Summary
Яичников культур тканей могут использоваться в качестве модели развития, овуляции и фолликул атрезии фолликулов и указать механизмы регулирования динамических процессов, яичников.
Abstract
Периодически млекопитающих женщины овуляция почти постоянное количество яйцеклеток во время каждого цикла эструса. Для поддержания таких регулярность и периодичности, регулирование происходит на уровне гипоталамо гипофизарно гонадной оси и на развитии фолликулов в яичниках. Несмотря на активные исследования механизмы развития фолликула не ясны из-за нескольких этапов от активации неактивных первичных фолликулов к овуляции и из-за сложности правил, который отличается на каждом этапе фолликулярной. Для изучения механизмов развития фолликула и динамика фолликулов на протяжении всего цикла эструса, мы разработали модель яичника культуры ткани мыши, который может быть использован для наблюдения развития фолликула с помощью микроскопа. Разработки систематической фолликула, периодических овуляции и атрезии фолликулов могут быть воспроизведены в модели искусственного яичника, и в условиях культуры можно модулировать экспериментально. Здесь мы продемонстрировать полезность этого метода в изучении механизмов регулирования развития фолликула и других явлений, яичников.
Introduction
Женщины мыши яичники содержат несколько тысяч фолликулов1, и периодические овуляции созревает примерно десять яйцеклеток на каждый цикл эструса. Фолликулов, подразделяются на несколько стадий развития: Братство пресвитериан, начальное, среднее, полостная и Graafian фолликулов, в зависимости от формы гранулезы сотовой слоя, окружающих каждый ооцитов. Большинство первичных фолликулов неактивны, и некоторые из них активизируются и превращаются в первичных фолликулов на каждый цикл эструса2. После этапа вторичных фолликулов развития фолликула регулируется главным образом гонадотропинов, фолликулярная стимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ). Однако изначальное и первичных фолликулов развития независимо от гонадотропина, и регулятивных механизмов, которые регулируют эти этапы остаются плохо inderstood3,4,5. Помимо факторов роста и гормонов изначальное и первичных фолликулов регулируется взаимодействием фолликулов6,7. Таким образом мы выступали анализ динамики фолликула в мыши тканей яичника и расследование связанных регулирующих механизмов, с помощью яичников культур тканей8,9,10.
Здесь мы представляем два методы модели яичников культуры ткани. Первый используется для анализа развития фолликула путем измерения фолликулярной областей, а вторая используется для изучения механизм регулирования во время раннего развития фолликула от изначального вторичных фолликулов сцену с трансгенных мышей. Для анализа развития фолликула мы главным образом используется яичников 4 - неделя старый самок мышей, потому что они позволяют легко визуализации фолликулов. Чтобы побудить периодических овуляции и модели в естественных условиях развития фолликула, мы воспроизводится LH всплеск и наблюдаемых овуляции, атрезии фолликулов и секрецию эстрадиола в условиях культуры ткани. Образы культивировали яичников были захвачены, и отслеживания изменений в области фолликулярной были проанализированы процессы развития фолликула. Однако в светлых местах микроскопии анализа, неясным различие между изначальным и начале первичных фолликулов. Таким образом, мы разработали метод для обнаружения малых фолликулов и различие между изначального, первичной, и вторичных фолликулов в культивированный яичников тканей с помощью Oogenesin1 (Oog1) pro3. 9 и яичников трансгенных мышей R26-H2B-mCherry дней 0 и 4 после рождения11. Oog1 выражение, обнаруживаемая в яйцеклеток после вступления в мейоз и постепенно увеличивается с развития фолликула, позволяя наблюдения за переход от изначального первичных фолликулов с помощью промежуток времени изображения культивировали завязи ткани11 ,12. Хотя Морфологические методы были использованы для изучения факторов, которые активируют изначальное спящих фолликулов13,14,,1516, является развитие физиологической фолликулов в яичниках трудно обнаружить, и воздействия различных факторов остаются uncharacterized. Нынешние методы культуры были разработаны для устранения этого недостатка в реальном времени анализ целевых факторов.
В настоящем исследовании мы отслеживаются фолликулярной развития методом покадровой изображений и охарактеризовал процесс развития фолликула. Наши новые методы предлагают беспрецедентный инструмент для изучения физиологии яичников.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Мышей были размещены в экологически контролируемой комнате в 23 ±1 ° C с 12 h свет/12 h темные циклом. Уход за животными протоколы и эксперименты были проведены в соответствии с руководящими принципами для экспериментов животных медицинского университета Айти и были одобрены действующий Комитет использование и уход за животными.
1. Подготовка питательной среды и блюда
- Для подготовки основных питательной среды, добавьте плода бычьим сывороточным (ФБС, 5% v/v), ФСГ (100 mIU/мл), LH (10 му/мл) и пенициллин стрептомицином (пенициллин, 100 ед/мл; этамбутол, 100 мг/мл) для минимальных основных средних альфа (MEM-альфа) и перемешать в 50 мл трубки.
Примечание: Общий объем требуемых культуры средств массовой информации варьируются от экспериментов, но 1 мл питательной среды обычно достаточно для 3,5 см стекло дно культуры блюд. - Налейте 1 мл аликвоты смешанные культуры среды в 3,5 см стекло дно культуры блюда и задать место 30 мм ячейку культуры вставок в блюда. Предварительно теплой СМИ и блюда в инкубаторе (5% CO2 и 37 ° C).
2. подготовка ткани яичников
- Предварительно теплой фосфат буфер солевой раствор (PBS) (−) и MEM-альфа, содержащих 5% FBS, 100 ед/мл пенициллина и стрептомицина 100 мг/мл в инкубатор (5% CO2 и 37 ° C).
Примечание: Около 3 мл аликвоты PBS (−) в яичнике достаточно для использования во время завязи вскрытия, и 1 мл аликвоты MEM-альфа, являются достаточными для переходных хранения одного яичников блюдах 3,5 см. -
Акцизный яичников с 4 - неделя старый самок мышей ICR (названный после Институт исследования рака) и отделки тканей, окружающих яичника, используя ножницы и щипчики под стереоскопическим микроскопом. Заповедник удалены яичники в среде культуры (см. шаг 2.1) до использования.
- Место одного яичников на фильтровальной бумаги, смоченной в предварительно разогретую PBS (−) (см. шаг 2.1) и нарезать на 4 части, используя микротом лезвия под стереоскопическим микроскопом.
Примечание: Яичники 4 - неделя старый мышей МГП являются около 2 мм в диаметре. Количество штук зависит от размера яичников; Однако, около 500 мкм толстые куски позволяют надлежащего фолликула наблюдений (в части толще, чем 500 мм, уменьшается ткани прозрачности; в куски тоньше, чем 500 мм, разбиваются и потерял много полостная фолликулов). - После вскрытия поместите нарезанный завязи образцов в подогретым культуры среднего блюдах 3,5 см (см. шаг 2.1).
- Место одного яичников на фильтровальной бумаги, смоченной в предварительно разогретую PBS (−) (см. шаг 2.1) и нарезать на 4 части, используя микротом лезвия под стереоскопическим микроскопом.
3. яичников Культура ткани
- Падение приблизительно 0.5 мкл питательной среды на кусочки тканей яичника на вкладыше культуры клеток где тканей яичника будет задать с помощью микропипеткой.
- Поместите каждый нарезанный образец в каплю питательной среды на вставки культуры клеток с помощью пинцета.
- Культура тканей яичника в 5% CO2 при 37 ° C.
- Замените питательной среды свежие подогретым среднего каждые 2 дня.
Примечание: Расписание для среднего изменения культуры секции завязи от 4 - неделя старый ICR мышей представлена на рисунке 1.- Чтобы воспроизвести всплеск LH, относиться к культивировали 4 - неделя старый ICR мышей яичников с носитель, содержащий 100 му/мл ФСГ и ЛГ для 12 h каждые 4 дня (рис. 1).
4. Микроскоп изображения культивировали яичников
- Начать изображений культивировали яичников после 1 день когда осесть на вставки культуры клеток ткани и выполнять анализ конфокальный или инвертированный микроскоп интервалы 24 h разрешить достаточного роста фолликула между моментами времени.
Примечание: Confocal микроскопии превосходит Перевернутый микроскопии для наблюдения фолликулов в яичниках весь искусственный.
5. промежуток времени визуализации культивировали яичников
-
Оптимизируйте промежуток времени визуализации условия, включая лазерной интенсивности и длительности выдержки, для визуализации системы (таблица 1).
- Выберите парные яичники образцов из одного мышей для использования в качестве лечения и управления группами. Различаются лазерного света и времени экспозиции для достижения лучших изображений (Таблица 1).
- Сравните рост фолликулов при условии каждой культуры путем измерения фолликул областей изображения образцов управления интервалом 24 ч и в промежуток времени изображений образцов (см. шаг 6). Одновременно подсчитать количество овуляцией яйцеклеток в каждом яичнике и выбрать оптимальный промежуток времени визуализации условия.
- Захват изображения интервалом 30 мин, с использованием покадровой тепловизионные системы при определенных условиях (Таблица 1).
6. фолликула роста анализ
-
Для анализа развития фолликула, измерения фолликул областей в захваченные изображения с помощью ImageJ программного обеспечения (http://resbweb.nih.gov/ij/).
- Первоначально Установите масштаб изображения, нажав кнопку «Задать шкалу» под «Анализировать» в панели инструментов. Введите длину стороны образа и соответствующее количество пикселей в пустые поля «Известный расстояние» и «Расстояние в пикселах», соответственно.
- Нажмите кнопку «Свободные руки» в панели инструментов и наметить фолликулов в захваченных светлые области изображения.
- Нажмите кнопку «Мера» под «Анализировать» в панели инструментов.
Примечание: Если другие данные измерений, нажмите кнопку «измерение» под «Анализировать» в панели инструментов и установите соответствующие флажки в списке.
7. анализ развития фолликула, используя трансгенных мышей
- Соберите яичников от послеродовых дней 0 и 4 (P0 и P4) женский трансгенных мышей содержащие трансгенов Oog1pro3.9 и R26-H2B-mCherrи культуры на вставки как описано в разделе шаги 1.1 – 3.2, за исключением не фрагмент P0 и P4 яичников.
- Замените питательной среды свежий, подогретым среднего блюдах 3,5 см в инкубаторе, содержащей 5% CO2 при 37 ° C каждые 2 дня.
Примечание: Концентрация ЛГ в среде культуры P0 и P4 яичников могут оставаться постоянной, поскольку LH всплески происходят не в P0 и P4 мышей. - Набор Микроскоп, чтобы визуализировать только AcGFP1-позитивных первичных фолликулов в яичниках культивировали P4 (Таблица 1).
Примечание: Только Изначальное и первичных фолликулов в яичниках женщины мыши P4. - Захват изображения культивировали Р0 Oog1pro3.9/R26-H2B-mCherry трансгенных мышей яичников интервалом 30 мин с использованием параметров, используемых для P4 яичников (см. шаг 5.2).
- Отслеживать и анализировать развитие фолликула с использованием сигналов AcGFP1 и H2B-mCHerry.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Рисунок 1 показывает протокол о внесении изменений в средствах массовой информации во время яичников культуры ткани. После этой программы, ICR 4 week-old мышей яичники были культивировали и образы интервалы 24-h, с помощью конфокальной микроскопии (рис. 2). В культуре тканей яичника на 3 недели наиболее полостная и вторичных фолликулов были выродились, атрезии фолликулов и некоторые были овуляцией (Рисунок 2D и Таблица 2). В анализе фолликула областей с помощью ImageJ (рис. 3) некоторые фолликулы разработан в группах во время каждого цикла всплеск LH (рис. 3B и Дополнительные фильм 1). Кроме того овуляция произошла почти одновременно в отдельный искусственный яичников из правого и левого яичников одного мышей. Принимается во внимание, что время овуляции и количество овуляцией ооцитов (Таблица 2) отличались между мыши яичников (данные не показаны), овуляция от искусственного яичников преимущественно произошла в течение 48 ч LH перенапряжений (рис. 3и дополнительных Фильм 1). Однако, не все овуляцией ооциты выпустила первый полярных органов после овуляции (Рисунок 2E и Таблица 2), и хотя овуляцией яйцеклеток может быть оплодотворена, развитие прекратилось на стадии 4-секционный (данные не показаны). Для выяснения механизмов, которые активируются изначальное спящих фолликулов в яичниках мыши, мы обнаружили первичных фолликулов активации в культурной ткани от трансгенных мышей проведение Oog1pro3.9 и R26-H2B-mCherry (трансгенов Рисунок 4, рис. 5и Дополнительные фильм 2). Ооциты Экспресс очень низкий уровень Oog1 гена от стадии первичных фолликулов, и промежуток времени визуализации отличается низкой AcGFP1-выражая первичных фолликулов от высокой AcGFP1-выражая первичных фолликулов. Изначальное и первичных фолликулов присутствуют одновременно в P4 мыши яичников, тогда как только первичных фолликулов в яичниках Р0 (рис. 4A, B). Таким образом мы оптимизировали промежуток времени визуализации условия для обнаружения только первичных фолликулов в яичниках культивировали P4 (рис. 4C). Впоследствии мы захватили изображения культивировали P0 яичников на 10 дней в одинаковых условиях (Рисунок 4D-G). AcGFP1 может использоваться как индекс первичных фолликулов в этих трансгенных мышей и первичных фолликулов AcGFP1-позитивные были обнаруживаемая в культивированный P0 яичников после культуры 30-40 h (рис. 4, рис. 5A-Fи дополнительных Кино 2). Изначальное и первичных фолликулов в культивированный яичников отличались ядер mCherry положительных клеток гранулезы (рис. 5B, E). В частности mCherry сигналы указывают форм фолликулов и позволяют наблюдения фолликула этапов в культивированный яичников (рис. 5B, E и H). Таким образом, эта система культуры с помощью яичников от Oog1pro3.9/ мышейR26-H2B-mCherry показало процесса раннего развития фолликула от Братство пресвитериан вторичных фолликулов этапов. Эти методы будут способствовать исследования механизмов регулирования развития фолликула гонадотропин независимые.
Рисунок 1 : Время курс среднего изменения. Средний A содержит 5% FBS, 100-му ФСГ, ЛГ 10-му, 100-ед/мл пенициллина и стрептомицина 100 мг/мл в MEM-альфа. Средний B содержит 5% FBS, 100-му ФСГ, ЛГ 100-му, 100-ед/мл пенициллина и стрептомицина 100 мг/мл в MEM-альфа. Средний B был использован для производства скачков LH каждые 4. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Изображения культивировали тканей яичника. Изображения были захвачены интервалом 24 ч с помощью конфокальной микроскопии. (A) день культуры 1; (B) день культуры 5; (C) день культуры 10; (D) день культуры 13; (E) Magnified имиджа региона указали на площади в (D); ооциты ре были овуляция из фолликулов, обозначается стрелками в B, C и D. ооцитов (F), выпуская полярного тела после овуляции; Шкалы бар = 200 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3 : Измерения фолликул районах культивировали яичники. (A) изображение культивировали яичников; пунктирные линии обозначают области измеряется ImageJ. (B) фолликулярной районах культивировали яичников после 3 недель; серые линии представляют период культура с добавлением 100-мм LH (LH всплеск). Линии показывают этапы развития в каждый фолликул в культивированный яичников; Шкалы бар = 200 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4 : Гематоксилином и эозином (H & E) окрашивание изображения P0 и P4 яичников и time-lapse томографии. (A) H & E пятнать P0 яичников; (B) H & E пятнать P4 яичников; (C) изображение P4 завязи от Oog1pro3.6 трансгенные мыши после 10 h культуры. Стрелка показывает AcGFP1-позитивных первичных фолликулов. (D-G) Образы P0 яичников от трансгенных мышей, выражая Oog1pro3.9 и R26-H2B-mCherry; зеленый и красный сигналы в D и F представляют AcGFP1 и mCherry, соответственно. Белые сигналы в E и G представляют AcGFP1 D и F, соответственно. D и E образы культивированный яичников после 0,5 ч культуры. F и G Показать яичников после 180 h культуры; Шкалы бар = 100 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: изображения изначального, первичной и вторичных фолликулов в культивированный яичников из oog1pro3.9/R26-H2B-mCherry мышей. (CA–) Образы первичных фолликулов в культивированный P0 яичников; (FD–) Образы первичных фолликулов в P0 культивированный яичников; (HG–) Образы вторичных фолликулов в яичниках культивировали 4-недельных мыши. A, D и G являются слияния изображений B и C, E и F и H и I, соответственно. Грин, AcGFP1; красный, mCherry; Шкалы бар = 100 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
| Микроскоп | объектив | лазер | экспозиции (МС) | Получить | интервал времени | z стек | другие | Цифры и фильмы |
| CV1000 | X10 | 488 нм: 30, 561 Нм: 20 | 488 нм: 700, 561 Нм: 600 | 488 нм: 90, 561nm: 20 | 30 мин. | 5 мм | Рисунок 4C-G, фильм 1 и 2 | |
| BZ-X700 | X20 (с воротником коллекции) | 40% | Авто | X4 | 30 мин. | 10 мм | биннинга 3 x 3 | Фильм 3 |
| LSM710 | X10 | 488 нм: 6%, 564 Нм: 5% | скорость камеры: 4 | 488 нм: 850, 564 Нм: 850 | 24 h | 10 мм | Цифровое увеличение, 488 нм: 2 564 nm:1 | Рисунок 2, 3 и 5 |
Таблица 1: промежуток времени визуализации условия. Промежуток времени визуализации условие конфокальных и светлые области микроскопы.
| Яичник не. | Количество общего овуляцией ооцитов | Количество MII ооцитов |
| 1 | 7 | 2 |
| 2 | 19 | 9 |
| 3 | 14 | 6 |
| 4 | 7 | 3 |
| 5 | 12 | 4 |
| 6 | 15 | 6 |
| 7 | 25 | 11 |
| 8 | 13 | 3 |
| 9 | 11 | 7 |
| 10 | 19 | 8 |
| 11 | 18 | 4 |
| 12 | 7 | 1 |
Таблица 2: число овуляцией яйцеклеток в яичниках искусственного. Количество овуляцией яйцеклеток из двенадцати культивировали яичников; MII указывает количество овуляцией ооцитов, которые выпущены первые полярного тела после овуляции.
Дополнительные фильм 1: промежуток времени фильм культивировали яичник. Яичники были собраны от 4 - неделя старый мышей и были нарезанный и культивировали в течение 3 недель. Фильм охватывает период культура 0 – 200 h в 10 кадров в секунду пожалуйста, нажмите здесь для просмотра этого видео. (Правой кнопкой мыши для загрузки.)
Дополнительные фильм 2: промежуток времени фильм культивировали P0 завязи от трансгенные мыши. Грин, AcGFP1; красный, mCherry. Фильм охватывает период культура 0 – 180 h в 10 кадров в секунду пожалуйста, нажмите здесь для просмотра этого видео. (Правой кнопкой мыши для загрузки.)
Дополнительные фильм 3: Промежуток времени фильм культивировали завязи от 4-неделя старый мыши. Грин, AcGFP1; красный; mCherry; Фильм охватывает период культура 9 – 13 дней культуры на 10 кадров в секунду. Стрелки в первом изображении обозначают фолликулов в которых атрезия произошло во время культуры. Пожалуйста нажмите здесь, чтобы посмотреть это видео. (Правой кнопкой мыши для загрузки.)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этом исследовании мы разработали две новые методы для изучения развития фолликулов в яичниках мыши. Первый метод предполагает культуры тканей нарезанный яичников взрослых мышей, следуют анализ развития фолликула, а вторая включает в себя использование покадровой imaging для визуализации раннего развития фолликула на этапе гонадотропин независимые. Ранее мы использовали нынешний метод культуры тканей яичника оценить влияние лейкемия ингибирующего фактора и прогестерон фолликула развития8,9и показал, что их последствия зависят от стадии концентрации и фолликул. В настоящем исследовании нарезанный яичников тканей выставлены фолликула динамика, требующих дальнейшего анализа с использованием этой модели механизма развития фолликула яичника.
Яичники от мышей более 5 недель содержат lutea корпус, что мешает микроскопические наблюдения. Следовательно 4-недельных мыши яичников являются предпочтительными для наблюдений развития фолликулов и овуляцию, и последующие конце начального, среднего и полостная фолликулов отличаются более легко, с помощью микроскопии светлые области. Наши методы предлагают сравнения воздействия факторов роста и наркотиков в культуре средств массовой информации, с заметного изменения в развитии фолликула между дифференциально лечение яичников (рис. 3).
Трансгенных мышей, выражая Cre или флуоресцеин белков в ооциты были описаны в предыдущих исследования18,,19-20. Однако, фолликулярная этап классификации зависит от гистологической характеристики, включая формы клеток гранулезы, числа слоев клеток гранулезы, и того, образованы ли клеток теки. Таким образом различия между изначальным и первичных фолликулов могут быть ограничены от наблюдений яйцеклеток только. Здесь мы использовали трансгенных мышей, содержащие Oog1pro3.9 и11,трансгенов R26-H2B-mCherry 17 и визуализировать раннего развития фолликула от изначального этапов вторичных фолликулов в яичниках культивировали. Oog1 выражение становится обнаружению в яйцеклеток на стадии первичных фолликулов и заметно увеличилось в первичных фолликулов. Следовательно интенсивность сигнала AcGFP1 в ооциты связаны с фолликула стадии (рис. 5) и были использованы для наблюдения за переходы изначального начальных фолликула (Рисунок 4, Дополнительные фильм 2). Клеточных ядер запятнаны красный в R26-H2B-mCherry трансгенных мышей (Рисунок 4, Дополнительные фильм 2и дополнительные 3 фильма), позволяя наблюдения фолликула этапов согласно номерам (клетки гранулезы Рисунок 5). Таким образом, коллективно нынешние методы позволяют анализ развития фолликула от изначального через до овуляции, используя Oog1pro3.9/R26-H2B-mCherry трансгенных мышей. Кроме того потому что apoptotic клеток хроматин конденсируется, mCherry сигналы atretic фолликулов сильнее, чем у обычных фолликулов (дополнительные 3 фильма).
Среди методологических тонкостях правильной толщины кусочки тканей, необходимые для успешного культивирования, с повышенной клеточной гибели завязи ломтиками, которые слишком густой, и потери больших полостная фолликулов яичника ломтиками, которые являются слишком тонкими. Скорость роста фолликула медленно; Следовательно это легко отслеживать и анализировать процесс каждый фолликул через 24-h интервал наблюдения. Настоящий конфокального микроскопа, настройки, в том числе лазерной интенсивности, интервал времени и цифровое увеличение, зависят от режима Микроскоп, но важно учитывать при получении покадровой фотографии. В частности решительно лазерного света и долгое время экспозиции требуются для получения четких снимков, но может повлиять на культивируемых клеток. Следовательно умеренность эти настройки, чтобы избежать Фототоксичность имеет решающее значение. Нарезанные яичников ткани 4-week-old мышей может культивировали для около 4 недель, тогда как изначальное и первичных фолликулов остаются впоследствии, они больше не растут. В отличие от P0 и P4 яичников могут культивировали для приблизительно 10 дней, в течение которых изначальное и первичных фолликулов развиться в первичных или вторичных фолликулов, соответственно. Однако фолликулов в яичниках культивировали P0 и P4 не развиваются в полостная фолликулов. Таким образом удаление яичников требуется на различных этапах изучения механизмов регулирования, связанные с развитием всей яичников фолликула.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Мы благодарим д-р Naojiro Minami (Университет Киото) за предоставление Oog1pro3.9 мышей. Это исследование было поддержано Nitto фонда и JSP-страницы (KAKENHI # JP15H06275).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Follicle stimulating hormone from human pituitary | SIGMA | F4021 | |
| Lutenizing hormone from equine pituitary | SIGMA | L9773 | |
| Penicillin-streptomycin solution | Wako Pure Chemical Industries | 168-23191 | |
| MEM a, GlutaMax, no nucleotides | Thermo Fisher | 32561037 | |
| Glass bottom dish | MatTek | P35G-0-10-C | 35mm dish, No. 0 coverslip, 10mm glass diameter |
| Millicell cell culture insert | Merck Millipore | PICM0RG50 | Diameter: 315 mm, pore size: 0.4 mm, material: hydrophilic PTTE |
| 3.5cm cell culture dishes | greiner bio-one | 627160 | |
| 50ml / centrifuge tube with triple seal cap | IWAKI | 2345-050 | |
| Low-profile disposable blades 819 | Leica | 14035838925 | |
| LSM 710 | Carl Zeiss | Confocal microscope | |
| CellVoyager, CV1000 | Yokogawa Electric Corporation | Time-lapse imaging | |
| BZ-X700 | KEYENCE | Time-lapse imaging |
References
- Myers, M., Britt, K. L., Wreford, N. G., Ebling, F. J., Kerr, J. B. Methods for quantifying follicular numbers within the mouse ovary. Reproduction. 127 (5), 569-580 (2004).
- Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle. Theriogenology. 69 (1), 72-80 (2008).
- Palma, G. A., et al. Biology and biotechnology of follicle development. Sci World J. , (2012).
- Knight, P. G., Glister, C. TGF-beta superfamily members and ovarian follicle development. Reproduction. 132 (2), 191-206 (2006).
- Picton, H. M., Harris, S. E., Muruvi, W., Chambers, E. L. The in vitro growth and maturation of follicles. Reproduction. 136 (6), 703-715 (2008).
- Spears, N., de Bruin, J. P., Gosden, R. G. The establishment of follicular dominance in co-cultured mouse ovarian follicles. J Reprod Fertil. 106 (1), 1-6 (1996).
- Baker, S. J., Srsen, V., Lapping, R., Spears, N. Combined effect of follicle-follicle interactions and declining follicle-stimulating hormone on murine follicle health in vitro. Biol Reprod. 65 (4), 1304-1310 (2001).
- Komatsu, K., et al. Analysis of the Effect of Leukemia Inhibitory Factor on Follicular Growth in Cultured Murine Ovarian Tissue. Biol Reprod. 93 (1), 18 (2015).
- Komatsu, K., Masubuchi, S. The concentration-dependent effect of progesterone on follicle growth in the mouse ovary. J Reprod Dev. 63 (3), 271-277 (2017).
- Murase, T., et al. Follicle dynamics: visualization and analysis of follicle growth and maturation using murine ovarian tissue culture. J Assist Reprod Genet. , 1-5 (2017).
- Ishida, M., et al. The promoter of the oocyte-specific gene, Oog1, functions in both male and female meiotic germ cells in transgenic mice. PLoS One. 8 (7), 68686 (2013).
- Minami, N., et al. Oogenesin is a novel mouse protein expressed in oocytes and early cleavage-stage embryos. Biol Reprod. 69 (5), 1736-1742 (2003).
- Nilsson, E. E., Skinner, M. K. Growth and differentiation factor-9 stimulates progression of early primary but not primordial rat ovarian follicle development. Biol Reprod. 67 (3), 1018-1024 (2002).
- Nilsson, E. E., Kezele, P., Skinner, M. K. Leukemia inhibitory factor (LIF) promotes the primordial to primary follicle transition in rat ovaries. Mol Cell Endocrinol. 188 (1-2), 65-73 (2002).
- Nilsson, E. E., Skinner, M. K. Bone morphogenetic protein-4 acts as an ovarian follicle survival factor and promotes primordial follicle development. Biol Reprod. 69 (4), 1265-1272 (2003).
- Nilsson, E. E., Skinner, M. K. Kit ligand and basic fibroblast growth factor interactions in the induction of ovarian primordial to primary follicle transition. Mol Cell Endocrinol. 214 (1-2), 19-25 (2004).
- Abe, T., et al. Establishment of conditional reporter mouse lines at ROSA26 locus for live cell imaging. Genesis. 49 (7), 579-590 (2011).
- Lan, Z. J., Xu, X., Cooney, A. J. Differential oocyte-specific expression of Cre recombinase activity in GDF-9-iCre, Zp3cre, and Msx2Cre transgenic mice. Biol Reprod. 71 (5), 1469-1474 (2004).
- Payer, B., et al. Generation of stella-GFP transgenic mice: a novel tool to study germ cell development. Genesis. 44 (2), 75-83 (2006).
- Ohinata, Y., Sano, M., Shigeta, M., Yamanaka, K., Saitou, M. A comprehensive, non-invasive visualization of primordial germ cell development in mice by the Prdm1-mVenus and Dppa3-ECFP double transgenic reporter. Reproduction. 136 (4), 503-514 (2008).
