Summary
Forstå emalje dannelse og mulige endringer krever studiet av ameloblast aktivitet. Her beskriver vi en pålitelig og konsekvent metode å mikro-analysere emalje organer som inneholder sekresjon og modning scenen ameloblasts som kan brukes for ytterligere kvantitative og kvalitative eksperimentelle prosedyrer.
Abstract
Emalje feil skyldes miljøforhold og levemåter er offentlig helse bekymringer deres høy utbredelse. Disse feilene skyldes endret aktiviteten til celler ansvarlig for emalje syntese kalt ameloblasts, som finnes i emalje orgel. Under amelogenesis følge ameloblasts en spesifikk og presis hendelsessekvens spredning, differensiering og død. Rotte stadig voksende fortenner er en passende eksperimentell modell å studere ameloblast aktivitet og differensiering stadier i fysiologiske og patologiske tilstander. Her beskriver vi en pålitelig og konsekvent metode å mikro-analysere emalje organ for rotter utsatt for miljømessig giftstoffer. Mikro-dissekert dental epithelia inneholder sekresjon og modning scenen ameloblasts som kan brukes for kvalitativ eksperimenter, som immunohistochemistry analyser og i situ hybridisering, og kvantitative analyser som RT-qPCR, RNA-seq og vestlige blotting.
Introduction
Mange utviklingsmessige emalje feil kan skyldes eksponering for miljømessige giftstoffer og/eller upassende livsstil1,2,3,4. Karakteristikk av forstyrre hendelser og molekyler av amelogenesis ved hjelp av tiden beskrevet prosedyren vil fremme bruk av resulterende emalje defekter som tidlig markører for eksponering for flere giftstoffer, og kan hjelpe for å gjeninnføre historie helse hver pasient i perinatalperioden når emaljen er synthetized1,2. Emalje syntese kan deles inn i fire hovedfaser avhengig av ameloblast aktivitet5. Det første trinnet regroups forløper celler og pre-ameloblast spredning. Under det andre steget er skiller differensiert ameloblasts emalje matrix proteiner (Samkjøringsmodellen), hovedsakelig amelogenin, enamelin og ameloblastin, som bestemmer tykkelsen på siste emalje. Dermed fører eventuelle avbrudd i EMP syntese kvantitative feil av emalje. Etter at Cospatric av full emalje tykkelsen begynner modning scenen. I denne fasen tillater apatitt crystallite vekst i bredde og tykkelse emaljen å nå den høyeste mineralisering forholdet i en biologisk vev, med opptil 96% av vekten. Forstyrre hendelser som oppstår under modning scenen føre til kvalitativ emalje defekter. Endelig ameloblasts angi en fase av etter modning, også kalt pigmentering i Red, og gjennomgår apoptose under tann utbrudd gjør emalje feil (hvis noen) ubotelig og uhelbredelig, dermed mangler gir potensielle retrospektiv opptak av ameloblast understreker. Gnagere følger amelogenesis en lignende hendelsessekvens med particularity som vokser kontinuerlig sine fortenner, noe som gjør dem en passende modell å studere den generelle prosessen med amelogenesis. Dermed resulterer eventuelle avbrudd i amelogenesis i endringer av emalje kvalitet og/eller antall, avhengig av gang-vinduet i hendelsen forstyrre. I den forstand, eksponering for dioksin, bly og endokrine-forstyrre kjemikalier (EDCs) som bisfenol A (BPA), genistein og vinclozolin, har vist seg å generere emalje hypomineralizations1,2,3 ,6,7,8. Asymmetrisk hvite ugjennomsiktig flekker ble identifisert på fortenner av rotter utsatt for en lav dose BPA dose i fosterets perioden og den første måneden etter fødselen1. Disse emalje defekter i rotter, og de av menneskelig molar helikopteret hypomineralization (MIH), dele lignende klinisk, strukturelle og biokjemiske egenskaper. MIH er en nylig beskrevet dental emaljen patologi, for som etiologien fortsatt uklart9,10 til tross for mange årsaksfaktorer har vært hypotetiske9,10,11 ,12.
En annen viktig emalje hypomineralization patologi miljømessige faktorene er dental fluorosis (DF), som er en konsekvens av overdreven fluor absorpsjon (> 0,1 mg/kg/dag)13,14. Den viktigste kilden av fluor er drikkevann som er supplert eller naturlig beriket med fluor. Fluor er også ofte foreskrevet for å forhindre tannråte, men forebyggende dosen er bare 50% lavere enn toksisk one (≤0.05 mg/kg/dag). MIH og DF, to hyppige patologi skyldes eksponering for miljømessige faktorer, kan presentere fellestrekk som skal være preget på grunn av potensiering hypomineralizing effekter av fluor kombinert med andre giftstoffer som EDCs2 eller amoxicillin15.
Mikro-Disseksjon av rotte emalje organ som inneholder ameloblasts på ulike differensiering stadier hjelper for å forstå virkningsmekanismen av molekyler kunne forstyrre ameloblast aktivitet og forårsake emalje feil diagnostiseres etter tann utbruddet. Med andre ord, karakterisering av endringer av emalje gene expression og emalje matrix sammensetning på grunn av miljømessige giftstoffer kan rekonstituering historie eksponering for giftstoffer, og forenkler miljø sikkerhet overvåking for offentligheten helse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyrene brukes studien ble opprettholdt i henhold til retningslinjer og bruk av forsøksdyr fra franske departementet av landbruket (A-75-06-12).
1. dyr eksponering for giftstoffer
- Før du utfører denne protokollen, nødvendig institusjonelle godkjenning og gjerne overholde alle dyr omsorg retningslinjer.
- Bruke utformingen av forskning protokollen tillater Grunnloven av ulike eksperimentelle grupper for å teste effekten av molecule(s) undersøkt på ameloblast utskillelse scenen og ameloblast modning scenen. Her, ble fire grupper av Wistar hannrotter utgjorde avhengig av sin eksponering til fluor (NaF) i kombinasjon eller ikke med BPA (figur 1A)2. Alle dyrene ble observert og dissekert dag 65 (figur 1B).
2. Disseksjon av Hemi-Accolade fra voksen rotter
- Euthanize rotter av CO2 kvelning, etterfulgt av halshogging til separate hodet fra resten av kroppen. Utsett rotter CO2 i 5 minutter i en egen boks16.
- Fjerne alle hud fra lavere leppene med #11 skalpell for å få enkel tilgang til lavere fortenner.
- Med den samme skalpell, gjør et snitt mellom to lavere fortenner med et lett trykk og mandible vil bli delt i to halvdeler.
- Kutte timelige mandibular felles med skalpell koble kjeven, og hold hemi-mandible med fine pinsett.
- Skjær omkringliggende bløtvev med skalpell og Fjern alle muskler, sener og leddbånd bruke skraper til benet er helt rent.
3. isolering av helikopteret17,18
- Nøye barbere av benet ved å plassere bladet parallelt med den store langsgående aksen av helikopteret. Start på benete ryggen nær tips av helikopteret (proksimale enden) til slutten av helikopteret nær cervical løkken. Snitt bevegelsen fortsetter fra den proksimale distale retning.
- Foreta et første kutt distally cervical sløyfen med skalpell å fjerne gonion av hemi-mandible og tillater ta av i helikopteret lett uten å skade cervical loopen eller sekretoriske scenen av ameloblasts (rød linje i figur 2).
- Gjør en andre kutt under andre molar, og sett inn skalpell mellom bein og mediale overflaten av helikopteret. Når alle basale benet er løftet, rotere utover helikopteret og ta den av nøye unngå emalje organ tissue svekke ved hjelp av fine pinsett.
4. micro-Disseksjon av emalje Organ under kikkert linse
- Slipp 200 µL av Saline fosfatbuffer (PBS 1 X) på helikopteret bruker en pipette. Ta helikopteret med fine pinsett med labial overflaten grossist. Gjøre en skalpell merke mellom den fargeløs og oransje delene av vev. Dette merket tilsvarer den underliggende hvit flekken som er observerbare etterpå (figur 2).
- Skrape, med en gravemaskin eller tilsvarende verktøy, celleoverflaten fra skalpell merke til apikale slutten tilsvarende sekresjon scenen (fargeløs) ameloblasts og fra skalpell merke til spissen av helikopteret for modning scenen (oransje) ameloblasts.
- Fjerne 2 mm vevet tilsvarer overgang scenen, som tidligere beskrevet19. Ikke åpne helikopteret under emaljen orgel disseksjon å unngå forurensning av mesenchyme.
- Kuttet cervical loopen ligger rett ved den apikale delen av helikopteret (figur 2) som beskrevet tidligere20.
- Samle den i 10% formalin eller lysis løsning for videre undersøkelser (se Tabell for materiale).
5. samling av atskilt emalje Organ vev for videre undersøkelser
- Slipp 200 µL PBS 1 X buffer på helikopteret.
- Med #11 skalpell blad, nøye koble dental epitelceller gradvis i buffer, separat for hvert trinn med hjelp av skalpell merket gjort tidligere.
- Cellen RNA og protein utdrag, sette vevet i en lysis løsning som tillater utvinning av både proteiner og RNAs (se Tabell for materiale).
Merk: Forberede høykvalitets RNAs ved å slå vev-gravemaskin i røret, og deretter sliping cellene til å få en homogen blanding. Blandingen er klar for RNA og protein utdrag i henhold til produsentens prosedyren, som ble beskrevet tidligere2,8,17. Vanligvis om 5-10 µg totalt RNAs og 150 µg totale proteiner ble innhentet for hvert preparat. - For histologiske analyser sette immunohistochemistry (IHC), og i situ hybridisering (ISH), celle laget i 10% formalin for 2 timer, så butikken på 4 ° C i PBS 1 X. Vevet kan deretter være innebygd i voks/parafin eller vev OCT for frosne snitt.
- EMP utdrag, ta av helikopteret med fine pinsett. Etter en kort eksponering til luft (liten dehydrering) vises en hvit flekk rundt den midtre delen av labial overflaten av helikopteret, som representerer initiering av emalje mineraliseringen. Denne hvite flekk svarer til overgangen / tidlig modning fasen av ameloblasts, så bruk den som en indikator for utvinning av Samkjøringsmodellen21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Mange emalje defekter, tannlege fluorosis12,13, kan skyldes miljømessige forhold på grunn av overdreven fluor absorpsjon eller emalje hypomineralization lik MIH skyldes eksponering for noe EDCs1, 7,22. Disse utviklingsmessige emalje feilene kan reproduseres eksperimentelt på rotter (figur 1),1,,2,,7,,23,,24. Rotte hemi-mandible inneholder en enkelt helikopteret atskilt fra tre jeksel av et gap kalt i diastema. Den stadig voksende helikopteret inneholder to mineralholdig vev og dentin produsert av odontoblasts emalje produsert av ameloblasts i emalje orgel med andre epitelceller (figur 2). Den gnager helikopteret synes å være en passende modell å studere i amelogenesis som, i motsetning til jeksel, den inneholder alle ameloblast spredning/differensiering stadier gjennom dyrets liv.
Mikro-dissekert emalje orgel fra rotte helikopteret kan skilles i henhold til ameloblast differensiering scenen ved hjelp av en hvit flekk som vises etter en liten dehydrering, og dette kan brukes som en indikator på overgang-scenen mellom sekresjon - og modning etappene19,21,25. Kvaliteten på mikro-dissekert emaljen vev kan kontrolleres av Trichrome Masson er flekker (figur 3A). Mikroskopiske observasjon viste typisk emalje epitelceller og palisade og ameloblast. Fravær av mesenchymal forurensning ble bekreftet av fraværet av kollagen grønne flekker (figur 3A) og uttrykk (figur 3B). Disse mikro-dissekert vev kan brukes for qualitative analyses som IHC (Figur 3 c) og ISH og kvantitative analyser som RT-qPCR (figur 3B), RNA-seq og vestlige blotting. For eksempel androgen reseptoren ble spesielt lokalisert i modning-trinns ameloblasts med et spesifikt antistoff rettet mot dette proteinet (se Tabell for materiale) (Figur 3 c)8. De viktigste ameloblast differensiering stadiene er preget av bestemte genet uttrykk mønstre26 som kan identifiseres på mikro-dissekert emalje orgel. For eksempel sekresjon-trinns ameloblasts express enamelin2 og modning-trinns ameloblasts express Kallikrein 4 (KLK4) (figur 3B). De inneholder høye nivåer av ferritin som gir muligheten til å lagre store mengder jern, som er ansvarlig for den oransje fargen av de emalje27.
Fluor avbrudd i amelogenesis kan lett bli etterfulgt av observasjon av celle lysates for RNA utdrag: kontrollere modning-trinns lysates var oransje, mens fluor-behandlet som var lett å fargeløs (figur 4A). Analyse av RNA utdraget fra mikro-dissekert modning-trinns emalje organ viste KLK4 ned-regulering på fluor behandling (figur 4B), som også ble dokumentert av en storstilt transcriptomic analyse rapporterte nylig2. Spesifikke proteiner uttrykt enten av sekresjon - eller modning-scene ameloblasts kan også være lokalisert ved hjelp av mikro-dissekert emalje orgel28. For eksempel var androgen reseptoren spesielt lokalisert ved hjelp av mikro-dissekert emalje orgel8,28.
Figur 1: emalje defekter observert på rotter utsatt for fluor (NaF) i kombinasjon eller ikke bisfenol A (BPA). (A) skjematisk fremstilling av fire eksperimentelle gruppene Wistar rotter utgjorde for studien, som avhengig av de ulike miljøforholdene på rotter. Fra svangerskapsdiabetes dag 1 (fecondation) til avvenning dag 21 (P21), var 5 µg/kg BPA i 0,5 mL maisolje muntlig administrert av gavage daglig til gravide og ammende kvinner, mens maisolje alene ble administrert til kontrollgruppen. Etter venne, ble hver dam identifisert og tilfeldig fordelt på en av de tilsvarende to gruppene. Hannrotter ble valgt for denne studien og utsatt for 5 mg/kg/dag BPA alene, 5 mM NaF alene, eller begge på samme dose til 65 dager etter fødselen (P65). Kontrollgruppe fikk løsemiddel alene. (B) på postnatal dag 30 (P30), rotter utsatt kronisk lavdose BPA utstilt hvite ugjennomsiktig flekker og en lenger tydelig dental fenotypen ble identifisert for voksen rotter (P65). Alternerende hvite og oransje band av typiske tannlege fluorosis (DF) ble observert hos rotter behandlet NAF. En mer alvorlig fenotypen preget av en viktig helikopteret misfarging ble identifisert i rotter utsatt for både agenter. Homogen oransje incisal emalje preget kontroll rotter. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: skjematisk fremstilling av prosedyren. Isolasjonen av ameloblasts fra sekret og modning-etappene fra mikro-dissekert emalje organ. Rotte hemi-mandible inneholder tre jeksel og en stadig voksende helikopteret med to mineralholdig vev, dentin produsert av odontoblasts (i gult) og emaljen produsert av ameloblasts (i oransje). Når helikopteret er isolert og litt dehydrert, er en hvit flekk nær den apikale delen av labial overflaten. Det hjelper for å identifisere ameloblast stadium av differensiering, som det dekker overgang scenen mellom de sekresjon - og modning-trinn. Emalje orgelet er nøye mikro-dissekert atskilt i 3 deler avhengig av ameloblast differensiering stadier og brukes for kvalitativ (histologiske) analyse eller kvantitativ eksperimentelle tilnærminger (mRNA og protein analyser av RT-qPCR og Western blotting, henholdsvis).
Figur 3: kvalitetskontroll av mikro-dissekert sekresjon - og modning-stadier av emalje orgel. Rotte emalje orgel deles i 3 deler som inneholder cervical løkken, sekresjon-trinns ameloblasts og modning scenen ameloblasts. (A) Trichrome Masson farging av mikro-dissekert deler viste ulike epitelceller og fravær av mesenchymal celler. Skala bar, 100 µm. (B) Gene expression analyse av RT-qPCR eksperimenter av RNAs Hentet fra sekret og modning scenen emalje orgel. Et typisk mønster av enamelin og KLK4 uttrykk ble observert, og fravær av kollagen 1 i mesenchymal celler. (C) lysstoffrør flekker brukte et antistoff (se Tabell for materiale) spesielt rettet mot androgen reseptoren Œdipus modning-trinns ameloblasts. Skala bar, 20 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: representant resultatene med mikro-dissekert rotte emalje orgel. (A) når cellene var resuspended i en lyseringsbuffer for RNA utvinning (se Tabell for materiale), modning-trinns vev som inneholder pigmentert ameloblasts dukket opp oransje i kontroll - og BPA-behandlet forhold. Delen sekresjon-scenen er gul uansett forholdene. NaF behandling, alle lysates var lett å fargeløs. (B) eksempel på RT-qPCR er innhentet med RNA forberedelser av emalje organer rotter sendt til ulike miljøforhold. NaF ned-regulert KLK4 i modning-scenen, og BPA økt enamelin uttrykk i sekresjon-scenen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Endret ameloblast aktivitet og/eller forstyrret ameloblast spredning, differensiering og modning prosesser bly irreversibel emalje feil og, igjen, karakterisering av emalje defekter kan bidra til å utvikle forståelse av endrede ameloblast aktivitet i amelogenesis. Dermed er studier på isolerte emalje orgel avgjørende å belyse patologisk hendelser som førte til emalje feil hva deres opprinnelse, miljø eller genetisk.
Denne teknikken har opprinnelig blitt beskrevet av Hiller et al. 17 og Robinson et al. 18, og brukes til å vise spesifikke effekter på hvert trinn av emalje orgel differensiering. Det er deretter tilrettelagt for EMP utdrag19,24,25. Vi bruker denne prosedyren til å skille de viktigste delene av emalje orgel og samle de biologiske prøvene i ulike miljøforhold analysere RNAs og proteiner (muligens intra - og ekstra cellular proteiner) ved hjelp av kvantitative og kvalitative i dag teknikker.
Presisjonen for mikro-dissection krever betydelig trening før sin søknad, å tillate innsamling av bevarte emalje orgel og unngå mesenchymal forurensning og alle vev. Dessuten, det er ganske vanskelig å lykkes med mus eller liten rotter. Faktisk, den vanskeligste delen av prosedyren er å bevare den vev morfologi, histology og orientering i IHC og ISH, i motsetning til klassiske teknikker vanligvis utføres på fortenner for disse to tilnærmingene.
En av de største fordelene med å bruke mikro-dissekert emalje orgelet sammenlignet demineralisert hele hemi-mandible er vedlikehold av emalje RNAs og proteiner takket være mangel på noen behandling etter samling. Mikro-dissekert emalje orgelet kan direkte brukes for alle teknikker i molekylærbiologi og biokjemi uten merking eller dyrking celler. Fordelen med denne fremgangsmåten er direkte målinger av RNA og protein som gjenspeiler deres mengder i bestemte ameloblasts i vivo i fysiologiske eller patologiske forhold. I tillegg fungere noen giftstoffer på en differensiering scenen spesielt, som er tilfellet med fluor, som fungerer på modning-trinns ameloblasts og ikke på sekret-scenen de23,24. Mikro-dissection fra ulike områder av emalje orgelet kan studere virkningsmekanismen av noen giftstoffer eller bestemte gener som effekter kan være usynlig på hele emalje orgelet eller isolert celler. Faktisk differensiert ameloblasts, spesielt de, er vanskelig å samle og kultur i vitro, som er attestert av mangel på studier på emnet. Bare dental epitelceller som kan isoleres er pre-ameloblasts og stilk celler fra livmorhalsen loop20. I tillegg de rapporterte ameloblastic linjene, hovedsakelig rotte HAT-729, mus LS830, ALC31og menneskelige AM-132, ofte miste atskilling egenskaper i vivo ameloblasts: de uttrykke ekstracellulær matrix proteiner (Samkjøringsmodellen) som ameloblastin på samme måte som sekresjon-trinns ameloblasts, og også KLK4 eller SLC26A4/pendrin, som modning-trinns ameloblasts8, men er mer eller mindre kan ikke uttrykke amelogenin og mineralize i Matrix å produsere emalje. Isolasjon av dental epithelial stamceller og embryonale ameloblasts kan utgjøre et alternativ å studere de første stadiene av ameloblast differensiering, men studier på terminal emalje mineralisering prosessen kan ikke utføres annerledes enn med i vivo modeller. Denne siste delen av amelogenesis er determinant for emalje kvalitet. Mens viktige faktorer involvert i tannutvikling, Bmp, Msx, Fgf, hakk, SSH, Wnt er godt beskrevet33,34, tett involvert i emalje kvalitet er fremdeles dårlig forstått. Karakterisering av de viktigste faktorene i emalje kvalitet er nødvendig å dechiffrere dental karies og oppdage nyskapende helbredende eller forebyggende behandling for dental karies, som utgjør et stort offentlig helseproblem som 92% av 20 til 64 år gamle voksne i verden har eller har hatt minst én karies35,36,37.
Gnagere utsatt for miljømessig giftstoffer kunne forstyrre amelogenesis og endre emalje kvalitet kan være en god modell for studier av miljømessige faktorer. Lignende fremgangsmåter kan også brukes for funksjonell studier på gener rundt direkte eller indirekte involvert i amelogenesis. Mikro-dissekert emalje orgelet er en passende å karakterisere virkningsmekanismer av giftstoffer og deres mål gener i vivo unngå skjevheter eksperimentelle. Når vil bli preget utviklingsmessige emalje defekter, kan slik tilnærming brukes som en logisk modell av romanen miljøgifter mulige patologisk konsekvenser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen konflikter av interesse å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble finansiert av universitetet Paris-Diderot, fransk National Institute of Health og medisinsk forskning (INSERM) og det franske institutt for Odontological Research (IFRO).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bisphenol A | Sigma Aldrich, Saint Louis MO | 239658 | |
| formalin 10% | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | HT5012 | |
| Tri-Reagent | Euromedex, France | TR118 | |
| RLT buffer | Qiagen, Les Ulis, France | 74126 | RNeasy Protect Mini Kit |
| Androgen receptor antibody | Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) | sc-816 | rabbit polyclonal antibody |
| PBS 10x | EUOMEDEX | ET330.A | |
| Sodium fluoride (NaF) | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | S-1504 | |
| paraplast regular | Leica microsystems, Nanterre cedex, France | 39601006 | called was/parafin in the text |
| tissue OCT | VWR, Fontenay-sous-Bois, France | 411243 | |
| Extra Fine Bonn Scissors - Straight/8.5 cm | PHYMEP , Paris, France | 14084-08 | |
| Handle for Scalpel Blades - 12.5 cm | PHYMEP, Paris, France | 10035-12 | |
| Curved Scalpel Blade | PHYMEP , Paris, France | 10035-20 | |
| Dissecting Knife - Fine/Straight Tip | PHYMEP , Paris, France | 10055-12 | |
| Circle Knife | PHYMEP, Paris, France | 10059-15 | |
| scalpel blades n°11 Swann-Morton | VWR, Fontenay-sous-Bois, France | 233-0024 | |
| binocular lens | Leica biosystems, Nanterre cedex, France | MZFLIII |
References
- Jedeon, K., et al. Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A. Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).
- Jedeon, K., et al. Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats. J Bone Miner Res. 31, 1955-1966 (2016).
- Alaluusua, S., et al. Developmental dental aberrations after the dioxin accident in Seveso. Environ Health Perspect. 112, 1313-1318 (2004).
- Chapple, I. L., et al. Interaction of lifestyle, behaviour or systemic diseases with dental caries and periodontal diseases: consensus report of group 2 of the joint EFP/ORCA workshop on the boundaries between caries and periodontal diseases. J Clin Periodontol. 44, S39-S51 (2017).
- Nanci, A. Enamel: Composition, Formation, and Structure. Ten Cate's Oral Histology Development, Structure, and Function. , 8th ed, Elsevier mosby. 122-164 (2012).
- Leite, G. A., Sawan, R. M., Teofilo, J. M., Porto, I. M., Sousa, F. B., Gerlach, R. F. Exposure to lead exacerbates dental fluorosis. Arch Oral Biol. 56, 695-702 (2011).
- Jedeon, K., et al. Enamel hypomineralization due to endocrine disruptors. Connect Tiss Res. 55, 1-5 (2014).
- Jedeon, K., et al. Androgen receptor involvement in rat amelogenesis: an additional way for endocrine disrupting chemicals to affect enamel synthesis. Endocrinology. 157, 4287-4296 (2016).
- Weerheijm, K. L., Jalevik, B., Alaluusua, S. Molar-incisor hypomineralisation. Caries Res. 35, 390-391 (2001).
- Jälevik, B. Prevalence and Diagnosis of Molar-Incisor- Hypomineralisation (MIH): A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 59-64 (2010).
- Alaluusua, S. Aetiology of Molar-Incisor Hypomineralisation: A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 53-58 (2010).
- Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. The tooth, target organ of Bisphenol A, could be used as a biomarker of exposure to this agent. Bisphenol A: Sources, Risks of Environmental Exposure and Human Health Effects. Gibert, Y. , Nova Science Publishers. 205-225 (2015).
- Fejerskov, O., Larsen, M. J., Richards, A., Baelum, V.
- Robinson, C., Connell, S., Kirkham, J., Brookes, S. J., Shore, R. C., Smith, A. M. The effect of fluoride on the developing tooth. Caries Res. 38, 268-276 (2004).
- Sahlberg, C., Pavlic, A., Ess, A., Lukinmaa, P. L., Salmela, E., Alaluusua, S. Combined effect of amoxicillin and sodium fluoride on the structure of developing mouse enamel in vitro. Arch Oral Biol. 58, 1155-1164 (2013).
- Pritchett-Corning, K. R. Euthanasia of neonatal rats with carbon dioxide. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 23-27 (2009).
- Hiller, C. R., Robinson, C., Weatherell, J. A. Variations in the composition of developing rat incisor enamel. Calcif Tissue Res. 18, 1-12 (1975).
- Robinson, C., Kirkham, J., Nutman, C. A. Relationship between enamel formation and eruption rate in rat mandibular incisors. Cell Tissue Res. 254, 655-658 (1988).
- Smith, C. E., Nanci, A. A method for sampling the stages of amelogenesis on mandibular rat incisors using the molars as a reference for dissection. Anat Rec. 225, 257-266 (1989).
- Chavez, M. G., et al. Isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor. J Vis Exp. (87), (2014).
- Brookes, S. J., Kingswell, N. J., Barron, M. J., Dixon, M. J., Kirkham, J. Is the 32-kDa fragment the functional enamelin unit in all species? Eur J Oral Sci. 119, 345-350 (2011).
- Babajko, S., Jedeon, K., Houari, S., Loiodice, S., Berdal, A. Disruption of Steroid Axis, a New Paradigm for Molar Incisor Hypomineralization (MIH). Front Physiol. 8, 343 (2017).
- Houari, S., et al. Asporin and the mineralization process in fluoride-treated rats. J Bone Min Res. 29, 1446-1455 (2014).
- Denbesten, P., Li, W. Chronic fluoride toxicity: dental fluorosis. Monographs in oral science. 22, 81-96 (2011).
- Kirkham, J., Robinson, C., Phull, J. K., Shore, R. C., Moxham, B. J., Berkovitz, B. K. The effect of rate of eruption on periodontal ligament glycosylaminoglycan content and enamel formation in the rat incisor. Cell Tissue Res. 274, 413-419 (1993).
- Lacruz, R. S., et al. Identification of novel candidate genes involved in mineralization of dental enamel by genome-wide transcript profiling. J Cell Physiol. 227, 2264-2275 (2012).
- Wen, X., Paine, M. L. Iron deposition and ferritin heavy chain (Fth) localization in rodent teeth. BMC research notes. 6, 1 (2013).
- Houari, S., Loiodice, S., Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. Expression of Steroid Receptors in Ameloblasts during Amelogenesis in Rat Incisors. Front Physiol. 7, 503 (2016).
- Kawano, S., et al. Establishment of dental epithelial cell line (HAT-7) and the cell differentiation dependent on Notch signaling pathway. Connect Tissue Res. 43, 409-412 (2002).
- Zhou, Y. L., Snead, M. L. Identification of CCAAT/enhancer-binding protein alpha as a transactivator of the mouse amelogenin gene. J Biol Chem. 275, 12273-12280 (2000).
- Nakata, A., et al. Establishment and characterization of a spontaneously immortalized mouse ameloblast-lineage cell line. Biochem Biophys Res Commun. 308, 834-839 (2003).
- Harada, H., et al. Establishment of ameloblastoma cell line, AM-1. Journal of oral pathology & medicine: official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology. 27, 207-212 (1998).
- Jussila, M., Thesleff, I. Signaling networks regulating tooth organogenesis and regeneration, and the specification of dental mesenchymal and epithelial cell lineages. Cold Spring Harb Perspect Biol. 4, a008425 (2012).
- Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; how the embryo makes teeth. Nat Rev Genet. 5, 499-508 (2004).
- Vos, T., et al. Years lived with disability (YLDs) for 1160 sequelae of 289 diseases and injuries 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 380, 2163-2196 (2012).
- Marcenes, W., et al. Global burden of oral conditions in 1990-2010: a systematic analysis. J Dent Res. 92, 592-597 (2013).
- National Institute of Dental and Craniofacial Research. Dental Caries (Tooth Decay) in Adults (Age 20 to 64). , Available from: https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm (2017).
