical Issue for Clinicians and Forensic Pathologists. Mediators Inflamm. 2017, 1-14 (2017).
- Yang, Q., He, G. -W., Underwood, M. J., Yu, C. -M. Cellular and molecular mechanisms of endothelial ischemia/reperfusion injury: perspectives and implications for postischemic myocardial protection. Am J Transl Res. 8, 765-777 (2016).
- Massberg, S., et al. Platelet-Endothelial Cell Interactions During Ischemia/Reperfusion: The Role of P-Selectin. Blood. 92, 507-515 (1998).
- Wang, J., et al. Antithrombin is protective against myocardial ischemia and reperfusion injury. J Thromb and Haemost. 11, 1020-1028 (2013).
- Hopp, S., et al. Targeting coagulation factor XII as a novel therapeutic option in brain trauma. Ann Neurol. 79, 970-982 (2016).
- Crick, S. J., Sheppard, M. N., Ho, S. Y., Gebstein, L., Anderson, R. H. Anatomy of the pig heart: comparisons with normal human cardiac structure. J Anat. 193 (Pt 1), 105-119 (1998).
- Heusch, G., Skyschally, A., Schulz, R. The in-situ pig heart with regional ischemia/reperfusion - ready for translation. J Mol Cell Cardiol. 50, 951-963 (2011).
- Poirier, P. Exercise, heart rate variability, and longevity: the cocoon mystery? Circulation. , 2085-2087 (2014).
- Milani-Nejad, N., Janssen, P. M. L. Small and large animal models in cardiac contraction research: advantages and disadvantages. Pharmacol Ther. 141, 235-249 (2014).
- Bloor, C. M., White, F. C. Functional development of the coronary collateral circulation during coronary artery occlusion in the conscious dog. Am J Pathol. 67, 483-500 (1972).
- Banz, Y. Locally targeted cytoprotection with dextran sulfate attenuates experimental porcine myocardial ischaemia/reperfusion injury. Eur Heart J. 26, 2334-2343 (2005).
- Krombach, G. A., Kinzel, S., Mahnken, A. H., Günther, R. W., Buecker, A. Minimally Invasive Close-Chest Method for Creating Reperfused or Occlusive Myocardial Infarction in Swine. Invest Radiol. 40, 14 (2005).
- Suzuki, Y., Lyons, J. K., Yeung, A. C., Ikeno, F. In vivo porcine model of reperfused myocardial infarction: in situ double staining to measure precise infarct area/area at risk. Catheter Cardiovasc Interv. 71, 100-107 (2008).
- McCall, F. C., et al. Myocardial infarction and intramyocardial injection models in swine. Nat Protoc. 7, 1479-1496 (2012).
- Koudstaal, S., et al. Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs. J Vis Exp. , e51269 (2014).
- Kamat, P., et al. Dexrazoxane Shows No Protective Effect in the Acute Phase of Reperfusion during Myocardial Infarction in Pigs. PLoS One. 11, e0168541 (2016).
- Carden, D. L., Granger, D. N. Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury. J Pathol. 190, 255-266 (2000).
- Pérez de Prado, A., et al. Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion. J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).
- Lown, B., Levine, S. A. The carotid sinus. Clinical value of its stimulation. Circulation. 23, 766-789 (1961).
- Regueiro-Purriños, M., et al. Ventricular Arrhythmias and Mortality Associated with Isoflurane and Sevoflurane in a Porcine Model of Myocardial Infarction. J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2011).
- Roberts, L. N. Evans blue toxicity. Can Med Assoc J. 71, 489-491 (1954).
- Ellenbroek, G. H. J. M., et al. Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction. J Vis Exp. , e54021 (2016).
