Summary
여기, 우리는 간단 하 고 저가 실버 3 시 약 및 처리의 7 분 이며 유전자 분석에 높은-품질 SSR 데이터의 빠른 생성을 위한 적합 한 프로토콜을 얼룩이 지를 보고 합니다.
Abstract
간단한 순서 반복 (SSR) 식물과 동물 유전자 연구 및 분자 breeding 프로그램에서 사용 하는 가장 효과적인 마커 중 하나입니다. 실버 얼룩 polyacrylamide 젤에 SSR 마커 검출에 대 한 널리 사용 되는 방법입니다. 그러나, 실버 얼룩에 대 한 전통적인 프로토콜은 기술적으로 요구 하 고 시간이 많이 걸리는. 다른 많은 생물학 실험실 처럼 기법, 프로토콜을 얼룩이 지 실버는 검출 효율 향상을 위해 꾸준히 최적화 되었습니다. 여기, 우리 보고 단순화 된 실버 얼룩 메서드를 크게 시 약 비용 감지 해상도 사진 선명도 향상 시킵니다. 새로운 메서드는 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤에 대 한 두 가지 주요 단계 (임신 및 개발) 및 3 개의 시 약 (실버 질산염, 수산화 나트륨, 그리고 포름알데히드), 그리고 처리의 불과 7 분을 필요합니다. 이전에 보고 된 프로토콜에 비해,이 새로운 방법 쉽습니다, 빨리 그리고 SSR 탐지에 대 한 더 적은 화학 시 약을 사용 하 여. 따라서,이 간단 하 고, 낮은-비용, 고 효과적인 실버 프로토콜을 얼룩이 지는 유전 매핑 및 SSR 마커 데이터의 빠른 세대 번 식 마커 기반 도움이 됩니다.
Introduction
PCR 기반 마커의 개발 식물 유전학 및 번 식1의 과학을 혁명을 했다. 간단한 순서 반복 (SSR) 마커는 가장 일반적으로 사용 되 고 가장 다재 다능 한 DNA 마커 중입니다. 그들의 게놈을 광범위 한 범위, 풍부, 게놈 특이성 및 반복성 heterozygous genotypes2의 검출에 대 한 그들의 codominant 상속 뿐만 아니라 SSR 마커의 장점 중 일부입니다. 여러 연구 결과 유전적 다양성 조사, 가계를 추적, 유전 결합 지도, 구성 및 경제적으로 중요 한 특성3,4에 대 한 유전자 지도를 SSR 마커를 사용 했습니다.
SSR 마커의 PCR 제품 agarose 또는 polyacrylamide 젤 전기 이동 법을 사용 하 여 및 다음 ethidium 평범한 사람으로 얼룩 후 또는 UV 빛은 얼룩과 시각에 일반적으로 구분 됩니다. Polyacrylamide 젤에서 DNA 파편의 얼룩은 다른 착 색 방법5,6 보다 더 민감한 이며 SSR 마커7같은 DNA 파편을 검출 하기 위하여 널리 이용 되는.
많은 생물학 실험실 기술 처럼 polyacrylamide 젤의 얼룩은 꾸준히 그것의 처음 보고 되 고 19798조각 시각화 기술로 개선 했다. 기술은 처음 Bassam 외. 여 DNA 파편의 탐지에 대 한 수정 6 1991 년에 1994 년에 Sanguinetti와 동료9 을 향상. 메서드는 더는 지난 몇 년간6,7,9,10,11,12,13,14 에서 최적화 되었습니다. , 그러나 15., 프로토콜의 업데이트 된 버전의 대부분 아직도 이러한 프로토콜7의 응용 프로그램을 제한 하는 등 기술 수요 및 긴 처리 시간이 고정을 위한 장착6, 몇 가지 단점이 있다 11. DNA 조각 검출의 높은 효율성과 낮은 비용을 결합 하는 최적의 프로토콜은 생물학 연구에서 얼룩의 일상적인 응용 프로그램 긴급 하 게 필요 합니다.
또한, polyacrylamide 젤 변성 및 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤으로 분할 될 수 있다 그리고 둘 다 SSR 마커 얼룩 방법 실버를 사용 하 여 검색에 사용할 수 있습니다. 효과 해상도는 크게 차이가 없습니다, 하지만 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤 프로세스를 쉽게 하 고 적은 시간16.
이전 연구15기준 현재 연구의 목표는 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤에 SSR 마커, 쉽고 빠르고 저렴 한 비용 검색 상세에서 프로토콜을 얼룩이 지는 최적화 된 실버를 설명 하기 위해입니다.
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Protocol
1. SSR 마커의 PCR 제품의 준비
- 서식 파일 DNA를 포함 하 여 PCR 반응을 위한 모든 화학 제품 및 시 약 준비 (30 ng / µ L), 2 × PCR 마스터 믹스 (0.4 m m 각 dNTP, MgCl2, Taq DNA 중 합 효소와 염료의 0.1 U / µ L의 3 m m의 2 × PCR 버퍼를 포함 하는), 각 10 µ M 앞으로 반전 뇌관 증 류 및 저온 (dH2O).
참고: 현재 연구에 사용 된 SSR 마커 했다 PT51333 (뇌관 순서 앞으로: 5 '-GCACCTTTGGTTATCCGACA-3' 및 역방향 뇌관 순서: 5 '-TGCTTTAAGTCATGTACCAAATTGA-3') 및 PT50903 (뇌관 순서 앞으로: 5 '-AAATTTCTTTCGGTGTGATAACTG-3'와 뇌관 순서를 반대로: AGAGACTGCCGTTTGATTTGA-3-5' ') 담배, 및 CX-43 (뇌관 순서 앞으로: 5'-TGGGGATGTGAGCTTCTTCT-3' 반전 뇌관 순서: 5'-AGGGTTCCTTTGGGGTGATA-3')와 CX-157 (뇌관 순서 앞으로: 5 '- TCGACGCTGACTTCACTGAC-3 ' 뇌관 순서를 반대로: 5 '-GGACAGCTTCACACATTTGC-3') 꽃 배 추에 대 한. - 템플릿 DNA, 2 × PCR 마스터 믹스, 각 앞으로 뇌관 및 역방향 뇌관의 0.2 µ L, dH2오의 2.6 µ L의 5 µ L의 2 µ L을 추가 하 여 10 µ L PCR 믹스의 확대를 위한 준비
- 5 분 동안 94 ° C의 초기 단계로 thermocycler의 PCR 증폭 반응 수행, 45의 38 주기 여 변성, 45 94 ° C에서 s s 뇌관 어 닐 링 55 ° C에서 확장, 72 ° C에서 1 분 및 72 °에서 10 분의 최종 확장 단계 C; 그런 다음 나중에 사용할 4 ° C에서 PCR 제품 저장.
2. 준비 솔루션의 Polyacrylamide 젤 캐스팅
- 기본 트리 및 dH2O 27.5 g 붕의 54 g 용 해, 0.5 M EDTA (pH 8.0) 20 mL를 추가 하 고 솔루션 1, dH2o. 000 mL의 최종 볼륨을 조정 하 여 5 × TBE 버퍼 1 리터를 준비
참고: TBE 버퍼 저장할 수 있습니다 실 온에서 몇 달 동안. - DH2O 2 L의 최종 볼륨을 5 × TBE 버퍼의 200 mL를 추가 하 여 0.5 × TBE 버퍼의 2 리터를 준비 하 고 상 온에서 저장.
- 29 g 분자 생물학 급료 아크릴의와 분자 생물학 급 N, N 1 g을 용 해 하 여 6% 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤 솔루션 준비 '-500 mL의 최종 볼륨을 0.5 × TBE 버퍼에 methylenebisacrylamide. 커버 알루미늄 호 일 및 나중에 사용할 4 ° C에서 저장소 솔루션 병.
주의: 아크릴 강력한 neurotoxin 간주 됩니다 하 고 신중 하 게 처리 되어야 한다. 분말 및 그것을 포함 하는 처리 솔루션 무게 때 항상 장갑을 착용 하십시오. - DH2O 10 mL의 최종 볼륨을 APS의 2 세대를 용 해 하 여 20% 염화 persulfate (AP) 솔루션을 준비 합니다. 그것은 몇 달 동안-20 ° C에 저장할 수 있습니다.
참고: 편의 위해 20 %APS 솔루션의 10 mL 수 1.5 mL 또는-20 ° c.에 스토리지에 대 한 원심 분리기 튜브의 2 mL aliquoted 해 동 하 고 사용 하기 전에 잘 섞어. - 아세트산의 0.5%를 포함 하는 95% 에탄올 0.997 mL에 bind silane의 3 µ L를 용 해 하 여 희석된 바인딩-실 란 솔루션을 준비 합니다. 그것은 4 ° C에서 주 저장할 수 있습니다.
주의: 바인딩 silane 독성, 솔루션을 취급할 때 장갑을 착용 이며 룸 통풍 유지.
3입니다. Polyacrylamide 젤 전기 이동 법에 대 한 준비
- 1 세트의 유리 접시와 스페이서 수돗물, dH2오 어 완전 한 rinsing 하 여 다음 세제로 세척 접시 건조 선반에에서 그들을 설정 하 여 판 건조.
- 그리고 5 분 동안 건조 직사각형 유리 접시의 안쪽 표면에 bind silane 솔루션의 1 mL를 분산.
참고: 경우 bind silane 솔루션은 접시의 표면에 균일 하 게 확산 되지, 젤 수 있습니다 얼룩 동안 분리할 고 결과 불만족 얼룩 효과. - 면봉으로 금이 낸된 유리 접시의 안쪽 표면에 격퇴 silane의 1 mL에 분산, 초과 격퇴-silane 티슈 종이로 닦아 하 고 5 분 동안 건조 한 공기.
참고: 반발 silane 균일 하 게 유리 접시의 표면 코트 하지 않습니다, 그것은 손상 될 수 젤 부분적으로 벗 겨 서. - 위에, 노치 플레이트 스페이서가 유리 접시를 조립 하 고 클램프 클램프 주조와 어셈블리의 양쪽.
- 1.5 m m의 33 cm 폭 × 10 cm 높이 두께의 플레이트 세트에 대 한 비 커에 6% 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤 솔루션의 적절 한 금액 (40 mL)을 부 어, tetramethylethylenediamine (TEMED)의 20 µ L와 200 µLfresh 20% 추가 AP 부드럽게 섞는다.
참고: 젤 솔루션의 적절 한 금액 (40 mL) 스페이서 (30 cm × 8.5 c m × 0.15 cm)의 간격을 가진 2 개의 격판덮개의 내부 볼륨에서 계산 했다. 젤의 중 합에 대 한 APS와 TEMED의 금액에 대해서는 참조17에 따라 APS와 TEMED 젤 솔루션의 표준 비율. 위에서 설명한 젤 솔루션 4 ° c.에 저장 됩니다. 젤 솔루션 TEMED의 20 µ L와 AP를 사용 해야 하는 20%의 100 µ L, 실내 온도에 저장 됩니다. 부드럽게 솔루션에 공기 방울을 피하기 위해 유리 막대기로 젤 솔루션의 혼합물을 저 어. - 즉시 솔루션을 부 어 하 고 신중 하 게 노치 플레이트의 가장자리를 따라 조립된 유리 접시로 가기로 거의 공간을 채우는 빗을 삽입. 빗에 젤 솔루션의 작은 볼륨을 추가 합니다.
참고: 유리 접시 젤 유출 하지 않도록 수평 유지. 필요한 경우 버블 걸이로 모든 거품을 제거 합니다. - 실 온에서 30 분 설정 하 젤을 허용 합니다.
참고: 중 합에 대 한 시간 젤 솔루션 및 환경 온도를 변경할 수 있습니다. - 젤 완전히 중 합 후, 캐스팅 클램프를 제거 하 고 접시 세트 전기 탱크 단위에 위 버퍼 저수지 쪽으로 직면 하는 노치 플레이트 놓고 큰 클램프를 사용 하 여 연결 플레이트 탱크 단위로 설정.
- 상단의 각 0.5 × TBE 버퍼와 낮은 챔버의 1 L를 붓는 다. 빗을 제거 하 고 피 펫 또는 주사기를 사용 하 여 버퍼와 모든 우물을 철저 하 게 플러시.
참고: 젤 샌드위치 접시의 바닥에 어떤 거품 없이 버퍼에 완전히 젖 었 확인 합니다.
4. 실행 젤
- 각 잘 polyacrylamide 젤에 PCR 제품의 대략 1 µ L를 로드 합니다. PCR 제품의 샘플 함께 젤의 양쪽에 DNA 크기 사다리를 로드 합니다. 위 버퍼 약 실에 안전 덮개를 해결.
- 리드 레드 레드와 블랙 하는 색 일치 하는 전원 공급 장치에 연결 합니다. 염료 ~ 70 분 동안 일반적으로 정의 된 위치에 도달할 때까지 110 V의 정 전압에서 젤을 실행 합니다.
참고: 전압 및 실행 시간 PCR 제품의 크기에 따라 조정할 수 있습니다.
5. 실버 감지 SSR 마커를 비 Polyacrylamide 젤에 대 한 얼룩
- 전기 이동 법, 후 위 상공에서 버퍼는 큰 비 커를 통해 밸브에 배수 하십시오. 사이드 클램프를 분리, 제거 판 기구에서 신중 하 게, 주걱으로 한쪽을 따라 금이 낸된 유리 접시를 분리 하 고 다른 유리 접시에 부착 된 젤 남아 바인딩 silane로 입힌 다는 것을 확인.
- DH2O 900 mL에 NaOH의 10 g을 용 해 하 여 AgNO3 dH2O. 준비 1 L 신선한 개발 솔루션의 1 리터에서 1.5 g을 용 해 하 여 신선한 임신 솔루션의 1 리터, 37% 포름알데히드의 1 mL을 추가 dH2o.를 사용 하 여 1 L의 최종 볼륨을 조정 하 고
참고: 장갑을 착용 하 고 위의 화학 물질 및 주의 솔루션을 처리 합니다. 솔루션 및 해당 솔루션 단계 어둠 속에서 유지 하는 필요는 없습니다. - 신중 하 게 충분 한 dH2O 전기 이동 법 버퍼 제거 다음 접시 젤 플라스틱 쟁반에 향하도록 놓고 잠수함 침 솔루션의 1 리터에 젤 젤과 유리 접시를 헹 구 십시오. 통에 트레이 넣어.
- 트레이 부드럽게 흔들어 분 60 r/3-4 분.
참고: 젤 두께 임신 솔루션에서 실버 질산염의 농도 따라 조정할 수 있습니다 시간을 떨고. - 임신 솔루션에서 격판덮개를 이동 하 고 다른 쟁반에 그것을 넣어. 접시와 두 번 3-5 s에 대 한 충분 한 dH2O를 사용 하 여 젤의 표면에서 떨어져 잔여 임신 솔루션 린스.
- 다른 트레이에 향하도록 젤 접시를 놓고, 접시 개발 솔루션의 1 리터에 잠수함 그리고 50 r/분 ~ 3 분 DNA의 모양을 조각 하는 모니터에 대 한 트레이 부드럽게 흔들어 때 DNA의 신호의 높은 비율 조각 개발을 중지 배경 잡음을 관찰 (이 단계는 3 분 소요).
- 두 번, 접시와 충분 한 dH2O 젤을 헹 구 고 건조 한 티슈 페이퍼와 젤 접시.
- 적절 한 스캐너를 사용 하 여 젤 스캔. 300 dpi의 해상도 DNA 파편의 명확한 시각화를 제공합니다. 또한 카메라를 사용 하는 젤에 촬영 수 있습니다.
- SSR 마커 밴딩 패턴 기반 이미지에 DNA 파편에 득점 수 있습니다.
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Representative Results
PCR amplicons 꽃 배 추와 담배에 해당 SSR 뇌관 쌍을 사용 하 여 생산 되었다. 전기 이동 법, 후 polyacrylamide 젤 SSR 마커 (그림 1)의 밴딩 패턴을 명확 하 게 감지 하는 프로토콜을 얼룩이 지는 위의 실버를 사용 하 여 얼룩이 있었다.
프로토콜을 얼룩이 지는 다른 실버의 검색 효율성 비교를 SSR 마커 담배와 꽃 배 추에서의 PCR 제품 polyacrylamide 젤 전기 이동 법을 사용 하 여 분리 했다 고 5 출판은 얼룩을 사용 하 여 시각화 프로토콜9,11,12,,1314 그리고 새로운 프로토콜. 모든 6 프로토콜 감지 SSR 담배에 대 한 패턴 밴딩 및 꽃 배 추 genotypes (그림 2), 하지만 현재 프로토콜 했다 낮은 배경 잡음 및 DNA의 가장 높은 대비 조각, 높은 그림 생산 되도록 동 질 다 상 SSR의 명확한 심사에 대 한 선명도입니다. 실행 시간 및 주요 단계 및 얼룩 과정은 완료 하는 데 사용 하는 시 약의 수 각 프로토콜에 대 한 표 1 에 나열 됩니다, 새로운 프로토콜은 최소한 시간과 적은 화학 시 약을 필요로 하 고 단계를 처리.
그림 3 50 2000 bp로 측정 된 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤에 DNA 마커 프로토콜의 감도 보여준다.
그림 1: 패턴 밴딩 SSR의. SSR banding의 genotypes 꽃 배 추 (A) 의 대 한 패턴 그리고 담배 (B) 새로운 실버 얼룩을 사용 하 여 프로토콜. PCR 제품 6% 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤에 분리 되었고 얼룩 프로토콜을 얼룩이 지는 위의 보고 실버에 의하여. 레인 미터는 DNA 크기 마커, 레인 1 62 대표는 amplicons 62 genotypes의 증폭 "CX-157"의 SSR 뇌관 쌍으로 (앞으로 역 뇌관의 시퀀스는 5'-TCGACGCTGACTTCACTGAC-3' 와 5'-GGACAGCTTCACACATTTGC-3', 각각)에 꽃이 피는 중국 양배추 (그림 1A)와 "PT51333" (앞으로 역 뇌관의 시퀀스는 5'-GCACCTTTGGTTATCCGACA-3' 5'-TGCTTTAAGTCATGTACCAAATTGA-3', 각각) 담배 (그림 1B). 화살표는 대상 SSR 밴드를 가리킵니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 담배 및 꽃 배 추 genotypes 프로토콜을 얼룩이 지는 다른 실버를 사용 하 여 SSR 마커 검출 효율의 비교. PCR 제품 polyacrylamide 젤 비 변성 시키기의 6%에서 분리 되었다와 스테인드를 사용 하 여 5 출판은 얼룩 프로토콜9,11,12,,1314 및 새로운 프로토콜입니다. 레인 M DNA 크기 표식입니다. 레인 1 ~ 4 "PT50903"의 SSR 뇌관의 amplicons 대표 (앞으로 역 뇌관의 시퀀스는 5'-AAATTTCTTTCGGTGTGATAACTG-3 '와 5'-AGAGACTGCCGTTTGATTTGA-3', 각각) 4 개의 담배 genotypes;에 레인 5 ~ 8 "CX-43"의 SSR 뇌관의 amplicons 나타냅니다 (정방향 및 역방향 뇌관의 시퀀스는 5'-TGGGGATGTGAGCTTCTTCT-3 '와 5'-AGGGTTCCTTTGGGGTGATA-3', 각각) 4 개의 꽃 배 추 genotypes에. 대상 SSR 밴드는 화살표와 함께 표시 됩니다. 이 그림은 리 외의 그림 2 에서 수정 되었습니다. 8 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 50-2000 년 bp DNA 마커 비 변성 시키기 polyacrylamide 젤에 의해 측정 된 프로토콜의 감도. 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 1000의 조각 크기와 DNA 마커의 1µL와 함께 첫 번째 레인 로드 10 ng / µ L에서 각각 1500 및 2000 혈압. 나머지 샘플 앞 차선에 1:2 직렬 희석으로 로드 되었습니다. 프로토콜에 대 한 감지 최소한 11일 레인 (2.2 pg/m m2 잘 4.5 m m2 )에 9.8 세 이었다. 이 그림의 리 우 외. 그림 1 에서 수정 되었습니다. 8. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
| 항목 | Sanguinetti 외. 9 | 숨어 외. 11 | 외. 12 | 변 외. 13 | 쿠마 르 외. 14 | 새로운 프로토콜 |
| 상영 시간 (분) | 30 | 12-25 | 8-9 | 9-31 | 42 | 6-7 |
| 단계 수 | 5 | 4 | 3 | 3 | 3 | 2 |
| 시 약의 수 | 5 | 6 | 6 | 5 | 7 | 3 |
표 1: 실행 시간, 주요 단계와 프로토콜을 얼룩이 지는 다른 실버에 사용 된 시 약의 수.
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Discussion
임신 후 젤의 세척은 중요 한 단계 이다. 부족 세척 시간 및 물 볼륨 접시와 젤의 표면에 침 솔루션의 불완전 한 제거 발생 하 고 어두운 배경에서 발생할 수 있습니다. 적절 한 개발에 또 다른 핵심 단계 이다,-개발 DNA 파편의 낮은 콘트라스트 이미지와 함께 어두운 갈색 배경에서 발생할 수 있습니다. 또한, 임신 단계 DNA 파편의 착 효율을 크게 영향을 줍니다. 임신 시간 5 분 이상 확장 또는 증가 임신 솔루션에서 AgNO3 금액 개선 하지 않으면 크게 얼룩 품질, 비록 3 분 또는 AgNO3 (양을 감소 시간는 임신을 감소 < 1 g) 회색 또는 얕은 검은 DNA 파편 귀 착될 수 있다.
효율적인 DNA 검출에 대 한 신속 하 고 쉽게 작업 방법 얼룩 실버 바람직합니다. 이 연구에서 개발 된 새로운 프로토콜 방지 해결, 중지 및 몇 가지 세척 단계 다른 프로토콜6,,910,11,12,13 에서 설명 , (그림 1 및 그림 2), 얼룩 품질에 영향을 주지 않고 14 만 7 분 소요 임신 및 개발 두 가지 간단한 단계를 필요 합니다. 따라서, 새로운 프로토콜은 모든 다른 얼룩 프로토콜 현재 사용할 수 있는6,7,9,10,11,12, 보다 빠른 13,14. 또한, 새로운 프로토콜에 3 개의 화학 물질을, 즉필요합니다. 어 그 노3, 포름알데히드, 및 다른 프로토콜6,7,,910,11,12,에에서 사용 된 것과 비슷한 금액에 NaOH, 13,14, 따라서 새로운 프로토콜 더 경제적이 고 생성 덜 화학 위험 화학 비용 감소 뿐만 아니라 또한에 추가 화학 물질의 유해 물질 처리 과정을 최소화 하는 실험실입니다.
새로운 프로토콜 SSR 담배에 패턴 밴딩 및 꽃 배 추 genotypes (그림 1)의 명백한 탐지에 대 한 낮은 배경 잡음과 투명 한 이미지를 생산. 다른 프로토콜에 비해, 새로운 프로토콜 얼룩 효과 낮은 배경 잡음 및 높은 그림 대비 (그림 2)와 함께 최고의 생산. 50-500 bp의 범위에서 DNA 검출을 위한 새로운 프로토콜의 감도 보다 19.5 pg / µ L 이었다 (4.3 pg / m m2) 9.8 pg / µ L (2.2 pg/m m2)의 최소 농도와 (그림 3), 다른 프로토콜에 보고 보다 높은 7 , 12 , 13.
높은 처리량 및 해상도 검출 DNA amplicons의 형광 라벨 기술을 제공할 수 있습니다, 그들은 필요한 특수 장비 및 특히 많은 생물학 실험실에 대 한 액세스할 수 없습니다 수 있습니다 더 비싼 시 약 개발 도상 국가. 새로운 얼룩 프로토콜은 간단 하 고 빠른 ~ 800 DNA 샘플 1 인당 하루, 따라서 화면 수, 일상적인 연구를 수행 하기 위해이 실험실에 대 한 좋은 옵션입니다.
결론적으로,이 연구에서 개발 된 새로운 프로토콜 프로세스, 구현 하기 더 쉬운, 더 싸게, 더 빨리 이며만 3 개의 시 약을 사용 하 여-탐지 효과 또는 그림 명확성 손상 없이-모든 다른 기존 실버 얼룩 기법 보다. 프로토콜을 얼룩이 지는 새로운 실버 담배 및 꽃 배 추 연구 성공적으로 사용 되었습니다 하 고 성공적인 SSR 유전형 다른 종에 유용한 도구가 될 수 있습니다.
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Disclosures
저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.
Acknowledgments
이 작품은 광 동 자연 과학 재단의 중국 (2015A030313500), 지방 키 국제 협동 연구 플랫폼 및 주요 과학 연구 프로젝트의 광 동 등 교육 (2015KGJHZ015), 과학에 의해 투자 되었다 고 광 동 담배 독점 관리 (201403, 201705), 과학 학부 학생 (201711078001) 국가 혁신 교육 프로젝트 (2016B020201001), 중국의 광 동의 기술 계획의 기술 계획. 상호 또는이 간행물에서 상용 제품의 언급만을 목적으로 특정 정보를 제공 하 고 미국 농 무부에 의해 승인 또는 추천을 의미 하지는 않습니다. 미국 농 무부는 평등한 기회 제공 및 고용주입니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PCR master mix (Green Taq Mix) | Vazyme Biotech Co. Ltd, China | #P131-03 | |
| 50-2000 bp DNA Ladder | Bio-Rad, USA | #170-8200 | |
| DL500 DNA marker | Takara Bio Inc., Japan | #3590A | |
| Tris base | Sangon Biotech Shanghai, China | #77-86-1 | |
| Boric acid | Sangon Biotech Shanghai, China | #10043-35-3 | |
| EDTA-Na2 | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #6381-92-6 | |
| Acrylamide | Sangon Biotech Shanghai, China | #79-06-1 | |
| N,N'-methylene-bis-acrylamide | Sangon Biotech Shanghai, China | #110-26-9 | |
| N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine | Sangon Biotech Shanghai, China | #110-18-9 | |
| Ammonium persulfate | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #7727-54-0 | |
| Bind-silane | Solarbio Beijing, China | #B8150 | |
| AgNO3 | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co.,Ltd, China | #7761-88-8 | |
| Formaldehyde | Tianjin DaMao Chemical Reagent Factory, China | #50-00-0 | |
| NaOH | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #1310-73-2 | |
| Acetic acid | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #64-19-7 | |
| Na2CO3 | Tianjin DaMao Chemical Reagent Factory, China | #497-19-8 | |
| Ethanol | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #64-17-5 | |
| HNO3 | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #7697-37-2 | |
| Na2S2O3.5H2O | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co.,Ltd, China | #10102-17-7 | |
| Eriochrome black T(EBT) | Tianjin DaMao Chemical Reagent Factory, China | #1787-61-7 | |
| Plastic tray | Shanghai Yi Chen Plastic Co., Ltd, China | - | |
| TS-1 Shaker | Qilinbeter JiangSu, China | - | |
| BenQ M800 Scanner | BenQ, China | - | |
| DYY-6C Power supply | Beijing Liuyi Instrument Factory, China | - | |
| High throughout vertical gel systems, JY-SCZF | Beijing Tunyi Electrophoresis Co., Ltd, China | - |
References
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