Яичников культур тканей могут использоваться в качестве модели развития, овуляции и фолликул атрезии фолликулов и указать механизмы регулирования динамических процессов, яичников.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Яичников культуры ткани для визуализации явлений в яичнике мыши
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Периодически млекопитающих женщины овуляция почти постоянное количество яйцеклеток во время каждого цикла эструса. Для поддержания таких регулярность и периодичности, регулирование происходит на уровне гипоталамо гипофизарно гонадной оси и на развитии фолликулов в яичниках. Несмотря на активные исследования механизмы развития фолликула не ясны из-за нескольких этапов от активации неактивных первичных фолликулов к овуляции и из-за сложности правил, который отличается на каждом этапе фолликулярной. Для изучения механизмов развития фолликула и динамика фолликулов на протяжении всего цикла эструса, мы разработали модель яичника культуры ткани мыши, который может быть использован для наблюдения развития фолликула с помощью микроскопа. Разработки систематической фолликула, периодических овуляции и атрезии фолликулов могут быть воспроизведены в модели искусственного яичника, и в условиях культуры можно модулировать экспериментально. Здесь мы продемонстрировать полезность этого метода в изучении механизмов регулирования развития фолликула и других явлений, яичников.
Введение
Женщины мыши яичники содержат несколько тысяч фолликулов1, и периодические овуляции созревает примерно десять яйцеклеток на каждый цикл эструса. Фолликулов, подразделяются на несколько стадий развития: Братство пресвитериан, начальное, среднее, полостная и Graafian фолликулов, в зависимости от формы гранулезы сотовой слоя, окружающих каждый ооцитов. Большинство первичных фолликулов неактивны, и некоторые из них активизируются и превращаются в первичных фолликулов на каждый цикл эструса2. После этапа вторичных фолликулов развития фолликула регулируется главным образом гонадотропинов, фолликулярная стимулирующий гормон (ФС....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Мышей были размещены в экологически контролируемой комнате в 23 ±1 ° C с 12 h свет/12 h темные циклом. Уход за животными протоколы и эксперименты были проведены в соответствии с руководящими принципами для экспериментов животных медицинского университета Айти и были одобрены действующий Комитет использование и уход за животными.
1. Подготовка питательной среды и блюда
- Для подготовки основных питательной среды, добавьте плода бычьим сывороточным (ФБС, 5% v/v), ФСГ (100 mIU/мл), LH (10 му/мл) и пенициллин стрептомицином (пенициллин, 100 ед/мл; этамбутол, 100 мг/мл) для минимальных основных средних альфа (MEM-альфа) и перемешать в 50....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Рисунок 1 показывает протокол о внесении изменений в средствах массовой информации во время яичников культуры ткани. После этой программы, ICR 4 week-old мышей яичники были культивировали и образы интервалы 24-h, с помощью конфокальной микроскопии (рис. 2). В культуре тканей яичника на 3 недели наиболее полостная и вторичных фолликулов были выродились, атрезии фолликулов и некоторые были овуляцией (Рисунок 2<.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этом исследовании мы разработали две новые методы для изучения развития фолликулов в яичниках мыши. Первый метод предполагает культуры тканей нарезанный яичников взрослых мышей, следуют анализ развития фолликула, а вторая включает в себя использование покадровой imaging для визуализации раннего развития фолликула на этапе гонадотропин независимые. Ранее мы использовали нынешний метод культуры тканей яичника оценить влияние лейкемия ингибирующего фактора и прогестерон фолликула развития8,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Мы благодарим д-р Naojiro Minami (Университет Киото) за предоставление Oog1pro3.9 мышей. Это исследование было поддержано Nitto фонда и JSP-страницы (KAKENHI # JP15H06275).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Фолликулостимулирующий гормон из гипофиза человека | SIGMA | F4021 | |
| Лютенизирующий гормон из гипофиза лошадей | SIGMA | L9773 | |
| Раствор пенициллин-стрептомицина | Wako Pure Chemical Industries | 168-23191 | |
| MEM a, GlutaMax, без нуклеотидов | Thermo Fisher | 32561037 | |
| Стеклянная нижняя чашка | MatTek | Чашка P35G-0-10-C | 35 мм, покровное стекло No 0, диаметр стекла 10 мм |
| Вкладыш для культивирования клеток | клеток Merck Millipore | PICM0RG50 | Диаметр: 315 мм, размер пор: 0,4 мм, материал: гидрофильная чашка для |
| клеточных культур PTTE 3,5 см | Greiner Bio-One | 627160 | |
| 50 мл / центрифужная пробирка с тройным уплотнением крышки | IWAKI | 2345-050 | |
| Низкопрофильные одноразовые лезвия 819 | Leica | 14035838925 | |
| LSM 710 | Zeiss | Конфокальный микроскоп | |
| CellVoyager, CV1000 | Yokogawa Electric Corporation | Цейтраферная съемка | |
| BZ-X700 | KEYENCE | Цейтраферная съемка |
Ссылки
- Myers, M., Britt, K. L., Wreford, N. G., Ebling, F. J., Kerr, J. B. Methods for quantifying follicular numbers within the mouse ovary. Reproduction. 127 (5), 569-580 (2004).
- Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle.<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
