Summary
Biz bir vivo içinde fare modeli perineural işgalinin siyatik sinir syngeneic pankreas kanseri hücreleri enjekte edilerek tanımlamak. Model ölçüde sinir işgalinin miktar için sağlar ve araştırma perineural işgalinin hücresel ve moleküler mekanizmaları destekler.
Abstract
Kanser hücrelerinin hangi kanser hücreleri çoğalırlar ve sinir microenvironment göç perineural işgali (PNI) olarak adlandırılan bir süreç sinirleri istila. İstila bu tür kanser türleri çeşitli tarafından sergilenen ve çok sık pankreas kanseri bulundu. Sinir lifleri fare pankreas içinde mikroskobik boyutunu PNI çalışmanın orthotopic fare modellerinde zor işler. Burada, nerede biz syngeneic pankreas kanseri hücre kültürünü Panc02-H7 fare siyatik sinir enjekte PNI, heterotopik vivo içinde modeli açıklar. Bu modelde, siyatik sinir imzalat farelerin maruz ve kanseri hücreleri enjekte. Kanser hücrelerinin sinirler omurilik enjeksiyon noktasından proksimale doğru istila. Baskına siyatik sinirleri sonra ayıklanır ve donmuş kesit için OCT ile işlenebilir. H & E ve bu bölümleri ayirt boyama işgali ve değişiklikleri her iki derece miktar protein ifadede izin verir. Bu model çok yönlü verilen PNI üzerinde çalışmalar çeşitli uygulanabilir. Farklı genetik değişiklikler ve/veya kanser hücrelerinin farklı türleri ile fare kullanarak PNI hücresel ve moleküler mekanizmaları incelenmesi ve farklı kanser türleri sağlar. Ayrıca, tedavi edici ajanların etkileri sinir işgali üzerinde bu farelerde tedavi uygulayarak okudu.
Introduction
Sinirleri uyarır kanser büyüme ve geçiş1,2,3belirli tümör microenvironment oluştururlar. Perineural işgali (PNI) içinde ve çevresinde sinirler hangi kanser hücreleri istila işlemidir. Sinirler boyunca kökenli siteleri uzak kanseri istila genişletir beri metastaz benzersiz bir yol olarak düşünülebilir. PNI % 22'i % 1001,2' ye kadar değişen bir insidans ile pankreas, prostat, baş ve boyun, tükürük, servikal ve kolorektal kanserler gibi çeşitli kanser türleri bulunur. PNI ağrı ile ilişkili olan ve kötü prognoz ve kötü hayatta kalma oranları1,2ile karşılıklı olarak ilişkilendirir.
Modelleri perineural işgalinin geliştirmeye, hücresel ve moleküler mekanizmaları bu sürecin aydınlatmak için ve aday terapötik ajanlar PNI azaltmak için test etmek esastır. Kanser hücrelerinin sinir explants4, dorsal kök ganglions5,6,7veya belirli hücreleri ile ortak kültür vitro kanserleri ve sinirler arasındaki etkileşimler eğitim yöntemleri şunlardır sinir7microenvironment gibi Schwann hücreleri. Vivo yaklaşımlar, ancak, daha fizyolojik ilgili, hangi kanser indüklenen nakledilen veya kanser fare modelleri kullanımını içerir ve tüm sinir microenvironment için muhasebe avantajına sahip. Orthotopic pankreas veya Prostat Kanser, PNI modelleri bildirilen8,9,10 olmuştur ve PNI insidansı kaydedilebilir, ancak bu organlar sinirler küçük boyutu nedeniyle, görmek zordur Tüm sinir ve bu nedenle PNI kapsamını ölçmek için. Biz burada tarif hangi kanser hücreleri-basit bir cerrahi prosedür11farelerin siyatik sinir içine enjekte edilir PNI vivo içinde modelin modelidir. Heterotopik transplantasyon sinir omurilik doğru içinde işgal etti. Sinir işgali sitesinden enjeksiyon spinal kord uzunluğu, yanı sıra sinir içinde kanser hacmi ölçülecek. Önemlisi, baskına sinir deneyleri mikroskobik ve moleküler analizleri de dahil olmak üzere çeşitli için toplanabilir. Kanser hücrelerinin çeşitli test ve genetik olarak değiştirilmiş veya belirli bileşikler ile tedavi ana bilgisayar fare de kullanılabilir olur. Bu güçlü tahlil kanser hücreleri ve ana bilgisayar microenvironment için PNI mekanizmaları içine soruşturma için değişiklik yapılmasına izin verir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm yordamları hayvan konuları ile kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi tarafından kabul edildi.
1. kanser hücrelerinin hazırlanması
- Hasat alt Konfluent Panc02-H7 hücrelerle % 0.25 tripsin 37 ° C'de 5 min için 15 mL santrifüj tüpü hücrelerde toplamak.
Not: Hücreleri yaklaşık 12 x %10 80 confluency ve 4 mL tripsin şişesi başına6 hücre içeren T-225 şişesi yetiştirilen / şişesi kullanılır. - Senaryo Özeti 5 dk. hücre resuspending tarafından hücreleri (yukarı ve aşağı iki kez pipetting tarafından) 1 mL PBS cips ve süspansiyon 1.5 mL microcentrifuge tüp buz üzerinde aktarım yıkama için 4 ° C'de 900 g x santrifüj kapasitesi.
- Tekrar hücreleri 5 min için 4 ° C'de 900 g x santrifüj kapasitesi ve süpernatant Pelet bozmadan atın. Buzda pelleted hücreler enjeksiyon kadar tutmak.
2. fare ve cerrahi hazırlanması
Not: Bu çalışmada 8-hafta-yaşlı, erkek ve dişi C57BL/6J fareler kullanılır. Ameliyat koşulları kuruluşumuzun IACUC kuralları izler. Aletleri sterilize, cerrahi çalışma yüzeyi dezenfekte, hayvan dezenfekte ve cerrah steril eldiven giyer.
- Ameliyattan önce gününde % 2 isoflurane kullanarak fare anestezi ve dorsal tarafta femur uzunluğu boyunca kürk ince bir jilet ya da kimyasal saç kaldırma aracı ile kaldır.
- Ameliyat günü, %2 isofluorane bir indüksiyon odasında kullanarak fare anestezi. Anesthetization bir ayak çimdik uyarıcı ve yanıt alınamaması onaylayın.
- Veteriner merhem göz kuruluğu anestezi altında önlemek için uygulayın.
- Ventral yan imzalat fareyi getirin ve yavaşça her bacak bacak enjekte edilir hafif gerginlik yaratmak için hipoalerjenik bant ile güvenli. Anestezi hassas Buharlaştırıcı ve burun konisi yolu ile teslim isoflurane kullanılarak korunur.
- Enjeksiyon yeri ile Betadine, sonra tekrar % 70 alkol ile temizleyin. Bu işlemi iki kez daha tekrarlayın. Hiçbir gevşek saç cerrahi sahada kalır emin olun.
- Küçük makas yaklaşık 2 mm aşağıda ve uyluk kemiği paralel ile 1 cm kesi yapmak. Cilt yanal kas altında ortaya çıkarmak için Forseps ile geri çek.
- Siyatik sinir derin gluteus maximus ve pazı kemiği kasları çalıştırır. Bu iki kaslar Fasial uçağa boyunca küçük makasla ayırmak ve siyatik sinir altında bulaşmasına neden. Künt diseksiyon kullanarak çevresindeki kas sinir ücretsiz.
- Kanser hücrelerinin (yaklaşık 50.000 hücreleri) 3 μL Pelet 10 μL enjektör çizin.
Not: Alternatif olarak, bir denetim olarak PBS 3 μL çizin. - Destek için enjeksiyon noktasında sinir altında küçük bir metal spatula yerleştirin. Diseksiyon mikroskop ile görselleştirme altında sinir sinir üzerine ekleme mümkün olduğunca paralel olarak iğne tutarak metal üssüne iğne takın. Sinir arkadan ponksiyon vermemek dikkatli olun. Sinir bu süreci boyunca mümkün olduğu kadar kullanımı en aza indirmek.
- Yavaş yavaş sinir üzerinde 5 enjekte s. Bir ampul enjeksiyon alanında bir oluşumu iyi bir enjeksiyon gösterir. Sonra yerde 3 için iğneyi bırak iğneyi yavaşça kaldırmadan önce s. İğne 3 için yerinde tutmak s geri dışarı sinir hücrelerinin en aza indirir.
Not: Enjeksiyon distal sinir veya spinal kord doğru gerçekleştirilebilir. Deneyler bir dizi içinde tutarlı kalması önemlidir. Hücreleri dışında dökmek, hayvan deney analize dahil edilmemesini. Deneyim ile bu olaylar çok nadirdir. - Sinir özgün konumuna geri dönün. Üstteki kaslı sinir kapsar. Fareler uygun analjezi ile tedavi ve Cilt 5-0 naylon sütür ile kapatın.
- Tam anesteziden uyanır kadar fare kurtarma sırasında gözlem için temiz bir kafeste tek başına koyun.
Not: Tam kendine gelmek hayvan için 5-15 dakika sürer. Sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar hayvan katılımsız sol değil. Hayvan tamamen iyileşti kadar diğer hayvanlar şirkete döndürülür. Bundan sonra kurtarma en az bir kez her 24 saat 72 h için değerlendirin.
3. siyatik sinir çıkarma
- Ameliyat günü #7, CO2fareler ötenazi. Fare ventral onun yanına koyun ve iğne kullanarak distal ekstremitelerde stabilize.
- Enjekte bacak ve gövde dorsal tarafta cilt kaldırın.
- Künt diseksiyon kullanarak, siyatik sinir kas için derin ortaya çıkarmak.
- Sinir kursları Ilium ve sakrum arasında. Sinir omurilik bölge erişimi için iki kemik ayırın. Siyatik sinir olduğu dar alanda kapalı makas yerleştir ve makas fareyi basılı tutarak açın. Hassas ve diseksiyonu sırasında siyatik sinir bütünlüğünü korumak.
- Siyatik sinir klemple sonuna femur ve proksimale omurilik dikkatle incelemek.
- Not: Son derece kırılgan ve gerilim altında bilgileri veya güçlü işleme eğilimli baskına sinirler vardır.
- Sinir distal sonuna keserek hasat. Bitişik doku boşaltma sırasında sinir çýkýntýdan. Sonunda proksimal, omurga üzerinden onun çıkış için mümkün olduğunca yakın sinir kesti.
- Kayıt sonra bir Vernier Kaliper kullanarak işgalinin brüt uzunluğu. Bu makroskopik tahmin sadece göstergesidir.
4. işlem ve miktar cesareti
- Disseke sinir Ekim bileşik gömün. Yapmak emin sinirler boyuna yerleştirmek ve mümkün olduğunca kalıp alt gibi dümdüz.
- Kasette mektup P ve ö. işaretleyerek sinir proksimal ve distal tarafı belirtmek
- Hemen kesitli değil, gömülü sinirler kuru buz, üstüne koyun. Örnek-80 ° C'de birkaç hafta için korunmuş.
- Cryostat microtome cam slaytlara 5 mikron kalınlık ve yer bölümleri de kullanarak bölümü örnekleri. Mümkünse, slayt 2 sinir bölüm uygun. Proksimal sinir tarafında gösterir.
- H & E12boyama kullanarak slaytları leke.
- Dijital olarak lekeli sinir bölümleri ile yüksek çözünürlüklü dijital verileri sağlayan bir slayt inceden inceden inceye gözden geçirmek.
- Görüntüleme yazılımı kullanarak ölçmek işgalinin uzunluk ölçü mesafe düğmesini tıklatarak, işgal, ya da diğer parametreleri istenen. İstila uzunluğunu iyi bir tahmin için birden çok bölüm (2-4) aynı sinir kullanın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu yöntem pankreas kanseri hücreleri cerrahi implantasyon ölçülebilir sinir işgalinin vivo içinde model oluşturmak için fare siyatik sinir içine açıklar. Siyatik sinir anatomik konumunu ve Enjeksiyon Makinası şekil 1 gösterir. Şekil 2 bir çıplak fare iki siyatik sinirleri gösterir. Damarına enjekte PBS (solda) MiaPaCa-2 kanser hücreleri (sağda) enjekte bir sinir ile karşılaştırıldığında. Kanseri hücreleri enjekte sinir tümörü tarafından sızmış ve PBS ile enjekte sinir daha koyu ve kalın görünür.
Şekil 3 vahşi türü ve NCAM KO fareler pankreas kanseri hücre Panc02H7 siyatik sinir işgalinin ölçülebilir farklılıklar gösterir. NCAM KO fareler fare adezyon molekül sinir hücre adezyon molekül 1 eksik13olduğu değildir. Uzunluk ve alan işgalinin görüntüleme yazılımı kullanarak sayısal. İstila NCAM KO fareler7' önemli ölçüde azaltılmış bulundu.
Resim 1 : Fare siyatik sinir ve enjeksiyon site. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : İki fare siyatik sinirleri disseke. Bir PBS sinir (solda) ve MiaPaCa-2 kanser hücreleri (doğru) gösterilir enjekte damarına enjekte. Siyah oklar Enjeksiyon Makinası gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : Siyatik sinir Panc02H7 kanser hücrelerinde vahşi türü ve NCAM KO fareler ile enjekte H & E boyuna kesitler. Beyaz okları enjeksiyon ve spinal kord proksimal tarafında gösterir. Siyah oklar işgali ile karşılık gelen değerler (mm) uzunluğunu gösterir. Ölçek çubuğu: 5 mm (en iyi fotoğraf) ve 0.2 mm (alt resim). Sinir işgalinin, uzunluk ve alan işgalinin tarafından ölçülen miktar. Verileri temsil eden ortalama ± SD n = 8 (NCAM1 WT), n = 7 (NCAM1 KO), ** P < 0.005, *** P < 0.0005 t testi kullanma. (Sonuçlar Deborde ve ark., 20167). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu protokol için pankreas kanseri hücreleri tarafından siyatik sinir işgalinin miktar sağlar perineural işgalinin bir vivo içinde fare modeli açıklar. Bu model sinir işgalinin moleküler mekanizmaları çalışma sağlar. Bu tekniği kullanarak başarılı deneyler üç kritik adımı sürecinde dikkatli bir yaklaşım gerektirir: 1) enjeksiyon (Adım 2.7, 2.8), kanser hücrelerinin baskına sinirler (Adım 3.4) 2) çıkarımı ve 3) hasat sinirler (Adım 4.1) işlenmesi.
Enjeksiyon kanser hücrelerinin bir kaybına neden sinir arka duvarından delinme önlemek için büyük bir dikkatle yapılmalıdır. İğneyi yerinde olduğunda, enjeksiyon yavaş ve istikrarlı bir hızda üzerinde 5 yapılmalıdır kanser iten hidrolik güç önlemek için s hücreleri çok çok ileri enjeksiyon noktasından. İğneyi enjeksiyon için bir ek 3 sonra sinir ayrılmak s en aza indirmek geri akışı ve kanser hücre kaçak. Baskına siyatik sinir çok kırılgan olduğu gibi siyatik sinir emme sırasında diseksiyon çok nazik olmalı. Kanseri istila siyatik sinir normal hücresel organizasyonu bozar. Baskına sinirler görünse de çapı için sigara enjekte göre kalınlaşmasına veya sigara işgal sinirler, onlar bile küçük germe ve manipülasyon ile kırma daha yatkındır. Eksize sinir Ekim için işleme sırasında katıştırma, çok sinir tamamen düz kalıp koydu sigortalamak önemlidir. Bu adım için örnek kesit sinir uygun analiz için tüm uzunluğu yakalamak için izin verir. Sinir üzerinde Solid tümör kez sinir kalıp alt kapalı getirmekten tümöre proksimal sinir kesimi önlemek için kesilmiş olabilir gerekir. Sinir tüm uzunluğu tamamen düz kalıp karşı koydu gerekir.
Bu iletişim kuralını kullanan birçok değişiklikler kabul edilebilir. Küçük bir metal spatula siyatik sinir altında yerleştirilmesi kullanılabilir olmadığında, geniş forseps bir çift yüzeyi yerine kullanılabilir. Bu yaklaşım downsides enjeksiyon ve aşırı güç kullanılırsa sinir ezmek için potansiyel azalmış bir görünüm olmasına rağmen bir forseps iğne ekleme sonra tutmak için kullanılabilir. Başka bir yol sonra sinirleri germek için forseps açarak sinir kaldırmak için iyi bir forseps kullanmaktır. Bu yöntem yürütmek daha kolaydır ve gerginlik ve enjeksiyon sırasında istikrar sağlar, ancak aşırı sinir germe ile sinir hasar verebilir. Enjeksiyon her iki proksimal veya distal yönde yapılabilir, ama her iki durumda da, yön kanser işgalinin genellikle spinal kord doğru olduğunu bulduk. Bu nedenle, daha fazla kanser hücrelerinin omurilik doğru itin ve işgalinin uzunluğu daha sonra önlemler yıkmak olabilir hidrolik güç en aza indirmek için klemple enjekte tercih ediyoruz. Konuşmalarõnõzõ enjeksiyon deneyler bir dizi içinde yönünü seçiminde tutarlı olmak önemlidir.
Biz syngeneic aşılama modeli mevcut olsa da, benzer bir teknik immünyetmezligi fare, sadece hafif farklılıklar nedeniyle içine xenografts insan kanser hücreleri için kullanılabilir. Xenografts çıplak farelerde kanser işgalinin benzer uzunlukları syngeneic modeller olduğu gibi sinir işgalinin vermeye gerekli daha uzun süre olabilir. Farklı kanser hücre hatları da kullanılabilir. PNI sadece, ama aynı zamanda baş ve boyun, prostat ve deri kanseri Pankreas Kanserinde yaygın değil. Laboratuarımızın başarıyla siyatik sinir insan pankreas kanseri hücre hatları MiaPaCa-2 ile Çıplak fareler ve Panc17,14,15enjekte etti.
Farelerin bazen yara açılması sonucu kendi dikiş çiğnemek gibi olası advers olaylar yara yırtılması, içerir. Bu durumda, yara yeniden dikişli olması gerekir. Ameliyat sonrası ilk 3 gündür günlük yarayı kontrol. Fareler de hafif topallayarak postoperatively, büyük olasılıkla acıdan hem cerrahi işlem hem de onların siyatik sinir kanserli işgali nedeniyle yürüyebilirsiniz. Bu genellikle ağrı kesici gerektirecek ciddi değildir.
Bu model sınırlamaları vardır. Germe ve sinir pinching işlem sırasında bir miktar tazminat sinir içinde oluşturabilirsiniz. Buna ek olarak, gidiş sinir hücreleri tam sayısını kontrol etmek zordur. Ayrıca, bu model zaten sinirleri istila hücreleri çalışma odasına sınırlıdır. Bu kanser hücreleriyle içinde birincil tümör bulunan sinirler arasındaki etkileşimin çalışmaya bir model değil. Siyatik sinir gastrointestinal sistem gibi sinirlere karşı kullanmanın olumsuz yanı siyatik sinir pankreas kanseri metastatik bir site değildir. Kompozisyon ve sinir lifleri doğasını fark istila etkileyebilir. Ancak, erişilebilirliğini ve pankreas sinirleri çok küçük boyutlu böyle bir çalışma izin vermez.
Yeni başlayanlar için anahtar bizim öneriler işaretlerini kolayca tespit edilebilir böylece saç planlı kesi siteleri çevresinde geniş bir alanı kaldırmak için ve enjekte başlamadan sabit bir konuma sahip emin olmak için olurdu. Birçok enjeksiyonları sonra en iyi oyuncusu-meli muktedir sinir invaze olan hayvanların % 100 olsun.
Bu model kanserleri ve hayvan modelinde sinirler arasındaki etkileşimler için çalışma sağlar. Bu çok çeşitli Onkolojik çalışmalar genetik fareler, kanser hücrelerini veya her ikisini kullanarak uygulanabilir. Sinirler boyunca tümör işgali karşı farmakolojik tedavi de uzunluk ve alan tedavi ve kontrol grupları arasında işgalinin karşılaştırarak test edilebilir. Bu farklı olası uygulamalar bu PNI çalışmak için son derece çok yönlü ve güçlü bir araç model olun.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Yazarlar moleküler Sitoloji tesis ve hayvan tesisin Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi tarafından sağlanan teknik hizmetleri kabul etmiş oluyorsunuz. Bu eser NIH hibe CA157686 (R.J. Wong) ve P30 CA008748 tarafından desteklenmiştir (Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi destek hibe).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse | Number and age variable depending on experimental needs | ||
| Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS) | Any | Steps 1.1, 1.2, 1.3. | |
| Conical centrifuge tube, 50 mL | Falcon | 352098 | Step 1.1 |
| Microcentrifuge tube 1.5 mL | Axygen | MCT-150-C-S | Step 1.2 |
| Electric razor | WAHL | 9962 | Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent |
| Isoflurane, 250 mL | Baxter | 1001936060 | Step 2.2 |
| Hypoallergenic surgical tape | 3M Blenderm | 70200419342 | Step 2.3 |
| Betadine Swapsticks | PDI | SKU 41350 | Step 2.4 |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 | Step 2.4 |
| Sterile surgical tools (scissors and forceps) | Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5 | ||
| 10 μL Hamilton syringe | Hamilton | 80308 | Steps 2.7, 2.8 |
| Steel Micro spatula | Fisher Scientific | S50823 | Step 2.7 |
| Dissecting microscope | Step 2.7 | ||
| Bupivacine, 1 g | Enzo Life Sciences | BML-NA139-0001 | Step 2.9. Reconstitute to 0.5% |
| 5-0 Nylon suture | Ethicon | 698H | Step 2.9 |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | VWR | 25608-930 | Step 4.1 |
| Tissue-Tek Cryomold Molds | VWR | 25608-916 | Step 4.1 |
References
- Liebig, C., Ayala, G., Wilks, J. A., Berger, D. H., Albo, D. Perineural invasion in cancer. Cancer. 115 (15), 3379-3391 (2009).
- Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer. Nat Rev Cancer. 11 (10), 695-707 (2011).
- Deborde, S., Wong, R. J. How Schwann cells facilitate cancer progression in nerves. Cell Mol Life Sci. 341 (177-186), 1236361-1236416 (2017).
- Abiatari, I., et al. Consensus transcriptome signature of perineural invasion in pancreatic carcinoma. Mol Cancer Ther. 8 (6), 1494-1504 (2009).
- Ayala, G. E., et al. In vitro dorsal root ganglia and human prostate cell line interaction: redefining perineural invasion in prostate cancer. Prostate. 49 (3), 213-223 (2001).
- Gil, Z., Cavel, O., et al. Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves. J Natl Cancer Inst. 102 (2), 107-118 (2010).
- Deborde, S. T., et al. Schwann cells induce cancer cell dispersion and invasion. J Clin Invest. 126 (4), 1538-1554 (2016).
- Pour, P. M., Egami, H., Takiyama, Y. Patterns of growth and metastases of induced pancreatic cancer in relation to the prognosis and its clinical implications. Gastroenterology. 100 (2), 529-536 (1991).
- Eibl, G., Reber, H. A. A xenograft nude mouse model for perineural invasion and recurrence in pancreatic cancer. Pancreas. 31 (3), 258-262 (2005).
- Stopczynski, R. E., et al. Neuroplastic changes occur early in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma. Cancer Res. 74 (6), 1718-1727 (2014).
- Gil, Z., et al. Nerve-sparing therapy with oncolytic herpes virus for cancers with neural invasion. Clin Cancer Res. 13 (21), 6479-6485 (2007).
- Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).
- Cremer, H., et al. Inactivation of the N-CAM gene in mice results in size reduction of the olfactory bulb and deficits in spatial learning. Nature. 367 (6462), 455-459 (1994).
- He, S., et al. The chemokine (CCL2-CCR2) signaling axis mediates perineural invasion. Mol Cancer Res. 13 (2), 380-390 (2015).
- He, S., et al. GFRα1 released by nerves enhances cancer cell perineural invasion through GDNF-RET signaling. P Natl Acad Sci USA. , 02944 (2014).
