Summary
هنا، نحن بالتفصيل الأساليب التجريبية المستخدمة لتقييم قوي نتوء بودوسوميس تنطبق على فيلم متوافقة، من إعداد الفيلم للتحليل الآلي للصور الطبوغرافية.
Abstract
في العديد من السياقات البيولوجية، تحتاج الخلايا الحيوانية من التفاعل فعلياً مع بيئتها بتطوير القوات الميكانيكية. ومن بين هذه الجر قوات كانت تتسم جيدا، ولكن هناك نقص في التقنيات التي تسمح بقياس بروز قوي تمارسه الخلايا أورثوجونالي إلى هذه الركيزة. لقد قمنا بتصميم إعداد تجريبية لقياس بروز قوي تمارسه الخلايا ملتصقة على هذه الركيزة. خلايا مطلي على ورقة فورمفار متوافقة مع تشوه هذه الركيزة وهو تعيين التضاريس الناتجة عن ذلك بواسطة مجهر القوة الذرية (AFM) بمقياس نانومتر. ثم يتم استخراج قيم القوة من تحليل الشخصية تشوه استناداً إلى هندسة الهياكل الخلوية بارزة. ومن ثم، يمكن قياس قوي تمارسه الوحدات الفردية بارزة من خلية حية على مر الزمن. وستمكن هذه التقنية دراسة توليد القوة وتنظيمها في العديد من العمليات الخلوية التي تنطوي على نتوء. وهنا يصف لنا تطبيقه لقياس قوي بارزة المتولدة عن بودوسوميس التي شكلتها الضامة البشرية.
Introduction
الخلايا الحيوانية التفاعل فعلياً مع المصفوفة والخلايا الأخرى التي تشكل هذه البيئة1. وهذا مطلوب بالنسبة لهم ترحيل أو تدخيل الهيئات، والحصول على المعلومات الخارجية أو التفريق. في مثل هذه العمليات، يجب إنشاء الخلية القوات الميكانيكية، وكما أظهرت العديد من الدراسات على مدى السنوات الأخيرة، قدرة خلية لتوليد القوى، والتحقيق في بيئتها يؤثر على سلوكها البيولوجي، على سبيل المثال توجيه الانتشار أو تمايز2،3. بدوره، قياس قوات الخلوية مساعدة كبرى دراسة تنظيم توليد القوة وفهم أثره في الخلايا والأنسجة والسلوك مصير4،5.
وقد شهدت السنوات الأخيرة تطوير العديد من التقنيات لقياس القوى التي يمكن أن تمارسه خلية على البيئة6. أن غالبية هذه قد ساعدت في الكشف عن قوي الجر أن تمارس الخلايا كما أنها تسحب متنقلة المسابير أو تشوه الركازة. بيد قوي ميكانيكية المتورطين في نتوء في البيئة خارج الخلية تعاني من الافتقار إلى تقنيات القياس والتاريخ تتميز ليس على ما يرام.
للتغلب على هذا التحديد، نقدم طريقة لقياس القوى التي تمارس أورثوجونالي إلى الركيزة. وهو يتألف في طلاء الخلايا الحية على ورقة رقيقة مرنة التي يمكن أن تشوه في اتجاه متعامد، مما يجعل من الممكن لقياس التشوه الركيزة بالخلايا ونستنتج القوى المعنية. يقاس الطوبوغرافيا الركازة مع القرار النانو باستخدام مجهر القوة الذرية والتقييم للقوات من التشوه ويعتمد على معرفة هندسة الهياكل الخلوية بارزة7،8، 9.
هنا، نحن وصف الإعداد وتطبيقها لقياس القوى التي تم إنشاؤها بواسطة بودوسوميس، هياكل التصاق بارزة شكلتها الضامة لهجرتهم الوسيطة في بيئات ثلاثية الأبعاد10،11، 12،13،،من1415،،من1617. ونحن نعتقد أن هذا الأسلوب ستعزز التفاهم وتوليد القوة وتنظيمها في العديد من العمليات الخلوية التي تنطوي على نتوء.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1-إعداد الشبكات المغلفة فورمفار
- تنظيف شبكات الميكروسكوب الإلكتروني مع الأسيتون النقي وتجفيفها على ورق الترشيح. ثم نظيف شريحة مجهر مع الإيثانول النقي، يمسح مع ورقة عدسة وإزالة الغبار مع منفاخ.
- مكان على شريحة زجاج تنظيفها الإيثانول عمودياً في القمع لجهاز صب الأفلام التي تتضمن حلاً فورمفار في الجزء السفلي. يغطي الجزء العلوي من القمع.
- ضخ 100 مل محلول فورمفار (0.5% في كلوريد الإيثيلين) مع لمبة رذاذ حتى يصل إلى المستوى الثلثين من الشريحة.
- ضع الشريحة في الحل لمدة 1 دقيقة.
- فتح الصمام الجهاز استنزاف الحل فورمفار في دفق مستمر. معدل تدفق من 10 إلى 15 مل/s سوف تسفر عن فيلم فورمفار من 30-80 نانومتر. يتم تحديد سمك الفيلم بتركيز حل فورمفار، ومعدل الصرف.
ملاحظة: يمكن التحكم في سعر الصرف بواسطة التنفيس الضغط عن طريق صمام الهواء من خلال فتح ببطء الصمام. أسرع الصرف، وأكثر سمكا الفيلم. في الممارسة العملية، لأنه من الصعب التنبؤ بسمك الفيلم من معدل التدفق فورمفار، نحن إعداد عدة دفعات من الأفلام فورمفار ومراقبة سمكها حسب فؤاد (راجع الخطوة 2). - إزالة الشريحة من الدائرة وجاف أنه دقيق على الورق مرشح لإزالة أي فورمفار السائلة.
- قطع مستطيل 20 مم × 50 مم من الفيلم فورمفار بشفرة حلاقة.
- ملء كوب ماء مقطر نظيفة ويغرق ببطء الشريحة عمودياً في الماء لتطفو قبالة الفيلم: الفيلم يجب أن تطفو على سطح الماء.
- مواجهة شبكات تنظيف الأسيتون الجافة مكان في الفيلم، لامعة.
- وضع زجاج جولة ساترة (Ø 12 مم) على عدد قليل من الشبكات. سيعمل هذا ساترة قياس سماكة الفيلم (راجع الخطوة 2).
- تغطية شريحة مجهر مع ملصق أبيض حجمها لتناسب ذلك. تراجع الشريحة عمودياً عند الحدود للفيلم فورمفار العائمة حتى الفيلم كله تلتزم بالشريحة. إزالة الماء الزائد من الشريحة مع ورق الترشيح وأتركها تجف في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها.
2-قياس سمك الفيلم
- قطع فورمفار حولها ساترة مع ملاقط لفصل فإنه من الشريحة.
- وضع علامة على موقع الشبكة تحت ساترة بقلم.
- قطع فورمفار حول الشبكة ملحوظ لفصل فإنه من ساترة. ولذلك ستكون ثقب في ورقة فورمفار المتبقية، والتي سوف تسمح لقياس سماكة الفيلم. تغطية ساترة مع برنامج تلفزيوني ووضعه على شريحة زجاج في المجهر.
- جبل ناتئ نيتريد سيليكون على كتلة الزجاج فؤاد، مع التأكد من أن الشريط الذهبي لا يشملها غيض من فصل الربيع.
ملاحظة: حساسية وربيع ثابت ناتئ ينبغي أن يكون سابقا تم معايرة في برنامج تلفزيوني. - جبل كتلة الزجاج على الوحدة النمطية فؤاد ومن ثم وضع الوحدة النمطية على المجهر.
- ضع ساترة المغلفة فورمفار في دائرة المراقبة وتغطية ذلك مع 500 ميليلتر من برنامج تلفزيوني.
- المسح الضوئي من الثقب في ورقة فورمفار استخدام فؤاد في وضع الاتصال ومجموعة قوة 0.5 nN نقطة الحدود.
- استخدام سطح الزجاج ساترة كالمرجع لقياس الطول، وتقييم سمك فورمفار كارتفاع المقطع العرضي (إجراء قياسات على الأقل 10 كل دفعة فورمفار).
3-زرع الخلايا في الشبكات
- تحت غطاء عقيمة، وضع شريطا (12 ملم × 3 ملم) من شريط لاصق الوجهين على ساترة.
- قطع شبكة فورمفار المغلفة بملاقط ووضعه رأسا على قطاع لاصقة (حافة الشبكة فقط يحتاج لإلحاقها بالشريط). الفيلم فورمفار يجب أن تواجه ساترة.
- وضع هذا الجهاز في ثقافة جيدا.
- مكان معالجة تجميعية 10 ميليلتر من ربمي دون FCS التي تحتوي على 104 الضامة متباينة من وحيدات الإنسان16.
ملاحظة: تأكد من عدم اتصال الشبكة مع طرف الماصة لمنع إتلاف طلاء فورمفار. - احتضان لمدة 30 دقيقة (37 درجة مئوية، 5% CO2) للسماح للخلايا الالتزام.
- تملأ البئر مع 2 مل ربمي المحتوية على السفح 10%.
- احتضان الجهاز ح 2 في 37 درجة مئوية و 5% CO2 للسماح للخلايا الالتزام قبل المراقبة فؤاد.
4-تضاريس قياسات التشوهات الناجمة عن بودوسومي
- عصا الشريطين لتضاعف من جانب شريط لاصق على زجاج قاع طبق بيتري.
ملاحظة: يجب أن تكون المسافة بين الشريطين أصغر من قطر الشبكة. - فصل الشبكة مطلي بالضامة من الشريط اللاصق بعناية.
- تشغيل الشبكة رأسا من أجل الحصول على الخلايا التي يواجهها الزجاج وعصا الشبكة بين الشريطين لاصقة.
- إصلاح الشبكة مع اثنين شرائط جديدة من الضعف من جانب لاصق: الشبكة وبالتالي سوف يكون تقع بين الشريطين لاصقة، تاركاً المنطقة الوسطى من الشبكة موجوداً لنصيحة فؤاد.
ملاحظة: تأكد من أن الشبكة الثابتة جيدا ولا الملتوية؛ ناتئ فؤاد قد لا تكون قادرة على الاقتراب من السطح فورمفار. - ملء طبق بيتري مع 2 مل من قبل ساخنة في 37 درجة مئوية الثقافة المتوسطة (ربمي مع السفح 10 ٪) وتستكمل مع 10 ملم حبيس (درجة الحموضة 7.4).
- ضع الطبق الثقافة على سخان طبق 37 درجة مئوية.
- تثبيت سخان طبق في مرحلة فؤاد.
- السماح للنظام بتحقيق استقرار في 37 درجة مئوية.
- في وضع الاتصال مع قوة 0.5 nN، جعل صورة عالمية أولى لتحديد موقع بودوسوميس، ومن ثم مسح طبوغرافية فورمفار عند 3 هرتز مع كسل نانومتر كبيرة حوالي 20.
ملاحظة: تجنب المسح الضوئي قرب حواف الشبكة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
البروتوكول أعلاه توضح كيفية إعداد الإعداد التجريبية تحديد حجم القوات نتوء تطبقها بودوسوميس بلعم على الركازة فورمفار. وهذا يتحقق باستخدام فؤاد ويتضح في الشكل 1.
عند تحليل صورة طوبوغرافية تضخمات تحت بودوسوميس باستخدام برنامج معالجة البيانات جبك، ينبغي طرح متعدد حدود الدرجة الثالثة صالح من كل سطر التفحص بشكل مستقل. يمكن تقييم ارتفاع الحد الأقصى للمطبات الناجمة عن بودوسومي عن طريق إضافة مقياس لون z على جانب الصورة. بعد تصدير بتنسيق TIFF، تحليل الصورة الطبوغرافية هو كذلك باستخدام مخصص الصنع ImageJ ماكرو متاحة على إنترنت8. يحدد موقع تضخمات في صورة ارتفاع تصحيح هذا الماكرو وغلة خارطة قوة (الشكل 2) وفقا لإعطاء المعلمات: فورمفار الفيلم بودوسومي وسمك حلقة نصف قطرها. وبالإضافة إلى ذلك، تؤدي الماكرو أيضا ملف نصي مع الإحداثيات والارتفاع وقيمة القوة المحسوبة لكل انتفاخ المكتشفة على سطح فورمفار.
تنطبق هذه العملية أيضا في حالة امتلاك الوقت الفاصل. الماكرو ثم يتتبع كل انتفاخ من نقطة منتصف الوقت فصاعدا وإلى الوراء، يطلب فيها التحقق من صحة المستخدم إذا نشأت أي شك.
الشكل 1 : برنامج الإعداد التجريبية
الرسم التوضيحي التخطيطي للإعداد التجريبية. الخلايا هي تبذر في شبكة مجهر الإلكتروني مغطاة بطبقة رقيقة، ومتوافقة مع فيلم فورمفار ووضع الشبكة، الخلايا التي تواجه أسفل، داخل طبق بيتري. عند الانضمام إلى الركازة، الضامة تشكيل هياكل التصاق شديد الحيوية submicron تسمى بودوسوميس. يتم تصويرها طبوغرافية الفيلم فورمفار تحت الخلايا ثم استخدام فؤاد. بودوسومي تطبيق قوات متعامد على الركازة، مما يسفر عن تضخمات على سطحه.
الشكل 2 : تشوه الركيزة والقوات التي تمارسها بودوسوميس
طبوغرافيا الفيلم فورمفار على الجانب المعاكس للخلايا تظهر انحراف (اللوحة اليمنى) والطول (الفريق الأوسط، رموز الألوان للارتفاع). تضخمات في الفيلم تناظر التشوه من بودوسوميس الفردية. يتم تقييم هذه القوة التي تطبقها كل بودوسومي بالنموذج (اللوحة اليمنى، يقابل كل بقعة واحدة بودوسومي وقوة القيم يتم ترميز). شريط الحجم: 5 ميكرومتر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
خصائص المواد
اختيار المواد للغشاء تشوه، في حالتنا فورمفار، يحتاج إلى الوفاء ببعض المتطلبات. المواد التي يجب أن تكون شفافة للضوء المرئي ويحمل الأسفار السيارات المحدودة للسماح للملاحظات في الميدان مشرق والفحص المجهري الأسفار. خشونة الفيلم رقيقة يجب أن تكون أقل من 10 نانومتر لتجنب أي تأثير الطبوغرافية على التصاق الخلايا والسماح الملاحظة واضحة من نتوءات المستحثة بالخلية بتصوير فؤاد. وأخيراً، تصلب الغشاء، الذي يعتمد على معامل للشباب وسمك المواد، يحتاج إلى أن تكون مرتفعة بما يكفي للحث على تشكيل بودوسوميس مع الاحتفاظ ببعض ديفورمابيليتي يمكن ملاحظتها لتؤكد النموذجية التي تم إنشاؤها في مواقع بودوسومي وهي حوالي 10-100 كيلو باسكال. المواد فورمفار، التي أعدت في طبقات رقيقة من 30-80 نانومتر حل وسط جيد بين كل هذه القيود. أنه يستحق أن يلاحظ أنه بضبط سمك الغشاء فورمفار، يمكن تعديلها صلابة لدراسة خصائص ميتشانوسينسينج بودوسوميس7.
إمكانية تكرار نتائج ونوعية إعداد فورمفار
بعض دفعات من فورمفار يقدم الطيات على الشبكة، وبالتالي فهي غير صالحة للاستعمال: يجوز أن ينظر إلى هذا مقدما على الصور الميدانية مشرق. في تجربتنا، نحن بحاجة إلى شبكات متعددة لشرط واحد لأنه في بعض الأحيان تركيب الشبكة ليست مثالية، والشبكة ينقل أو يحصل الملتوية. سمك الفيلم فورمفار يحتاج إلى أن تتكيف مع هذه القوة المتوقعة. سمكا الفيلم، وتشديد، ولكن انخفاض التشوهات ستكون، يزيد من صعوبة المراقبة. وفي المقابل، أرق الفيلم، أكثر هشاشة من ويزيد من صعوبة التعامل معها دون تمزق ذلك.
تأثير القوة تطبقها ناتئ على قياسات طبوغرافية
للحصول على قياس تشوه الفيلم دون أن تؤثر على نشاط نانوية بودوسومي أو يشوه الفيلم مع التحقيق فؤاد، من المهم لقوات مراقبة تطبيقها أثناء تصوير فؤاد. في الواقع، تطبيق القوة المفرطة أثناء التصوير قد يؤدي إلى المبالغة في تقدير ارتفاع نتوء وبالتالي قوة نتوء. وبعبارة أخرى، هناك حاجة إلى الحد من هذه القوة أقل بكثير من قوة كشك موقع بارزة. ونحن نوصي الحد القوى تطبيقها أثناء تصوير حولها إلى بضع مئات من بيكو-نيوتن.
نموذج لتقييم قوة نتوء
لتحويل القياسات الطوبوغرافية فؤاد إلى قيم القوة، من الضروري أن تحدد شروط الحدود ومعرفة التكوين المكاني لتطبيق القوة. وفي حالة بودوسوميس، اقترحنا نموذج استناداً إلى المعارف الراهنة لمنظمة الجزيئية، والتحقق من أن هذا النموذج يوفر تشوه الملامح تمشيا مع الملاحظات الطوبوغرافية8. أكثر دقة، ونحن على غرار جوهر كثيفة مبلمرة خيوط أكتين الرأسي محاطة بحلقة من البروتينات الالتصاق كوحدة نمطية مركزية دفع الركيزة ووحدة طرفية سحب عليه. مصممة تشوه الركيزة بهذه اثنين من وحدات تعمل استخدام المحاكاة عنصر محدود، مما يؤدي إلى علاقة قوة-تشوه. وبفضل هذا النهج العددية، نحن يتسم تأثير كل معلمة هندسية على علاقة القوة-التشوه، تبين أن سمك القطر والركيزة خاتم اللازمة لقياس دقة. العلاقة بين ارتفاع ح من انتفاخ في الركيزة وقوة قد تكون معبراً عنها و تطبقها بودوسومي واحد و =0 ج ه/(1-υ2) ﻫ3/r2 ح, حيث E = 2.1 هو برنامج العمل العالمي للشباب معامل فورمفار و υ = 0.3 نسبة بواسون7، ج0 تكافؤ ثابت 2.7 وه و r تدل على التوالي فيلم بودوسومي وسمك نصف قطرها8. لكل حالة، وتم الحصول على متوسط قيمة r من الصور الأسفار من بودوسوميس.
تطبيقات لبروز قوة مجهرية
مجهر القوة نتوء مربح واستخدم في الضامة لاختبار أهمية بروتينات محددة على توليد قوة بودوسومي وإظهار دور الميكانيكية بخاتم بودوسومي18 والكشف عن الارتباطات الزمانية للقوة جيل بين الجيران وثيقة داخل شبكة بودوسوميس8.
وقد وجد خلايا نتا في بيئتهم في العديد من العمليات البيولوجية. خلايا الورم الغازية استخدام بنيات بارزة تسمى إينفادوبوديا، التي تعتبر أساسية للمصفوفة خارج الخلية تدهور19. أظهرت الخلايا الليمفاوية نتا إلى خلايا بطانية خلال ديابيديسيس ترانسسيلولار بهم عن طريق البطانة20. بعض حالات التفاعل خلية خلية تعتمد أيضا على الخلوي بارزة هياكل: هذا هو الحال للاعتراف مستضد خلايا تي في خلايا بطانية21، والشروع في خلية الانصهار الذي يؤدي إلى الآكلة مولتينوكليتيد أو ميوتوبيس 22 , 23 , 24-وأخيراً، استيعاب العمليات مثل البلعمه الخلوية الاستخدام على أساس أكتين هياكل هذا المشروع حول الهدف الجسم25. دراسة للقوات التي تم إنشاؤها بواسطة بارزة هياكل سيساعد بالتأكيد تسليط الضوء على الآليات في اللعب في هذه العمليات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وأعلن لا تضارب في المصالح.
Acknowledgments
الكتاب ممتنون لانا لابيرنادي وغيوم Charrière وباتريك ديلوبيلي على مساهمتها الأولى لهذا العمل سانشيز ماتيو وفيلا فرانسواز لمساعدتهم بتصوير الفيديو وتحريرها. ودعمت هذا العمل تم بالوكالة الوطنية de la البحوث (ANR14-CE11-0020-02)، مؤسسة لبحوث ميديكال (FRM DEQ2016 0334894)، INSERM خطة السرطان وسرطان تولوز مؤسسة وبرنامج العلوم الحدود البشرية (RGP0035/2016).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 200 mesh nickel grids | Electron Microscopy Sciences | G200-Ni | |
| Filter paper | Sigma-Aldrich | 1001-055 | |
| Microscope slides | Fisher Scientific | 10235612 | |
| White stickers 26 x 70 mm | Avery | DP033-100 | |
| Film casting device with valve in its outlet | Electron Microscopy Sciences | 71305-01 | |
| Razorblades | Electron Microscopy Sciences | 72000 | |
| Ethanol | VWR | 1.08543.0250 | |
| Acetone | VWR | 20066.321 | |
| Formvar 0.5% solution in ethylene dichloride | Electron Microscopy Sciences | 15820 | |
| 12 mm coverslips | VWR | 631-0666 | |
| Inverted microscope | Carl Zeiss | Axiovert 200 | |
| Atomic Force Microscope | JPK Instruments | NanoWizard III | |
| Temperature-controlled sample holder | JPK Instruments | BioCell | |
| Silicon nitride cantilever with a nominal spring constant of 0.01 N/m | Veeco Instruments | MLCT-AUHW | |
| PBS | Gibco | 14190-094 | |
| Double-sided adhesive tape | APLI AGIPA | 118100 | |
| RPMI 1640 | Gibco | 31870-025 | |
| FCS | Sigma-Aldrich | F7524 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H0887 | |
| 35 mm glass-bottom Petri dishes | WPI | FD35-100 |
References
- Discher, D. E., Janmey, P., Wang, Y. L. Tissue Cells Feel and Respond to the Stiffness of Their Substrate. Science. 310, 1139-1143 (2005).
- Paszek, M. J., et al. Tensional Homeostasis and the Malignant Phenotype. Cancer Cell. 8, 241-254 (2005).
- Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. Matrix Elasticity Directs Stem Cell Lineage Specification. Cell. 126, 677-689 (2006).
- Gilbert, P. M., Weaver, V. M. Cellular Adaptation to Biomechanical Stress across Length Scales in Tissue Homeostasis and Disease. Seminars in Cell & Developmental Biology. 67, 141-152 (2017).
- Vining, K. H., Mooney, D. J. Mechanical Forces Direct Stem Cell Behaviour in Development and Regeneration. Nature Reviews Molecular Cell Biology. , (2017).
- Roca-Cusachs, P., Conte, V., Trepat, X. Quantifying Forces in Cell Biology. Nature Cell Biology. 19, 742-751 (2017).
- Labernadie, A., et al. Protrusion Force Microscopy Reveals Oscillatory Force Generation and Mechanosensing Activity of Human Macrophage Podosomes. Nature Communications. 5, 5343 (2014).
- Proag, A., et al. Working Together: Spatial Synchrony in the Force and Actin Dynamics of Podosome First Neighbors. ACS Nano. 9, 3800-3813 (2015).
- Proag, A., Bouissou, A., Vieu, C., Maridonneau-Parini, I., Poincloux, R. Evaluation of the Force and Spatial Dynamics of Macrophage Podosomes by Multi-Particle Tracking. Methods. 94, 75-84 (2016).
- Cougoule, C., et al. Three-Dimensional Migration of Macrophages Requires Hck for Podosome Organization and Extracellular Matrix Proteolysis. Blood. 115, 1444-1452 (2010).
- Cougoule, C., et al. Blood Leukocytes and Macrophages of Various Phenotypes Have Distinct Abilities to Form Podosomes and to Migrate in 3d Environments. European Journal of Cell Biology. 91, 938-949 (2012).
- Guiet, R., et al. Macrophage Mesenchymal Migration Requires Podosome Stabilization by Filamin A. Journal of Biological Chemistry. 287, 13051-13062 (2012).
- Maridonneau-Parini, I. Control of Macrophage 3d Migration: A Therapeutic Challenge to Limit Tissue Infiltration. Immunology Review. 262, 216-231 (2014).
- Park, H., et al. Tyrosine Phosphorylation of Wiskott-Aldrich Syndrome Protein (Wasp) by Hck Regulates Macrophage Function. Journal of Biological Chemistry. 289, 7897-7906 (2014).
- Van Goethem, E., et al. Macrophage Podosomes Go 3d. European Journal of Cell Biology. 90, 224-236 (2011).
- Van Goethem, E., Poincloux, R., Gauffre, F., Maridonneau-Parini, I., Le Cabec, V. Matrix Architecture Dictates Three-Dimensional Migration Modes of Human Macrophages: Differential Involvement of Proteases and Podosome-Like Structures. Journal of Immunology. 184, 1049-1061 (2010).
- Verollet, C., et al. Hiv-1 Reprograms the Migration of Macrophages. Blood. 125, 1611-1622 (2015).
- Bouissou, A., et al. Podosome Force Generation Machinery: A Local Balance between Protrusion at the Core and Traction at the Ring. ACS Nano. 11, 4028-4040 (2017).
- Lizarraga, F., et al. Diaphanous-Related Formins Are Required for Invadopodia Formation and Invasion of Breast Tumor Cells. Cancer Research. 69, 2792-2800 (2009).
- Carman, C. V., et al. Transcellular Diapedesis Is Initiated by Invasive Podosomes. Immunity. 26, 784-797 (2007).
- Sage, P. T., et al. Antigen Recognition Is Facilitated by Invadosome-Like Protrusions Formed by Memory/Effector T Cells. Journal of Immunology. 188, 3686-3699 (2012).
- Sens, K. L., et al. An Invasive Podosome-Like Structure Promotes Fusion Pore Formation During Myoblast Fusion. Journal of Cell Biology. 191, 1013-1027 (2010).
- Takito, J., et al. The Transient Appearance of Zipper-Like Actin Superstructures During the Fusion of Osteoclasts. Journal of Cell Science. 125, 662-672 (2012).
- Shilagardi, K., et al. Actin-Propelled Invasive Membrane Protrusions Promote Fusogenic Protein Engagement During Cell-Cell Fusion. Science. 340, 359-363 (2013).
- Freeman, S. A., et al. Integrins Form an Expanding Diffusional Barrier That Coordinates Phagocytosis. Cell. 164, 128-140 (2016).
