Summary
يصف لنا في فيفو مورين نموذجا لغزو perineural عن طريق حقن خلايا سرطان البنكرياس سينجينيك في العصب الوركي. النموذج يسمح للقياس الكمي لمدى غزو العصب، ويدعم تحقيق الآليات الخلوية والجزيئية لغزو perineural.
Abstract
الخلايا السرطانية غزو الأعصاب من خلال عملية تسمى غزو perineural (الدكتور)، هي السرطان في الخلايا تتكاثر وتهاجر في المكروية العصب. هذا النوع من الغزو هو معروض بمجموعة متنوعة من أنواع السرطان، وكثيراً جداً ما يتم العثور على الإصابة بسرطان البنكرياس. الحجم المجهري للألياف العصبية داخل البنكرياس الماوس صعوبة دراسة الدكتور في نماذج موريني أورثوتوبيك. وهنا يصف لنا نموذج هيتيروتوبيك في فيفو للدكتور، حيث أننا ضخ خط خلية سرطان البنكرياس سينجينيك Panc02-H7 في العصب الوركي مورين. في هذا النموذج، تتعرض الأعصاب الوركي تخديره من الفئران وحقن بالخلايا السرطانية. غزو الخلايا السرطانية في الأعصاب بروكسيمالي نحو النخاع الشوكي من نقطة الحقن. ثم تستخرج الأعصاب الوركي غزت وتجهيزها مع أكتوبر لتقطيع المجمدة. ح & ه وتلطيخ الفلورة هذه الأقسام تسمح التحديد الكمي لكل درجة من غزو والتغييرات في التعبير البروتين. يمكن تطبيق هذا النموذج على مجموعة متنوعة من الدراسات على الدكتور نظراً براعة. يسمح استخدام الفئران مع التعديلات الوراثية المختلفة و/أو أنواع مختلفة من الخلايا السرطانية لتحقيق الآليات الخلوية والجزيئية للدكتور وأنواع مختلفة من السرطان. وعلاوة على ذلك، يمكن دراسة آثار العوامل العلاجية على غزو العصب بتطبيق العلاج على هذه الفئران.
Introduction
وتشكل الأعصاب محددة وورم المكروية التي تحفز السرطان النمو والهجرة1،،من23. غزو Perineural (الدكتور) هو العملية من خلال السرطان التي تغزو الخلايا في وحول الأعصاب. فإنه يمكن اعتبار طريقا فريداً لورم خبيث منذ غزو السرطان يمتد بعيداً عن المواقع الأصلية على طول الأعصاب. تم العثور على الدكتور في العديد من أنواع السرطان، بما في ذلك رأس البنكرياس، والبروستاتا، والرقبة، اللعابية، وسرطان عنق الرحم، وسرطان القولون والمستقيم نسبة تتراوح بين 22% إلى 100%1،2. الدكتور يرتبط مع الألم ويرتبط بسوء التشخيص، والأسوأ من ذلك بقاء معدلات1،2.
وضع نماذج لغزو perineural ضروري توضيح الآليات الخلوية والجزيئية لهذه العملية، واختبار العوامل العلاجية المرشح إنقاص الدكتور. وتشمل أساليب في المختبر دراسة التفاعلات بين أنواع السرطان والأعصاب ثقافة المشارك من الخلايا السرطانية مع العصب explants4أو الجذرية الظهرية جانجليونس5،6،7، أو مع الخلايا المحددة من العصبية الخلايا المكروية مثل شوان7. في فيفو النهج، ولكن ذات الصلة أكثر من الناحية الفسيولوجية وتشمل استخدام نماذج الماوس السرطان الذي تم الناجمة عن السرطان أو زرع وتتميز بالمحاسبة المكروية العصب الكامل. في أورثوتوبيك نماذج سرطان البنكرياس أو البروستاتا، الدكتور تم الإبلاغ عنها8،،من910 وقد سجلت حالات الإصابة بالدكتور، ولكن بسبب الحجم الصغير للأعصاب في تلك الأجهزة، فإنه من الصعب أن نرى العصب الكامل وذلك تقدير مدى الدكتور. النموذج الذي يصف لنا هنا هو نموذج في فيفو للدكتور في السرطان الذي يتم حقن الخلايا في العصب الوركي من الفئران من خلال إجراء العمليات جراحية بسيطة11. زرع هيتيروتوبيك يغزو داخل العصب نحو النخاع الشوكي. ويمكن قياس طول العصب غزو من الموقع الحقن في النخاع الشوكي، فضلا عن حجم السرطان داخل العصب. الأهم من ذلك، يمكن أيضا جمع العصب غزت لمجموعة متنوعة من الاختبارات بما في ذلك التحليلات المجهرية، والجزيئية. ويمكن اختبار مجموعة متنوعة من الخلايا السرطانية، والفئران المضيف التي تم تعديلها وراثيا أو تعامل مع مركبات معينة يمكن استخدامها كذلك. هذا التحليل قوية يسمح للخلايا السرطانية والمكرويه المضيفة إلى أن يتم تعديل للتحقيق في الآليات للدكتور.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
كافة الإجراءات مع مواضيع الحيوان أقرتها لجنة الاستخدام في مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان ورعاية الحيوان المؤسسية.
1-إعداد الخلايا السرطانية
- حصاد الخلايا Panc02-H7 الفرعي المتلاقية مع التربسين 0.25% لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية. جمع الخلايا في أنبوب الطرد مركزي 15 مل.
ملاحظة: الخلايا وتزرع في قارورة T-225، الذي يحتوي على حوالي 12 × 106 خلايا كل قارورة في 80% كونفلوينسي والتربسين مل 4/يستخدم قارورة. - الطرد المركزي في الخلايا × 900 غ في 4 درجات مئوية للحد الأدنى 5 غسل الخلايا بالخلية ريسوسبيندينج بيليه في 1 مل من برنامج تلفزيوني (من بيبيتينج صعودا وهبوطاً مرتين)، ونقل التعليق إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل على الجليد.
- الطرد المركزي الخلايا مرة أخرى في × 900 غ عند 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، وتجاهل المادة طافية بدون إزعاج بيليه. تبقى الخلايا الأعلاف على الجليد حتى الحقن.
2-إعداد الفئران وجراحة
ملاحظة: يتم استخدام الفئران C57BL/6J عمرها 8 أسبوع والذكور والإناث في هذه الدراسة. شروط الجراحة يتبع القواعد IACUC لمؤسستنا. يتم تعقيم الأدوات وهو تطهير سطح العمل الجراحي، وهو تطهير الحيوان والجراح ترتدي القفازات المعقمة.
- في اليوم قبل الجراحة، تخدير isoflurane 2% باستخدام الماوس ثم قم بإزالة الفراء على طول عظم الفخذ في الجهة الظهرية مع شفرة حلاقة رقيقة أو عامل إزالة شعر كيميائية.
- في يوم الجراحة، تخدير الفئران باستخدام إيسوفلوراني 2% في دائرة التعريفي. تأكيد أنيسثيتيزيشن بحافز قرصه أخمص القدمين وعدم الاستجابة.
- تطبيق مرهم البيطرية في العيون لمنع جفاف تحت التخدير.
- ضع الماوس أنيسثيتيزيد على الجانب البطني، وتأمين كل أطرافه مع الشريط هيبوالرجينيك خلق توتر خفيف في أطرافهم بالحقن بلطف. التخدير هو الاحتفاظ باستخدام isoflurane تسليمها عبر المبخر الدقة ومخروط الآنف.
- تنظيف مكان الحقن مع تدين، ثم مرة أخرى مع الكحول 70%. كرر هذه العملية مرتين أخريين. تأكد من أن لا الشعر فضفاضة لا يزال في مجال الجراحة.
- جعل شق 1 سم مع مقص صغير حوالي 2 مم أدناه وموازية لعظم الفخذ. سحب الجلد مع الملقط جانبياً لفضح العضلات تحتها.
- يعمل العصب الوركي العميق للعضلات عضلة مكسيموس والعضلة ذات الرأسين الفخذية. فصل هذه العضلات اثنين على طول طائرة اللفافي مع مقص صغير وفضح العصب الوركي تحت. مجاناً على العصب من العضلات المحيطة استخدام تشريح كليلة.
- رسم 3 ميكروليتر من الخلايا السرطانية (خلايا حوالي 50,000) من بيليه في محقن 10 ميكروليتر.
ملاحظة: بدلاً من ذلك، رسم ميكروليتر 3 من برنامج تلفزيوني كعنصر تحكم. - ضع ملعقة معدنية صغيرة تحت العصب عند نقطة الحقن للدعم. إطار التصور مع مجهر تشريح، أدخل الإبرة في العصب ضد قاعدة معدنية، إبقاء الإبرة كمواز للعصب قدر الإمكان عند الإدراج. كن حذراً لا للثقب عن طريق الجزء الخلفي للعصب. تقليل التعامل مع العصبية قدر الإمكان طوال هذه العملية.
- ببطء بحقن العصب أكثر من 5 s. ويشير إلى تشكيل لمبة في منطقة الحقن حقنه جيدة. ثم اترك الإبرة في مكان ل 3 s قبل إزالة الإبرة برفق. حفظ الإبرة في مكان ل 3 s يقلل الدفق الخلايا خارج العصب.
ملاحظة: يمكن إجراء حقن نحو القاصي العصب أو الحبل الشوكي. من المهم أن تظل متسقة ضمن مجموعة من التجارب. إذا تسرب الخلايا خارج، ينبغي عدم إدراج الحيوان في تحليل هذه التجربة. مع التجربة، هذه الأحداث نادرة جداً. - إعادة العصب إلى موضعه الأصلي. تغطية الأعصاب مع العضلات السطحية. علاج الفئران مع التسكين الصحيحة، ثم قم بإغلاق الجلد بخيوط النايلون 5-0.
- ضع الماوس وحدها في قفص نظيف للمراقبة أثناء عملية الاسترداد، حتى أنها توقظ تماما من التخدير.
ملاحظة: يستغرق 5-15 دقيقة للحيوان أن يستعيد وعيه الكامل. لا تترك الحيوان غير المراقب حتى قد وعيه كافية للحفاظ على ريكومبينسي القصية. لم يتم إرجاع الحيوان إلى شركة الحيوانات الأخرى حتى شُفي تماما. وبعد ذلك، تقييم الانتعاش مرة واحدة على الأقل كل 24 ساعة في حالة ح 72.
3-العصب الوركي الاستخراج
- في يوم بوستوب #7، euthanize الفئران مع CO2. ضع الماوس على الجانب البطني، وتحقيق الاستقرار في أطرافه البعيدة باستخدام دبابيس.
- قم بإزالة الجلد في الجهة الظهرية لحقن أطرافهم والجذع.
- استخدام تشريح كليلة، تعرض العصب الوركي العميق في العضلات.
- دورات العصب بين الحرقفه وأن عجز. للوصول إلى العصب في منطقة الحبل الشوكي، فصل اثنين من العظام. أولاً إدراج مقص مغلق في منطقة ضيقة حيث يوجد العصب الوركي، ثم قم بفتح المقص أثناء الضغط على الماوس. أن تكون حساسة والحفاظ على سلامة العصب الوركي أثناء التشريح.
- عناية تشريح العصب الوركي ديستالي إلى نهاية عظم الفخذ، وبروكسيمالي إلى النخاع الشوكي.
- ملاحظة: الأعصاب غزت هشة للغاية وعرضه للانهيار تحت التوتر أو معالجة قوية.
- حصاد العصب بأول قطع نهايته البعيدة. رفع العصب بعناية أثناء تخليصه من النسيج المجاور. قطع العصب في النهاية الدانية، أقرب ما يمكن الخروج به من العمود الفقري.
- سجل ثم الطول الإجمالي للغزو قدمه ذات الورنيّة الورنيّة باستخدام. هذا التقدير العيانية إرشادية فقط.
4-العصب التجهيز والتقدير الكمي
- تضمين في تشريح العصب في أكتوبر مجمع. جعل التأكد من مكان الأعصاب طوليا ومسطحة كما في الجزء السفلي من العفن قدر الإمكان.
- تشير على الكاسيت الجانب الدانية والبعيدة للعصب بوسم الحرف P و D.
- مكان الأعصاب مضمن على رأس الجليد الجاف، وإذا كانوا هم لا مقطوع فورا. ويمكن الحفاظ على نموذج في-80 درجة مئوية لعدة أسابيع.
- قسم العينات باستخدام مبضع كريوستات في 5 ميكرومترات سمك ومكان المقاطع على الشرائح الزجاجية. إذا كان ذلك ممكناً، تناسب فروع العصب 2 كل شريحة. وتشير إلى الجانب الدانية للعصب.
- وصمة عار على الشرائح باستخدام ح & ه تلطيخ12.
- رقمياً المسح الضوئي الملون فروع العصب مع شريحة-الماسح ضوئي الذي يوفر البيانات الرقمية ذات الدقة العالية.
- استخدام برامج التصوير، قياس طول الغزو بالنقر على زر المسافة التدبير، المجال للغزو، أو أخرى المطلوب معلمات. لإجراء تقدير جيد لطول غزو، استخدام مقاطع متعددة (2 إلى 4) العصب نفسه.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يصف هذا الأسلوب الجراحي زرع خلايا سرطان البنكرياس في العصب الوركي مورين لإنشاء نموذج في فيفو غزو العصب قابلة للقياس الكمي. ويبين الشكل 1 موقع العصب الوركي التشريحية وفي موقع الحقن. ويبين الشكل 2 الأعصاب الوركي اثنين من الماوس عارية. يمكن مقارنة برنامج تلفزيوني حقن عصب (يسار) لعصب حقن الخلايا السرطانية مياباكا-2 (على اليمين). العصب حقن الخلايا السرطانية هو تسلل بالورم، ويبدو أكثر سمكا وأكثر قتامة من العصب حقن ببرنامج تلفزيوني على حد سواء.
ويبين الشكل 3 الاختلافات قابلة للقياس الكمي لغزو العصب الوركي بخلية سرطان البنكرياس Panc02H7 في نوع البرية والفئران "نكام كو". كو نكام الفئران هي الفئران التي يكون فيها التصاق جزيء جزيء التصاق الخلايا العصبية 1 ناقص13. طول والمنطقة من الغزو التي تم كمياً باستخدام برامج التصوير. تم العثور على غزو انخفاضا كبيرا في الفئران "نكام كو"7.
الشكل 1 : العصب الوركي الماوس وموقع الحقن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : وهما تشريح الأعصاب الوركي بالماوس- برنامج تلفزيوني حقن العصب (يسار) وعصب حقن بسرطان مياباكا-2 تظهر الخلايا (يمين). السهام السوداء تظهر في موقع الحقن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : ح & الطولي ه أقسام الأعصاب الوركي حقن الخلايا السرطانية Panc02H7 في نوع البرية والفئران "نكام كو"- تشير الأسهم البيضاء إلى موقع الحقن والجانب الدانية من الحبل الشوكي. السهام السوداء تشير إلى طول الغزو مع القيم المناظرة (مم). شريط الحجم: 5 (أعلى الصور) و 0.2 ملم (الصور أسفل). التحديد الكمي لغزو العصب، إذا قيست بطول والمنطقة من الغزو. وتمثل البيانات يعني ± التنمية المستدامة. n = 8 (WT NCAM1)، n = 7 (كو NCAM1)، * * ف < 0.005، * * * ف < 0.0005 باستخدام اختبار t. (النتائج من ديبوردي et al., 20167). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذا البروتوكول يصف لنا في فيفو مورين نموذجا لغزو perineural التي تسمح للتقدير الكمي لغزو العصب الوركي بخلايا سرطان البنكرياس. ويتيح هذا النموذج دراسة الآليات الجزيئية لغزو العصب. تجارب ناجحة باستخدام هذه التقنية تتطلب نهجاً حذراً لثلاث خطوات حاسمة في العملية: 1) حقن الخلايا السرطانية (خطوات 2.7، 2.8)، 2) استخراج غزت الأعصاب (الخطوة 3، 4)، وتجهيز 3) للأعصاب المقطوع (الخطوة 4، 1).
وينبغي أن يتم الحقن بحذر شديد لتجنب ثقب عبر الجدار الخلفي للعصب، مما يؤدي إلى فقدان الخلايا السرطانية. مجرد الإبرة في المكان، الحقن وينبغي أن يتم بوتيرة بطيئة وثابتة أكثر من 5 s لمنع القوة الهيدروليكية من دفع السرطان خلايا بعيدة جداً إلى الأمام من نقطة الحقن. اترك الإبرة في العصب بعد حقن 3 إضافية سيتم تصغير s مرة أخرى تدفق وسرطان الخلية التسرب. تشريح أثناء استخراج العصب الوركي، يجب أن تكون لطيف جداً كما العصب الوركي غزت هش للغاية. غزو السرطان يعطل المنظمة الخلوية العادية للعصب الوركي. على الرغم من أن تظهر الأعصاب غزت رشاقته في قطر مقارنة بغير الحقن أو غير غزت الأعصاب، هم أكثر عرضه لكسر مع تمتد حتى الثانوية والتلاعب. خلال التضمين للعصب قصت في أكتوبر للمعالجة، أنها هامة جداً لضمان أن وضعت العصب تماما شقة على العفن. تسمح هذه الخطوة لتقطيع العينة للقبض على طول العصب للتحليل السليم. الأورام الصلبة في العصب كثيرا ما يحتاج إلى تهذيب لمنع الجزء العصب الدانية للورم من إثارة العصب قبالة الجزء السفلي من القالب. يجب أن يوضع على طول العصب تماما شقة ضد العفن.
ويمكن اعتبار العديد من التعديلات أثناء استخدام هذا البروتوكول. عندما لا يتوفر ملعقة معدنية صغيرة توضع تحت العصب الوركي، السطح من زوج من الملقط واسعة يمكن استخدامها بدلاً من ذلك. يمكن استخدام ملقط عقد الإبرة في مكانها بعد الإدراج، على الرغم من الجوانب السلبية لهذا النهج طريقة عرض تقلص الحقن وإمكانات لسحق العصب إذا استخدمت القوة المفرطة. طريقة أخرى استخدام ملقط ما يرام لرفع العصب، ثم فتح الملقط على امتداد الأعصاب. هذا الأسلوب هو أسهل لتنفيذ ويوفر كل من التوتر وتحقيق الاستقرار من خلال الحقن، ولكن قد تتلف العصب مع التمدد المفرط للعصب. يمكن أن يتم الحقن في اتجاه القريبة أو البعيدة، ولكن وجدنا أن في كلتا الحالتين، يتم عادة باتجاه غزو السرطان نحو النخاع الشوكي. ولذلك، نحن نفضل الحقن ديستالي للتقليل من زيادة القوة الهيدروليكية التي قد تدفع الخلايا السرطانية نحو النخاع الشوكي، والخلط بين تدابير لاحقة لطول الغزو. ننصحك بأن من المهم أن تكون متسقة في اختيار اتجاه حقن داخل مجموعة من التجارب.
على الرغم من أن نقدم نموذجا لتطعيم سينجينيك، يمكن استخدام تقنية مماثلة للخلايا السرطانية البشرية تكثيفها في الفئران العوز، مع اختلافات طفيفة فقط. تكثيفها في الفئران عارية قد يتطلب فترات أطول من غزو السرطان تسفر عن أطوال مماثلة لغزو العصب كما في نماذج سينجينيك. يمكن أيضا استخدام خطوط خلايا السرطان المختلفة. الدكتور ليس فقط انتشارا في سرطان البنكرياس، ولكن أيضا للرأس والرقبة، والبروستاتا، وسرطان الجلد. لدينا مختبر قد بنجاح حقن الفئران عارية في العصب الوركي مع خطوط الخلايا البشرية سرطان البنكرياس مياباكا-2 و Panc17،،من1415.
وتشمل الأحداث الضائرة الممكنة dehiscence الجرح، أحياناً مضغ الفئران غرز ما أدى إلى فتح الجرح. وفي هذه الحالة، يلزم الجرح يمكن إعادة مخيط. نحن فحص الجرح يوميا لأول مرة 3 أيام بعد العمليات الجراحية. الفئران قد أيضا سيرا على الأقدام مع يعرج طفيف بعد، يرجح أن سبب الألم من على حد سواء إجراء العمليات الجراحية، فضلا عن غزو على العصب الوركي مع مرض السرطان. هذا عادة غير شديدة بما يكفي لتتطلب أدوية الألم.
هذا النموذج على القيود. قد تخلق بعض مقدار معسر العصب أثناء الإجراء وتمتد أضرار في العصب. وبالإضافة إلى ذلك، من الصعب تحديد العدد الدقيق للخلايا الخوض في العصب. علاوة على ذلك، يقتصر هذا النموذج بدراسة الخلايا التي قد غزت الفعل الأعصاب. أنها ليست نموذجا لدراسة التفاعل بين الأعصاب مع خلايا السرطان الموجودة في الورم الرئيسي. والعيب الرئيسي لاستخدام الأعصاب الوركي مقابل أعصاب الجهاز الهضمي أن العصب الوركي ليس موقع المنتشر من سرطان البنكرياس. الفرق في التكوين وطبيعة الألياف العصبية يمكن أن تؤثر الغزو. ومع ذلك، بإمكانية الوصول وحجم صغير جداً للأعصاب البنكرياس لن تسمح هذه دراسة.
سيكون لدينا اقتراحات رئيسية للمبتدئين إزالة الشعر في منطقة واسعة حول المواقع شق المخطط بحيث يمكن بسهولة التعرف على المعالم وأن نتأكد من لديها موقف ثابت قبل بداية لحقن. بعد العديد من الحقن، المؤدي يجب أن تكون قادرة على الحصول على 100% حيوانات مع غزو العصب.
هذا النموذج يسمح للدراسة التفاعلات بين أنواع السرطان والأعصاب في نموذج حيوان. ويمكن تطبيقه على مجموعة واسعة من دراسات الأورام باستخدام الفئران المعدلة وراثيا، والخلايا السرطانية، أو كليهما. يمكن أيضا اختبار العلاجات الدوائية ضد غزو الورم على طول الأعصاب بمقارنة الطول ومجال غزو بين المجموعات المعالجة والمراقبة. هذه التطبيقات الممكنة المختلفة تجعل هذا النموذج أداة قوية وتنوعاً للغاية لدراسة الدكتور.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
الكتاب الاعتراف بالخدمات التقنية التي يقدمها مرفق الخلايا الجزيئية ومرفق الحيوان من مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان. ودعمت هذا العمل منح المعاهد الوطنية للصحة CA157686 (للملكية الأردنية وونغ) و P30 CA008748 (منحة دعم مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse | Number and age variable depending on experimental needs | ||
| Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS) | Any | Steps 1.1, 1.2, 1.3. | |
| Conical centrifuge tube, 50 mL | Falcon | 352098 | Step 1.1 |
| Microcentrifuge tube 1.5 mL | Axygen | MCT-150-C-S | Step 1.2 |
| Electric razor | WAHL | 9962 | Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent |
| Isoflurane, 250 mL | Baxter | 1001936060 | Step 2.2 |
| Hypoallergenic surgical tape | 3M Blenderm | 70200419342 | Step 2.3 |
| Betadine Swapsticks | PDI | SKU 41350 | Step 2.4 |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 | Step 2.4 |
| Sterile surgical tools (scissors and forceps) | Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5 | ||
| 10 μL Hamilton syringe | Hamilton | 80308 | Steps 2.7, 2.8 |
| Steel Micro spatula | Fisher Scientific | S50823 | Step 2.7 |
| Dissecting microscope | Step 2.7 | ||
| Bupivacine, 1 g | Enzo Life Sciences | BML-NA139-0001 | Step 2.9. Reconstitute to 0.5% |
| 5-0 Nylon suture | Ethicon | 698H | Step 2.9 |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | VWR | 25608-930 | Step 4.1 |
| Tissue-Tek Cryomold Molds | VWR | 25608-916 | Step 4.1 |
References
- Liebig, C., Ayala, G., Wilks, J. A., Berger, D. H., Albo, D. Perineural invasion in cancer. Cancer. 115 (15), 3379-3391 (2009).
- Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer. Nat Rev Cancer. 11 (10), 695-707 (2011).
- Deborde, S., Wong, R. J. How Schwann cells facilitate cancer progression in nerves. Cell Mol Life Sci. 341 (177-186), 1236361-1236416 (2017).
- Abiatari, I., et al. Consensus transcriptome signature of perineural invasion in pancreatic carcinoma. Mol Cancer Ther. 8 (6), 1494-1504 (2009).
- Ayala, G. E., et al. In vitro dorsal root ganglia and human prostate cell line interaction: redefining perineural invasion in prostate cancer. Prostate. 49 (3), 213-223 (2001).
- Gil, Z., Cavel, O., et al. Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves. J Natl Cancer Inst. 102 (2), 107-118 (2010).
- Deborde, S. T., et al. Schwann cells induce cancer cell dispersion and invasion. J Clin Invest. 126 (4), 1538-1554 (2016).
- Pour, P. M., Egami, H., Takiyama, Y. Patterns of growth and metastases of induced pancreatic cancer in relation to the prognosis and its clinical implications. Gastroenterology. 100 (2), 529-536 (1991).
- Eibl, G., Reber, H. A. A xenograft nude mouse model for perineural invasion and recurrence in pancreatic cancer. Pancreas. 31 (3), 258-262 (2005).
- Stopczynski, R. E., et al. Neuroplastic changes occur early in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma. Cancer Res. 74 (6), 1718-1727 (2014).
- Gil, Z., et al. Nerve-sparing therapy with oncolytic herpes virus for cancers with neural invasion. Clin Cancer Res. 13 (21), 6479-6485 (2007).
- Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).
- Cremer, H., et al. Inactivation of the N-CAM gene in mice results in size reduction of the olfactory bulb and deficits in spatial learning. Nature. 367 (6462), 455-459 (1994).
- He, S., et al. The chemokine (CCL2-CCR2) signaling axis mediates perineural invasion. Mol Cancer Res. 13 (2), 380-390 (2015).
- He, S., et al. GFRα1 released by nerves enhances cancer cell perineural invasion through GDNF-RET signaling. P Natl Acad Sci USA. , 02944 (2014).
