Summary
हम murine tracheostomy और तीन प्रमुख लार ग्रंथियों के अलगाव सहित लार संग्रह, प्रदर्शन करने के लिए एक विस्तृत दृष्टिकोण प्रस्तुत करते हैं ।
Abstract
Hyposalivation सामांयतः Sjögren's सिंड्रोम की स्व-प्रतिरक्षित प्रतिक्रिया में मनाया जाता है या प्रमुख लार ग्रंथियों को विकिरण चोट के बाद । इन मामलों में, प्रश्न रोग रोगजनन और प्रभावी हस्तक्षेप के बारे में रहते हैं । एक अनुकूलित तकनीक है कि लार ग्रंथियों के कार्यात्मक मूल्यांकन की अनुमति देता है exocrine ग्रंथि जीव विज्ञान, शिथिलता, और चिकित्सकीय जांच के लिए अमूल्य है । यहां, हम tracheostomy और तीन प्रमुख murine लार ग्रंथियों के विच्छेदन सहित लार स्राव, उत्तेजित pilocarpine प्रदर्शन करने के लिए कदम दृष्टिकोण से एक कदम मौजूद है । हम भी विस्तार से उपयुक्त murine सिर और गर्दन इन तकनीकों के दौरान पहुंच एनाटॉमी । इस दृष्टिकोण स्केलेबल है, कई चूहों के लिए अनुमति एक साथ संसाधित किया जा करने के लिए, इस प्रकार कार्य प्रवाह की दक्षता में सुधार. हम इन तरीकों, जिनमें से प्रत्येक क्षेत्र के भीतर आगे आवेदन किया है की reproducibility में सुधार करने के लिए लक्ष्य । लार संग्रह के अलावा, हम को बढ़ाता है और इन ऊतकों की कार्यात्मक क्षमता को सामान्य करने के लिए मैट्रिक्स पर चर्चा । प्रतिनिधि डेटा उदास लार ग्रंथि समारोह के साथ अवअधोहनुज ग्रंथियों से शामिल किए गए हैं 2 सप्ताह के बाद fractionated विकिरण (६.८५ Gy की 4 खुराक).
Introduction
लार ग्रंथि विकारों dysregulated या बिगड़ा या तो अधिक अनुत्पादक (sialorrhea) या अनुत्पादक (xerostomia और hyposalivation) के लिए अग्रणी स्राव के सिंड्रोम शामिल है1। दोनों ही मामलों में, उपचारात्मक विकास के अंतिम लक्ष्य के प्रति लार ग्रंथि जीवविज्ञान की हमारी समझ में सुधार करने में रुचि है2.
लार ग्रंथियों अत्यधिक radiosensitive अंगों हैं, और अक्सर सिर और गर्दन के कैंसर रेडियोथेरेपी के दौरान क्षतिग्रस्त कर रहे हैं, स्थायी शुष्क मुँह (xerostomia)3,4के लिए अग्रणी । अंय radiosensitive ऊतकों के विपरीत, तथापि, लार ग्रंथि कारोबार दर अपेक्षाकृत कम है, और स्रावी नुकसान का तंत्र खराब समझ5,6है । इस अनूठी चोट की स्थापना में, ऊतक पुनर्जनन और radioprotection रणनीतियों लार कार्यात्मक मूल्यांकन की आवश्यकता है । प्रयोग, murine लार संग्रह दोनों विकिरण और चिकित्सीय एजेंटों के लिए ग्रंथि की प्रतिक्रिया का मूल्यांकन में एक विशेष रूप से मूल्यवान उपकरण है ।
यहां, हम प्रदर्शन और बढ़ाता लार pilocarpine, एक शक्तिशाली मस्करीनिक एगोनिस्ट7का उपयोग कर स्राव के लिए एक विधि वर्तमान । Pilocarpine ग्रंथि स्राव8,9प्रेरित करने के लिए स्वायत्त तंत्रिका तंत्र को उत्तेजित करता है । इस परीक्षण को उचित रूप से पूरा करने के लिए, एक tracheostomy को यह सुनिश्चित करने की आवश्यकता है कि माउस प्रक्रिया के दौरान एक पेटेंट airway का रखरखाव करता है, और मौखिक गुहा10में परित स्राव से घुट और आकांक्षा के जोखिम को कम करता है ।
यह एक टर्मिनल प्रक्रिया है, तीन प्रमुख लार ग्रंथियों को हटाने में समापन: कर्णमूल (स्नातकोत्तर), अवअधोहनुज (एके 47), और (SLG) है । कार्यात्मक अध्ययन के लिए, थाइराइड वजन दर्ज कर रहे हैं और अक्सर लार माप11,12,13को सामान्य करने के लिए उपयोग किया जाता है । इस डेटा विकिरण अध्ययन में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, जिसमें ग्रंथि शोष एक अपेक्षित परिणाम है14,15
वहां के साथ साहित्य में परिवर्तनशीलता है कैसे उत्तेजित लार स्राव किया जाता है और16की सूचना दी । उदाहरण के लिए, साहित् य के भीतर pilocarpine डोज का परिमाण17,18,19,20,21,22,23के कम से तीन आदेश हैं । यहां, हम विधि निष्पादन में सुधार reproducibility के इरादे के साथ एक अनुकूलित उच्च खुराक pilocarpine प्रोटोकॉल वर्तमान, के रूप में अच्छी तरह से तकनीक का एक मॉड्यूलर मंच (tracheostomy, लार संग्रह, और ग्रंथि विच्छेदन) है कि के रूप में अनुकूलित किया जा सकता प्रदान आवश्यक.
प्रोटोकॉल प्रदर्शन के अलावा, हम fractionated विकिरण के बाद 2 सप्ताह में लार प्रवाह के प्रतिनिधि कार्यात्मक डेटा शामिल (६.८५ Gy की 4 खुराक) के लिए 47 क्षेत्र ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
सभी विवो प्रक्रियाओं में नीचे उल्लिखित रोचेस्टर, रोचेस्टर विश्वविद्यालय में पशु संसाधनों पर विश्वविद्यालय समिति द्वारा अनुमोदित किया गया । हिन्दी अनुवाद.
1. तैयारी
- एक विश्लेषणात्मक संतुलन का उपयोग कर, pilocarpine के 20 मिलीग्राम वजन । एक microcentrifuge ट्यूब में बाँझ खारा के 2 मिलीलीटर में इसे भंग.
नोट: क्योंकि pilocarpine संवेदनशील प्रकाश है और समय के साथ गतिविधि खो देता है, इस समाधान इंजेक्शन के दिन तैयार किया जाना चाहिए, और प्रकाश से संरक्षित जब तक प्रशासित । - एक विश्लेषणात्मक संतुलन का उपयोग करना, वजन और सभी संग्रह ट्यूबों और कांच केशिकाओं की पहचान । संग्रह ट्यूबों और कांच केशिकाओं की संख्या चूहों की संख्या से मेल खाना चाहिए ।
2. Tracheostomy
- C57/BL6 चूहों एक विश्लेषणात्मक संतुलन का उपयोग कर वजन ।
- 29G एक्स ½ "सुई, anesthetize चूहों के साथ एक ०.५ मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर के साथ एक intraperitoneally इंजेक्शन बाँझ खारा समाधान की १०० मिलीग्राम/केजी ketamine और 10 मिलीग्राम/ माउस अब उत्तेजनाओं (यानी पेडल वापसी पलटा के अभाव) है, जो आम तौर पर 5 से 10 मिनट बाद इंजेक्शन के भीतर होता है, जब निंनलिखित कदम आगे बढ़ें ।
- एक कपास इत्तला दे दी applicator पर स्नेहक वितरण के बाद, धीरे से आंखों पर लागू होते है और मंच पर एक लापरवाह स्थिति में माउस जगह है । anesthetized पशु गर्म सतह पर रखा जाना चाहिए ।
नोट: सभी कदम कमरे के तापमान पर प्रदर्शन कर रहे हैं । - शल्य टेप का उपयोग कर चरण के लिए नाक, अंगों, और पूंछ सुरक्षित ।
- साफ और एक शराब पोंछे के साथ गर्दन गीला ।
नोट: यह बाद में चीरा में प्रवेश करने से फर को रोकने में मदद मिलेगी । - संदंश के साथ ventral midline गर्दन त्वचा की स्थापना, एक छोटे, सतही काट विदारक कैंची का उपयोग कर । खोलने में कैंची गाइड और धीरे-अलग ऊतक विमानों के लिए चमड़े के नीचे के ब्लेड खोल ।
- त्वचा को बढ़ाते हुए, ध्यान से मुंह के नीचे 1 सेमी तक काटें ।
- पहली कटौती के अवर और श्रेष्ठ पहलुओं पर दो पार्श्व चीरा बनाओ । संदंश का उपयोग करना, धीरे दूर त्वचा सिर और गर्दन संरचनाओं के लिए उपयोग को सक्षम करने के लिए प्रतिबिंबित ।
- x 6 आवर्धन पर विदारक माइक्रोस्कोप का प्रयोग, अवअधोहनुज ग्रंथियों की कल्पना (midline: चित्रा 1) ।
- ठीक संदंश का प्रयोग, धीरे ग्रंथियों लिफ्ट चार infrahyoid (पट्टा) की मांसपेशियों को बेनकाब करने श्वासनली । आसपास की vasculature या निकालनेवाला नलिकाओं को फाड़ने या बाधित करने से बचें ।
- यदि एक से अधिक माउस से लार का संग्रह, आगे बढ़ने से पहले प्रत्येक माउस के साथ २.१-२.१० चरणों को दोहराएँ ।
नोट: यह प्रक्रिया सुरक्षित रूप से 5 चूहों को समवर्ती पर किया जा सकता है । - छोटे विदारक कैंची के साथ, पट्टा की मांसपेशियों के औसत दर्जे के भाग को हटाने के रूप में संभव के रूप में midline के करीब रहते हैं । श्वासनली कल्पना और प्रक्रिया के दौरान रास्ते से बाहर पट्टा मांसपेशियों को रखने के लिए आवश्यक के रूप में ही ज्यादा कटौती । किसी भी पास के जहाजों निक से बचें क्योंकि अगर वहां मात्रा कम करने के लिए महत्वपूर्ण नकसीर माध्यमिक है, pilocarpine स्राव उत्प्रेरण में प्रभावी नहीं होगा ।
- श्वासनली से दूर पट्टा मांसपेशियों को प्रतिबिंबित ।
- गला, श्वासनली, और थायरॉयड ग्रंथि कल्पना । सुनिश्चित करें कि श्वासनली से अधिक ऊतक के स्पष्ट है ।
- छोटे विदारक कैंची का उपयोग कर थायराइड के लिए श्वासनली अवर/पीछे में एक क्षैतिज चीरा बनाओ । सुनिश्चित करें कि airway पेटेंट और द्रव का स्पष्ट है ।
3. लार संग्रह
- मुंह के पास टेप निकालें और कोण विच्छेदन चरण नीचे (४५ °, कपाल) लार प्रवाह के साथ सहायता करने के लिए ।
- 29G एक्स ½ "सुई के साथ एक ०.५ मिलीलीटर सिरिंज का प्रयोग, १०० मिलीग्राम/किग्रा की कुल खुराक के लिए 10 µ एल/जी शरीर के वजन pilocarpine के intraperitoneal इंजेक्शन प्रदर्शन ।
- कोई टाइमर प्रारंभ करें । यदि एकाधिक चूहों खुराक, जल्दी से चलती है और एक साथ एक सहायक होने से नेतृत्व समय को कम करने के लिए शेष चूहों इंजेक्षन.
- मानक संदंश का प्रयोग, केशिका ट्यूब का उपयोग के लिए मुंह खोलो ।
- एक बार लार के एक मनका मुंह में मनाया जाता है, तरल पदार्थ में केशिका ट्यूब के समीपस्थ अंत जगह है, एक इकट्ठा करने के बाहर के अंत के साथ एक विदारक मंच (दोनों ट्यूबों पूर्व तौला) नीचे तैनात ट्यूब में रखा ।
नोट: C57/BL6 मादा चूहों में 6-10 सप्ताह की आयु, सकल लार pilocarpine इंजेक्शन के 2 मिनट के भीतर होता है । - यदि लार मुंह में निर्माण है, लेकिन ट्यूब के माध्यम से बहने नहीं, पिछले कदम का प्रयास । सुनिश्चित करें कि ट्यूब सीधे एक श्लैष्मिक सतह के खिलाफ नहीं रखा है, जो प्रवेश बाधा कर सकते हैं ।
- pilocarpine उत्तेजना के बाद 12 मिनट की कुल के लिए लार ले लीजिए । सुनिश्चित करें कि stoma स्पष्ट रहता है ।
नोट: इस समय के दौरान ज्वार की मात्रा और स्राव (लार, मूत्र, मल) में वृद्धि सामान्य है । - यदि चूहों उदास लार समारोह है (उदा, चोट या हस्तक्षेप के कारण), एक P200 micropipette का उपयोग कर संग्रह ट्यूब करने के लिए मुंह से शेष द्रव हस्तांतरण । यदि एकाधिक चूहों से इकट्ठा, यह सुनिश्चित करें कि सुझाव बदल रहे हैं ।
- pilocarpine इंजेक्शन के बाद 12 मिनट एकत्र लार प्लस ट्यूबों का वजन रिकॉर्ड ।
4. ग्रंथि विच्छेदन
- 2 इच्छामृत्यु द्वारा चूहों Euthanize (के रूप में जानवरों की इच्छामृत्यु के लिए AVMA दिशा निर्देशों में वर्णित: २०१३ संस्करण) thoracotomy द्वारा पीछा किया, देखभाल करने के लिए सिर और गर्दन की संरचनाओं को बनाए रखने । इस कारण के लिए, इच्छामृत्यु की एक विधि के रूप में गर्भाशय ग्रीवा के विस्थापन से बचें ।
- मंच पर एक लापरवाह स्थिति में माउस रखें । श्वासनली (चित्रा 1) पर मूल साइट में ग्रंथियों का स्थान ।
- के तहत एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करना x, प्रमुख ग्रंथियों कल्पना: स्नातकोत्तर, 47, और SLG । विच्छेदन के दौरान ग्रंथियों भेद, पहचान है कि स्नातकोत्तर फैलाना है, एके 47 और SLG के लिए पार्श्व झूठ बोलना ।
नोट: यदि पीजी विदारक, यह पहले किया जाना चाहिए, क्योंकि यह कम से परिभाषित है और सबसे अधिक फटे होने की संभावना है । - संदंश के साथ स्नातकोत्तर की पूंछ समझ, अंतर्निहित संरचनाओं से दूर खींच, और धीरे से विदारक कैंची के साथ पीजी के सिर काटने से पहले तनाव लागू होते हैं ।
- संदंश का उपयोग कर SMGs आसपास के कैप्सूल भंग. धीरे बाएं और दाएं 47 अलग ।
- संदंश का उपयोग करके पालने nonglandular ऊतक से 47 के पृष्ठीय पहलू को नि: शुल्क ।
- संदंश के साथ तना हुआ है व्हार्टन वाहिनी ड्राइंग और विदारक कैंची के साथ डक्ट काटने के द्वारा गर्दन से 47 निकालें ।
- धीरे संदंश का उपयोग कर SLG से अलग ।
नोट: SLG के superolateral पहलू में है । - एक विश्लेषणात्मक संतुलन का उपयोग करना, 47 रिकॉर्ड भार ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
जब उच्च खुराक pilocarpine लार संग्रह उत्तेजित प्रदर्शन, यह airway को बनाए रखने के लिए आकांक्षा या मौखिक गुहा में स्राव से घुट को रोकने के लिए महत्वपूर्ण है । tracheostomy के एक योजनाबद्ध (चित्रा 1) प्रदान की जाती है । सांस चीरा के बाद, stoma ऊतक और तरल पदार्थ के स्पष्ट रहना चाहिए ।
लार संग्रह के दौरान केशिका कार्रवाई को बढ़ाने के लिए, चूहों एक ४५ ° कोण पर उनके सिर के नीचे के साथ तैनात किया जाना चाहिए । इन चरणों > 1 माउस पर किया जा सकता है, हालांकि यह अनुशंसित नहीं है एक समय में 5 चूहों से अधिक (चित्र 2) । एक बार संग्रह पूरा हो गया है, यह अनुशंसित है कि ट्यूबों जल्दी से तौला जा करने के लिए वाष्पीकरण घाटे से बचें ।
लार संग्रह के बाद, चूहों euthanized हैं । गर्भाशय ग्रीवा विस्थापन नहीं किया जाना चाहिए, क्योंकि यह सिर और गर्दन संरचनाओं को नुकसान पहुंचा सकता है । चूहे विदारक अवस्था में लौट जाते हैं, और ग्रंथियों को श्वासनली पर स्थान दिया जाना चाहिए, जैसा कि मूल रूप से स्थित है । ग्रंथि विच्छेदन (चित्रा 3) स्नातकोत्तर के साथ शुरू, दोनों अपनी स्थिति और प्रसार निरंतरता के कारण होना चाहिए । एके 47 और SLG फर्म हैं, और आसानी से हटाया जा सकता है ।
murine 47 के लिए ६.८५ Gy विकिरण के 4 भागों के बाद, लार समारोह में काफी 2 सप्ताह (चित्रा 4) से घट जाती है । दोनों कुल लार स्राव, और ग्रंथि गीला वजन करने के लिए सामान्यीकृत स्राव साजिश रची गई । या तो मीट्रिक, लार कार्यात्मक क्षमता का उपयोग कम है, के रूप में उंमीद के अनुसार, 2 सप्ताह में विकिरण के बाद24।
ग्रंथि ऊतक तय किया जा सकता है और ऊतकवैज्ञानिक दाग और/immunohistochemistry के लिए खोदी । Hematoxylin और Eosin धुंधला (एच एंड ई) दोनों के साथ या pilocarpine उत्तेजना (चित्रा 5) के बिना समान सकल 47 वास्तुकला से पता चलता है । Nkcc1, एक झिल्ली सोडियम पोटेशियम-क्लोराइड ट्रांसपोर्टर के लिए धुंधला, pilocarpine उत्तेजना (चित्रा 6) की परवाह किए बिना समान कोशिका आकृति विज्ञान से पता चलता है.
चित्र 1 . Tracheostomy योजनाबद्ध. (क) गर्दन क्षेत्र खोलने के बाद, प्रमुख संरचनाओं कल्पना । (ख) एक tracheostomy पूरा करने के लिए, धीरे से उठा, लेकिन अलग नहीं है, SMGs रक्त की आपूर्ति, इन्नेर्वतिओन, और निकालनेवाला नलिकाओं सहित पड़ोसी संरचनाओं को बाधित किए बिना । श्वासनली में एक चीरा बनाने से पहले सांस उपास्थि बेनकाब करने के लिए पट्टा मांसपेशियों में कटौती. जगह में एके छोड़ दो और पूरी लार संग्रह प्रक्रिया के दौरान उजागर श्वासनली । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2 . लार संग्रह । pilocarpine उत्तेजना के बाद, कोण चूहों नीचे और केशिका ट्यूबों के माध्यम से पूर्व तौला संग्रह ट्यूबों, जो विच्छेदन मंच के नीचे रखा जाता है में लार इकट्ठा । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 3 . प्रमुख लार ग्रंथ ि विच्छेदन । एक बार चूहों euthanized गया है, स्थिति और बाएँ और दाएँ 47 अलग. ध्यान से nonglandular ऊतकों और रक्त वाहिकाओं के आसपास से प्रत्येक ग्रंथि अलग । पीजी एक फैलाना, पार्श्व संरचना है । एके 47 और SLG शामिल हैं, लेकिन संदंश के साथ साफ रूप से अलग किया जा सकता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4 . प्रतिनिधि स्राव डेटा । दो सप्ताह fractionated विकिरण के बाद (६.८५ Gy की 4 खुराक) के लिए 47, pilocarpine-उत्तेजित लार स्राव मापा गया था । लार समारोह कुल के रूप में सूचना दी है लार की मात्रा (क) और कुल लार मात्रा (बी) कुल 47 गीला वजन को सामान्यीकृत । के रूप में आशा की जाती है, वहां 47 के कार्यात्मक क्षमता में एक महत्वपूर्ण कमी है (मतलब ± एसडी * *पी < 0.01 का उपयोग कर दो पूंछ ख़राब टी परीक्षण) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 5 . Hematoxylin आणि Eosin. 47 pilocarpine उत्तेजना (१०० मिलीग्राम/kg, दाएं) नियंत्रण, अनुपचारित माउस 47 (बाएं) की तुलना में के बाद एक चूहे से काटा गया था । एच एंड ई धुंधला 10x (स्केल सलाखों: २०० µm) (ए, बी) और 40X (स्केल बार्स: ५० µm) (सी, डी) में सकल ग्रंथि संरचना से पता चलता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 6 . Nkcc1 Immunohistochemistry । 47 pilocarpine उत्तेजना (१०० मिलीग्राम/kg, दाएं) नियंत्रण, अनुपचारित माउस 47 (बाएं) की तुलना में के बाद एक चूहे से काटा गया था । Nkcc1 एक झिल्ली प्रोटीन है और सेलुलर आकृति विज्ञान का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । DAPI का प्रयोग परमाणु counterstain (स्केल बार्स: ७५ µm) के रूप में किया जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
हम लार ग्रंथि समारोह का आकलन करने के लिए एक multistep विधि पेश करते हैं, जो ग्रंथि चोट और चिकित्सीय अध्ययन करने के लिए लागू किया जा सकता है । हमारी प्रक्रिया tracheostomy, लार संग्रह शामिल है, और ग्रंथि विच्छेदन, जिनमें से प्रत्येक प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों है कि लार ग्रंथि जीव विज्ञान के एक एकीकृत अध्ययन का समर्थन कर सकते हैं । उदाहरण के लिए, murine tracheostomy मौखिक गुहा निरोधक प्रक्रियाओं के दौरान सामान्य airway प्रबंधन के लिए उपयोग किया गया है ।
उचित विच्छेदन और सांस चीरा १०० मिलीग्राम/किलोग्राम में pilocarpine उत्तेजित लार स्राव के लिए आवश्यक हैं । वैकल्पिक रूप से, एक कम pilocarpine खुराक tracheostomy के लिए की जरूरत से बचने और इसलिए लार स्राव के अनुदैर्ध्य आकलन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है16.
लार स्राव रिकॉर्डिंग के अलावा, इस प्रोटोकॉल भी अतिरिक्त विश्लेषण के लिए लार इकट्ठा करने के लिए एक सटीक, सुसंगत साधन प्रदान करता है । इस तरह के अध्ययनों में rheology, प्रोटियोमिक्, एंजाइम गतिविधि, लार osmolarity25,26,27, और रिमार्कर डिस्कवरी28,29शामिल हैं ।
अंत में, प्रमुख लार ग्रंथियों के लिए मानकीकृत विच्छेदन तरीकों लार संग्रह से परे उपयोगिता है । ग्रंथि के विकास और चोट के जवाब को समझने में रुचि है । प्रभावी जांच के लिए, यह प्रमुख लार ग्रंथियों के संगत, साफ विच्छेदन करने के लिए महत्वपूर्ण है । स्वच्छ और कुशल ग्रंथि अलगाव प्राथमिक कोशिकाओं है कि यांत्रिक और enzymatically असंबद्ध प्रमुख लार ग्रंथियों से30,31, और histologic और immunohistochemical के लिए कर रहे हैं से व्युत्पन्न संस्कृतियों के लिए महत्वपूर्ण है तैयारी. इसके अलावा, जब ग्रंथि ऊतक वर्गों में स्रावित प्रोटीन के लिए धुंधला, यह विचार और उत्तेजित लार संग्रह के बाद इन उत्पादों की संभावना घट के लिए नियंत्रण करने के लिए महत्वपूर्ण है ।
चोट या हस्तक्षेप की जांच में लार ग्रंथि समारोह को बढ़ाता है एक महत्वपूर्ण प्रायोगिक तकनीक है । ग्रंथि प्रोटोकॉल जानकारीपूर्ण है और प्रमुख टिप्पणियों को प्राप्त कर सकते हैं, अभी तक निष्कर्ष सबसे अच्छा स्पष्ट कार्यात्मक डेटा द्वारा समर्थित हैं ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस प्रकाशन में दी गई अनुसंधान रिपोर्ट में नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ डेंटल एण्ड Craniofacial रिसर्च (NIDCR) तथा राष्ट्रीय कैंसर संस्थान (NCI) के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के अंतर्गत पुरस्कार संख्या R56 DE025098, UG3 DE027695, और F30 CA206296 का समर्थन किया गया. सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिंमेदारी है और जरूरी नहीं कि स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के सरकारी विचारों का प्रतिनिधित्व करते हैं । यह काम भी NSF DMR १२०६२१९ और ओरल केयर पुरस्कार (२०१६) में IADR नवाचार द्वारा समर्थित किया गया था ।
हम लार संग्रह के साथ उनकी सहायता के लिए डॉ ऐरी Maruyama और एंड्रयू Hollomon शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । हम ग्रंथ विच्छेदन के साथ उनकी सहायता के लिए बेई-Lun वेंग शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । हम चित्र तैयार करने में उनकी सहायता के लिए मैथ्यू को वीरगति को धन्यवाद देना चाहेंगे । हम इस पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए डॉ ऐलेन Smolock और एमिली वू शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomy |
| Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
| Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Curved Forceps |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Straight Forceps |
| Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunt Forceps |
| Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissection Scissors |
| Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillary tubes |
| Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antibody |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
| Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicator for eye ointment |
| 0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Syringe for intraperitoneal injection |
References
- Bradley, P., O'Hara, J. Diseases of the salivary glands. Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).
- Fox, P. C. Salivary enhancement therapies. Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).
- Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. On the mechanism of salivary gland radiosensitivity. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).
- Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy. Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).
- Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication. Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).
- Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both? Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).
- Ono, K., et al. Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats. Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).
- Proctor, G. B., Carpenter, G. H. Regulation of salivary gland function by autonomic nerves. Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).
- Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals. Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).
- Urita, Y., et al. Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation. North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).
- Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo. Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).
- Kondo, Y., et al. Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands. Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).
- Evans, R. L., et al. Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice. Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).
- Delanian, S., Lefaix, J. L. The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway. Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).
- Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment. Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).
- Lin, A. L., et al. Measuring short-term γ-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device. Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).
- Montenegro, M. F., et al. Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research. Redox biology. 10, 206-210 (2016).
- Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model. Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).
- Imamura, T. K., et al. Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).
- Ma, T., et al. Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels. Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).
- Parkes, M. W., Parks, J. C. Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse. British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).
- Nishiyama, T., et al. Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516 (2007).
- Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).
- Kamiya, M., et al. X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses. BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).
- Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study. Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).
- Droebner, K., Sandner, P. Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test. Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).
- Lamy, E., et al. Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet. Proteome Science. 8 (1), 65 (2010).
- Mahomed, F. Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma. Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).
- Kohlgraf, K. G., et al. Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay. Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).
- Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells. Radiotherapy and Oncology. , (2015).
- Lombaert, I. M., et al. Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands. PLoS One. 3 (4), e2063 (2008).
