Summary
Nous rapportons ici un protocole qui nécessite seulement trois réactifs et 7 min de traitement et est adapté pour la Géneration rapide des données de SSR de qualité dans l’analyse génétique de coloration à l’argent simple et peu coûteuse.
Abstract
Simple Sequence Repeat (SSR) est un des marqueurs plus efficaces utilisés dans la recherche en génétique animale et végétale et des programmes de sélection moléculaire. Coloration à l’argent est une méthode largement utilisée pour la détection des marqueurs dans un gel de polyacrylamide. Cependant, les protocoles classiques coloration à l’argent sont techniquement exigeants et chronophage. Comme de nombreux autres laboratoires biologiques techniques, protocoles de coloration à l’argent ont été constamment optimisés pour améliorer l’efficacité de la détection. Nous rapportons ici une coloration méthode significativement réduit les coûts de réactif et améliore la clarté de la résolution et la photo de détection simplifié à l’argent. La nouvelle méthode nécessite deux étapes principales (imprégnation et développement) et trois réactifs (nitrate d’argent, d’hydroxyde de sodium et formaldéhyde) et seulement 7 min de traitement pour un gel de polyacrylamide non dénaturant. Par rapport aux protocoles indiqués précédemment, cette nouvelle méthode est plus facile, plus rapide et utilise moins de réactifs chimiques pour la détection de la SSR. Par conséquent, ce protocole de coloration à l’argent simple, peu coûteux et efficace bénéficiera de cartographie génétique et la sélection assistée par une génération rapide de données marqueur SSR.
Introduction
Le développement de marqueurs PCR a révolutionné la science de la génétique des plantes et reproduction1. Marqueurs microsatellites (SSR) sont parmi les marqueurs d’ADN plus polyvalents et les plus couramment utilisés. Leur génome large couverture, abondance, spécificité du génome et répétabilité sont quelques-uns des mérites des microsatellites en plus de leur héritage codominant pour la détection des hétérozygotes génotypes2. Plusieurs études ont utilisé des microsatellites pour étudier la diversité génétique, suivre ascendance, établir des cartes de liaison génétique et cartographier les gènes pour les caractères économiquement importants3,4.
Produits PCR des microsatellites sont couramment séparés par électrophorèse sur agarose ou gel de polyacrylamide et puis visualisées avec coloration à l’argent ou sous une lumière UV après coloration au bromure d’éthidium. Coloration à l’argent de fragments d’ADN en gels de polyacrylamide est plus sensible que les autres coloration méthodes5,6 et a été largement utilisée pour détecter des fragments d’ADN comme marqueurs SSR7.
Comme de nombreuses techniques de laboratoire d’analyses biologiques, coloration à l’argent des gels de polyacrylamide a augmenté depuis son tout d’abord rapporté qu’une technique de visualisation de fragment dans 19798. La technique a été initialement modifiée pour la détection de fragments d’ADN par Bassam al. 6 en 1991 et ensuite amélioré par Sanguinetti et collaborateurs9 en 1994. La méthode a été optimisée en dernier quelques décennies6,7,9,10,11,12,13,14 , 15. Toutefois, la plupart de ces versions mises à jour des protocoles ont encore quelques inconvénients tels que la forte demande technique et long temps pour fixation de traitement et montage6, qui limitent l’application de ces protocoles7, 11. Un protocole optimal qui allie faible coût avec le rendement élevé de détection de fragment d’ADN est absolument nécessaire pour l’application systématique de coloration dans la recherche biologique à l’argent.
En outre, gel de polyacrylamide peuvent être divisée en dénaturants et non-dénaturisation de gels de polyacrylamide, et les deux peuvent être utilisés pour la détection des marqueurs à l’aide de la méthode de coloration à l’argent. L’effet et la résolution qui ne diffèrent pas significativement, mais non-dénaturisation de gels de polyacrylamide sont plus faciles à traiter et prendre moins de temps16.
Sur la base de la recherche précédente15, l’objectif de la présente étude est de décrire une coloration protocole en détail pour la détection rapide, facile et peu coûteux des microsatellites dans un gel de polyacrylamide non dénaturants optimisée à l’argent.
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Protocol
1. préparation des produits PCR des microsatellites
- Préparer tous les produits chimiques et réactifs pour les réactions de PCR dont l’ADN modèle (30 ng/µL), mélange maître de PCR × 2 (contenant 2 × PCR tampon, 0,4 mM de chaque dNTP, 3 mM de MgCl2, 0,1 U/µL de l’ADN polymérase Taq et colorants), 10 µM de chacun avant et marche arrière amorces et eau distillée ou désionisée (dH2O).
NOTE : Les marqueurs utilisés dans la présente étude ont été PT51333 (séquence d’amorce en avant : 5 ' - GCACCTTTGGTTATCCGACA - 3' et séquence inverse apprêt : 5 « - TGCTTTAAGTCATGTACCAAATTGA - 3 ») et PT50903 (séquence d’amorce en avant : 5 ' - AAATTTCTTTCGGTGTGATAACTG - 3' et amorce sens inverse : 5'-AGAGACTGCCGTTTGATTTGA-3 ') pour le tabac et CX-43 (séquence d’amorce en avant : 5'-TGGGGATGTGAGCTTCTTCT-3' et inverser la séquence d’amorce : 5' - AGGGTTCCTTTGGGGTGATA-3') et CX-157 (séquence d’amorce en avant : 5 '- TCGACGCTGACTTCACTGAC-3 ' et d’inverser la séquence de l’amorce : 5 « - GGACAGCTTCACACATTTGC - 3 ») de chou chinois floraison. - Préparer 10 µL du mélange PCR amplification en ajoutant 2 µL de l’ADN, 5 µL du mélange maître de PCR × 2, 0.2 µL de chaque amorce vers l’avant et l’inverse amorce et 2,6 µL de dH2O.
- Effectuer la réaction d’amplification PCR dans un thermocycleur avec une étape initiale de 94 ° C pendant 5 min, procédez par 38 cycles de 45 s à 94 ° C pendant la dénaturation, 45 s à 55 ° C pour apprêt recuit et 1 min à 72 ° C pendant l’extension et une étape finale extension de 10 min à 72 ° C ; puis stockez les produits de PCR à 4 ° C pour une utilisation ultérieure.
2. préparation des Solutions de Polyacrylamide Gels Casting
- Préparer 1 L de 5 × TBE tampon en dissolvant 54 g de base Tris et 27,5 g d’acide borique dans dH2O, en ajoutant 20 mL d’EDTA 0,5 M (pH 8,0) et en ajustant la solution pour un volume final de 1 000 mL avec dH2O.
Remarque : Le tampon TBE peut être stocké à température ambiante pendant des mois. - Préparer 2 L de tampon TBE 0,5 × en ajoutant 200 mL de tampon TBE × 5 dH2O pour un volume final de 2 L et conserver à température ambiante.
- Préparer une solution de gel de polyacrylamide non dénaturants 6 % en dissolvant 29 g d’acrylamide grade de biologie moléculaire et 1 g de qualité biologie moléculaire N, N'-methylenebisacrylamide dans le tampon TBE × 0,5 pour un volume final de 500 mL. Couvrir le flacon de solution avec le papier d’aluminium et de conserver à 4 ° C pour une utilisation ultérieure.
ATTENTION : L’Acrylamide est considéré comme une puissante neurotoxine et doit être manipulé avec soin. Toujours porter des gants pour le pesage de poudre et des solutions de manutention qui le contiennent. - Préparer une solution à 20 % d’ammonium persulfate (APS) dissoudre 2 g de APS avec dH2O pour un volume final de 10 mL. Il peut être stocké à-20 ° C pour le mois.
Remarque : Pour plus de commodité, 10 mL de solution APS 20 % peut être aliquoté dans 1,5 mL ou 2 mL de tubes à centrifuger pour conservation à-20 ° C. Décongeler et bien mélanger avant utilisation. - Préparer une solution diluée de bind-silane en dissolvant 3 µL de bind-silane en 0,997 mL d’éthanol à 95º contenant 0,5 % d’acide acétique. Il peut être stocké à 4 ° C pendant des semaines.
ATTENTION : Bind-silane est toxique, portez des gants lorsque vous manipulez la solution et garder la chambre ventilée.
3. préparation des Gels de Polyacrylamide pour l’électrophorèse
- Laver un ensemble de plaques de verre et les entretoises avec un détergent dans l’eau du robinet, suivie d’un rinçage complet avec dH2Air O. sécher les plaques en les définissant dans une plaque Etendoir.
- Disperser, 1 mL de solution de bind-silane sur la surface intérieure de la dalle de verre rectangulaire et sec pendant 5 min.
Remarque : Si la solution de bind-silane n'est pas répartie uniformément sur la surface de la plaque, le gel peut être détaché pendant la coloration et entraîner un effet de coloration insatisfaisant. - Disperse 1 mL de repousser-silane sur la surface intérieure d’une plaque de verre cranté avec un écouvillon, essuyer l’excès repousser-silane avec papier de soie et laisser sécher pendant 5 min.
Remarque : Si le repel-silane ne pas uniformément enduire la surface de la plaque de verre, cela pourrait endommager le gel en privant partiellement. - Assembler les plaques de verre avec entretoises avec la plaque de l’encoche sur le dessus et serrez les deux côtés de l’Assemblée avec coulée de pinces.
- Versez la quantité appropriée (40 mL) de solution d’un gel de polyacrylamide non dénaturants 6 % dans un bécher pour l’ensemble de la plaque de largeur 33 cm × 10 cm de hauteur et entretoise épaisseur de 1,5 mm, ajouter 20 µL de tétraméthyléthylènediamine (TEMED) et 200 µLfresh 20 % APS et mélanger doucement.
Remarque : La quantité appropriée (40 mL) de solution de gel a été calculée à partir du volume interne des deux plaques d’entretoises (30 cm sur 8,5 cm × 0,15 cm) d’épaisseur. En ce qui concerne la quantité de TEMED et APS pour la polymérisation du gel, il y a un rapport standard de la solution de gel TEMED et APS basé sur la référence17. La solution de gel décrite ci-dessus est stockée à 4° C. Si la solution de gel est stockée à température ambiante, 20 µL de TEMED et 100 µL de 20 % APS doit être utilisé. Remuer doucement le mélange de la solution de gel avec une baguette de verre pour éviter les bulles d’air dans la solution. - Versez la solution immédiatement et soigneusement dans les plaques de verre assemblées le long du bord de la plaque à encoche, remplir l’espace presque jusqu’au sommet et insérer le peigne. Ajouter un petit volume de solution de gel sur le peigne.
NOTE : Gardez les plaques de verre horizontal pour éviter le gel de la fuite. Éliminez les bulles avec un crochet de bulle, si nécessaire. - Laisser le gel à durcir durant 30 min à température ambiante.
NOTE : Le temps de polymérisation peut changer avec la température de la solution de gel et de l’environnement. - Une fois le gel est entièrement polymérisation, retirer les pinces de coulée et positionner la plaque sertie dans l’unité de cuve d’électrophorèse de la plaque crantée orienté vers le réservoir tampon supérieur et grand étau pour fixer la plaque réglé sur l’unité du réservoir.
- Versez 1 L de tampon TBE 0,5 × dans chacun de la tige et les cavités inférieures. Retirer le peigne et rincer tous les puits avec un tampon à l’aide d’une pipette ou une seringue.
Remarque : Veiller à ce que le gel "sandwich" en bas de la plaque est complètement trempée dans un tampon sans les bulles.
4. DEROULEMENT gelées
- Charger environ 1 µL du produit PCR dans chaque puits du gel polyacrylamide. Charger une échelle de taille d’ADN sur les deux côtés du gel ainsi que des échantillons de produits PCR. Fixer le couvercle de sécurité à la chambre supérieure de tampon.
- Connectez les câbles d’alimentation, correspondant à la couleur rouge à rouge et noir sur noir. Exécutez le gel à une tension constante de 110 V jusqu'à ce que le colorant atteint une position définie, normalement pendant environ 70 min.
NOTE : Le temps de la tension et la course est réglable selon la taille des produits PCR.
5. coloration pour la détection de marqueurs microsatellites dans un Non-Gel de Polyacrylamide à l’argent
- Après électrophorèse, vider la mémoire tampon de la chambre haute dans un grand bécher via la vanne. Détacher les pinces de côté, retirer les plaques de l’appareil, soigneusement séparer la plaque de verre entaillé le long d’un côté avec une spatule et veillez à ce que le gel reste attaché à l’autre plaque de verre recouverte de bind silane.
- Faire 1 L de solution d’imprégnation fraîches en dissolvant 1,5 g de AgNO3 dans 1 L de dH2O. préparer 1 L de solution de développement fraîches dissoudre 10 g de NaOH dans 900 mL de dH2O, ajouter 1 mL de 37 % de formaldéhyde et s’adapter à un volume final de 1 L à l’aide de dH2O.
NOTE : Porter des gants et manipuler les produits chimiques ci-dessus et les solutions avec soin. Il n’est pas nécessaire de conserver les solutions et les étapes correspondantes avec les solutions dans l’obscurité. - Rincez soigneusement la plaque de gel et verre avec ample dH2O pour retirer le tampon d’électrophorèse, puis placer la plaque avec le gel vers le haut sur un plateau en plastique et submerger le gel dans 1 L de solution d’imprégnation. Placez le plateau sur un agitateur.
- Secouez le plateau à 60 tr/min pendant 3-4 min.
NOTE : Secouant de temps peut être ajustée selon l’épaisseur de gel et de la concentration de nitrate d’argent dans la solution d’imprégnation. - Déplacez le plateau hors de la solution d’imprégnation et le déposer sur un autre bac. Rincer la solution d’imprégnation résiduel hors de la surface de la plaque et le gel à l’aide d’ample dH2O deux fois pour les 3-5 s de chaque.
- Placer la plaque avec le gel vers le haut sur un autre plateau, plonger la plaque dans 1 L de solution de développement, puis secouez le plateau à 50 tr/min pendant environ 3 min. surveiller l’apparition de l’ADN des fragments et arrêter le développement lorsque le ratio le plus élevé du signal de l’ADN de fragments au bruit de fond est observée (cette étape prend environ 3 min).
- Rincez la plaque et le gel avec un grand dH2O deux fois et sécher la plaque de gel avec un papier de soie.
- Scannez le gel à l’aide d’un scanner approprié. Une résolution de 300 dpi permet une visualisation claire de fragments d’ADN. Le gel peut également être photographié à l’aide d’une caméra.
- Le marquage chromosomique des microsatellites peut être marqué basée sur les fragments d’ADN dans l’image.
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Representative Results
Les amplicons PCR ont été produits en utilisant les paires d’amorces SSR correspondantes en floraison pak-choï et le tabac. Après électrophorèse, les gels de polyacrylamide sont colorées à l’aide de l’argent qui précède souillant le protocole, qui a détecté sans ambiguïté les patrons des bandes des microsatellites (Figure 1).
Pour comparer l’efficacité de la détection des différent argent souillant des protocoles, produits PCR des microsatellites chez le tabac et la floraison chou chinois ont été séparés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide et visualisés à l’aide de coloration argentée publié cinq protocoles9,11,12,13,14 et le nouveau protocole. Tous les six protocoles détectés SSR baguage des patrons pour le tabac et la floraison des génotypes de chou chinois (Figure 2), mais le présent protocole avait le bruit de fond plus faible et un contraste plus élevé de l’ADN des fragments, telle qu’elle a produit la meilleure image clarté de dépistage sans ambiguïté des polymorphismes SSR. La durée et le nombre des principales étapes et les réactifs utilisés pour compléter le processus de coloration à l’argent sont répertoriés dans le tableau 1 pour chaque protocole, le nouveau protocole prend le moins de temps et nécessite moins de réactifs chimiques et étapes du processus.
La figure 3 montre la sensibilité du protocole, tel que mesuré par 50-2 000 bp marqueur d’ADN sur un gel de polyacrylamide non dénaturants.
Figure 1 : détection des profils de bandes de SSR. Détection de baguage de la SSR de profils de génotypes de floraison pak-choï (A) et protocole de tabac (B) à l’aide de la nouvelle coloration à l’argent. Les amplicons ont été séparés sur gel de polyacrylamide de non-dénaturisation de 6 % et colorées selon le protocole de coloration à l’argent rapporté ci-dessus. Voie M est marqueur de taille d’ADN, voies 1 à 62 représentent les amplicons de 62 génotypes amplifié par des paires d’amorces SSR « CX-157 » (les séquences des amorces et inverses sont 5'-TCGACGCTGACTTCACTGAC-3' et 5'- GGACAGCTTCACACATTTGC-3', floraison, respectivement) de chou chinois (Figure 1 a) et « PT51333 » (les séquences des amorces et inverses sont 5'- GCACCTTTGGTTATCCGACA-3' et 5'- TGCTTTAAGTCATGTACCAAATTGA-3', respectivement) dans le tabac (Figure 1 b). Les flèches pointent vers les bandes SSR de cible. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : Comparaison de l’efficacité de la détection de marqueurs microsatellites chez le tabac et la floraison génotypes de chou chinois à l’aide de différent argent souillant des protocoles. Les amplicons ont été séparés dans 6 % des non-dénaturisation de gels de polyacrylamide et colorées à l’aide de cinq publié de protocoles coloration argentée9,11,12,13,14 et le nouveau Protocole. Voie M est marqueur de taille d’ADN. Voies de 1 à 4 représentent les amplicons d’amorces SSR de « PT50903 » (les séquences des amorces et inverses sont 5'-AAATTTCTTTCGGTGTGATAACTG-3 'et 5'-AGAGACTGCCGTTTGATTTGA-3', respectivement) dans quatre génotypes de tabac ; voies de 5 à 8 indiquent les amplicons d’amorces SSR « CX-43 » (les séquences des amorces et inverses sont 5'-TGGGGATGTGAGCTTCTTCT-3 'et 5'-AGGGTTCCTTTGGGGTGATA-3', respectivement) dans quatre génotypes de chou chinois de floraison. Les bandes SSR de cible sont indiqués par des flèches. Ce chiffre a été modifié par la Figure 2 de Liu et al. 8 S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : sensibilité du protocole tel que mesuré par le marqueur d’ADN bp 50-2000 sur un gel de polyacrylamide non dénaturants. La première voie a été chargée avec 1 µl de marqueur d’ADN avec des tailles de fragment de 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 1000, 1500 et 2000 bp, chacun à 10 ng/µL. Les échantillons restants ont été chargés avec une dilution 1:2 en série dans les ruelles qui précède. La quantité minimale détectable pour le protocole était de 9,8 pg dans le 11ème lane (2,2 pg/mm2 en 4,5 mm2 puits). Ce chiffre a été modifié par la Figure 1 de Liu et al. 8. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
| Ordre du jour | Sanguinetti et al. 9 | Qu et al. 11 | L’al. 12 | Byun et al. 13 | Kumar et al. 14 | Nouveau protocole |
| Durée (min) | 30 | 12-25 | 8 – 9 | 9 – 31 | 42 | 6 – 7 |
| Nombre d’étapes | 5 | 4 | 3 | 3 | 3 | 2 |
| Nombre de réactifs | 5 | 6 | 6 | 5 | 7 | 3 |
Tableau 1 : Temps, nombre des étapes clés et des réactifs utilisés dans le différent argent souillant des protocoles de fonctionnement.
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Discussion
Le lavage de gel après l’imprégnation est une étape cruciale. Volume de l’eau et le temps lavage insuffisant pourrait l’élimination incomplète des solution d’imprégnation sur la surface de la plaque et le gel et provoquer dans un fond sombre. Le temps de développement approprié est une autre étape clé, développement excessif peut se traduire par un fond brun foncé avec une image de faible contraste de fragments d’ADN. En outre, l’étape d’imprégnation altèrent l’efficacité coloration des fragments d’ADN. Bien qu’allonger le temps d’imprégnation pendant 5 min ou d’augmenter AgNO3 s’élèvent dans la solution d’imprégnation n’améliorent pas sensiblement la qualité de coloration, une réduction de l’imprégnation temps inférieurs à 3 min ou diminuant la quantité de AgNO3 ( < 1 g) peut entraîner des fragments d’ADN noirs gris ou superficielles.
Une opération simple et rapide pour la détection efficace de l’ADN est souhaitable pour une méthode de coloration à l’argent. Le nouveau protocole mis au point dans cette étude évite la fixation, arrêt et plusieurs étapes de lavage décrits dans d’autres protocoles6,9,10,11,12,13 , 14 sans affecter la qualité de coloration (Figure 1 et Figure 2) et ne nécessite que deux étapes simples d’imprégnation et de développement qui prennent 7 min. Par conséquent, le nouveau protocole est plus rapide que tous les autres coloration protocoles actuels disponible6,7,9,10,11,12, 13,14. En outre, le nouveau protocole ne nécessite que trois produits chimiques, c’est à dire. AgNO3, le formaldéhyde et NaOH, à des quantités semblables que celle utilisée dans d’autres protocoles6,7,9,10,11,12, 13,14, par conséquent, le nouveau protocole est plus économique et génère des risques moins chimiques, qui non seulement réduit le coût des produits chimique mais minimise également le processus de manipulation de matériaux dangereux supplémentaires substances chimiques présentes dans le laboratoire.
Le nouveau protocole produit des images claires avec un bruit faible bruit de fond pour la détection sans ambiguïté des SSR des patrons dans le tabac de bandes et la floraison des génotypes de chou chinois (Figure 1). Par rapport aux autres protocoles, le nouveau protocole produit la meilleure coloration effet avec le plus faible bruit de fond et un contraste plus élevé (Figure 2). À la gamme de 50 à 500 bp, la sensibilité du nouveau protocole pour la détection de l’ADN a été inférieur à 19,5 pg/µL (4,3 pg / mm2) avec une concentration minimale de 9,8 pg/µL (2,2 pg/mm2) (Figure 3), qui est supérieur à celui indiqué dans les autres protocoles 7 , 12 , 13.
Bien que les technologies de marquage par fluorescence peuvent fournir un débit élevé et détection de la résolution des amplicons d’ADN, dont ils ont besoin d’équipement spécialisé et des réactifs plus chers qui n’est peut-être pas accessibles pour les nombreux laboratoires biologiques, en particulier ceux dans les pays en développement. Le nouveau protocole de coloration est simple et rapide qui peut dépister des échantillons d’ADN de ~ 800 par personne et par jour, donc, est une bonne option pour ces laboratoires effectuer une recherche de routine.
En conclusion, le nouveau protocole mis au point dans cette étude est plus rapide de processus, plus facile à mettre en œuvre, moins cher et n’utilise que trois réactifs — sans compromettre la clarté effet ou photo de détection — que tous les autre existant coloration à l’argent des techniques. Le nouvel argent souillant le protocole a été utilisé avec succès dans la recherche de chou chinois de floraison et du tabac et peut être un outil précieux pour le génotypage SSR réussie chez d’autres espèces.
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Disclosures
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont aucun intérêt financier concurrentes.
Acknowledgments
Ce travail a été financé par la Fondation de sciences naturelles de Chine Guangdong (2015A030313500), la plateforme de recherche clé International coopérative provinciale et les grands scientifiques recherche projet de Guangdong l’enseignement supérieur (2015KGJHZ015), la Science et Plan de la technologie du Guangdong Tobacco Monopoly Administration (201403, 201705), Science et technologie Plan de Guangdong de la Chine (2016B020201001), le projet de formation National d’Innovation pour les étudiants de premier cycle (201711078001). La mention de noms commerciaux ou des produits commerciaux dans cette publication est uniquement dans le but de fournir des informations spécifiques et n’implique pas de recommandation ou une approbation par le US Department of Agriculture. USDA est un fournisseur de l’égalité des chances et l’employeur.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PCR master mix (Green Taq Mix) | Vazyme Biotech Co. Ltd, China | #P131-03 | |
| 50-2000 bp DNA Ladder | Bio-Rad, USA | #170-8200 | |
| DL500 DNA marker | Takara Bio Inc., Japan | #3590A | |
| Tris base | Sangon Biotech Shanghai, China | #77-86-1 | |
| Boric acid | Sangon Biotech Shanghai, China | #10043-35-3 | |
| EDTA-Na2 | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #6381-92-6 | |
| Acrylamide | Sangon Biotech Shanghai, China | #79-06-1 | |
| N,N'-methylene-bis-acrylamide | Sangon Biotech Shanghai, China | #110-26-9 | |
| N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine | Sangon Biotech Shanghai, China | #110-18-9 | |
| Ammonium persulfate | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #7727-54-0 | |
| Bind-silane | Solarbio Beijing, China | #B8150 | |
| AgNO3 | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co.,Ltd, China | #7761-88-8 | |
| Formaldehyde | Tianjin DaMao Chemical Reagent Factory, China | #50-00-0 | |
| NaOH | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #1310-73-2 | |
| Acetic acid | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #64-19-7 | |
| Na2CO3 | Tianjin DaMao Chemical Reagent Factory, China | #497-19-8 | |
| Ethanol | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #64-17-5 | |
| HNO3 | Guangzhou Chemical Reagent Factory, China | #7697-37-2 | |
| Na2S2O3.5H2O | Sinopharm Chemical Reagent Beijing Co.,Ltd, China | #10102-17-7 | |
| Eriochrome black T(EBT) | Tianjin DaMao Chemical Reagent Factory, China | #1787-61-7 | |
| Plastic tray | Shanghai Yi Chen Plastic Co., Ltd, China | - | |
| TS-1 Shaker | Qilinbeter JiangSu, China | - | |
| BenQ M800 Scanner | BenQ, China | - | |
| DYY-6C Power supply | Beijing Liuyi Instrument Factory, China | - | |
| High throughout vertical gel systems, JY-SCZF | Beijing Tunyi Electrophoresis Co., Ltd, China | - |
References
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