Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה

Published: May 4, 2018 doi: 10.3791/57522
Automatic Translation
1, 2, 1, 2, 1, 3
1Department of Biomedical Engineering, University of Rochester, 2Department of Otolaryngology, University of Rochester Medical Center, 3Center for Oral Biology, University of Rochester Medical Center

Summary

אנו מציגים גישה מפורטת לביצוע אוסף רוק, כולל מיכשור וציוד מאתר את ניתוקה של שלושה בלוטות הרוק הגדולות.

Abstract

Hyposalivation הוא ציין כלל התגובה אוטואימונית של תסמונת סיוגרן או הקרנות הבאה, לפגיעה בלוטות הרוק הגדולות. במקרים אלה, נותרו שאלות לגבי המחלה פתוגנזה והתערבויות יעיל. שיטת אופטימיזציה המאפשר הערכה תפקודית של בלוטות הרוק לא יסולא בפז עבור חוקרים בלוטה אקסוקרינית ביולוגיה, תפקוד, הרפוי. כאן, אנו מציגים גישה צעד אחר צעד כדי ביצוע פילוקרפין המרצת הפרשת הרוק, כולל מיכשור וציוד את הקרע של שלוש הגדולות מאתר בלוטות הרוק. אנחנו גם פירוט המתאימה מאתר הראש והצוואר האנטומיה גישה במהלך הטכניקות הללו. גישה זו היא מדרגית, המאפשרות מספר עכברים יעובדו בעת ובעונה אחת, ובכך שיפור היעילות של תהליך עבודה. אנו שואפים לשפר את הפארמצבטית בשיטות אלה, שלכל אחד מהם יש נוספת יישומים בתוך השדה. בנוסף אוסף רוק, נדון מדדי לכימות, נורמליזציה קיבולת תפקודית של רקמות אלה. נציג נתונים כלולים מ בבלוטות submandibular עם תפקוד בלוטת הרוק מדוכא 2 שבועות בעקבות קרינה fractionated (4 מנות של 6.85 Gy).

Introduction

הפרעות בלוטת הרוק כוללים תסמונות של dysregulated או הפרשת לקוי מוביל עודף (sialorrhea) או underproduction (xerostomia ו- hyposalivation) של רוק1. בשני המקרים, יש אינטרס לשפר את ההבנה שלנו של בלוטת הרוק ביולוגיה לעבר היעד הסופי של התפתחות טיפולית2.

בלוטות הרוק הן איברים מאוד רגיש, פגעו לעיתים קרובות במהלך הקרנות סרטן הראש והצוואר, המוביל הקבוע יובש בפה (xerostomia)3,4. בניגוד לרקמות אחרות רגיש, עם זאת, שיעור תחלופה בלוטת הרוק הוא יחסית נמוך, המנגנון של אובדן הפרשה ממעטים להבין5,6. בהגדרה פגיעה ייחודי, התחדשות רקמות אסטרטגיות המכון להגנת דורשים הערכה תפקודית הרוק. השפעול, אוסף רוק מאתר הוא כלי יקר במיוחד בהערכת התגובה בלוטת קרינה וגם סוכני טיפולית.

כאן, אנו מציגים את שיטת ביצוע וכימות הפרשת רוק מגורה באמצעות פילוקרפין, אגוניסט מוסקריניים חזק7. פילוקרפין מגרה את מערכת העצבים האוטונומית לזירוז בלוטת הפרשה8,9. כדי להשלים את המבחן הזה כראוי, מיכשור וציוד נדרש כדי להבטיח כי העכבר שומרת על דרכי הנשימה פטנטים לאורך כל ההליך, וכדי להפחית את הסיכונים של חנק השאיפה של חלל הפה10. הפרשות במאגר.

זהו הליך מסוף, שהגיעה לשיאה להסרת בלוטות הרוק הגדולות שלושה: את parotid (עמוד), submandibular (SMG) ו את sublingual (. סיג). ללימודים פונקציונלי, בלוטת משקולות נרשמים, משמשים לעתים קרובות כדי לנרמל רוק למדידה11,12,13. המידע הזה חשוב במיוחד במחקרים קרינה, שבתוכה בלוטת ניוון נמצא14,התוצאה הצפויה15

יש השתנות בספרות לגבי איך ממריצים הפרשת רוק מבוצעת ודיווח16. לדוגמה, פילוקרפין מנות בתוך ספרות span לפחות שלושה סדרי גודל17,18,19,20,21,22,23. כאן, אנו מציגים פרוטוקול פילוקרפין במינון גבוה ממוטבת עם כוונה הפארמצבטית משופרת שיטת הביצוע, כמו גם מתן פלטפורמה מודולרית של טכניקות (מיכשור וציוד, אוסף רוק ו ניתוח בלוטת) כי ניתן להתאים כמו הצורך.

בנוסף פרוטוקול הדגמה, אנו כוללים נציג נתונים פונקציונלי של זרימת הרוק-2 שבועות לאחר fractionated קרינה (4 מנות של 6.85 Gy) לאזור SMG.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל ויוו ההליכים המתוארים להלן אושרו על ידי ועדת האוניברסיטה חיה משאבים ב אוניברסיטת רוצ'סטר, רוצ'סטר. NY.

1. הכנה

  1. באמצעות איזון האנליטי, שוקלים 20 מ"ג פילוקרפין. להמיס ב 2 מ ל תמיסת סטרילית צינור microcentrifuge.
    הערה: כי פילוקרפין רגיש אור ולא מאבד את הפעילות לאורך זמן, פתרון זה צריך להיות מוכן ביום ההזרקה, מוגן מפני אור עד מנוהל.
  2. באמצעות איזון האנליטי, שוקל ולזהות כל אוסף צינורות, נימים זכוכית. המספר של אוסף צינורות, נימים זכוכית צריך להתאים את מספר עכברים.

2-מיכשור וציוד

  1. שוקלים C57/BL6 עכברים באמצעות איזון האנליטי.
  2. באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, עזים ומתנגד עכברים עם פתרון סטרילי מלוחים intraperitoneally מוזרק של 100 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 10 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים. המשך לשלב הבא כאשר העכבר אינו מגיב לגירויים (דהיינו היעדר רפלקס הנסיגה פדלים), אשר בדרך כלל מתרחשת בתוך 5-10 דקות לאחר ההזרקה.
  3. לאחר dispensing חומר סיכה על המוליך שקצהו כותנה, בעדינות להחיל על העיניים, מקם את העכבר במצב פרקדן על הבמה. החיה anesthetized חייב להישמר על משטח חם.
    הערה: כל הפעולות מבוצעות בטמפרטורת החדר.
  4. אבטח את האף הגפיים, זנב אל הבמה באמצעות הדבקה.
  5. נקי, להרטיב את הצוואר עם המחיקה אלכוהול.
    הערה: זה יעזור למנוע חדירה החתכים הבאים פרווה.
  6. מרימה את העור בצוואר קו האמצע הגחון עם מלקחיים, לעשות חתך קטן, שטחי באמצעות מספריים ויבתר. להנחות את המספריים לתוך הפתח ופתח לאט את להבי subcutaneously כדי להפריד בין רקמות מטוסים.
  7. יש לשמור על עור הרים, לחתוך בזהירות כדי 1 ס מ מתחת בפה.
  8. להזמין שני חתכים לרוחב-ההיבט נחות מעולה של החתך הראשון. באמצעות מלקחיים, בעדינות משקפים משם את העור כדי לאפשר גישה למבנים הראש והצוואר.
  9. באמצעות המיקרוסקופ ויבתר בהגדלה X 8, להמחיש את בלוטות submandibular (קו האמצע: איור 1).
  10. בעזרת מלקחיים בסדר, הרם בעדינות את בלוטות לחשוף את השרירים infrahyoid (רצועה) ארבעה המכסים את קנה הנשימה. הימנע קריעה או לשבש את להערכת שמסביב או צינורות excretory.
  11. אם אוסף רוק מכל עכבר אחד או יותר, חזור על השלבים 2.1-2.10 עם העכבר כל לפני שתמשיך.
    הערה: הליך זה שניתן לבצע בביטחה על עד 5 עכברים בו-זמנית.
  12. במספריים ויבתר קטן, להסיר את החלק המדיאלי של השרירים רצועה בעודם שוהים קרוב קו האמצע ככל האפשר. חותכים רק ככל הדרוש להמחיש את קנה הנשימה ולשמור רצועה השרירים מהדרך במהלך ההליך. הימנע חותך כל ספינות בקרבת מקום, כי אם יש דלדול אחסון משני דימום משמעותי, פילוקרפין לא יהיה יעיל וגורם הפרשת.
  13. משקפים את השרירים רצועה מן קנה הנשימה.
  14. דמיינו את הקול, קנה הנשימה, בלוטת התריס. ודא קנה הנשימה ברור עודפי רקמת.
  15. לבצע חתך אופקי לקנה נחות/אחוריים בלוטת התריס באמצעות מספריים ויבתר קטנות. ודא דרכי הנשימה פטנטים וברור של נוזל.

3. רוק אוסף

  1. הוצא את הקלטת ליד הפה ואת הזווית לנתיחה הבמה כלפי מטה (45°, cranially) כדי לסייע עם זרימת הרוק.
  2. באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, לבצע הזרקה בקרום הבטן של 10 µL/g הגוף משקל פילוקרפין עבור מנה סך של 100 מ"ג/ק"ג.
  3. להפעיל טיימר. אם מינון עכברים מרובים, להפחית זמן חפיפה ובמהירות ועל ידי יש לי עוזר בו-זמנית להזריק העכברים הנותרים.
  4. בעזרת מלקחיים רגילה, פתח את הפה לגישה צינור קפילרי.
  5. פעם חרוז של רוק נצפית בפה, מקום לסוף הפרוקסימלית צינור קפילרי לתוך הנוזל, בקצה הדיסטלי להציב לתוך צינור איסוף ממוקם מתחת לזירה ויבתר (שני צינורות מראש שקל).
    הערה: בעכברים הנשי C57/BL6 6-10 שבועות של גיל, ריור ברוטו מתרחשת בתוך 2 דקות של הזרקת פילוקרפין.
  6. אם רוק בניין בפה, אך לא זורם דרך הצינור, reattempt הצעד הקודם. ודא כי הצינור אינם ממוקמים ישירות נגד משטח הרירית, אשר יכול לחסום את הים.
  7. לאסוף את הרוק עבור סכום כולל של 12 דקות בעקבות גירוי פילוקרפין. להבטיח פיונית יישאר נקי.
    הערה: נפח מוגבר, הפרשות (הרוק, בדרכי השתן, צואה) תקינים בתקופה זו.
  8. אם עכברים יש מדוכא רוק פונקציה (למשל., עקב פציעה או התערבות), להעביר את הנוזלים הנותרים מן הפה אל הצינור אוסף באמצעות micropipette P200. אם איסוף של עכברים מרובים, ודא כי טיפים משתנים.
  9. להקליט את המשקל של רוק שנאספו פלוס צינורות 12 דקות לאחר ההזרקה פילוקרפין.

4. בלוטת לנתיחה

  1. המתת חסד עכברים מאת CO2 המתת חסד (כפי שמתואר ההנחיות AVMA המתת חסד של בעלי חיים: 2013 מהדורה) ואחריו ניקור חזה, דואגת לשמר את המבנים של הראש והצוואר. מסיבה זו, להימנע נקע בצוואר הרחם כשיטה של המתת חסד.
  2. הנח את העכבר במצב פרקדן על הבמה. מיקום מחדש של בלוטות באתר המקורי מעל קנה הנשימה (איור 1).
  3. באמצעות מיקרוסקופ ויבתר תחת הגדלה X 8, להמחיש את בלוטות העיקריים: PG, SMG, סיג. כדי להבחין בין הבלוטות בזמן, לזהות כי פ ג הוא מפוזר, משקר לרוחב SMG, סיג.
    הערה: אם לנתח את PG, זה צריך להיעשות קודם כי זה לפחות מוגדר וכנראה להיקרע.
  4. לתפוס את הזנב של PG עם מלקחיים, משיכתו הרחק מבנים המשמשים כבסיס, ולהחיל בעדינות את המתח לפני חיתוך ראש PG עם לנתח מספריים.
  5. הפרה הקפסולה המקיפים את SMGs באמצעות מלקחיים. הפרד בעדינות את SMG ימינה ושמאלה.
  6. חינם ההיבט הגבי SMG מרקמות nonglandular מודבקת באמצעות מלקחיים.
  7. הסר את SMG הצוואר על ידי ציור צינור של וורטון מתוח עם מלקחיים, לחתוך את צינור עם לנתח מספריים.
  8. בעדינות להפריד את סיג SMG באמצעות מלקחיים.
    הערה: סיג הוא בהיבט superolateral של SMG.
  9. באמצעות איזון אנליטית, להקליט SMG משקולות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

אחרי ביצוע במינון גבוה פילוקרפין גירוי אוסף רוק, זה חשוב לשמור על האוויר כדי למנוע שאיפה או חנק מן הפרשות בחלל הפה. תיאור סכמטי של מיכשור וציוד מסופק (איור 1). בעקבות החתך בקנה הנשימה, פיונית חייבת להישאר ברורה של רקמות ונוזלים.

כדי לשפר נימיות במהלך אוסף רוק, שנמצאת עכברים עם הראש כלפי מטה בזווית של 45°. ניתן לבצע את הפעולות הבאות ב- > 1 עכבר, למרות שאין זה מומלץ לחרוג 5 עכברים בבת אחת (איור 2). עם סיום איסוף, מומלץ כי צינורות להישקל במהירות כדי למנוע הפסדים אויר.

מסע בעקבות רוק, עכברים מורדמים. נקע בצוואר הרחם לא לבצע, כמו זה עלול לגרום נזק למבנים הראש והצוואר. עכברים מוחזרות אל הבמה ויבתר, הבלוטות צריך למקם מעל קנה הנשימה, כמו במקור ממוקם. ניתוח בלוטת (איור 3) צריכים להתחיל עמוד, בשל הן שלה עמדה עקביות ' מאטום לשקוף '. SMG של סיג המשרד, ניתן להסיר בקלות.

בעקבות 4 שברים של 6.85 קרינה Gy SMG מאתר, פונקציה הרוק פוחתת באופן משמעותי על ידי 2 שבועות (איור 4). שניהם סה כ הפרשת הרוק, הפרשת מנורמל משקל רטוב בלוטת שורטטו. שימוש בכל מדד, קיבולת תפקודית הרוק מופחת, כצפוי, ב 2 שבועות בעקבות הקרנה24.

בלוטה יכול להיות קבוע, המחולקת למקטעים עבור כתמים היסטולוגית ו/או אימונוהיסטוכימיה. Hematoxylin ואאוזין מכתימים (H & E) מראה דומה ברוטו SMG אדריכלות הן עם או בלי פילוקרפין גירוי (איור 5). צביעת עבור Nkcc1, נהג נתרן-אשלגן-כלוריד ממברנה, מראה דומה מורפולוגיה תאים ללא התחשבות פילוקרפין גירוי (איור 6).

Figure 1
איור 1 . מיכשור וציוד סכמטי. (א) לאחר פתיחת באזור הצוואר, דמיינו את המבנים העיקריים. (B) כדי להשלים עם מיכשור וציוד, בעדינות הרם, אך לא ניתוק, SMGs מבלי להפריע מבנים הסמוכים, כולל אספקת דם, העצבוב של צינוריות excretory. חותכים את השרירים רצועה כדי לחשוף את הסחוס והכו אותי לפני ביצוע חתך לתוך קנה הנשימה. השאר SMG במקום ואת קנה הנשימה נחשף במהלך הליך אוסף רוק כולו. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 . אוסף רוק. בעקבות גירוי פילוקרפין, זווית עכברים כלפי מטה ולאסוף רוק דרך צינורות קפילר לתוך צינורות אוסף שנשקל מראש, אשר ממוקמים מתחת לזירה לנתיחה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3 . רס ן בלוטת הרוק לנתיחה. ברגע שיש כבר מורדמים עכברים, למקם מחדש ולהפריד את SMG ימינה ושמאלה. הפרד בזהירות את כל בלוטת שבסביבה רקמות nonglandular וכלי הדם. פ ג הוא מבנה מפוזר, לרוחב. SMG של סיג הם חברו, אך ניתן להפריד נקיה עם מלקחיים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4 . הפרשת נציג נתונים. שבועיים לאחר fractionated קרינה (4 מנות של 6.85 Gy) SMG, הפרשת רוק מגורה פילוקרפין נמדדה. הפונקציה הרוק הוא דיווח כמו רוק סה כ נפח (א) ו רוק סה כ נפח (ב) מנורמל ל סה כ משקל רטוב SMG. כצפוי, יש ירידה משמעותית יכולת תפקודית SMG (זאת אומרת ± SD * *p < 0.01 באמצעות דו-זנבית אינטראקצית-t-test). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5 . Hematoxylin ואאוזין SMG מכתים. רקמות SMG הייתה שנקטפו עכבר לאחר גירוי פילוקרפין (100 מ"ג/ק"ג, מימין) לעומת שליטה, עכבר שאינו מטופל SMG (משמאל). צביעת המטוקסילין מציג מבנה בלוטת ברוטו 10 X (גודל ברים: 200 מיקרומטר) (A, B) ו- 40 X (גודל ברים: 50 מיקרומטר) (C, D). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 6
איור 6 . אימונוהיסטוכימיה SMG Nkcc1. רקמות SMG הייתה שנקטפו עכבר לאחר גירוי פילוקרפין (100 מ"ג/ק"ג, מימין) לעומת שליטה, עכבר שאינו מטופל SMG (משמאל). Nkcc1 הוא חלבון ממברנה והוא יכול לשמש כדי להעריך מורפולוגיה הסלולר. דאפי משמשת counterstain הגרעין (גודל ברים: 75 מיקרומטר). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

אנו מציגים שיטה שקודמים להעריך תפקוד בלוטת הרוק, אשר יכול להיות מיושם ללמוד פציעה בלוטת ו הרפוי. את הנהלים שלנו כולל מיכשור וציוד, אוסף רוק ו בלוטת לנתיחה, שלכל אחד מהם יש יישומים ניסיוני יכול לתמוך לימוד משולב של בלוטת הרוק הביולוגיה. לדוגמה, מיכשור וציוד מאתר שימש לניהול כללי דרכי הנשימה במהלך הליכי הפרעה לחלל הפה.

דיסקציה תקין, החתך והכו אותי נדרשים עבור פילוקרפין המרצת הפרשת רוק-100 מ ג/ק ג. לחלופין, מנה פילוקרפין מופחת יכול למנוע את הצורך מיכשור וציוד, ולכן ניתן להשתמש עבור הערכה האורך של הפרשת רוק16.

בנוסף הקלטה הפרשת הרוק, פרוטוקול זה מספק גם אמצעי מדויק, עקבי כדי לאסוף את הרוק עבור ניתוחים נוספים. מחקרים כאלה כוללות rheology, פרוטאומיקס, פעילות אנזים, רוק osmolarity25,26,27ו-28,גילוי סמן29.

לבסוף, שיטות ניתוח מתוקננת בלוטות הרוק הגדולות יש שירות מעבר אוסף רוק. יש עניין בהבנת התפתחות בלוטת והתגובה לפגיעה. לחקירה יעילה, חשוב לבצע ניתוח עקבי, נקי של בלוטות הרוק הגדולות. נקי, יעיל בלוטת בידוד הוא קריטי עבור תרבויות נגזר מן התאים הראשי הם מכנית, enzymatically הפומבית של בלוטות הרוק הגדולות30,31, ובשביל היסטולוגית ו immunohistochemical ההכנות. יתר על כן, כאשר מכתים חלבונים המופרש בסעיפים רקמת בלוטת, זה קריטי כדי לשקול ולשלוט על דלדול סביר של מוצרים אלה בעקבות אוסף רוק מגורה.

לכימות תפקוד בלוטת הרוק בחקירות של פציעות או התערבות היא טכניקה נסיוני חיוני. בלוטת היסטולוגיה אינפורמטיבי ולא עשוי להפיק תצפיות מפתח, אולם מסקנות בצורה הטובה ביותר הנתמכים על-ידי נתונים ברורים פונקציונלי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

מחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי מחקר ואסטתיים (NIDCR) את נבחרת המכון של שיניים ו של המכון הלאומי לסרטן (NCI) של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R56 DE025098, UG3 DE027695 ו F30 CA206296. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים. עבודה זו נתמכה גם על ידי 1206219 DMR של ה-NSF וחדשנות IADR את פרס טיפול אוראלי (2016).

ברצוננו להודות מרוימה ערי ד ר אנדרו Hollomon לסיוע שלהם עם אוסף רוק. ברצוננו להודות וונג פיי-לון לסיוע שלו עם ניתוח בלוטת. ברצוננו להודות אינגלס מתיו על עזרתו איור הכנה. ברצוננו להודות ד ר איליין Smolock, אמילי וו על קריאה ביקורתית של כתב היד הזה.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Pilocarpine hydrochloride Sigma Aldrich P6503 Pilocarpine
Student Vannas Spring Scissors Fine Science Tools 91500-9 Spring Scissors for Tracheostomy
Sterile Saline Solution Medline RDI30296H Saline
Dumont #7 Forceps Fine Science Tools 11274-20 Curved Forceps
Dumont #5 Forceps Fine Science Tools 11251-10 Straight Forceps
Standard Pattern Forceps Fine Science Tools 11000-12 Blunt Forceps
Fine Scissors- Tungsten Carbide Fine Science Tools 14568-09 Dissection Scissors
Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes Fisher Scientific 22362566 Capillary tubes
Lubricant Eye Ointment Refresh N/A Refresh Lacri-Lube
Goat polyclonal anti-Nkcc1 Santa Cruz Biotech SC-21545 Nkcc1 Antibody
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) Thermo Fisher Scientific D1306 DAPI
GraphPad Prism GraphPad ver6.0 Statistical Software
Cotton tipped applicator Medline MDS202000 Applicator for eye ointment
0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" BD 7629 Syringe for intraperitoneal injection

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bradley, P., O'Hara, J. Diseases of the salivary glands. Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).
  2. Fox, P. C. Salivary enhancement therapies. Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).
  3. Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. On the mechanism of salivary gland radiosensitivity. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).
  4. Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy. Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).
  5. Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication. Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).
  6. Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both? Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).
  7. Ono, K., et al. Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats. Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).
  8. Proctor, G. B., Carpenter, G. H. Regulation of salivary gland function by autonomic nerves. Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).
  9. Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals. Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).
  10. Urita, Y., et al. Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation. North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).
  11. Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo. Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).
  12. Kondo, Y., et al. Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands. Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).
  13. Evans, R. L., et al. Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice. Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).
  14. Delanian, S., Lefaix, J. L. The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway. Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).
  15. Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment. Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).
  16. Lin, A. L., et al. Measuring short-term γ-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device. Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).
  17. Montenegro, M. F., et al. Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research. Redox biology. 10, 206-210 (2016).
  18. Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model. Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).
  19. Imamura, T. K., et al. Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).
  20. Ma, T., et al. Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels. Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).
  21. Parkes, M. W., Parks, J. C. Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse. British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).
  22. Nishiyama, T., et al. Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516 (2007).
  23. Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).
  24. Kamiya, M., et al. X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses. BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).
  25. Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study. Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).
  26. Droebner, K., Sandner, P. Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test. Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).
  27. Lamy, E., et al. Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet. Proteome Science. 8 (1), 65 (2010).
  28. Mahomed, F. Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma. Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).
  29. Kohlgraf, K. G., et al. Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay. Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).
  30. Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells. Radiotherapy and Oncology. , (2015).
  31. Lombaert, I. M., et al. Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands. PLoS One. 3 (4), e2063 (2008).

Tags

רפואה גיליון 135 רוק אוסף xerostomia sialorrhea פילוקרפין מיכשור וציוד submandibular sublingual parotid בלוטת
מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Varghese, J. J., Schmale, I. L.,… More

Varghese, J. J., Schmale, I. L., Hansen, M. E., Newlands, S. D., Benoit, D. S. W., Ovitt, C. E. Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation. J. Vis. Exp. (135), e57522, doi:10.3791/57522 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter