Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Mikro-dissektion af emalje orgel fra Mandibular chopper rotter udsat for miljømæssige giftige stoffer

Published: March 29, 2018 doi: 10.3791/57081
Automatic Translation
1,2, 1,2, 1,2, 1,2, 1,2
1Institut National de la Santé et Recherche Médicale (INSERM) UMRS 1138, Paris-Diderot University, Pierre & Marie Curie University, Paris-Descartes University, Laboratory of Molecular Oral Pathophysiology, Cordeliers Research Centre, 2Unit of Formation and Research (UFR) of Odontology, Paris-Diderot University

Summary

Forståelse emalje dannelse og mulige ændringer kræver undersøgelse af ameloblast aktivitet. Her, beskriver vi en pålidelig og ensartet metode til mikro-dissekere emalje organer indeholdende sekretion og modning fase ameloblasts, der kan bruges til yderligere kvantitative og kvalitative eksperimentelle procedurer.

Abstract

Emalje defekter som følge af miljøforhold og livsformer er hensynet til folkesundheden på grund af deres høje prævalens. Disse mangler skyldes ændret aktivitet af celler der er ansvarlig for emalje syntese ved navn ameloblasts, som er til stede i emalje orgel. Under amelogenesis følge ameloblasts en konkret og præcis rækkefølge af hændelser for spredning, differentiering og død. En rotte konstant voksende fortænder er en egnet eksperimentel model til at studere ameloblast aktivitet og differentiering stadier i fysiologiske og patologiske betingelser. Her, beskriver vi en pålidelig og ensartet metode til mikro-dissekere emalje orgel af rotter udsat for miljømæssige giftige stoffer. De mikro-dissekeret dental epitheler indeholder sekretion og modning fase ameloblasts, der kan bruges til kvalitative eksperimenter, som Immunhistokemi assays og i situ hybridisering, samt for kvantitative analyser som RT-qPCR, RNA-FF. og Western blotting.

Introduction

Mange udviklingsmæssige emalje defekter kan skyldes eksponering for miljømæssige giftstoffer og/eller uhensigtsmæssig livsstil1,2,3,4. Karakterisering af forstyrrende begivenheder og molekyler af amelogenesis ved hjælp af de i øjeblikket beskrevne procedure vil fremme brugen af resulterende emalje defekter som tidlige markører for eksponering for flere giftige stoffer, og kan hjælpe til at rekonstruere historien om sundhed hver patient i den perinatale periode når emalje er synthetized1,2. Emalje syntese kan opdeles i fire hovedfaser afhængigt af ameloblast aktivitet5. Det første trin omfatter forløber celle og pre-ameloblast spredning. Under det andet trin udskiller differentierede ameloblasts emalje matrix proteiner (EMPs), hovedsageligt amelogenin, enamelin og ameloblastin, der bestemmer tykkelsen af den endelige emalje. Således fører enhver afbrydelse af EMP syntese til kvantitative defekter af emalje. Efter aflejring af fuld emalje tykkelse begynder modning fase. I denne fase tillader apatit crystallite vækst i bredde og tykkelse emalje at nå den højeste mineralisering forholdet findes i en biologisk væv, med op til 96% af vægten. Forstyrrende hændelser, der opstår under modning Stadium fører til kvalitative emalje defekter. Endelig ameloblasts ind i en fase af efter modning, også kaldet pigmentering i gnavere, og gennemgå apoptose i løbet af tand vulkanen gør emalje defekter (hvis nogen) uoprettelig og irreversibel, således defekter give potentielle retrospektiv optagelse af ameloblast understreger. I gnavere følger amelogenesis en lignende sekvens af begivenheder med den særegenhed, at deres fortænder vokser hele tiden, hvilket gør dem en passende model til at studere den generelle proces af amelogenesis. Således resulterer enhver afbrydelse af amelogenesis i ændringer af emalje kvalitet og/eller antal, afhængig af tidsvinduet af hændelsen forstyrrende. I forstand, eksponering for dioxin, bly og hormonforstyrrende kemikalier (EDC) som bisphenol A (BPA), genistein og vinclozolin, har vist sig at generere emalje hypomineralizations1,2,3 ,6,7,8. Asymmetrisk hvid uigennemsigtig steder blev identificeret på fortænderne rotter udsat for en lav-dosis BPA dosis i fostrets periode og den første måned efter fødslen1. Disse emalje defekter i rotter, og dem af menneskelige kindtand chopper hypomineralization (MIH), del lignende kliniske, strukturelle og biokemiske egenskaber. MIH er en nylig beskrevet dental emalje patologi, for som ætiologien stadig forbliver uklart9,10 trods mange årsagsfaktorer har været en hypotese9,10,11 ,12.

En anden vigtig emalje hypomineralization patologi på grund af miljømæssige faktorer er dental fluorose (DF), der er resultatet af overdreven fluor absorption (> 0,1 mg/kg/dag)13,14. Den vigtigste kilde til fluor er drikkevand, der er enten suppleres eller naturligt beriget med fluor. Fluor er også ofte ordineres for at forhindre karies, men profylaktisk dosis er kun 50% lavere end giftige one (≤0.05 mg/kg/dag). MIH og DF, to hyppige sygdomme som følge af eksponering for miljøfaktorer, kan fremlægge fælles træk, som skal karakteriseres på grund af potensering af hypomineralizing effekter af fluor kombineret med andre giftige stoffer såsom EDC2 eller amoxicillin15.

Mikro-dissektion af rotte emalje orgel indeholdende ameloblasts på forskellige differentiering faser vil bidrage til at forstå virkningsmekanismen af molekyler kan forstyrre ameloblast aktivitet og forårsage emalje mangler at blive diagnosticeret efter tand udbrud. Med andre ord, karakterisering af ændringer af emalje gen expression og emalje matrix sammensætning på grund af miljømæssige giftige stoffer tillader rekonstituering af historien om eksponering for giftige stoffer, og letter miljømæssige sikkerhed overvågning for offentlige sundhed.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle dyr, der anvendes i den foreliggende undersøgelse blev opretholdt i overensstemmelse med retningslinjer for pleje og anvendelse af forsøgsdyr fra det franske landbrugsministerium (A-75-06-12).

1. dyrs eksponering for giftige stoffer

  1. Inden du udfører denne protokol, indhente nødvendige institutionelle godkendelse og sørg for at overholde alle dyrs pleje retningslinjer.
  2. Anvende design forskning protokollen tillader forfatningen af forskellige eksperimentelle grupper for at teste effekten af molecule(s) undersøgt på ameloblast sekretion fase og ameloblast modning fase. Her, blev fire grupper af mandlige Wistar rotter udgjorde afhængigt af deres eksponering for fluorid (NaF) i kombination eller ikke med BPA (figur 1A)2. Alle dyrene blev observeret og dissekeret på dag 65 (figur 1B).

2. dissektion af Hemi-hvaltænder fra voksne rotter

  1. Aflive rotter af CO2 kvælning, eventuelt efterfulgt af halshugning i separate hovedet fra resten af kroppen. Udsætte rotter til CO2 i 5 min i en dedikeret rubrik16.
  2. Fjerne alle hud fra de nedre læber ved hjælp af en #11 skalpel for at få nem adgang til den nedre fortænder.
  3. Med den samme skalpel, gøre et snit mellem de to nedre fortænder med et let tryk og underkæben vil blive delt i to halvdele.
  4. Skære den tidsmæssige mandibular joint med en skalpel til at frigøre kæben, og holde hemi-underkæbe med fine pincet.
  5. Skær det omgivende bløde væv med en skalpel og fjern alle muskler, sener og ledbånd ved hjælp af en skraber, før knoglen er helt ren.

3. isolering af chopper17,18

  1. Omhyggeligt barbere ben ved at placere bladet parallelt med chopper store længdeakse. Start på den benede ridge nær spidsen af Chopper (proksimale ende) indtil udgangen af chopper nær cervikal sløjfen. Snit bevægelse provenuet fra den proksimalt for den distale retning.
  2. Foretage en første cut distalt til cervikale sløjfen med skalpel til at fjerne gonion af hemi-mandiblen og tillade Aftagning af chopper nemt uden at beskadige den cervikale løkke eller den sekretoriske fase af ameloblasts (rød linje i figur 2).
  3. Gøre en anden skåret under andet kindtand, og Indsæt skalpel mellem knoglen og den mediale overflade af chopper. Når alle de basale ben løftes, rotere udad til chopper og tage det ud omhyggeligt for at undgå emalje orgel væv skade ved hjælp af fine pincet.

4. mikro-dissektion af emalje Organ under kikkert linse

  1. Drop 200 µL af saltvand fosfat Buffer (PBS 1 X) på chopper ved hjælp af en pipette. Tage chopper med fine pincet med labial overflade vender opad. Gøre en skalpel mark mellem den farveløse og de orange dele af væv. Dette mærke svarer til den underliggende hvide plet, som er observerbare bagefter (figur 2).
  2. Skrab med en gravemaskine eller tilsvarende værktøj, cellens overflade fra skalpel mark til den apikale ende svarer til sekretion fase (farveløs) ameloblasts, og fra skalpel mark til spidsen af chopper for modning fase (orange) ameloblasts.
  3. Fjerne den 2-mm væv svarende til overgangsfase, som tidligere beskrevet19. Undlad at åbne chopper under emalje orgel dissektion at undgå forurening af udkom.
  4. Skære cervikal Løkken ligger umiddelbart på den apikale del af Chopper (figur 2) som tidligere beskrevet20.
  5. Samle det i 10% formalin eller lysis løsning for yderligere undersøgelser (Se Tabel af materialer).

5. opkrævning af adskilte emalje orgel væv for yderligere undersøgelser

  1. Drop 200 µL PBS 1 X buffer på chopper.
  2. Med en #11 skalpel klinge, forsigtigt frigøre dental epitelceller gradvist i bufferen, separat for hver fase ved hjælp af skalpel mark gjort tidligere.
  3. For celle RNA og protein ekstraktioner, sætte vævet i en lysis løsning, der tillader udvinding af både proteiner og RNA'er (Se Tabel af materialer).
    Bemærk: Forberede høj kvalitet RNA'er ved at dreje væv-gravemaskine i røret, og så slibe cellerne til at opnå en homogen blanding. Blandingen er klar til RNA og protein ekstraktioner ifølge fabrikantens procedure, som var tidligere beskrevet2,8,17. Normalt, omkring 5-10 µg alt RNA'er og 150 µg samlede proteiner var opnået for hvert præparat.
  4. For histologiske analyser sætte Immunhistokemi (IHC), og i situ hybridisering (ISH), cellelag i 10% formalin for 2 h og derefter opbevares ved 4 ° C i PBS 1 X. Vævet kan derefter være indlejret i voks/paraffin eller væv OCT for frosne sektioner.
  5. EMP ekstraktioner, tage chopper med fine pincet. Efter en kort udsættelse for luft (lille dehydrering) bliver en hvid plet synlige omkring den midterste del af chopper, der repræsenterer indledningen af emalje mineralisering labial flade. Denne hvide plet svarer til overgang- / tidlig modning-fase af ameloblasts, så bruge det som en indikator for udvinding af EMPs21.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Mange emalje defekter, såsom dental fluorose12,13, kan skyldes miljømæssige forhold på grund af overdreven fluor absorption eller emalje hypomineralization ligner MIH som følge af eksponering for nogle EDC1, 7,22. Disse udviklingsmæssige emalje defekter kan gengives eksperimentelt på rotter (figur 1)1,2,7,23,24. Rotte hemi-mandiblen indeholder en enkelt chopper adskilt fra tre kindtænder af et hul, kaldet diastema. Den konstant voksende chopper indeholder to mineraliseret væv, dentin produceret af odontoblasts og emalje produceret af ameloblasts i emalje orgel med andre epitelceller (figur 2). Den gnaver chopper synes at være en velegnet model til at studere amelogenesis, som i modsætning til kindtænder, den indeholder alle ameloblast spredning/differentiering stadier i hele dyrets levetid.

Mikro-dissekeret emalje orgel fra rotte chopper kan adskilles efter ameloblast differentiering fase ved hjælp af en hvid plet, der vises efter en lille dehydrering, og dette kan bruges som en indikator for overgangsfase mellem sekretion - og modning-faser19,21,25. Kvaliteten af den mikro-dissekeret emalje væv kan kontrolleres af Trichrome Masson er farvning (figur 3A). Mikroskopiske observation viste typisk emalje epitelceller og ameloblast palisade. Fravær af mesenchymale forurening er attesteret af manglen på collagen grøn farvning (figur 3A) og udtryk (figur 3B). Disse mikro-dissekeret væv kan anvendes til qualitative analyses som IHC (figur 3 c) og ISH og kvantitative analyser som RT-qPCR (figur 3B), RNA-FF. og Western blotting. For eksempel, androgen receptor var specifikt lokaliseret i modning-trins ameloblasts benytter et specifikt antistof rettet mod dette protein (Se Tabel af materialer) (figur 3 c)8. De vigtigste ameloblast differentiering faser er karakteriseret ved specifikke gen expression mønstre26 der kan identificeres på mikro-dissekeret emalje orgel. For eksempel, sekretion-trins ameloblasts express enamelin2 og modning-trins ameloblasts express Kallikrein 4 (KLK4) (figur 3B). De indeholder høje niveauer af ferritin, der giver mulighed for at lagre store mængder af jern, som er ansvarlig for den orange farve af emalje27.

Fluor afbrydelse af amelogenesis kan let følges af observation af cellelysater for RNA ekstraktioner: styre modning-trins lysates var orange, mens fluor-behandlede dem var lys gule til farveløse (figur 4A). Analyse af RNA niveauer udvundet fra mikro-dissekeret modning-fase emalje orgel viste KLK4 ned-regulering på fluor behandling (figur 4B), som var også fremgår af en storstilet transkriptom analyse rapporterede for nylig2. Specifikke proteiner udtrykt enten af sekretion - eller modning-trins ameloblasts kan også lokaliseres ved hjælp af mikro-dissekeret emalje orgel28. For eksempel var androgen receptor specifikt lokaliseret ved hjælp af mikro-dissekeret emalje orgel8,28.

Figure 1
Figur 1: emalje defekter konstateret rotter udsat for fluorid (NaF) i kombination eller ikke med bisphenol A (BPA). (A) skematisk fremstilling af de fire eksperimentelle grupper af Wistar rotter udgjorde for den foreliggende undersøgelse, grupper, der afhang af forskellige miljømæssige betingelser for rotter. Fra svangerskabsuge dag 1 (befrugtning) indtil fravænning dag 21 (P21), blev 5 µg/kg BPA i 0,5 mL majs olie oralt administreret af sonde dagligt til gravide og ammende kvinder, mens majsolie alene blev administreret til kontrolgruppen. Efter fravænning, blev hver dæmningen identificeret og tilfældigt fordelt i en af de tilsvarende to grupper. Mandlige rotter blev udvalgt til denne undersøgelse og eksponeret for 5 µg/kg/dag BPA alene, 5 mM NaF alene, eller begge dele på den samme dosis indtil 65 dage efter fødslen (P65). Kontrolgruppen fik opløsningsmiddel alene. (B) på postnatal dag 30 (P30), rotter kronisk udsat for lav-dosis BPA udstillet hvid uigennemsigtig steder og en ikke længere indlysende dental fænotype blev identificeret for voksne rotter (P65). Skiftende hvid og orange bånd af typiske dental fluorose (DF) blev observeret hos rotter behandlet med NaF. En mere alvorlig fænotype karakteriseret ved en vigtig chopper misfarvning var identificeret i rotter udsat for både agenter. Homogen orange incisal emalje karakteriseret kontrol rotter. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2: skematisk fremstilling af proceduren. Isolering af ameloblasts fra sekretion - og modning-faser fra mikro-dissekeret emalje orgel. Rotte hemi-mandiblen indeholder tre kindtænder og en konstant voksende chopper med to mineraliseret væv, dentin produceret af odontoblasts (i gult) og emalje produceret af ameloblasts (i orange). Når Chopper er isoleret og lidt dehydreret, er en hvid plet nær den apikale del af labial overfladen observerbare. Det hjælper til at identificere ameloblast fase af differentiering, da det dækker overgangsfase mellem sekretion - og modning-faser. Emalje orgel er nøje mikro-dissekeret, adskilt i 3 dele afhængigt af ameloblast differentiering faser, og anvendes enten kvalitativ (histologiske) analyse eller kvantitative eksperimenterende tilgange (mRNA og protein analyser af RT-qPCR og Western blotting, henholdsvis).

Figure 3
Figur 3: kvalitetskontrol af mikro-dissekeret sekretion - og modning-faser af emalje orgel. Rotte emalje orgel er opdelt i 3 dele, der indeholder den cervikale loop, sekretion-trins ameloblasts og modning fase ameloblasts. (A) Trichrome Masson farvning af mikro-dissekeret dele viste forskellige epitelceller og fraværet af mesenchymale celler. Skala bar, 100 µm. (B) gen expression analyse af RT-qPCR eksperimenter af RNA'er udvundet fra sekretion og modning fase emalje orgel. Et typisk mønster af enamelin og KLK4 udtryk blev observeret, samt fravær af kollagen 1 forventes i mesenchymale celler. (C) fluorescerende farvning brugte et antistof (Se Tabel af materialer) specifikt rettet mod androgen receptor udtryk kun ved modning-trins ameloblasts. Skala bar, 20 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4: repræsentative resultater opnået med micro-dissekeret rotte emalje orgel. (A) når celler var genopslemmes i en lysisbuffer for RNA ekstraktion (Se Tabel af materialer), modning-fase væv indeholdende pigmenteret ameloblasts syntes orange i kontrol - og BPA-behandlet betingelser. Delen sekretion-scenen er gule uanset betingelserne. Alle lysates var i NaF behandling, lys gule til farveløse. (B) eksempel på RT-qPCR data indhentet med RNA præparater fra emalje organer af rotter indsendt til forskellige miljøforhold. NaF nedreguleret KLK4 i modning-fase, og BPA steg enamelin udtryk i stadiet sekretion. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Ændrede ameloblast aktivitet og/eller forstyrret ameloblast spredning, differentiering og modning processer fører til irreversible emalje defekter, og til gengæld, karakterisering af emalje defekter kan hjælpe med at udvikle forståelse af den ændrede ameloblast aktivitet under amelogenesis. Undersøgelser på isolerede emalje orgel er således afgørende at belyse de patologiske begivenheder, der førte til emalje mangler uanset deres oprindelse, miljømæssige eller genetiske.

Denne teknik er oprindeligt blevet beskrevet af Hiller et al. 17 og Robinson et al. 18, og bruges til at demonstrere specifikke virkninger på hver etape af emalje orgel differentiering. Det er derefter blevet tilpasset til EMP ekstraktioner19,24,25. Vi brug i øjeblikket denne procedure til at adskille de vigtigste dele af emalje orgel og indsamle biologiske prøver i forskellige miljøforhold til analyser RNA'er og proteiner (eventuelt intra og ekstra cellular proteiner) ved hjælp af kvantitative og kvalitative teknikker.

Præcisionen af mikro-dissektion kræver betydelig uddannelse før sin ansøgning, at tillade samling af velbevarede emalje orgel og undgå mesenchymale forurening og tilintetgørelse væv. Derudover er det ganske vanskeligt at lykkes med mus eller små rotter. Den vanskeligste del af proceduren, er faktisk at bevare væv morfologi, histologi og orientering i IHC og ISH, i modsætning til klassiske teknikker almindeligvis udføres på fortænderne for disse to tilgange.

En af de vigtigste fordele ved hjælp af mikro-dissekeret emalje orglet i forhold til demineraliseret hele hemi-underkæben er vedligeholdelse af emalje RNA'er og proteiner takket være manglen på enhver behandling efter samling. Mikro-dissekeret emalje orglet kan direkte anvendes for alle teknikker i molekylær biologi og biokemi uden at vælge eller dyrkning af celler. Fordelen ved denne procedure er de direkte målinger af RNA og protein niveauer, der afspejler deres mængder i specifikke ameloblasts i vivo i fysiologiske eller patologiske betingelser. Derudover handle nogle giftige stoffer på en differentiering fase specifikt, som er tilfældet med fluor, der fungerer på modning-trins ameloblasts og ikke på sekretion-fase dem23,24. Mikro-dissektion af de forskellige regioner i emalje orgel giver mulighed for undersøgelse af virkningsmekanismen af nogle giftige stoffer eller specifikke gener hvis virkninger kan være målbart på hele emalje orgel eller på isolerede celler. Faktisk, ameloblasts, især opdelte dem, er vanskeligt at indsamle og kultur in vitro som er bevidnet af manglen på undersøgelser rapporterede om emnet. Kun dental epitelceller, der kan isoleres er pre-ameloblasts og stamceller fra cervikal loop20. Derudover cellelinjer rapporterede ameloblastic hovedsagelig rotte HAT-729, mus LS830, ALC31og menneskelige AM-132, ofte mister differentiering karakteristika i vivo ameloblasts: de udtrykker ekstracellulær matrix proteiner (EMPs) som ameloblastin ligeledes til sekretion-trins ameloblasts, og også KLK4 eller SLC26A4/pendrin, såsom modning-stage ameloblasts8, men er mere eller mindre ude af stand til at udtrykke amelogenin og mineralize den matrix til at producere emalje. Isolering af dental epitelial stamceller og embryonale ameloblasts kan udgøre en mulighed for at studere de første faser af ameloblast differentiering, men undersøgelser på terminal emalje mineralisering proces kan ikke udføres anderledes end med i vivo modeller. Denne sidste del af amelogenesis er afgørende for emalje kvalitet. Vigtige faktorer involveret i tandudvikling, såsom Bmp, Msx, Fgf, Notch, Shh, Wnt er godt beskrevet33,34, der er tæt involveret i emalje kvalitet er stadig dårligt forstået. Karakterisering af de vigtigste faktorer i emalje kvalitet er nødvendig for at dechifrere tænderne og oplev innovative helbredende eller forebyggende behandling for tænderne, som udgør et stort folkesundhedsproblem i 92% af 20-64 år gamle voksne i verden har eller har haft mindst én caries35,36,37.

Gnavere udsat for miljømæssige giftstoffer kan forstyrre amelogenesis og ændre emalje kvalitet kan udgøre en god model for undersøgelser af miljømæssige faktorer. Lignende procedurer kunne også bruges til funktionelle studier på gener af interesse direkte eller indirekte involveret i amelogenesis. Mikro-dissekeret emalje orgel er et egnet materiale til at karakterisere virkningsmekanisme af giftige stoffer og deres mål gener i vivo undgå enhver eksperimentelle bias. Når udviklingsmæssige emalje defekter vil karakteriseres, kunne en sådan fremgangsmåde bruges som en prognosemodel roman forurenende potentiel patologisk virkninger.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen interessekonflikter at videregive.

Acknowledgments

Dette arbejde blev finansieret ved universitetet Paris-Diderot, franske nationale Institut for sundhed og medicinsk forskning (INSERM) og det franske Institut for Odontological Research (IFRO).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bisphenol A Sigma Aldrich, Saint Louis MO 239658
formalin 10% Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO HT5012
Tri-Reagent Euromedex, France TR118
RLT buffer Qiagen, Les Ulis, France 74126 RNeasy Protect Mini Kit
Androgen receptor antibody Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) sc-816 rabbit polyclonal antibody
PBS 10x EUOMEDEX ET330.A
Sodium fluoride (NaF) Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO S-1504
paraplast regular Leica microsystems, Nanterre cedex, France 39601006 called was/parafin in the text
tissue OCT VWR, Fontenay-sous-Bois, France 411243
Extra Fine Bonn Scissors - Straight/8.5 cm PHYMEP , Paris, France 14084-08
Handle for Scalpel Blades - 12.5 cm PHYMEP, Paris, France 10035-12
Curved Scalpel Blade PHYMEP , Paris, France 10035-20
Dissecting Knife - Fine/Straight Tip PHYMEP , Paris, France 10055-12
Circle Knife PHYMEP, Paris, France 10059-15
scalpel blades n°11 Swann-Morton VWR, Fontenay-sous-Bois, France 233-0024
binocular lens Leica biosystems, Nanterre cedex, France MZFLIII

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Jedeon, K., et al. Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A. Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).
  2. Jedeon, K., et al. Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats. J Bone Miner Res. 31, 1955-1966 (2016).
  3. Alaluusua, S., et al. Developmental dental aberrations after the dioxin accident in Seveso. Environ Health Perspect. 112, 1313-1318 (2004).
  4. Chapple, I. L., et al. Interaction of lifestyle, behaviour or systemic diseases with dental caries and periodontal diseases: consensus report of group 2 of the joint EFP/ORCA workshop on the boundaries between caries and periodontal diseases. J Clin Periodontol. 44, S39-S51 (2017).
  5. Nanci, A. Enamel: Composition, Formation, and Structure. Ten Cate's Oral Histology Development, Structure, and Function. , 8th ed, Elsevier mosby. 122-164 (2012).
  6. Leite, G. A., Sawan, R. M., Teofilo, J. M., Porto, I. M., Sousa, F. B., Gerlach, R. F. Exposure to lead exacerbates dental fluorosis. Arch Oral Biol. 56, 695-702 (2011).
  7. Jedeon, K., et al. Enamel hypomineralization due to endocrine disruptors. Connect Tiss Res. 55, 1-5 (2014).
  8. Jedeon, K., et al. Androgen receptor involvement in rat amelogenesis: an additional way for endocrine disrupting chemicals to affect enamel synthesis. Endocrinology. 157, 4287-4296 (2016).
  9. Weerheijm, K. L., Jalevik, B., Alaluusua, S. Molar-incisor hypomineralisation. Caries Res. 35, 390-391 (2001).
  10. Jälevik, B. Prevalence and Diagnosis of Molar-Incisor- Hypomineralisation (MIH): A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 59-64 (2010).
  11. Alaluusua, S. Aetiology of Molar-Incisor Hypomineralisation: A systematic review. Eur Arch Paediatr Dent. 11, 53-58 (2010).
  12. Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. The tooth, target organ of Bisphenol A, could be used as a biomarker of exposure to this agent. Bisphenol A: Sources, Risks of Environmental Exposure and Human Health Effects. Gibert, Y. , Nova Science Publishers. 205-225 (2015).
  13. Fejerskov, O., Larsen, M. J., Richards, A., Baelum, V. Dental tissue effects of fluoride. Adv Dent Res. 8, 15-31 (1994).
  14. Robinson, C., Connell, S., Kirkham, J., Brookes, S. J., Shore, R. C., Smith, A. M. The effect of fluoride on the developing tooth. Caries Res. 38, 268-276 (2004).
  15. Sahlberg, C., Pavlic, A., Ess, A., Lukinmaa, P. L., Salmela, E., Alaluusua, S. Combined effect of amoxicillin and sodium fluoride on the structure of developing mouse enamel in vitro. Arch Oral Biol. 58, 1155-1164 (2013).
  16. Pritchett-Corning, K. R. Euthanasia of neonatal rats with carbon dioxide. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 23-27 (2009).
  17. Hiller, C. R., Robinson, C., Weatherell, J. A. Variations in the composition of developing rat incisor enamel. Calcif Tissue Res. 18, 1-12 (1975).
  18. Robinson, C., Kirkham, J., Nutman, C. A. Relationship between enamel formation and eruption rate in rat mandibular incisors. Cell Tissue Res. 254, 655-658 (1988).
  19. Smith, C. E., Nanci, A. A method for sampling the stages of amelogenesis on mandibular rat incisors using the molars as a reference for dissection. Anat Rec. 225, 257-266 (1989).
  20. Chavez, M. G., et al. Isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor. J Vis Exp. (87), (2014).
  21. Brookes, S. J., Kingswell, N. J., Barron, M. J., Dixon, M. J., Kirkham, J. Is the 32-kDa fragment the functional enamelin unit in all species? Eur J Oral Sci. 119, 345-350 (2011).
  22. Babajko, S., Jedeon, K., Houari, S., Loiodice, S., Berdal, A. Disruption of Steroid Axis, a New Paradigm for Molar Incisor Hypomineralization (MIH). Front Physiol. 8, 343 (2017).
  23. Houari, S., et al. Asporin and the mineralization process in fluoride-treated rats. J Bone Min Res. 29, 1446-1455 (2014).
  24. Denbesten, P., Li, W. Chronic fluoride toxicity: dental fluorosis. Monographs in oral science. 22, 81-96 (2011).
  25. Kirkham, J., Robinson, C., Phull, J. K., Shore, R. C., Moxham, B. J., Berkovitz, B. K. The effect of rate of eruption on periodontal ligament glycosylaminoglycan content and enamel formation in the rat incisor. Cell Tissue Res. 274, 413-419 (1993).
  26. Lacruz, R. S., et al. Identification of novel candidate genes involved in mineralization of dental enamel by genome-wide transcript profiling. J Cell Physiol. 227, 2264-2275 (2012).
  27. Wen, X., Paine, M. L. Iron deposition and ferritin heavy chain (Fth) localization in rodent teeth. BMC research notes. 6, 1 (2013).
  28. Houari, S., Loiodice, S., Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. Expression of Steroid Receptors in Ameloblasts during Amelogenesis in Rat Incisors. Front Physiol. 7, 503 (2016).
  29. Kawano, S., et al. Establishment of dental epithelial cell line (HAT-7) and the cell differentiation dependent on Notch signaling pathway. Connect Tissue Res. 43, 409-412 (2002).
  30. Zhou, Y. L., Snead, M. L. Identification of CCAAT/enhancer-binding protein alpha as a transactivator of the mouse amelogenin gene. J Biol Chem. 275, 12273-12280 (2000).
  31. Nakata, A., et al. Establishment and characterization of a spontaneously immortalized mouse ameloblast-lineage cell line. Biochem Biophys Res Commun. 308, 834-839 (2003).
  32. Harada, H., et al. Establishment of ameloblastoma cell line, AM-1. Journal of oral pathology & medicine: official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology. 27, 207-212 (1998).
  33. Jussila, M., Thesleff, I. Signaling networks regulating tooth organogenesis and regeneration, and the specification of dental mesenchymal and epithelial cell lineages. Cold Spring Harb Perspect Biol. 4, a008425 (2012).
  34. Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; how the embryo makes teeth. Nat Rev Genet. 5, 499-508 (2004).
  35. Vos, T., et al. Years lived with disability (YLDs) for 1160 sequelae of 289 diseases and injuries 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 380, 2163-2196 (2012).
  36. Marcenes, W., et al. Global burden of oral conditions in 1990-2010: a systematic analysis. J Dent Res. 92, 592-597 (2013).
  37. National Institute of Dental and Craniofacial Research. Dental Caries (Tooth Decay) in Adults (Age 20 to 64). , Available from: https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm (2017).

Tags

Retraktion sag 133 rotte chopper emalje orgel Amelogenesis mineralsk emalje Hypomineralization endokrine disruptorer fluor
Mikro-dissektion af emalje orgel fra Mandibular chopper rotter udsat for miljømæssige giftige stoffer
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Houari, S., Babajko, S., Loiodice,… More

Houari, S., Babajko, S., Loiodice, S., Berdal, A., Jedeon, K. Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants. J. Vis. Exp. (133), e57081, doi:10.3791/57081 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter