Ölçeklenebilir, Hızlı montaj ve biyoaktif proteinler ve Immunostimulants yükleme yolu ile birden parlamak Nanoprecipitation çeşitli sentetik Nanocarriers içine

Summary

Nanomalzemeler çok yönlü kontrollü tedavi teslimat temel bilim ve çevirim uygulamalar için mekanizmalar kullanır, ancak onların imalat kez en Biyomedikal laboratuvarlarda kullanılamaz uzmanlık gerektirir. Burada, iletişim kuralları ölçeklenebilir imalat ve terapötik flash nanoprecipitation kullanarak çeşitli kendi kendine monte nanocarriers yüklenmesini için mevcut.

Abstract

Nanomalzemeler tedavi ve görüntüleme uygulamaları için tek ve kombine moleküler payloads kontrollü teslimat özelleştirmek için seçenekleri çok çeşitli sunuyoruz. Bu artan özgüllüğü düşük yan etkileri ve daha düşük dozlarda ile daha yüksek güç de dahil olmak üzere önemli klinik üzerinde etkileri olabilir. Ayrıca, in situ hedefleme ve belirli hücre alt kümeleri kontrollü modülasyon temel biyolojik olayların içinde in vitro ve in vivo incelemeler geliştirmek ve hücre işlevini prob. Ne yazık ki, nano bilimi, kimya ve mühendislik kez gerekli uzmanlık yasaklamak laboratuvarlar bu alanlardaki deneyimi olmayan imalatı ve onların soruşturma için araçları veya Araçlar için Nanomalzemeler özelleştirme onların tedavi stratejileri. Burada, sentez ve ölçeklenebilir bir çok yönlü toksik olmayan blok kopolimer sistem facile oluşumuna müsait Meclisi ve biyomedikal uygulamalar için nano araçların yükleme için iletişim kuralları sağlar. Flash nanoprecipitation farklı nanocarriers poly(ethylene glycol) -blüzerinden hızlı imalatı için bir metodoloji olarak sunulan-poli (propilen sülfit) kopolimerler. Bu protokoller laboratuvarları geniş bir yelpazede uzmanlık ve kaynaklara kolayca izin ve tekrarlanarak gelişmiş nanocarrier dağıtım sistemleri uygulamaları için imal. Tasarım ve flash nanoprecipitation kolaylaştırmak için bir yüksek hızlı şırınga pompa istihdam otomatik bir araç inşaat süreci ve homojenliği gelişmiş denetime izin vermek için boyut, Morfoloji ve yük-in polymersome nanocarriers olduğunu açıklanan.

Introduction

Nanocarriers küçük ve makromoleküllerin kargo, kontrollü teslimat için izin dahil olmak üzere etkin varlıklar, aksi takdirde kapsüllü, ya son derece parçalanabilir ve/veya Yönetim içinde vivoiçin de hidrofobik olurdu. Düzenli olarak fabrikasyon nanocarrier türleri morfoloji, polimer veziküller (polymersomes olarak da bilinir) lipozomlar benzer teklif Hidrofilik ve hidrofobik kargo^1,2aynı anda yüklemek için yetenek. Gelecek vaat eden onların avantajlara rağmen polymersomes nedeniyle, kısmen, birkaç temel zorlukla onların imalat için klinik uygulamalarda hala nadirdir. Klinik kullanım için polymersome formülasyonları büyük ölçekli, steril ve tutarlı gruplar halinde yapılması gerekir.

Bir takım teknikler-ebilmek var olmak kullanılmış için formu polymersomes poly(ethylene glycol) -blokgibi bir diblock kopolimer üzerinden-poli (propilen sülfür) (PEG -bl- PPS), solvent dağılım³, ince film rehidrasyon¹ içeren ^{, 4}, havacilik ^5,6ve doğrudan hidrasyon⁷. Solvent dağılım uzun bir kuluçka kez proteinler gibi bazı biyoaktif payloads denatüre organik çözücüler huzurunda içerir. İnce film rehidrasyon kez kabul edilebilir monodispersity elde etmek için pahalı ve zaman alıcı ekstrüzyon teknikleri gerektiren kurulan polymersomes polydispersity üzerinde denetim sağlamaz. Ayrıca, microfluids ve doğrudan hidrasyon ölçek daha büyük üretim birimleri için zordur. Farklı nanocarrier imalat yöntemleri, flash nanoprecipitation (FNP) büyük ölçekli ve tekrarlanabilir formülasyonları^8,9,10yapma yeteneğini sunmaktadır. Sırasında FNP daha önce katı çekirdekli nano tanecikleri formülasyon için rezerve edilen, laboratuarımıza son zamanlarda çeşitli PEG -bl- PPS nanostructure türleri morfoloji^11, tutarlı oluşumu dahil etmek FNP kullanımı genişletti ¹², polymersomes¹¹ ve bicontinuous nanospheres¹²de dahil olmak üzere. İnce film rehidrasyon ve solvent dağılımı tarafından kurulan sigara kalıptan çekilmiş polymersomes göre üstün polydispersity dizin değerlerini sonuçlanan FNP ekstrüzyon, gerek kalmadan polymersomes monodisperse formülasyonları şekillendirme yeteneğine sahip olduğunu ortaya koymuştur ¹¹. Bicontinuous nanospheres, onların büyük hidrofobik etki alanları ile bir dizi FNP¹²ile solvent koşul altında şekillendirme rağmen ince film rehidrasyon tarafından oluşturulmasına izin mümkün değildi.

Burada, biz bir sentezi için PEG -bl- PPS diblock kopolimer polymersome oluşumunda kullanılan ayrıntılarıyla, FNP FNP için kullanılan sınırlı sıkışma jetler (CIJ) Mikser protokol kendisi ve otomatik bir sistem uygulanması Kullanıcı değişkenliği azaltır. Yeterince endotoksin-Alerjik formülasyonları kullanım vivo içindeve FNP tarafından kurulan polymersomes karakterizasyonu ilgili temsilcisi verilerin için üretmek için sistem sterilize hakkında bilgi içerir. Bu bilgileri kullanarak, okuyucuların ilgi polymersomes vitro ve in vivo çalışmaları için kullanan ile steril, kendi monodisperse formülasyonları imal etmek mümkün olacak. Deneyime sahip okuyucular nanocarrier formülasyonları ve polimer sentez uzmanlığı ile hızla FNP geçerli formülasyonu teknikleri için potansiyel bir alternatif olarak kullanarak kendi polimer sistemleri test edebilecektir. Ayrıca, burada açıklanan protokoller eğitim araçları nanocarriers nanoteknoloji Laboratuvarı dersleri formülasyonu için kullanılabilir.

Protocol

1. Poly(ethylene glycol) -bloksentezi-poli (propilen sülfit)-Thiol

1. Metoksi-poly(ethylene glycol) mesylate sentez (Mn: 750) (MeO-PEG₁₇-Ms, ben).
   1. MeO-PEG₁₇- Oh 200 ml % 100 Toluen 3-boyun yuvarlak alt kabı (RBF) içinde 10 g 600 RPM manyetik karıştırma altında geçiyoruz.
   2. Kendisi bir kondansatör için bağlı bir Dean-Stark aparatı 3-boyun RBF bağlanmak, asal gaz altında tüm sistem tutmak azot veya argon.
   3. 3-boyun RBF bir yağ banyosu, karıştırma 600 rpm'de ise 165 ° C ısıya yerleştirin.
   4. İzleme su ve 100 mL Toluen azeotropic damıtma kullanarak kaldırın.
   5. 3-boyun RBF yağdan çıkarın, Dean-Stark aparatı inert gaz koşulları koruyarak ayırmak ve oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin.
   6. MeO-PEG₁₇-OH çözüm karıştırma 600 rpm'de ise 5.6 mL % 100 trietilamin (3 molar EQ) ve susuz % 100 Toluen 300 mL ekleyin.
   7. 3-boyun RBF bir buz banyosu için hareket, karıştırma 600 rpm ve inert gaz koşulları sağlamak.
   8. % 100 methanesulfonyl klorür (3 molar EQ) 3.1 mL % 100 Toluen 30 mL seyreltik, yavaş yavaş karıştırmaya 600 rpm'de ise bir ek huni ile 3-boyun RBF ekleyin.
   9. Gecede etkisiz koşullar altında oda sıcaklığında 600 rpm'de ilave edin.
   10. Filtre çözümü Buchner huni Paketli atomik toprakla (bakınız Tablo reçetesituzları kaldırmak için).
   11. Toluen döner buharlaştırıcı üzerinden 40 ° c, rotasyon 120 rpm ve 50-100 milibar arasında ayarlamak basınç ayarla su banyosu ile kaldırın.
   12. % 100 diklorometan (DCM) 200 ml ürün yeniden dağıtılması ve filtre atomik earth ile Paketli Buchner huni ( Tablo malzemelerigörmek).
   13. DCM döner buharlaştırıcı 40 ° c, rotasyon 120 rpm ve 450-600 milibar arasında ayarlamak basınç ayarla su banyosu ile kaldırın.
   14. İdareli ürün % 100 DCM yılında yeniden dağıtılması ve yavaş yavaş buz gibi % 100 dietil eter 500 mL dropwise (Pasteur pipet) ekleyerek ürün çökelti. Karıştırma 300 devirde korumak.
   15. Dikkatle boşaltmak veya dietil eter zarlarını ürününden MeO-PEG₁₇kaldırmak için Aspire - Mesylate ve Mağaza Vakum desiccator tamamen kurumasını bir gecede.
   16. Ürün hemen kullanın veya inert gaz-20 ° c altında birkaç ay için saklayabilirsiniz.
2. Metoksi-poly(ethylene glycol) thioacetate (MeO-PEG₁₇-TA, II) sentez.
   1. MeO-PEG₁₇-Ms (I) % 100 susuz dimethylformamide (DMF) 3-boyun RBF 200 ml, 5 g geçiyoruz, inert gaz altında oda sıcaklığında 600 rpm'de ilave edin.
   2. % 100 potasyum karbonat (3 molar EQ) 2.5 g çözüm karıştırarak ekleyin.
      Not: potasyum karbonat tamamen çözümünde eriyecektir değil.
   3. % 100 Tioasetik asit (3 molar EQ) 1.3 mL 100 mL % 100 oranında seyreltin susuz DMF ve dropwise eriyik yolu ile bir ek huni ekleyin.
      Not: Tioasetik asit güçlü, nahoş bir kokusu vardır. Gecede önce elden çıkarma veya temizlik kimyasal duman hood içindeki tüm kirli nesneler tutmaya özen göstermelidir.
   4. Karistirin (d/d 600 veya daha büyük) bir gecede oda sıcaklığında.
      Not: Tuz oluşumu kolayca bu çözümün karıştırma bozabilir. Gecede karıştırarak korumak için özen göstermelidir.
   5. Filtre çözümü Buchner huni Paketli atomik earth ile (bkz. Tablo malzeme).
   6. DMF döner buharlaştırıcı 60 ° c, rotasyon 120 rpm ve 5-15 milibar arasında ayarlamak basınç ayarla su banyosu ile kaldırın.
   7. Ürün % 100 tetrahydrofuran (THF) 100 ml dağıtılması ve tarafsız alümina ile kırmızı/turuncu renkli kirleri çıkarmak için Paketli bir sütun ekleyin.
   8. THF döner buharlaştırıcı 40 ° c, rotasyon 120 rpm ve 200-300 milibar arasında ayarlamak basınç ayarla su banyosu ile kaldırın.
   9. İdareli ürün % 100 DCM yılında yeniden geçiyoruz. Tuz bir çökelti formlar varsa, filtre solution'ı 6 mikron gözenek boyutu filtre kağıdı bir Buchner huni kullanarak.
   10. Yavaş yavaş ürün dropwise buz gibi % 100 dietil eter 300 devir / dakikada karıştırarak, 500 mL Pasteur pipet ile ekleyerek çökelti. Dietil eter çökelti kaza değil Eğer daha fazla ile-20 ° C arasında bir patlama koruyucu dondurucuda birkaç saat için soğutulmuş gerekebilir çözüm 4 ° C'de dışında
   11. Dikkatle boşaltmak veya dietil eter zarlarını ürününden MeO-PEG17-Thioacetate kaldırmak için Aspire edin. Ürün gecede bir vakum desiccator ve daha sonra inert gaz-20 ° C'de altında depolamak
3. Diblock kopolimer poly(ethylene glycol) -blok -poly(propylene sulfide)-thiol sentez (PEG₁₇-bl- PPS₃₅-SH, III).
   1. MeO-PEG₁₇-TA (II) 10 mL % 100 dağıtılması susuz DMF argon, oda sıcaklığında su banyosu içinde 400 rpm karıştırma sırasında altında bir Schlenk şişesi içinde.
   2. Sodyum methoxide (metanol 0,5 M çözümde), 1.1 molar eq izin 400 rpm'de 5 dakika karıştırın için ekleyin.
   3. % 100 propilen sülfür, 35 molar eq hızla ekleyin. 400 devir / dakikada 10 dakika karıştırın olanak sağlar.
   4. 400 rpm'de 5 dakika karıştırın için izin, 10 molar eq % 100 buzul asetik asit ekleyin.
   5. DMF döner buharlaştırıcı 60 ° c, rotasyon 120 rpm ve 5-15 milibar arasında ayarlamak basınç ayarla su banyosu ile kaldırın.
   6. % 100 DCM idareli üründe yeniden dağıtılması, 80 ml % 100 metanol, iki 50 mL konik santrifüj tüpleri arasında bölünmüş çökelti.
   7. 7500 x g 4 ° C'de 5 dakika, konik tüpler santrifüj Dış görev süpernatant Aspire edin.
   8. Mağaza ürün, PEG₁₇-bl- PPS₃₅-SH, bir vakum desiccator ve daha sonra inert gaz-20 ° C'de altında bir gecede

2. montaj PEG -bl -PPS Nanocarriers Hand-Powered Flash Nanoprecipitation yolu ile

1. (İsteğe bağlı) Sınırlı sıkışma jetler (CIJ) Mikser sterilize.
   1. Bir biyolojik güvenlik içinde dolap (BSC), mikser ile tüm parçaları içinde 0.1 M NaOH gecede demonte daldırın.
   2. Tekrar CIJ Mikser ve radarı-kilit şırınga kullanarak endotoksin ücretsiz su akışı.
   3. Suyun pH test ve tarafsız olarak pH kayıtları kadar su akmaya devam.
2. PEG₁₇-bl- PPS₃₅çözülür-SH polimer ve hidrofobik kargo bölümünde THF (sıkışma çözüm 1).
   1. PEG₁₇-bl- PPS₃₅20 mg tartmak-SH 1,5 mL tüp içine.
   2. Hidrofobik boyalar (Örneğin,dıı, ICG), eklemek ilaçlar (Örneğin,rapamycin) veya diğer kargo.
      Not: Kargo kuru veya su karışan bir çözücü, tercihen THF içinde çözünmüş olabilir. Kargo THF veya DMF çözünmez ise, polimer çözünür olması pek mümkün olduğu gibi başka bir su karışan solvent, ama idareli kullanılır. Yüklenebilir kargo kargo özellikleri üzerinde bağımlı olan kendisi (Örneğin, molekül ağırlığı, hydrophobicity, steric dikkat edilmesi gereken noktalar) ve bir ayrı ayrı dava-^11,12tarihinde araştırdı.
   3. %100 500 µL eklemek THF polimer ve kargo, şiddetle çözülmeye girdap.
3. Sulu tampon (sıkışma çözüm 2) hidrofilik kargo geçiyoruz. Bunun için gerektiği gibi sulu arabelleği (Örneğin, fosfat tamponlu tuz saf suya, vb) 500 µL polimer veziküller içinde yüklenmesi için hidrofilik kargo geçiyoruz.
4. Arabellek için rezervuar ekleyin.
   1. 2.5 mL (Örneğin, 1 fosfat tamponlu tuz x) tercih sulu arabelleği uygun ölçekli bir rezervuar için (Örneğin, 20 mL cam mercek flakon) ekleyin. Öyle ki çıkış Mikser üzerinden doğrudan havzanın girer rezervuar CIJ mikser altında yerleştirin.
5. Sıkışma çözümleri ayrı 1 mL plastik tek kullanımlık şırınga yükleyin.
6. Çözümleri birbirleriyle aynı anda nanoyapıların oluşturmak ve onları yükü ile yüklemek için vurmak.
   1. Şırınga radarı-kilit bağdaştırıcıları CIJ Mikser üstündeki takın.
   2. Bir tek, pürüzsüz ve hızlı hareket, her iki şırınga aynı anda ve eşit güçle düşürmek.
      Not: birden çok sıralı eklemininden performans varsa, ilk boş bir depo çıkış toplamak.
   3. (İsteğe bağlı) Birden çok eklemininden gerçekleştirin. İki şırınga ve adımları yineleyin 2.6.1-2.6.2 en fazla 4 kez daha arasında bölünmüş doğmakta olan nanostructure çözüm.
   4. Çıkış 2.4.1 içinde hazırlanan sulu tampon dolu Reservoir toplamak ve karıştırma sağlamak için hafifçe karıştırın.
7. Boş kargo ve organik çözücü kaldırın.
   1. (1. seçenek) En az 24 saat en az 2 arabellek değişiklikleri ile uygun bir MW kesme tüp kullanarak nanocarrier formülasyonu sıkışma için kullanılan aynı sulu arabellek ve depo, diyaliz. Bu oda sıcaklığında gerçekleştirilebilir.
      Not: Nanocarriers boru ile MW kesim tarafından muhafaza edilecektir < 100.000 kDa ve potansiyel olarak daha yüksek cutoffs tarafından de tutulabilir. Bu seçenek bir BSC steril tampon kullanarak gerçekleştirilen zaman kısırlık tutar.
   2. (Seçenek 2) Formülasyon bir boyutu dışlama veya 1 x PBS sulu tampon olarak kullanarak desalting/tamponu Satım sütun (Örneğin, Sepharose 6B sütun) aracılığıyla filtre.
      Not: Bu seçenek bir BSC iyice sterilize bir sütunla gerçekleştirildiğinde kısırlık tutar.
   3. (Seçenek 3) Uçucu organik çözücü vakum kuruma gecede kullanarak kaldırın.
   4. (Seçenek 4) Filtre 50-100 kDa filtre bağlı olarak uzak saf unencapsulated kargo molekül ağırlığı 1 saat 15 dakika 20-60 mL/dk akış hızında çalıştırarak bir teğet akış filtrasyon sistemi kullanarak formülasyonu (daha büyük kargo daha uzun alacak).
8. (İsteğe bağlı) Nanocarrier formülasyonu konsantre.
   1. (1. seçenek) Konsantre bir spin yoğunlaştırıcı sistemi kullanarak (Örneğin, spin sütun MW ile kesme > 100.000), kullanılan üreticisi tarafından açıklandığı gibi.
      Not: Nanocarriers spin arasında resuspended gerekebilir ve spin aşağı istediğiniz birim konsantre bir dizi gerektirebilir. Spin konsantrasyon nanocarrier formülasyonları kısırlık azaltabilir.
   2. (Seçenek 2) Vakum kuruma kullanarak ses azaltın.
      Not: Birim değişikliği bu koşullar altında kontrol etmek zordur ve öncesi ve konsantrasyon sonrası Osmolarite korumak için özen göstermelidir.
9. Ay hafta nanocarriers 4 ° C'de depolayın. Sonra depolama, kısaca girdap nanocarrier formülasyonları kullanmadan önce.

3. Nanocarrier formülasyonları karakterize

1. Verimlilik yükleme ölçmek
   1. Kargo floresan veya belirli bir dalga boyu 260-450 nm dışında güçlü emer, floresans/absorbans fluorimeter/spektrofotometre kullanarak ölçmek.
      Not: PEG -bl- PPS şiddetle 260-310 nm emer ve miktar benzer bir dalga boyu emer kargo karmaşık hale 310-450 nm den polymersome formülasyonları emer.
   2. Kargo 260-450 nm aralıkta emer ve hidrofilik ise, PEG -bl- PPS nanoyapıların eşit miktarda % 1 H₂O₂ veya % 1'için formülasyon 25 μL ekleyerek bozabilir Triton X-100 ve daha sonra ayrı ve ayırt Kargo polimer absorbans sulu ile uyumlu bir boyutu dışlama sütun kullanarak yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) üzerinden üzerinden arabelleğe alır (Örneğin, bir Sepharose 6B sütun) ¹¹.
   3. Kargo 260-450 nm aralıkta emer ve THF veya DMF çözünür ise, formülasyon bir 1,5 mL plastik tüp-80 ° C'de 100 μL gecede dondurarak lyophilize. O zaman bir cam vakum kabı ve yer bir lyophilizer üzerine tüpü yerleştirin. Lyophilization oluşur ve daha sonra yeniden ayırma ve HPLC ile algılama önce 50 μL DMF veya THF içinde erimesi için 24 saat süre tanıyın.
2. Ölçü nanocarrier boyut ve Morfoloji
   1. Dinamik ışık saçılma (DL)¹¹ veya analiz¹³ izleme nanopartikül nanocarrier boyutunu ölçmek için kullanın.
      Not: Nanocarriers PEG₁₇-bl- PPS₃₅kurdu-SH beklenen 100-200 nm arasında ortalama bir çapa sahip, bir polydispersity ile < 0,3 dizin için.
   2. Nanocarrier morfoloji kriyojenik transmisyon elektron mikroskobu (cryoTEM)¹⁴kullanarak belirleyin.
      Not: Nanocarriers PEG₁₇-bl- PPS₃₅kurdu-SH polimer veziküller (polymersomes) bir açıkça discernable polimer membran ve büyük ölçüde küresel şekli ile olacağı tahmin ediliyor.
3. (İsteğe bağlı) Endotoksin için test formülasyonları
   1. (1. seçenek) Bir hücre tabanlı tahlil endotoksin, Örneğin, ham mavi hücreleri veya HEK mavi TLR4 hücreler, ( Tablo malzemelerigörmek) durumu için ya bir nitel veya nicel tahlil lipopolisakkaritler (LPS)^{13 için üretici tarafından açıklandığı gibi kullanmak} .
   2. (Seçenek 2) Bir Limulus Amebocyte Lysate (LAL)¹⁵ tahlil seti, üretici tarafından açıklandığı gibi kullanın.

4. FNP için bir yüksek hızlı şırınga pompa imalatı

1. Özel alet bileşenleri imal.
   Not: tüm özel parçaları işleme için 3D modelleri içinde ek materyalleri sağlanır.
   1. ¾" Akrilik levhalar çok katmanlı enstrüman şasi makine ve (bkz: Ek dosyalar 1-5) bir araya.
      Not: Akrilik zavallı kimyasal dayanımı yüksektir. Araç ile sert çözücüler kullanılacak ise, uygulama için uygun görülen bir metal tabanından makine.
   2. 3D baskı parçaları ile polylactide (PLA) plastik ile basılmış.
      1. Şırınga sınırdışı (SE) 2 parça aparat yazdırma: SE Bölüm 1 - taşıma (Şekil 5F, gri bölüm; holding arka FNP blok Ek dosya 6) ve SE Bölüm 2 - açık sınırdışı Kılavuzu (Şekil 5F, siyah bölümleri; Ek dosya 7). Ek dosya 2 şemaları için bkz.
      2. Kızılötesi sensör ayraçlar (Şekil 5I, siyah kutular; Yazdır Ek dosyaları 8 ve 9).
      3. (İsteğe bağlı) Çift şırınga dalgıç ayraç yazdırın.
2. Araç kasa katmanları M5 onaltılık cıvata birlikte bağlayın ve Kauçuk ayak tabanına ekleyin.
3. Bir Tek platalı bilgisayar Raspbian GNU/Linux 8.0 (Jessie) işletim sistemi (Linux Debian dayalı) ile yapılandırın.
   Not: yazılım aracı çalıştırmak için istek üzerine mevcuttur. Araç yazılım kaynak kodu elde edilebilir üzerinde rica. Sıkıştırılmış dosyayı aldıktan sonra Benioku dosyasında belirtilen tüm bağımlılıkları indirin. Bu bilgisayar yazılımı alet çalışma, temel çalışma parametreleri (motor hız, yön, vb) dahil olmak üzere üzerinde kontrol sağlayan basit grafik kullanıcı arabirimini içerir. Kullanıcılar varolan kaynak kodu üzerinde genişletmek için teşvik edilir ve kendi deneyleri programı özel modülleri için özel olarak tasarlanmış kullanın. Tüm yazılım Python 2.7.12 kullanılarak yazılmıştır ve şu anda Python 3 ile uyumlu değildir. RPi, PicoBorgRev, antep ve çoklu işlem modülleri kullanılmaktadır. Benioku dosyası yazılım dağıtım lisansı ile ilgili ayrıntılı bilgi içerir.
4. 24 V DC motor (Şekil 5A) ve hassas slayt (4,5"(114.3 mm) kontur; kurşun 1,27 mm vida) fırça (Şekil 5C) yükleyin.
   Not: burada kullanılan 24 V DC motor bir RPM_Maksimum, vardır ben_maxve 4,252 RPM, 4.83 A, tam yük tork ve ~0.2 N * m, anılan sıraya göre.
   1. (İsteğe bağlı) Doldurma işlemi sırasında titreşimi azaltacak motor altında yerleştirin.
      Not: Bir 2-3 mm kalın lastik pedi enstrüman Bankası motorlu obüs boyutları uygun kesilmiş önerilir.
   2. Hassas slayt enstrüman tabanına monte.
      1. Dişli çubuk geçici olarak kaldırın.
      2. İki #8-32 düz makine vidaları kullanarak slayt bağlayın.
   3. Mount DC motor vida ışın kaplin (1-1/4" uzunluk) 6/16" ve 1/4" çapında içeren kullanarak hassas slayda sıkıyor.
      Not: enstrüman taban katmanları makine için kullanılan akrilik kalınlığına bağlı olarak, dolgu verileri motor ve hassas slayt milleri seviye için gerekli olabilir.
5. Sınırdışı platformu metal plakalar ve L şeklindeki köşe parantez (Şekil 5 d) topla. Yana kayar platform (dişli çubuk için ekli) bölge: erime çizgisinin platforma monte #6-32 vidaları kullanarak. Hassas slayt şematik montaj kısıtlamaları ile ilgili ayrıntılı bilgi için üretici tarafından sağlanan bakın.
6. Şırınga sınırdışı sistem kurulumu bir araya getirin.
   1. Doğrusal hareket Yastık bloklar (montaj platformlar + lineer hareket taşıyan) (paralel çelik raylar kolayca Şekil 5' te görülebilir) M8 krom kaplama paslanmaz çelik raylar üzerine ekleyin.
   2. İş parçacığı Raylar doğrusal şaft aracılığıyla Kılavuzu/destek ve raylar kilitleyin. Demiryolu başına üç Kılavuzlar'ı kullanın. Mount SE parçalar 1 ve 2 yastık bloklar M4 makine vidaları kullanarak üzerine.
   3. Gevşek SE parçalar 1 ve 2 onaltılık M8 civata ile katılın. SE Bölüm 1 ve 2 ile güvenliği sağlanan her cıvata kapsayan helisel baskı yayları arasındaki iki içe dönük naylon burçlar (bkz. Şekil 5F) arasındaki boşluğu yapılandırın. Bu burçlar SE Bölüm 1 ve SE Bölüm 2 dış bağlayın.
7. Tel devre (bkz. Şekil 6 çekirdek bağlantı şeması için)
   1. I2C/SDA, 3,3 V, motor kontrolörü bağlayın ve GND pimleri tek tahta bilgisayar.
   2. DC motor terminalleri M - ve M + motor kontrolörü kurulu bloklarını bağlayın. 24 V, 2.5 A güç kaynağı (Şekil 5B) motor kontrolörü V + ve GND bloklarını bağlanmak (denetleyici nihai tasarım basit elektronik kutusunda kaplı, Şekil 5 Hbakınız).
   3. Motor kontrol kurulu 3V3 ve 5V pin tek tahta bilgisayar ilgili pimlerinden bağlayın. Motor kontrolörü ile SDA ve SCL pim pim 3 ve 5 / tek tahta bilgisayar için sırasıyla bağlayın.
      Not: Motor denetleyicisi aracılığıyla tek tahta bilgisayar üzerinden DC motor için komutlar verilir. Motor hızı darbe genişlik modülasyonu ile motor terminaller arasında voltaj düzenleyen tarafından kontrol edilir. En fazla geçerli 24 V DC motor ile çalışan bu kurulumunda (tam yükleme amper: 4.83 A) 2,5 bir 24 V güç kaynağı ile sınırlıdır. Bu motor devre bir normalde kapalı (NC) acil durum durdurma (5J rakam) kablolu tavsiye edilir. Bunu yaparken bir temel acil kapatma işlemi etkinleştirmek için motor devre bozmak için bir yol sağlar.
   4. Ön ve arka kızılötesi yakınlık duyumsal (dijital mesafe sensörleri, Şekil 5I) sırasıyla 24 ve 23, RPi GPIO pin bağlayın.
      1. Rota Sensör kablo kanallarını enstrüman Bankası'aracılığıyla.
         Not: Temassız sonu-ışın hareket sensörleri bir algılama mesafesi 2-10 cm ile IR algılayıcılar.
      2. 4.7.4.2 kablolu IR sensörleri 3D baskılı kızılötesi sensör ayraçlar (Şekil 5I, siyah kasa) snap ve enstrüman Bankası monte. Küme ayracı doğru olarak ayarlandığında, sensör yüzü dışa doğru 14 mm x 7 mm açma küme ayracı dikdörtgen çıkıntı.
         Not: Bu sensör diş telleri geçici olarak Velcro veya bir yapıştırıcı kullanarak monte edilebilir (geçici montaj uygun şekilde ayarlamak ve IR sensör yerleşimi optimize etmek yararlı). Alternatif olarak, kalıcı enstrüman Bankası küçük kılavuz delik delme ve ayraçlar M2 vida ile güvenli hale getirme tarafından monte.
   5. 7" dokunmatik LCD ekran 5V, GND, bağlanır ve seri arayüz (DSI) iğne tek tahta bilgisayar görüntüler. 7" RPi ve montaj görüntü LCD Şekil 5Giçinde gösterilir.

5. Polymersomes özel yapım yüksek hızlı şırınga pompa kullanarak FNP ile imal

1. (1. seçenek) Auto koşmak modunu kullanın.
   1. Otomatik Çalıştır ı seçerek projeyi seçin. Sistem kullanıcıların motoru otomatik olarak hassas slayt başına şırınga sınırdışı platformu konumlandırmak için izin ister. Yolun önünde ve arkasında metal plakayı devam etmeden önce açık olduğundan emin olun.
   2. 1 mL plastik şırıngaların 2.5 bölümünde açıklandığı gibi ve mount şırınga dişi radarı konektörler CIJ Mikser üzerine yükleyin. Yük CIJ Mikser (şırınga ile bağlı) içine arka sınırdışı taşıma açılış dikdörtgen (bkz. Şekil 5E).
   3. İstediğiniz motor hızını ayarla (birim: devir/dakika) GUI kaydırıcıyı kullanarak (dikkat edilmesi gerekenler için aşağıdaki nota bakın). En iyi motor hızı belirli pompa ve kurulum bağlıdır ama bir akış hızı en az 1 mL/s burada sağlanan CIJ karıştırıcı kanal boyutları için emin olmalısınız.
      Not: ayar akış hızı ise şunları göz önünde bulundurun. Dikey-elle işletilen FNP yapılandırmada, şırınga ~ 1 mL oranında Reaktanları ihraç / s, ama ne zaman-ebilmek var olmak son derece değişken tahrik el. Bu sadece hangi Kullanıcı şırınga pistonu gelişmeler oranı tarafından kontrol edilir şırınga varil üzerinden akışını oranıdır. 1 mL/s oranı Not çıkış debisi daha küçük çaplı meme atıfta değil . Belgili tanımlık yukarıda belirtilen kanal boyutları, ~ 1 mL/s çalkantılı karıştırma¹⁰için uygun bir Reynold numarası sağlamak için tutulan. Kanal çapı buna göre çalkantılı koşulları destekler bir Reynold sayısı korumak için ayarlanır sürece farklı akış oranları kullanılabilir. Şırınga itici bir yüksek-tamlık alüminyum slayt boyunca hamle 24 V DC motor fırçalanmış birleştiğinde dikey bir metal plaka tarafından ileri seviyededir. Bu yapılandırmada, bir dizi faktöre, (1) en yüksek motor hızı (4,252 devir/dakika) dahil olmak üzere en fazla varil akış hızı etkilenir ve birleştirilmiştir hassas slayt (1,27 mm) motoru vida kurşun Milli Küçük (2) motor tork (~0.2 N * m tam-l OAD tork), hangi içine sıvı giriş (3) geri dönüş basıncı katkılarıyla akışı ve CIJ Mikser ve (4) kullanılan şırınga gücünü çıkmak için direnci aşmak için gereklidir (kullanıcılar şırınga üzerinde hareket güçlerinin dikkatli olmalı ve şırınga ile kullanın uygun gücü). (2) ne zaman akışı artan, nokta ile ilgili oranı yeterli tork motor geri dönüş basıncı artırarak altında sabit sınırdışı koruyarak durdurduklarını önlemek için gereklidir. Namlu akış oranları-varil akışı göstermek için oranı söz konusu sistemi elde etmek, durumda düşünün nerede FNP iki tane mililitre şırınga yüklü Reaktanları kullanılarak gerçekleştirilir. 1 mL/s akışı elde etmek için oranı namlu, motor ile metal plaka dalgıç uzunluğu (tipik bir mL şırınga için ~ 68 mm) tarafından tanımlanan bir saniyede mesafe yükseltmelisiniz. Hassas slayt 1,27 mm vida kurşun, o 4,252 rpm'de çalışan bir DC motor platform kadar ilerleyen bir kapasitesine sahip olduğunu aşağıdaki sağlanan ~ 90 mm/s (71 devir/s * 1,27 mm/rev). Bu ~1.3 mL/s, 1 mL/s hedef hızı aşan bir varil akış hızı için karşılık gelir.
   4. Araç çalıştırılmadan önce yolunu emin olmak için sistem kontrol engelleri açık bir platformdur ve ön ve arka IR yakınlık dedektörleri (IR algılayıcılar küçük siyah kutular hassas slayt yakınındaki engelleri açık olan terminalleri; Şekil 5Ibkz.). Ayrıca CIJ Mikser Kılcal boru prizinden uygun toplama konteyner içine yönlendirilir emin olun (ex: cam kabı, vb).
   5. Reaktanları şırıngaları ve CIJ Mikser kovmak için yazılım arayüzü Çalıştır düğmesine basın.
2. (Seçenek 2) El ile çalıştırma modu kullan. Otomatik çalıştırma modu yönergeleri yukarıdaki bakın ve aşağıdaki değişikliği 5.1.5 adım Not: basın Çalıştır (platform gelişmeler bir baskı olay ve motor yanıtYani, tamamlanması ile sürekli olarak sıkışık belgili tanımlık ileri düğme bir yayın üzerinde olay-ecek durmak).
3. (Seçenek 3) El ile platform modu konumlandırma kullanın; Bu tarz bırakmak kullanıcı düşük hızda (% 20 güç) motor çalıştırarak platform konumlandırmak yanıt olarak yazılım arayüzü üzerinde ileri ve geri düğmeleri.

Representative Results

Burada, biz vivo içinde fare ve insan dışı primat Yönetim^11,13için güvenli Hidrofilik ve hidrofobik kargo yükleme kapasitesine sahip nanocarriers formülasyonu için basit bir protokol sundu. Mekanik kontrollü sıkışma CIJ Mikser çözümleri için özel bir araç imalatı için bir açıklama ile birlikte temsilcisi sonuçlarımız kullanılan polimer sentezi için detaylı bir protokol de dahil ettik. Şekil 1 PEG₁₇-bl- PPS₃₅üretmek için gerçekleştirilen sentez adımlara genel bir bakış sağlar-SH, diblock kopolimer polymersome nanocarriers kendi kendine montajı için kullanılır. PEG-bl-PPS polymersomes tedavi ve/veya görüntüleme ajanlar ile yüklenen montaj için FNP protokol genel bakış Şekil 2' de diagramed. Polimer dinamik ışık saçılma (DL) tarafından doğrulanmış ve kriyojenik olabilen bir CIJ karıştırıcı (şematik gösterilen Şekil 3a, başlangıçta açıklandığı ¹⁰) monodisperse polymersomes toplam morfoloji olarak oluşturmak üzere gerilmelere Transmisyon Elektron mikroskobu (cryoTEM) (Şekil 3b-3 c). FNP tarafından kurulan Polymersomes daha küçük (şekil 3d) ve daha fazla monodisperse (Şekil 3e) sonraki eklemininden ile olmak ve Hidrofilik ve hidrofobik kargo ile yüklenebilir (Örneğin, lipofilik boya, küçük molekül yaptım tedavi, protein vb.; Şekil 4a). Yukarıda açıklanan steril koşullarda oluşan Nanocarriers endotoksin ham mavi ve LAL endotoksin deneyleri tarafından ücretsiz ve böylece in vitro ve in vivo kullanma (Şekil 4b, verileri gösterilmez) geniş bir aralığı için uygun bulunmaktadır.

Son olarak, biz tasarlanmış ve inşa bir enstrüman için mekanik-denetim akış hızı ve elde edilen sıkışma çözümleri CIJ karıştırıcı (Şekil 5). Piyasada bulunan şırınga pompalar FNP için gerekli akış oranları elde edemez gibi bu enstrüman oluşturulması önemlidir. Özel değişiklikler dışında ticari olarak mevcut şırınga pompalar onların kullanımı güvenilir bir şekilde sıvı yavaş ve istikrarlı bir şekilde dağıtmak için tasarlanmış olan düşük hızlı step motorlar tarafından uygulanan hız sınırlamaları var. Bizim araç kontrollerimiz sınırdışı ticari şırınga pompaları bulundu yavaş Step motorlar daha hassas slayt 24 V kadar büyük hızları (4,252 devir/dakika) elde edebilirsiniz DC Motorlu fırça kontrol altında tarafından denetlenir. Özel yazılım çalıştıran bir tek tahta bilgisayar alet (Şekil 6) çalıştırmak için kullanılır. 2D çizimler parçaları 3D modellerinin yanı sıra sağlanmıştır. Tüm çizimler ve modelleri araştırma topluluğu için son derece erişilebilir olduklarından emin olmak için FreeCAD (açık kaynak parametrik 3 boyutlu CAD modelleme yazılımı) oluşturulmuş. Araç çalıştırmak için yazılım Python 2.7.12, nanocarriers (büyüklük, morfoloji, vb) congruous üretimini sağlamak için özel FNP yordamlar hızla gelişmesi için izin ile yazılmıştır. Araç çalıştırmak için yazılım-ecek edilmek elde edilebilir üzerinde rica. Kullanıcıların yazılımı şu anda Python 3 ile uyumlu değildir dikkat etmelisiniz; Ancak, bu güncelleştirmeleri gelecekte değişebilir. Kontrollerimiz sınırdışı oranı kontrol ederek, bu alet el-operasyondaki insan hatası değişken ortadan kaldırır.

Şekil 1. PEG₁₇- bl-PPS₃₆sentezi için sentezi şeması-SH. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 2. Üretim polymersomes üzerinden FNP el temelli CIJ karıştırıcı. Diyagramı FNP kullanarak polymersomes oluşum. PEG-bl-PPS polimer hidrofobik kargo ile birlikte organik çözücü içinde çözünmüş ve sulu solvent çözünmüş hidrofilik kargo ile karşı gerilmelere. Hızlı karıştırma CIJ karıştırıcı içinde oluşur ve sızma olması art arda gerilmelere veya seyreltme sulu solvent Reservoir oluşumu sürecinde tamamlamak için izin. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 3. FNP tarafından kurulan polymersomes karakterizasyonu. (a) tasarım şematik Bu çalışmada kullanılan CIJ mikser. Tüm ölçüler milimetre vardır. (b) DLS tarafından ölçülen 1 ve 5 eklemininden sonra FNP tarafından kurulan polymersomes dağılımı boyutu. n = 6 formülasyonları, örnekleri ortalaması Grafiği çizilecek. (c) örnek cryoTEM görüntüleri polymersomes oluşan 1 ve 5 eklemininden CIJ mikser aracılığıyla ölçekli sonra çubuk 100 = nm. Çapı (d) ve polydispersity (e) FNP DLS tarafından ölçülen, oluşturduğu polymersomes dizin. Karşılaştırma için polymersomes kurdu (TF-E) ile ince film rehidrasyon tarafından veya (TF-NE) sonraki ekstrüzyon, olmadan ve solvent dağılım (SD) tarafından kurulan vardı de ölçülen, n = 3, hata çubukları temsil eden standart sapma. (C)- Allen ve ark. izni ile çekilen(e) subfigures ¹¹. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 4. Verimlilik ve endotoksin karakterizasyonu yükleniyor. (a) küçük ve polymersomes, n içinde oluştururlar verimliliğini yükleme = 3, hata çubukları temsil eden standart sapma. (b) ham mavi LPS tahlil steril FNP tarafından kurulan polymersomes, n = 6, hata çubukları temsil eden standart sapma. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 5. Çözüm sıkışma CIJ karıştırıcı mekanik kontrol aleti. (a) 24 V DC Motor fırçaladı. (b) güç kaynağı (24 V, 2,5 bir). (c) 4,5" kontur hassas slayt 1,27 mm vida kurşun (vida ışın kaplin tarafından motor miline bağlı) ile. (d) sınırdışı platformu dikdörtgen metal plakalar üzerinden inşa ve L şeklindeki köşe parantez. (e) CIJ karıştırıcı. (f) sınırdışı taşıma. (g) tek tahta bilgisayar ve 7" dokunmatik ekran. (h) mMotor kontrol kurulu plastik gövde (83 x 53 x 35 mm) kaplı. (i) IR sensörler (temassız sonu-ışın hareket sensörleri). (j) acil stop butonu (NC). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 6. Çekirdek bağlantı şeması. Tek tahta bilgisayar, motor kontrolörü ve IR sensörleri arasındaki birincil bağlantıları görüntülenir. Bu bileşen gerekli olmayan olduğu gibi LCD dokunmatik ekran bağlantıları burada, görüntülenmez (kullanıcılar opt bir standart bilgisayar monitörü'nü kullanın ve yerine mouse). Görüntülenen yapılandırmada, 24 V motor güç kaynağı ve tek tahta bilgisayar güç kaynağı ayrı olduğunu unutmayın. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Discussion

Biz polymersomes PEG₁₇-bl- PPS₃₅kullanarak hızlı imalatı için ayrıntılı talimatlar hazırladık-SH diblock kopolimer. Veziküler polymersomes PEG Hidrofilik ve hidrofobik PPS blok moleküler ağırlık bu oranında monte birincil toplama morfolojisi vardır. Ne zaman birden çok kez gerilmelere, onlar bir çapa sahip ve ince film hidrasyon ile 200 nm membran sonra kalıptan çekilmiş polymersomes eşleşen polydispersity kurdu. Bu iletişim kuralı böylece monodisperse polymersome nanocarriers imalat sırasında ek ekstrüzyon adımları gereksinimini ortadan kaldırır. Polymersomes oluşan üzerinden FNP yüklemek hem hidrofilik hem de hidrofobik kargo ve bu moleküller-formülasyonu sürecini¹¹bioactivity korumak. Ek protokolleri kısırlık gerektiğinde, biyokimyasal ve immünolojik deneyleri için uygun hem de güvenli Yönetim içinde vivo endotoksin içermeyen ve bu nedenle polymersome formülasyonları oluşumunu sağlayan emin olmak için açıklanmıştır . Elle işletilen CIJ Mikser kurmak kolaydır ve rahatlık--in-kullanma kullanıcıya sağlar, ancak Kullanıcı değişkenlik nedeniyle olası kalite kontrol sorunlarını tanıtır. Akış tutarlılık sağlamak için bir enstrüman ulaşmak ve tekrarlanarak karşılaştırılabilir bir debi Bakımı yeteneğine oluşturmak istedi. Önemlisi, yukarıda kanal boyutları, belirtilen ticari şırınga pompalar yeterince yüksek akış oranları ulaşamayacağını (~ 1 mL/s) nedeniyle düşük hızlı step motorlar ile donatılmış. Bu konu ile mücadele ve akış hızı üzerinde daha fazla kontrol göze için yüksek hızlı şırınga pompa imalatı FNP için tanımlanmıştır. Açık kaynak ve sistem işletim sistemi ve kod için kolayca özelleştirilebilir yazılım kullanmaya özen.

Alternatif akış oranları üzerinde kontrol nanocarrier formülasyonu ince ayar yapmak için potansiyel sunmaktadır ve çeşitli nanocarrier türleri morfoloji Meclisi daha fazla keşfetmek için fırsatlar sağlar. Reynolds sayısı ve karıştırma zamanı karşılık gelen önceden gösterildi FNP⁹yolu ile oluşan katı çekirdekli nanocarriers boyutuna etkisi için ama polymersomes oluşumu olurdu ne gibi bir etkisi açık değildir. Bu Şu anki soruşturmanın bir konudur, geçerli önerilen oranı ile gerçekleştirilen yaklaşık 1 mL/s 2 mL/s, temsilcisi sonuçları ile 0,5 olmak. Akış hızı üzerinde kontrol artırmak için daha da, bu şırınga pompa motoru üzerinde gerçek zamanlı kontrol ile Linux tabanlı işletim sistemi değiştirmek için gerekli olabilir.

Akış hızını ayarlama bir yana, birkaç bu FNP iletişim kuralı değiştirilebilir şekilde Suit ihtiyaçlarınıza veya uygulamalar vardır. Polimer daha küçük veya daha büyük miktarda kullanılabilir. Konsantrasyonu 1 mg/mL olarak düşük ve yüksek olarak 100 mg/mL olarak istikrarlı nanocarriers oluşturmak için kullanılmaktadır. Basınç tutarlı uygulanması sırasında FNP el temelli birimler 1 mL şırınga başına daha büyük, daha zor olmasına rağmen daha büyük birimleri sıkışma için kullanılabilir. Göl hacmi de değiştirilebilir. Final organik: 1:3 nanocarriers eksik oluşumuna neden olabilir ve bu nedenle değil azalma göl hacmi nanocarriers oluşumu teyit olmadan özen gösterilmelidir daha büyük sulu çözelti oranları. Toplama genellikle polimer: kargo molar oranını artırarak hafifletti hidrofobik kargo yüksek konsantrasyonda yüklenmeye çalışılıyor ortaya çıkabilir.

Ek bir konuyu açmak için keşif FNP polymersome oluşumu PEG -blötesinde diğer polimer sistemleri içerecek şekilde daha fazla genişleme-PPS Gerçekten de, diğer sistemleri daha önce micelles ve katı çekirdekli uyuşturucu nanocarriers^16,17oluşumunda kullanılmıştır. Ancak, öyle bir oluşumu polymersomes yolu ile bu diğer polimer sistemleri kullanarak FNP için yol açabilir parametre kümesi ise belli değil. Keşfetmek için potansiyel değişkenlerin sayısını göz önüne alındığında, bu diğer polimerler polymersomes veya diğer yumuşak nanoarchitectures üzerinden FNP akış hızı, sıcaklık, çözücü seçimi gibi düzeltilmiş deneysel parametrelerle oluşabilir tamamen mümkündür ve Polimer konsantrasyon.

Olarak tüm formülasyonu teknikleri ile sınırlamalar vardır FNP ve belirli uygulamaları savunulamaz sağlayabilir kısıtlamaları. Hızlı karıştırma işlemi hangi birçok diblock kopolimerler, Örneğin, diklorometan ve kloroform dağılması için kullanılan bazı yaygın solvent kullanımını önleyen organik ve sulu çözücüler karışan, olmasını gerektirir. Eğer onlar bir su karışan organik çözücü içinde çözünmüş mümkün değildir bazı polimerler bu nedenle FNP ile uyumsuz oluşturulabilir. Burada açıklanan FNP Protokolü organik payloads biyoaktif bazı protein gibi organik çözücü yüksek konsantrasyonda duyarlı etkinliğini azaltabilir sulu çözücü için 1:1 oranında kullanır. Alkalen fosfataz polymersomes içinde yükleme FNP¹¹tarafından takip enzimatik aktivite en az düzeyde etkisi daha önce bulduğumuz gibi bioactivity üzerine etkileri protein üzerinde bağlıdır unutulmamalıdır. Çoklu giriş girdap mikserler¹⁸ CIJ mikserler bu bağlamı için çok yönlü bir alternatif sunan sulu solventler organik oranı üzerinde ek denetim sağlayan bir daha pahalı ama daha fazla özelleştirilebilir FNP platform vardır.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
CanaKit Raspberry Pi 3 Ultimate Starter Kit - 32 GB Edition	CanaKit	UPC 682710991511
Linear Bearing Platform (Small) - 8mm Diameter	Adafruit	1179
Linear Motion 8 mm Shaft, 330 mm Length, Chrome Plated, Case Hardened, Metric	VXB	kit11868
Linear Rail Shaft Guide/Support - 8 mm Diameter	Adafruit	1182
Manual-Position Precision Slide 4.5" Stroke, 15 lb load capacity	McMaster-Carr	5236A16
MTPM-P10-1JK43 Iron Horse DC motor	Iron Horse	MTPM-P10-1JK43
Official Raspberry Pi Foundation 7" Touchscreen LCD Display	Raspberry Pi	B0153R2A9I (ASIN)
PicoBorg Reverse - Advanced motor control for Raspberry Pi	PiBorg	BURN-0011
Pololu Carrier with Sharp GP2Y0D810Z0F Digital Distance Sensor 10cm	Pololu	1134
Ruland PSR16-5-4-A Set Screw Beam Coupling, Polished Aluminum, Inch, 5/16" Bore A Diameter, 1/4" Bore B Diameter, 1" OD, 1-1/4" Length, 44 lb-in Nominal Torque	Ruland	PSR16-5-4-A
Polyethylene glycol monomethyl ether	Sigma Aldrich	202495
Methanesulfonyl chloride	Sigma Aldrich	471259
Toluene	Sigma Aldrich	179418
Toluene, Anhydrous	Sigma Aldrich	244511
Triethylamine	Sigma Aldrich	T0886
Celite 545 (Diatomaceous Earth)	Sigma Aldrich	419931
Dichloromethane	Sigma Aldrich	320269
Diethyl ether	Sigma Aldrich	296082
N,N-Dimethylformamide, anhydrous	Sigma Aldrich	227056
Potassium carbonate	Sigma Aldrich	791776
Thioacetic acid	Sigma Aldrich	T30805
Tetrahydrofuran	Sigma Aldrich	360589
Aluminum oxide, neutral, activated, Brockmann I	Sigma Aldrich	199974
Sodium methoxide solution, 0.5 M in methanol	Sigma Aldrich	403067
Propylene sulfide	Sigma Aldrich	P53209
Acetic acid	Sigma Aldrich	A6283
Methanol	Sigma Aldrich	320390
Sodium hydroxide solution 1.0 N	Sigma Aldrich	S2770
Endotoxin-free water	GE Healthcare Life Sciences	SH30529.01
Paper pH strips	Fisher Scientific	13-640-508
Endotoxin-free Dulbecco's PBS	Sigma Aldrich	TMS-012
Borosilicate glass scintillation vials	Fisher Scientific	03-337-4
1 mL all-plastic syringe	Thermo Scientific	S75101
Sepharose CL-6B	Sigma Aldrich	CL6B200
Liquid chromatography column	Sigma Aldrich	C4169
CIJ mixer, HDPE	Custom
Triton X-100	Sigma Aldrich	X100
Hydrogen peroxide solution	Sigma Aldrich	216763
HEK-Blue hTLR4	InvivoGen	hkb-htlr4
RAW-Blue Cells	InvivoGen	raw-sp
QUANTI-Blue	InvivoGen	rep-qb1
PYROGENT Gel Clot LAL Assays	Lonza	N183-125