Summary
Hier präsentieren wir Ihnen teilweise Gallengang Ligatur als chirurgische Modell der Leberschädigung und Regeneration bei Nagetieren.
Abstract
Bei Nagetieren ist komplette Gallengang Ligatur (cBDL) der Hauptgallengang eine etablierte chirurgische Methode zur Untersuchung obstruktiver Cholestase und Gallengang Verbreitung. Langzeitexperimente können jedoch zu erhöhter Morbidität und Mortalität führen. In ausgewählten Mausstämme mit zugrunde liegenden Lebererkrankung können sinnvolle Vergleiche auch mit Ligatur der einer einzelnen Leberlappen, erfolgen die tierischen Verluste und Kosten reduzieren können. Hier beschreiben wir teilweise Gallengang Ligatur (pBDL) in der Maus, in der nur die linken hepatischen Gallengang ligiert ist, verursacht biliären Obstruktion in der linke Lappen aber nicht die restlichen Lappen. Mit sorgfältiger mikrochirurgische Technik können pBDL Experimente kostengünstig sein, da der unligated Lappen als interne Kontrolle, die aufgespaltenen Lappen dient, wenn Sie den gleichen Bedingungen in der selben Tier ausgesetzt. Im Gegensatz zu cBDL ist eine separate Schein betrieben Kontrollgruppe nicht notwendig. pBDL ist sehr nützlich um direkt vergleichen lokalisiert versus systemische Wirkungen von Cholestase und anderen Gewinnrücklagen Galle Komponenten. pBDL kann auch als eine neuartige Methode zu untersuchen, Mechanismen, die im Zusammenhang mit Medikamenten und Zellwanderung verwendet werden.
Introduction
Chirurgische Modelle der akuten Leberschädigung und Reparatur, wie teilweise Hepatektomie oder Gallengang Ligatur (cBDL), wurden seit Jahrzehnten bei Nagetieren zur Leberregeneration und Pathobiologie1,2zu studieren. In cBDL ist der Hauptgallengang (die alle Galle in der Leber produziert Kanalisation) ligiert, was obstruktive Cholestase, Entzündung und Fibrose in den ersten 2-3 Wochen nach der Operation, mit eventuellen Progression zur Leberzirrhose3. Gallengang Proliferation, Transdifferenzierung und Induktion von resident Leber Vorläuferzellen sind auch Funktionen von cBDL4,5. Obwohl cBDL spezifische Mechanismen der obstruktiven Cholangiopathy die gut-gekennzeichneten mit reproduzierbaren Ergebnissen in Wildtyp Mäusen und in dieser Stämme mit normalen Leber6,7,8 verdeutlicht, die Verfahren kann in einigen transgenen Mausmodellen von Lebererkrankungen, erfordern mehr Tiere als auf Grund der höheren Morbidität und Mortalität der biliären Obstruktion im Laufe der Zeit zu erwarten technisch anspruchsvoll sein. Diese Technik ist auch vorteilhaft für das Studium transgener Mäuse mit zugrunde liegenden Leber-Krankheit, die den Stress des längere Zeit Kurs Experimente nach cBDL sonst nicht tolerieren könnten.
pBDL bieten eine sinnvolle Alternative zu helfen, diese Herausforderungen zu überwinden. Erste pBDL Studien in Wildtyp Mäusen mit dem Ziel, lokal handelnde und systemische Mediatoren der Entzündung9zu unterscheiden. In pBDL die wichtigsten biliären Zusammenfluss der rechten und linken hepatischen Gallenwege über den Gallengang wird sorgfältig auf die Hilum visualisiert und nur die linken hepatischen Gallenwege ist um eine lokalisierte obstruktive Cholestase generieren ligiert. pBDL bietet mehrere Vorteile, cBDL. In pBDL dient der unligated Rechte Lappen als identisch übereinstimmenden interne Kontrolle für die aufgespaltenen linke Lappen, die gleichen systemische Effekte, wie Ernährungszustand oder zirkulierenden Faktoren ausgesetzt. Obwohl systemische Pro-inflammatorischen Mediatoren anwesend waren, Osawa Et Al. beobachtet weniger Fibrose und Nekrose in der unligated Lappen, aber erhöhte Entzündungszellen und transformierende Wachstumsfaktor β Ausdruck in der aufgespaltenen Lappen-9.
In jüngerer Zeit, umdefiniert pBDL, um Leber parenchymal einbehaltene Galle10zu untersuchen. Mithilfe der gleichen Tier für interne Kontrolle (unligated "Schein") und Versuchsgruppen halbiert pBDL effektiv die Anzahl der Tiere pro Experiment, welches wiederum kostengünstiger ist. Die Mäuse vertragen die Auswirkungen der pBDL viel besser, so dass der ideale Zeitpunkt Kurs experimentieren (≥2 Wochen) in der aufgespaltenen Lappen erreicht werden können. Vor allem pBDL direkte intrahepatischen Auswirkungen der obstruktiven Cholestase unterscheiden kann und Galle Komponenten in der aufgespaltenen Lappen, im Vergleich zu der unligated Kontrolle Lappen beibehalten. Insgesamt ist die pBDL eine attraktive Methode, Lappen-spezifische Effekte der lokalisierten Cholestase in der Leber zu studieren.
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Protocol
Alle Verfahren wurden im Einklang mit ethischen Richtlinien des institutionellen Animal Care und Verwendung von der University of Pittsburgh durchgeführt.
1. grundlegende Techniken und gemeinsame Verfahren
- Autoklav alle mikrochirurgische Ausrüstung vor dem Gebrauch.
- Um zu vermeiden, die Maus zu töten, indem Anästhesie, prüfen Sie sorgfältig ihre Atmung.
- Tippen Sie auf Organe und Darm möglichst wenig schädigen Organe und verursacht Blutungen zu vermeiden. Drücken Sie blutende Punkte mit feuchten Wattestäbchen oder Gaze Schwämme.
- Verwenden Sie nasse Wattestäbchen für sanfte Manipulation der Organe. Nass, Vlies-Gaze Schwämme sind in zwei Größen verwendet, 3,5 × 3,5 cm und 6,0 × 6,0 cm. verwenden Sie die kleinere ganze Leber zurückziehen. Verwenden Sie den größeren, um den kleinen und großen Darm zu wickeln.
(2) präoperativen Vorbereitung
- Verwenden Sie männliche c57/b6 Mäuse 8-12 Wochen alt (wenn Körpergewicht ist ca. 20-35 g) für teilweise Gallengang Ligatur.
- Erlauben Sie die Mäuse freien Zugang zu Wasser und Nahrung bis zum Induktion der Anästhesie.
3. teilweise Gallengang-Ligatur-Operation
- Die Maus zu betäuben, indem man das Tier in eine Induktion-Kammer mit einer Mischung aus 1,5-2,0 % Isofluran und 1 L/min Sauerstoff. Überwachen Sie das Tier durch die Beobachtung der Atemfrequenz sorgfältig. Wenn die Atmung des Tieres einem Atemzug pro Sekunde beträgt, ist die Maus gut betäubt. Da vorderen Gliedmaßen Rückzug Reflex schneller verschwindet, ziehen Sie die hinteren Gliedmaßen Fuß sowie um völlige Fehlen der Reflex-Entzug zu bestätigen zu. Augen sollten mit einem ophthalmologischen Schmier Mittel zu Hornhautgeschwüren geschmiert werden. Beachten Sie die erste Dosis Schmerzmittel kann präoperativ gegeben werden, zur Stimulation der Schmerz-Rezeptoren zu verhindern.
- Rasieren Sie die Bauchdecke mit Haarschneidemaschinen, und platzieren Sie den Mauszeiger auf dem OP-Tisch unter dem Operationsmikroskop. Fixieren Sie alle Glieder an den Tisch mit Klebeband. Verwenden Sie Isofluran Inhalation zur Wartung der Maus unter Vollnarkose.
- Anpassen des Verdampfers Isoflurane und 2,0-3,0 % Isofluran für Induktion.
- Verwendung von sterilen Tupfer desinfizieren die Bauchwand zuerst mit 0,3-0,5 mL Povidon-Jod angewendet topisch, gefolgt von 70 % Ethanol. Tier sollte mit einem sterilen Tuch abgedeckt werden.
- Machen Sie einen langen Mittellinie Bauchschnitt aus dem Xiphoid um das Schambein mit der Schere und Adson Pinzette. Nachdem Sie haben den Bauchschnitt, reduzieren Isofluran auf 0,8-1,0 % für die Wartung.
- Setzen Sie die Bauchhöhle mit einem Micro-Retraktor aus. Das Xiphoid mit Moskito-Zange halten und in Richtung zum Kopf der Maus einfahren. Fixieren Sie die Moskito-Zange mit weichem Ton.
- Einzuflößen 1-2 mL erwärmten (37 ° C) sterilisiert Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS) in die Bauchhöhle, nicht zu verletzen, Bauchorgane. Halten Sie den Dünndarm mit feuchten Wattestäbchen und ziehen sie sanft in Richtung zum Kopf der Maus. Schneiden Sie die Bänder zwischen den kleinen Därmen und Retroperitoneum, nicht zu verletzen, den Dünndarm (Abbildung 1A).
- Wickeln Sie den kleinen und großen Darm mit einem Schwamm nass, Vlies-Gaze. Legen Sie sie auf den kaudalen Teil der Bauchhöhle. Steril drapiert Feld zur Vermeidung von Kontaminationen können Darm verpackt in sterile Gaze auferlegt werden.
- Sanft Einfahren der gesamten Leber in Richtung der Xiphoid mithilfe einen kleinen nassen Vlies Gaze-Schwamm, setzen die hepatische Hilum und Hepato-Zwölffingerdarm Ligament (Abbildung 1 b).
- Überprüfen Sie die Anatomie des hepatischen Hilum bestätigen. Hauptgallengang befindet sich auf der Bauchseite der Pfortader. Standorte der rechten und linken hepatischen Gallenwege, die in den wichtigsten biliären Zusammenfluss bei der hepatischen Hilum entwässern zu bestätigen.
- Identifizieren Sie der linken hepatischen Gallenwege die Kanalisation den linken Lappen, und umschließen Sie es mit einer 10-0-Nylon-Naht mit der stumpfen Seite einer Naht-Nadel (Abbildung 2A). Nicht zu verletzen, der Pfortader, der Leberarterie und Leber Oberfläche.
- Verbinden Sie den linken Gallengang mit 10: 0 Nylon. (Abb. 2 b).
- Legen Sie den kleinen und großen Darm in der gleichen Position wie vor der Operation mit feuchten Wattestäbchen.
- Bestätigen Sie, dass es keine Darm Torsion und intraabdominellen Blutung, dann schließen Sie den Muskel und die Haut in zwei Schichten mit 4-0 Vicryl. Geflochtene Naht (Vicryl) diente zur Schließung der Haut, aber Monofilament wird bevorzugt, um die Wahrscheinlichkeit einer Infektion zu verringern.
Hinweis: Schließen Sie Faszie durch kontinuierliche Naht von Xiphoid bis Schambein und die Haut durch kontinuierliche Naht vom Schambein zum Xiphoid. - Narkose nach dem Schließen des Schnittes zu stoppen.
4. postoperative Behandlung und Nachsorge
- Gerade nach der Operation, kneifen die Rückenhaut der Maus und Spritzen Buprenex (0,1 mg/kg) und Cefazolin (100 mg/kg) subkutan, gefolgt von Buprenex Injektion alle 12 h für 3 Tage und Cefazolin alle 24 h für 3 Tage bzw.11,12 ,13. Beachten Sie die erste Dosis Schmerzmittel kann präoperativ gegeben werden, zur Stimulation der Schmerz-Rezeptoren zu verhindern. Cefazolin und andere perioperative Antibiotika sind nur für Immunsystem unterdrückt Tiere, wie Sie in Transplantation Studien notwendig.
Hinweis: Wenn die Operation erfolgreich durchgeführt wird, die Maus in der Regel erholt sich innerhalb von 30 min. Aktivität der Mäuse werden fast identisch mit dem präoperativen Zustand. - Überprüfen Sie die Mäuse täglich für alle Zeichen der Bedrängnisses.
- Die Mäuse durch zervikale Dislokation unter Vollnarkose für die Beschaffung von Leber und anderen Gewebeproben zu definierten Zeitpunkten (d. h., 7, 14, 21 Tage) nach pBDL zu opfern.
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Representative Results
Für dieses typische Experiment war pBDL in dreifacher Ausfertigung PiZ transgenen Mäusen durchgeführt, die die menschliche Leber Krankheit gefunden (A1AT) Alpha1-Antitrypsin-Mangel zu rekapitulieren. Die PiZ-Maus overexpresses ein Transgen, bestehend aus mehreren genomische Fragmente von DNA, die kodierenden Bereiche des menschlichen A1AT Mutation und Förderer zusammen mit Introns und ~ 2 Kilobases der vor- und nachgelagerten flankierenden Regionen14enthalten, 15. Normale A1AT ist ein sekretierten Serumprotein in der Leber produziert. Die mutierte Form des A1AT erzeugt unlöslichen Protein-Aggregate, die spontan reichern sich in der Leber verursachen toxische Belastung. Die Experimente genutzt, 3 - Monate alte männlichen PiZ-Mäusen, die die schwersten Phänotyp dieser Krankheit äußern, wenn die Proteinaggregation16Spitzen.
Serum Leber Biochemistries wurden in pBDL und cBDL PiZ Mäuse (Tabelle 1)10verglichen. Die Leberenzyme Alanin-Aminotransferase (ALT) und Aspartat-Aminotransferase (AST) sind Biomarker des hepatozellulären Verletzungen, während insgesamt Serum Bilirubin (TSB) den Grad der Cholestase misst. Insgesamt zeigte Mäuse ausgesetzt pBDL nicht Anzeichen einer schweren Schädigung der Leber oder Cholestase, wie deren Serum-Werte ähnlich wie Grundlinie10 waren. Es ist wichtig zu beachten, dass Mäuse mit ausgefallenen pBDL (aufgrund von technischen Problemen, wie z. B. Gallengang oder vaskulären Verletzungen) Serum-Werte ähnlich cBDL Mäuse, mit deutlich erhöhte Leberenzyme und TSB zeigen werden. Klinisch, Mäuse mit ausgefallenen pBDL erscheint, Gelbsucht und verzweifelt, mit Ergebnissen der Galle Lecks, Aszites, Peritonitis oder Hämatom, und letztlich geopfert werden müssen.
Da Mäuse ausgesetzt pBDL Lappen-spezifische obstruktive Cholestase entwickeln, erwerben sie kein aufgetrieben, dunkel, Galle gefüllten Gallenblase in cBDL gesehen. Nur der aufgespaltenen Lappen erscheint heller, während die unligated Lappen ihre normal, dunkel, rötlich-braune Färbung (Abbildung 3) beibehalten werden. Es gibt wichtige Unterschiede in Leber Histologie als auch mit erhöhten Gallengang Proliferation und Fibrose in der aufgespaltenen Lappen (Abbildung 4). 10
Tabelle 1: Repräsentative Serum Leber Biochemistries von teilweise Gallengang Ligatur (pBDL) im Vergleich zum Gallengang Ligatur (cBDL) abgeschlossen 10 . Jeder Zeitpunkt entspricht ca. 3-4 Mäuse. Hinweis: PiZ transgene Mäuse auf c57/bl6 Hintergrund. Lab Referenzbereiche sind auch in Klammern angegeben. (WT Wildtyp; TSB, total Serum Bilirubin; ALT, Alanin-Aminotransferase; ALP, alkalische Phosphatase).
Abbildung 1:Exposition des abdominalen Kavität und Artischockenblättern. (A) Dünndarm werden sanft zurückgezogen, um Darm Verletzungen zu vermeiden und die verbindenden Bänder sind aus Retroperitoneum freigeschnitten. (B) Leber wird sanft zurückgezogen, um maximale Visualisierung der biliären Struktur auf die hepatische Hilum (Pfeil) zu ermöglichen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 : Teilweise Gallengang Ligation. (A) dem stumpfen Ende der chirurgischen Nadel wird verwendet, um sorgfältig die Nylon-Naht um linken hepatischen Gallenwege, über dem Zusammenfluss, der Gallengang (original Vergrößerung 40 X) umschließen. (B) erfolgreiche Ligatur der linken hepatischen Gallenwege, die normalerweise die linken Leber Lappen Kanalisation. Die restlichen Gallengänge sind unligated (original Vergrößerung 40 X). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3: grobe Aussehen der WT (c57/b6) Maus Leber 14 Tage nach pBDL. Beachten Sie, dass der aufgespaltenen linke Lappen heller (Pfeile), erscheint während die unligated Lappen ihre normale, dunkel, rötlich-braune Färbung behalten. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 : Lappen-spezifische Änderungen in repräsentativen Lebergewebe Abschnitten von Tag 14 pBDL unligated rechts (R) Lappen, aufgespaltenen linke (L) Lappen in WT (c57/b6) Mäuse zu vergleichen. (A) Hämatoxylin und Eosin (H & E) Färbung zeigt erhöhte Gallengang Proliferation (Pfeile) in der aufgespaltenen Lappen. (B) Sirius rote Fleck zeigt Überbrückung Fibrose begleiten Gallengang Verbreitung in der aufgespaltenen Lappen. Histologie für den PiZ Maus bisher berichtet10. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Obwohl cBDL die häufigste experimentelle Technik für obstruktive Cholestase ist, kann es mehrere Herausforderungen bei Nagetieren präsentieren. Abhängig von der Anzahl der postoperativen Tage benötigt, um einen Endpunkt zu erreichen können die Tiere erhebliche Morbidität und Mortalität mit fortschreitender Zeit erleben. Der Grad der Gewebeverletzung und biliären Nekrose wird weiter verschärft, bei der Arbeit mit einigen transgenen Mausmodellen der Lebererkrankung, die abnorme Leberparenchym und Funktion zu Studienbeginn zeigen. Im Vergleich zu cBDL, Berichte der pBDL beschränken, sondern diese Technik kann angewendet werden, als Alternative in ausgewählten Experimenten zu negativen Ergebnissen und tierischen Verluste zu reduzieren.
Variationen in der pBDL-Methode wurden ebenfalls berichtet. In der Methode der Heinrich Et Al.ist eine externe gebogene Nadel neben den Gallengang, gefolgt von Ligatur der Gallengang und die Nadel17gesetzt. Die Nadel wird dann vor Schließung der Bauchdecke, was zu begrenzten Galle Strömung durch eine verengte Lumen (d.h. Zwischensumme Obstruktion) der Gallengang17entfernt. Während dieses Vorgangs wird auch die Gallenblase entfernt, um Cholezystitis17zu verhindern. Die Autoren folgerten, dass diese Methode günstiger war, akuter Cholestase anstatt chronischen Veränderungen17zu studieren. Im Gegensatz dazu ist die pBDL-Methode, die wir hier beschrieben hochstrukturiert mit aufgespaltenen und unligated ("sham") Lappen im gleichen Tier, so dass weniger Tiere pro Experiment benötigt werden. Auch transgene Mäuse mit schweren zugrunde liegenden Lebererkrankung können für längere Endpunkte (2-3 Wochen) aufrecht erhalten werden. Vorsicht ist geboten, um vollständig aussetzen und identifizieren des biliären Baumes mit Mikrodissektion Techniken, mit begrenzten Manipulation der vaskulären Strukturen und Gallenwege, Verletzungen zu vermeiden.
Im idealen Experiment werden Gewebe aus der aufgespaltenen (links) und unligated (rechts) Lappen zum gleichen Zeitpunkt geerntet werden, sodass direkte Vergleiche von Galle sekretorischen Funktion und Transportern mit histologische und molekularbiologische Techniken gemacht werden können. Obwohl Leber Serum Biochemistries schwere Cholestase nicht entsprechen werden, wird der aufgespaltenen Lappen histologische Veränderungen im Zusammenhang mit obstruktiver Cholestase10demonstrieren. Dieses Modell ist nützlich, um direkte microenvironmental Auswirkungen der einbehaltenen Galle Komponenten (z. B.Gallensäuren, Lipide, Cholesterin) in der Leber zu untersuchen. Als eine Zukunftsstudie kann pBDL betrachtet werden, zu untersuchen, Cholehepatic rangieren, wo bestimmte Gallensäuren und Drogen direkt vom Cholangiocytes auf Hepatozyten18,19resorbiert werden. Endogene ineffizient von Hepatozyten konjugierte Gallensäuren werden von biliären Epithel, Cholehepatic sowie Rangier-, führt zu Hypercholeresis und Alkanlinization der Galle durch erhöhte Bikarbonat-Sekretion20unterziehen passiv aufgenommen. Anwendung der pBDL Technik könnte Wirkstoffforschung erleichtern, durch pharmakologische Mechanismen für neuartige Gallensäure Therapeutika in Untersuchung für Lebererkrankungen.
Zusätzliche Anwendungen für pBDL können der biliären Baum hinausgehen. Reversibilität der cBDL und ihre Begleiterscheinungen ist beschrieben worden, und dies kann auch zu pBDL mit direkten Vergleich für die interne Kontrolle21angewendet werden. In ähnlicher Weise wurde längs in Vivo Bioimaging Meinungsäußerung fluoreszierende Reporter in Maus Leber nach cBDL22, mit starken Auswirkungen auf die pBDL Experimente untersucht. Darüber hinaus haben Nagetier Experimente mit pBDL das Potenzial, Linie nachzeichnen oder "homing" des zirkulierenden Zellen, wie Knochenmark gewonnenen mesenchymalen Zellen, an den Ort der Schädigung der Leber, so dass sie verfolgten in Vivo mit mehr einbinden Präzision23,24,25.
Natürlich gibt es weit verbreitete Anwendungen für pBDL allein als intern geregelte und reproduzierbare Technik, Leberschäden und Reparatur, sowie biliären Physiologie und Droge Stoffwechsel zu studieren. Für Experimente, die darauf abzielen, die Progression und systemische Wirkungen der chronische Cholestase zu bewerten, ist cBDL immer noch die bevorzugte Methode; pBDL würde jedoch noch ergänzende Daten zur Unterstützung solcher Erkenntnisse hinzufügen.
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Disclosures
Die Autoren haben keine Angaben.
Acknowledgments
Dr. Khan bestätigt Zuschüsse aus NIH/NICHD K12HD052892, Alpha-1-Stiftung, Stiftung Hillman und Pittsburgh Leber Research Center. Dr. Michalopoulos erkennt Zuschüsse aus NIH/NIDDK P01DK096990. Wir freuen uns über die hervorragende und großzügige technische Hilfe von Anne Orr. Wir sind auch für den Zugriff auf die Transplantation/Nagetier Mikrochirurgie-Labor Dr. David A. Geller dankbar.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope-Leica Wild M650, 6–40× magnification | Leica Microsystems | n/a | |
| Tec 3 isoflurane funnel fill vaporizer | General Anesthetic Services | n/a | |
| Stevens Tenotomy Scissors | Accurate Surgical & Scientific Instruments Corporation | ASSI.9193 | |
| Adson Forceps | Fine science tools | 11006-12 | |
| Mosquito classic delicate hemostatic forceps | Codman | 30-4472 | |
| Micro-retractor | Murdock; Roboz Surgical Instrument | RS-6550 | |
| Nonwoven gauze sponges | Fisherband | 870-PC-DBL | |
| Puritan 6” Small Cotton Swab w/Wooden Handle | Puritan Medical Products Company | 868-WCS | |
| Dumont SS Forceps - Standard Tips/Straight/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-23 | |
| Dumont SS Forceps - Standard Tips/Angled 45°/Inox/13.5cm | Fine science tools | 11203-25 | |
| Vannas Spring Scissors - 3mm Cutting Edge | Fine science tools | 15000-00 | |
| Microneedle holder | Aesculap Surgical Instruments | FD231R | |
| Micro AROSuture, sterile 10-0 nylon suture, 70 µm, TAP points | AROSurgical Instruments Corporation | T4A10N07 | |
| 4-0 Vicryl | Ethicon | J662H | |
| 5-ml Syringe | BD | 309646 | |
| Falcon tissue culture dish, 60 × 15 mm | Corning | 353002 | |
| Isoflurane, United States Pharmacopeia (USP) liquid for inhalation, 250 ml | Piramal Healthcare | NDC 66794-017-25 | |
| Buprenex injectable (buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals | NDC 12496-0757-1 | |
| Cefazolin for injection , USP | APP Pharmaceuticals | NDC 63323-238-61 | |
| PVP scrub solution (povidone–iodine 7.5%) | Medline | NDC 12496-0757-1 | |
| 70% Ethanol | Decon Labs | 2716 | |
| Phosphate Buffered Saline Without Calcium or Magnesium | LONZA | 17-516F | |
| Sirius Red | Sigma | 365548 | |
| Hematolxylin | Fisher (Richard-Allan Scientific) | 22-050-111 (7211) | |
| Eosin | Anatech (Fisher) | 832 (NC9686037) | |
| Formalin | Fisher | SF100-20 |
References
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