Summary
यहां, हम संयंत्र रोगज़नक़ Magnaporthe grisea के साथ संयंत्र डाह परीक्षण करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । यह रिपोर्ट कवक के pathotypes के बड़े पैमाने पर स्क्रीनिंग में योगदान देगी और आणविक प्रजनन के दौरान पौधों के प्रतिरोधी तंत्र को समझने के लिए एक उत्कृष्ट प्रारंभिक बिंदु के रूप में कार्य करेगी ।
Abstract
पौधों के पास रोगजनक कवक द्वारा संभावित खतरों से बचाव के लिए एक शक्तिशाली प्रणाली है । कृषि महत्वपूर्ण पौधों के लिए, तथापि, वर्तमान उपायों ऐसे रोगजनकों का मुकाबला करने के लिए भी रूढ़िवादी साबित कर दिया है और, इस प्रकार, पर्याप्त प्रभावी नहीं है, और वे संभावित पर्यावरणीय जोखिम पैदा कर सकते हैं । इसलिए, यह अत्यंत आवश्यक है की पहचान करने के लिए मेजबान प्रतिरोध कारकों स्वाभाविक रूप से प्रतिरोधी जर्मप्लाज्म की पहचान के माध्यम से संयंत्र रोगों को नियंत्रित करने में सहायता करने के लिए, अलगाव और प्रतिरोध जीन के लक्षण वर्णन, और आणविक प्रजनन प्रतिरोधी किस्मों की । इस संबंध में, नस्ल और संयंत्र प्रतिरोध जीन विकसित करने के लिए एक सटीक, तेजी से, और बड़े पैमाने पर टीका विधि स्थापित करने की आवश्यकता है । चावल विस्फोट कवक रोगज़नक़ Magnaporthe grisea गंभीर रोग के लक्षण और उपज नुकसान का कारण बनता है । हाल ही में, एम grisea संयंत्र कवक रोगज़नक़ बातचीत के तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल जीव के रूप में उभरा है । इसलिए, हम एक संयंत्र डाह परीक्षण विधि है कि एम. griseaके लिए विशिष्ट है के विकास की रिपोर्ट । यह विधि एक conidial निलंबन और mycelium क्यूब्स या conidial निलंबन की बूंदों के साथ टीका घाव के साथ दोनों स्प्रे टीका के लिए प्रदान करता है । अलग चावल के पत्तों के लिए घाव टीका विधि के प्रमुख कदम संयंत्र पत्तियों, जो किसी भी मेजबान पैठ प्रतिरोध की वजह से हस्तक्षेप से बचा जाता है पर घाव बनाने के लिए है । इस स्प्रे/घाव प्रोटोकॉल तेजी से, सटीक, और एम grisea के pathotypes के बड़े पैमाने पर स्क्रीनिंग के लिए अलग योगदान देता है । यह एकीकृत और व्यवस्थित संयंत्र संक्रमण विधि संयंत्र विकृति में मुद्दों का एक व्यापक परिप्रेक्ष्य पाने के लिए एक उत्कृष्ट प्रारंभिक बिंदु के रूप में काम करेंगे ।
Introduction
चावल विस्फोट, एम griseaकी वजह से, दुनिया भर में चावल किस्मों के लिए सबसे गंभीर बीमारियों में से एक है1,2। प्रक्रिया जिसके द्वारा एम grisea संक्रमित मेजबान संयंत्रों एक conidia उत्पादन और सतह लगाव, एक conidia अंकुरण और appressorium गठन, पैठ खूंटी और संक्रामक hypha भेदभाव के गठन, और एक रोग फैल शामिल 3. इन सभी चरणों के कई अंय संयंत्र रोगजनक कवक में आम हैं, और, वास्तव में, किसी भी एक मंच की नाकाबंदी मेजबान संयंत्रों के संक्रमण से बचाता है । अपने आर्थिक महत्व और आनुवंशिक पथ के कारण, एम grisea संयंत्र कवक रोगज़नक़ बातचीत के तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल जीव के रूप में उभराहै 1,4। इसलिए, एम. grisea में इन विकासात्मक चरणों के आणविक आधार का अध्ययन करने में मदद मिलेगी आणविक तंत्र अंतर्निहित कवक pathogenicity स्पष्ट और स्क्रीनिंग और डिजाइनिंग उपन्यास के लिए उंमीदवार लक्ष्य जीन की पहचान कवक5.
एम. grisea संक्रमण से संबंधित हाल की रिपोर्ट पूर्व के आणविक तंत्र पर ध्यान केंद्रित किया है, प्रवेश चरणों, विशेष रूप से conidiation, appressorium गठन, पैठ खूंटे, और संक्रामक विकास3, 6. इसलिए, यह एम. grisea संक्रमण परीक्षण करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल विकसित करने के लिए आवश्यक है । इस के साथ साथ, हम एक संक्रमण परीक्षण है कि एक conidial निलंबन और एम griseaके mycelial प्लग के साथ घावों के टीका के साथ स्प्रे मध्यस्थता संक्रमण परख का इस्तेमाल के लिए एक विस्तृत विधि प्रस्तुत करते हैं । इस रिपोर्ट में, प्रोटोकॉल उपभेदों की संस्कृति पर केंद्रित है, छिड़काव के लिए conidiation समाधान की तैयारी, और mycelial प्लग टीका पौधों की मध्यस्थता एम griseaके साथ । इन चरणों नीचे विवरण में वर्णित हैं, और एक योजनाबद्ध दृश्य विधि का संपूर्ण वर्कफ़्लो दिखा रहा है और एक विशिष्ट घावों के आंकड़े 1 और 2, क्रमशः में दिखाए जाते हैं ।
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Protocol
1. स्प्रे टीका के निलंबन के साथ एम. grisea Conidia
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एम. grisea के लिए कवक संस्कृति
- कवक उपभेदों के लिए दलिया टमाटर आगर (ओ टी ए) संस्कृति मध्यम तैयार करें ।
- दलिया के 30-50 ग्राम वजन, आसुत/पानी (ddH2हे) के ८०० मिलीलीटर के लिए इस जोड़ें और बिजली के बर्तन में 30 मिनट के लिए मिश्रण फोड़ा ।
- उबला हुआ दलिया का रस जाली के एक टुकड़े के माध्यम से चोंच में फ़िल्टर करें ।
- इसमें १५० मिलीलीटर टमाटर का रस और आगर के 20 ग्राम को यूरिन में छानने के लिए डालें और ddH2O up में १,००० मिलीलीटर डालें ।
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प्रायोगिक सामग्रियों की तैयारी
- लगभग 1 डी के लिए ddH 2 ओ में चावल (धान्य sativa) फसल Lijiangxintuan-heigu (LTH) के बारे में ५०2हे में भिगोएं 3 डी के लिए या जौ के लगभग ५० बीज (Hordeum अभद्र सीवी गोल्डन वादा) सोख
- नम धुंध में चावल या जौ के बीज लपेटें और उंहें नम फ़िल्टर कागज पर के बारे में 30 पेट्री व्यंजन में 10 सेमी x 10 सेमी के व्यास के साथ 28 डिग्री सेल्सियस पर उगना । चावल बीज अंकुरण समय के बारे में है 2-3 d, जौ बीज अंकुरण समय के बारे में है 2 डी । ग्रीनहाउस में सापेक्षिक आर्द्रता लगभग ७०% है ।
- autoclaved पॉटी मिट्टी और पानी का उपयोग कर बर्तन में चावल या जौ के अंकुर संयंत्र और फिर उंहें vermiculite की एक परत के साथ कवर ।
- के बारे में 1 ~ 2 सप्ताह के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर एक उपयुक्त glasshouse या विकास कैबिनेट में पौधों प्लेस ।
- बाँझ सर्जिकल कैंची के साथ हलकों में फिल्टर कागज के 3 परतों में कटौती (प्रत्येक सर्कल एक 8 सेमी व्यास होना चाहिए) और उन्हें १०० mm बाँझ प्लास्टिक प्लेटों पर जगह है ।
- फिल्टर पेपर सोख करने के लिए प्रत्येक डिश के लिए ddH2हे जोड़ें ।
- सुनिश्चित करें कि फिल्टर कागज पूरी तरह से गीला है, लेकिन कोई अतिरिक्त पानी जोड़ें ।
- एक वैक्यूम पंप के साथ किसी भी अतिरिक्त पानी निकालें ।
- प्लेस 2 बाँझ toothpicks संस्कृति डिश में चावल का समर्थन करने के लिए/ अंतरिक्ष toothpicks ~ 2-3 सेमी के अलावा ।
- बीज बोने के बाद चावल की पत्तियों को 2 सप्ताह तक जमा कर लें या फिर बीज बोने के बाद जौ 7 डी की पत्तियों पर डालें ।
- चावल के 4-से 6 पत्ती के अंकुरों का प्रयोग जौ, तने के निचले हिस्से को ऊपर से ~ 5 सेमी में काट लें और पत्तियों को इकट्ठा करें ।
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स्प्रे टीका प्रोटोकॉल
- संस्कृति ~ 4 डी के लिए एक थर्मोस्टेट मशीन (25 डिग्री सेल्सियस) में ओ टी ए प्लेटों पर कवक तनाव ।
- जोड़ें ~ 2 ddH की मिलीलीटर2हे प्रत्येक 4 दिन पुरानी थाली के लिए एक ०.५-5 मिलीलीटर पिपेट का उपयोग कर ।
- एक टीका पाश के साथ, mycelia मलबे में एम. grisea जंगली प्रकार के तनाव और उत्परिवर्ती तनाव के mycelia परिमार्जन ।
- mycelia का मलबा लीजिए और इसे एक नई ओटा प्लेट में ट्रांसफर कर दीजिये. mycelia का मलबा लें और साफ बेंच में सूखा उड़ाएं ।
- प्लेट कवर धुंध के 3 परतों के साथ एक ग्रीनहाउस में conidia के विकास के लिए आवश्यक नमी सुनिश्चित करने के लिए 25 ° c दिन में (14 ज) और 23 ° c रात में (10 ज) के लिए 24-48 ज ।
- प्रत्येक डिश के लिए 2ddH के 2 मिलीलीटर जोड़ें और एक निस्पंदन द्वारा लेंस कागज के 2 परतों के माध्यम से पीछा बाँझ कपास झाड़ू के साथ धीरे conidia परिमार्जन । संस्कृति माध्यम की सतह खरोंच करने के लिए नहीं सावधान रहना ।
- conidia सस्पेंशन एक नया ५० एमएल ट्यूब में एक १००-१,००० µ एल पिपेट के साथ स्थानांतरण ।
- 25 डिग्री सेल्सियस पर ५,००० x g की एक ंयूनतम पर 5 मिनट के लिए केंद्रापसारक ।
- supernatant निकालें और गोली resuspend 2 x एक ०.०२५% (v/v) के बीच में एमएल प्रति 104 conidia-20 समाधान दे । के बीच-20 समाधान आमतौर पर के बारे में 10-20 मिलीलीटर है ।
- एक हाथ से आयोजित स्प्रेयर में बीजाणु सस्पेंशन डालना ।
- Spay के बारे में 10 मिलीलीटर conidial निलंबन के 2 सप्ताह पुराने चावल अंकुर या जौ के पत्तों पर 7 दिन पुराने जौ अंकुरित और उंहें एक अंधेरे में 25 डिग्री सेल्सियस पर गर्मी, आर्द्र चैंबर के लिए ~ 24 h. ०.०२५% के साथ नियंत्रण संयंत्रों स्प्रे (v/वी) के बीच-20 समाधान ।
- 12 एच के एक photoperiod के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर फ्लोरोसेंट रोशनी के तहत एक और नम चैंबर में पत्तियों स्थानांतरण
- टीका के बाद 5 डी में रोग के लक्षण रिकॉर्ड । रोगग्रस्त चावल/लंबाई में ~ 6 सेमी के जौ ब्लेड की जांच करें । मूल्यांकन मानक अंतरराष्ट्रीय चावल अनुसंधान संस्थान (IRRI) के विस्फोट प्रतिरोध के लिए स्कोरिंग प्रणाली के अनुसार है । ब्लास्ट प्रतिरोध के लिए स्कोरिंग प्रणाली के विवरण तालिका 1में दिखाए जाते हैं ।
- फोटोग्राफ पत्तियों परीक्षण उपभेदों के संक्रमण का मूल्यांकन करने के लिए । संक्रमण ३.६ सेमी2प्रति घावों की संख्या का आकलन किया गया था ।
2. Mycelium क्यूब्स या Conidial की बूंदों के साथ घाव टीका M. grisea के निलंबन
- एक संरचनात्मक सुई का उपयोग करना, अलग चावल की मुख्य नसों में तीन 2-3 सेमी लंबे घाव परिमार्जन/ ध्यान रखना पत्तियों में घुसना नहीं है ।
- toothpicks पर स्क्रैप पत्तियों रखो और बूंदों की एक परत बनाने के लिए पत्तियों पर एक ०.०२% (वी/वी) के बीच-20 समाधान स्प्रे ।
- एक एम. grisea तनाव के लिए एक ०.५ cm x ०.५ cm mycelial प्लग (जंगली-प्रकार, उत्परिवर्ती, पूरक उपभेदों, या अंय परीक्षण उपभेदों) एक ओटा थाली से कट ।
- mycelial प्लग या 25 µ एल बूंदें घायल पत्तियों पर conidial निलंबन और 3-8 डी के लिए एक आर्द्र कक्ष में 25 डिग्री सेल्सियस पर पत्तियों की मशीन रखो ।
- 5-7 d पोस्ट-टीका पर घावों की जांच करें । परीक्षा की विधि एक ही है के रूप में यह स्प्रे टीका विधि के लिए था (चरण 1.3.13 देखें) ।
- रोगग्रस्त चावल/लंबाई में ~ 6 cm के जौ ब्लेड की जांच करें और उंहें परीक्षण उपभेदों के संक्रमण का मूल्यांकन करने के लिए तस्वीर । संक्रमण ३.६ सेमी2प्रति घावों की संख्या का आकलन किया गया था ।
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Representative Results
तकनीक के लिए पूरे कार्यप्रवाह चित्रा 1में दिखाया गया है । संयंत्र संक्रमण परख 14 दिन पुराने अतिसंवेदनशील चावल अंकुर पर प्रदर्शन किया गया (ओ sativa cv CO-३९) या अतिसंवेदनशील 7 दिन पुराने जौ के पत्ते (एच. अभद्र सीवी गोल्डन वादा)7,8,9. चावल के पत्तों पर एक संक्रमण के लिए परीक्षण करने के लिए, एक conidial निलंबन (१.० x 105 बीजाणुओं/ एम. grisea जंगली प्रकार के तनाव P131 और Com1 विलोपन उत्परिवर्ती तनाव के लिए तैयार किया गया था और फिर 14 दिन पुरानी अतिसंवेदनशील के पत्ते के आवरण पर छिड़काव सीओ ३९ अंकुर, जो तब 5 डी10के लिए एक नम चैंबर में रखा गया था । P131-inoculated CO-३९ पत्तियों चावल विस्फोट के ठेठ मजबूत घावों को प्रदर्शित किया, लेकिन Com1-inoculated पत्तियों स्पष्ट संक्रमण दोष दिखाया और एक पूर्ण संक्रमण (चित्रा 2ए) नहीं कर सका। जंगली प्रकार के तनाव P131 आप द्वारा प्राप्त एक तनाव है-१९८८18में लिआंग पेंग । MoKMT2H नल उत्परिवर्ती (ΔMoKMT2H) काओ एट अल द्वारा प्राप्त की गई हमारी प्रयोगशाला में एक लक्ष्य जीन प्रतिस्थापन रणनीति11का उपयोग कर । Com1 उत्परिवर्ती यांग एट अल द्वारा अलग-थलग था । आप में-लिआंग पेंग की लैब10.
M. grisea ΔMoKMT2H घावों के माध्यम से मेजबान कोशिकाओं को संक्रमित सकता है कि जांच करने के लिए, जंगली प्रकार के चावल के पौधों की abraded पत्तियों स्प्रे विधि या घायल विधि11के माध्यम से mycelial के ΔMoKMT2H प्लग के साथ inoculated थे । पत्तियों कि ΔMoKMT2H के साथ स्प्रे inoculated थे ΔMoKMT2H संक्रमण में कोई स्पष्ट दोष P131 के साथ तुलना में पता चला/ हालांकि, स्पष्ट दोषों घावों के माध्यम से ΔMoKMT2H के साथ inoculated पत्तियों के लिए मनाया गया (चित्रा 2ए) । आगे जौ के पत्ते, स्वस्थ या घायल पत्तियों के साथ संयंत्र के संक्रमण का परीक्षण करने के लिए (cv सुनहरा वादा) conidial बूंदों या mycelial प्लग के साथ, क्रमशः Com1, ΔMoKMT2H, या P131 के inoculated थे । 5 डी के बाद टीका, ठेठ चावल विस्फोट घावों को पूरी तरह से या तो ΔMoKMT2H या P131 तनाव के साथ inoculated पत्तियों पर विकसित किया था, जबकि कम और छोटे घावों inoculated उत्परिवर्ती के साथ Com1 पत्तियों पर पाए जाते थे (चित्रा 2 ख).
चित्रा 1 : एक योजना संयंत्र संक्रमण illustrating । संयंत्र बीज प्लास्टिक के बर्तन में मिट्टी में अंकुरित (५० मिमी2 x ५० mm दीप, एक ड्रेनेज छेद के साथ), पॉट प्रति दो बीज, और अंकुर एक ग्रीनहाउस में बड़े हो गए थे । टीकाकरण की संस्कृति और विस्फोट कवक एम grisea के ओटा प्लेटों पर उगाया जाता था । conidia छिड़काव टीका विधि के लिए, conidia निलंबन एक ०.०२% (वी/वी) के बीच-20 समाधान में निलंबित कर दिया गया था और चावल/जौ के पौधों पर छिड़काव किया । खरोंच टीका विधि के लिए, स्क्रैप चावल/जौ संयंत्र पत्तियों प्लास्टिक की प्लेटों पर डाल रहे थे और फिर एक mycelial प्लग या conidia निलंबन के द्वारा inoculated । और फिर, सभी का इलाज संयंत्र पत्ते अंधेरे थे 24 घंटे के लिए संस्कृति और प्रकाश 12 एच के लिए संस्कृति । अंत में ३.६ सेमी2 की इकाइयों के भीतर कालोनियों की संख्या दर्ज की गई । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: Com1 और MoKMT2H एक conidium गठन और चावल के पत्तों पर pathogenicity के लिए आवश्यक हैं। (क) यह पैनल conidia स्प्रे (बाएँ) या mycelial प्लग (दाएँ) से conidia के माध्यम से चावल के पत्तों की टीका से पता चलता है कि एम. grisea वाइल्ड-टाइप P131, उत्परिवर्ती Com1, या ΔMoKMT2H. ठेठ पत्तियों mycelial प्लग मध्यस्थता टीका, जो abraded चावल के पत्तों पर आयोजित किया गया था के बाद 7 डी मनाया गया । ठेठ घावों mycelial प्लग मध्यस्थता टीका के बाद 5 डी मनाया गया । (ख) जौ के पत्ते conidia स्प्रे (बाएँ) या mycelial प्लग (दाएँ) के माध्यम से inoculated थे. एक नकली उपचार नियंत्रण के रूप में, एक ०.०२५% की एक ही मात्रा (वी/वी) के बीच-20 समाधान छिड़काव किया गया था । घाव टीका के लिए, P131 का आंकड़ा काओ एट अल से संशोधित किया गया है । 11. ascomycete कवक में MoKMT2H Ash1 के एक कार्यात्मक homolog है, जो H3K4 और H3K36 मिथाइल11में फंसा है । बार = 1 सेमी । Δcom1 म्यूटेंट में चावल और जौ के अंकुर10पर डाह में काफी कम थे । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
| स्केल | विवरण |
| 1 | पिन-पॉइंट साइज के छोटे भूरे रंग के धब्बे |
| 2 | छोटे गोलाकार के लिए थोड़ा लंबा, भूरे धब्बे, के बारे में 1-2 मिमी व्यास में एक अलग भूरे रंग के मार्जिन के साथ, गल । घावों ज्यादातर ऊपरी पत्तियों पर पाए जाते हैं |
| 3 | घावों के प्रकार में 2 के रूप में एक ही है, लेकिन घावों की महत्वपूर्ण संख्या theupper पत्तियों पर हैं |
| 4 | ठेठ अतिसंवेदनशील विस्फोट घावों, 3 मिमी या लंबे समय तक, theleaf क्षेत्र के 4% से कम संक्रमित |
| 5 | ठेठ अतिसंवेदनशील विस्फोट घावों, 3 मिमी या अब, पत्ती क्षेत्र के 4-10% से कम संक्रमित |
| 6 | ठेठ अतिसंवेदनशील विस्फोट घावों, 3 मिमी या अब, पत्ती क्षेत्र के 11-25% से कम संक्रमित |
| 7 | ठेठ अतिसंवेदनशील विस्फोट घावों, 3 मिमी या अब, पत्ती क्षेत्र के 26-50% से कम संक्रमित |
| 8 | ठेठ अतिसंवेदनशील विस्फोट घावों, 3 मिमी या अब, पत्ती क्षेत्र के 51-75% से कम संक्रमित, कई पत्ते मर |
| 9 | ठेठ अतिसंवेदनशील विस्फोट घावों, 3 मिमी या अब, पत्ती क्षेत्र के ७५% से अधिक संक्रमित |
तालिका 1: विस्फोट प्रतिरोध के लिए एक स्कोरिंग प्रणाली । तालिका अंतरराष्ट्रीय चावल अनुसंधान संस्थान (IRRI) से उद्धृत किया गया है ।
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Discussion
संयंत्र रोग प्रतिरोध जीन जीवाणुओं द्वारा संक्रमण को रोकने में एक आवश्यक भूमिका निभाते हैं, जिसमें फफूंद रोगजनकों सहित1,12. चावल विस्फोट रोगज़नक़ जनसंख्या संरचनाओं की प्रकृति को समझने के लिए और संयंत्र प्रतिरोध जीन4की पहचान करने के लिए एक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया है । इसलिए आवश्यक है कि बड़े पैमाने पर कृषि संयंत्रों की मुख्य किस्मों की रोग प्रतिरोधक जीनोटाइप और avirulence पादी की जांच की जाए जिससे रोग प्रतिरोधी पौधों की पहचान की जा सके जिससे लगातार खेती की जा सके । इसके अलावा, क्षेत्र रोगजनकों के avirulence पादी के लाभ मेजबान किस्मों12,13के विभिंन प्रतिरोधी पादी के तर्कसंगत वितरण जरूरत । हालांकि, वर्तमान टीका तरीकों आमतौर पर प्रतिरोध और रोगज़नक़ पहचान के लिए स्क्रीनिंग के साथ हस्तक्षेप14,15,16,17।
यहां, हम संयंत्र संक्रमण के लिए परीक्षण करने के लिए एक तेजी से और सही विधि प्रस्तुत करते हैं । यह टीका विधि प्रजनन परीक्षणों के दौरान प्रतिरोधी पौधों की पहचान और प्रतिरोधक जीन की क्लोनिंग के दौरान एक संतान आबादी के phenotype के लिए उपयुक्त है. यहां, हम एम griseaके साथ inoculating घायल संयंत्र पत्तियों के लिए एक विधि की स्थापना की । क्योंकि मेजबान प्रतिरोध एक रोगज़नक़ के प्रसार को रोकने में एक प्रमुख भूमिका निभाता है, इस इन विट्रो विधि, जो परीक्षण चावल पर घाव का उत्पादन पत्तियों और घाव पर चावल विस्फोट inoculated, एक संक्रमण बनाने के लिए सुविधाजनक है सीधे में पत्तियों को बिना पत्ता एपिडर्मिस और एपिडर्मल कोशिका दीवार में घुसना पड़ता है. इसके अलावा, इस टीका विधि अलग पत्ती उंर के लिए उपयुक्त है । टीका परिणाम स्थिर और सटीक रहे हैं । टीका घाव भरने की विधि mycelia के साथ टीका के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कवक उपभेदों जो conidia की केवल कम मात्रा में उत्पादन की pathogenicity की पहचान ।
इस प्रोटोकॉल आगे रोगजनक तंत्र है कि कवक में संरक्षित कर रहे है के बारे में हमारी समझ में योगदान होगा, साथ ही साथ रोगज़नक़-विशिष्ट कारकों है कि एक कवक का विरोध करने की अनुमति और उसके मेजबान13की जंमजात प्रतिरक्षा को दबाने । हालांकि, घाव टीका लागू नहीं है जब एक conidial आक्रमण और mycelia विस्तार की दर निर्धारित करने की कोशिश कर रहा । लेकिन प्राकृतिक स्थिति में, स्प्रे टीका विधि बेहतर एक रोगज़नक़ के pathogenicity को प्रतिबिंबित कर सकते हैं । स्प्रे टीका विधि संचालित करने के लिए आसान है और कार्य कुशलता में सुधार करने में मदद करता है । एक साथ लिया, इन परिणामों का संकेत एक सटीक और स्थिर टीका विधि स्क्रीनिंग संयंत्र प्रतिरोध जीन और pathogenicity निर्धारित करने के लिए आवश्यक हैं ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस काम को बीजिंग कृषि विश्वविद्यालय (YQ201603) की विशेष वैज्ञानिक अनुसंधान परियोजना और बीजिंग शैक्षिक समिति (KM201610020005) की वैज्ञानिक परियोजना ने समर्थन दिया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Filter paper | GE Healthcare brand(Sweden) | 10311387 | |
| 50-mL tube | CORNING(Amercia) | 430290 | |
| Centrifuge | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
| Culture dish | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
| 0.5-5 mL pipette | Eppendorf | 4920000105 | |
| 100-1000uL pipette | Eppendorf | 4920000083 | |
| Vacuum pump | Leybold | D25B | |
| Dissection needle | FST | 26000-35 | |
| Incubator | MEMMERT | PYX313 | |
| Inoculation ring | Greiner Bio One | 731175 |
References
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