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Medicine

उत्पादन एक Murine Orthotopic मेटास्टेटिक स्तन कैंसर मॉडल और प्रदर्शन Murine कट्टरपंथी Mastectomy

Published: November 29, 2018 doi: 10.3791/57849
Automatic Translation
1, 1, 2,3,4,5, 1,6,7,8,9,10
1Breast Surgery, Department of Surgical Oncology, Roswell Park Comprehensive Cancer Center, 2Holy Cross Hospital Michael and Dianne Bienes Comprehensive Cancer Center, 3Department of Surgery, Massachusetts General Hospital, 4Department of Surgery, University of Miami Miller School of Medicine, 5Department of Surgery, Nova Southeastern University School of Medicine, 6Department of Surgery, University at Buffalo Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, 7Department of Breast Surgery and Oncology, Tokyo Medical University, 8Department of Surgery, Yokohama City University, 9Department of Surgery, Niigata University Graduate School of Medical and Dental Sciences, 10Department of Surgery, Fukushima Medical University

Summary

हम bioluminescence प्रौद्योगिकी के साथ एक murine orthotopic स्तन कैंसर मॉडल और कट्टरपंथी mastectomy मॉडल परिचय ट्यूमर बोझ यों तो मानव स्तन कैंसर प्रगति की नकल है ।

Abstract

में vivo माउस मॉडल स्तन कैंसर प्रगति का आकलन करने के लिए कैंसर अनुसंधान के लिए आवश्यक हैं, नैदानिक दवा घटनाओं सहित. हालांकि, व्यावहारिक और तकनीकी विवरण के बहुमत आमतौर पर प्रकाशित पांडुलिपियों में लोप कर रहे है जो, इसलिए, यह मॉडल को पुन: पेश करने के लिए चुनौतीपूर्ण बनाता है, विशेष रूप से जब यह शल्य चिकित्सा तकनीक शामिल है । Bioluminescence प्रौद्योगिकी कैंसर कोशिकाओं की छोटी मात्रा के मूल्यांकन के लिए भी अनुमति देता है जब एक ट्यूमर स्पष्ट नहीं है । luciferase-व्यक्त कैंसर कोशिकाओं का उपयोग, हम एक उच्च tumorigenesis दर के साथ एक स्तन कैंसर orthotopic टीका तकनीक की स्थापना । फेफड़े मेटास्टेसिस एक पूर्व vivo तकनीक का उपयोग मूल्यांकन किया है । हम तो, मेटास्टेटिक ट्यूमर बोझ का आकलन करने के लिए एक कम स्थानीय पुनरावृत्ति दर के साथ एक mastectomy मॉडल की स्थापना । इस के साथ साथ, हम विस्तार से वर्णन, स्तन कैंसर के लिए orthotopic आरोपण और mastectomy की शल्य चिकित्सा तकनीक एक उच्च tumorigenesis दर और कम स्थानीय पुनरावृत्ति दरों के साथ, क्रमशः, स्तन कैंसर मॉडल दक्षता में सुधार करने के लिए ।

Introduction

एनिमल मॉडल्स कैंसर रिसर्च में अहम भूमिका निभाते हैं । जब एक परिकल्पना इन विट्रो में सिद्ध हो जाता है, तो इसकी नैदानिक प्रासंगिकता का मूल्यांकन करने के लिए vivo में परीक्षण किया जाना चाहिए । कैंसर प्रगति और मेटास्टेसिस अक्सर बेहतर पशु मॉडल द्वारा कब्जा कर रहे है के रूप में इन विट्रो मॉडलों की तुलना में, और यह दवा के विकास के लिए एक नैदानिक अध्ययन के रूप में एक पशु मॉडल में एक नई दवा का परीक्षण आवश्यक है1,2। हालांकि, पशु प्रयोगों के तकनीकी विवरण अक्सर अच्छी तरह से प्रकाशित लेख में वर्णित नहीं हैं, यह सफलतापूर्वक मॉडल पुन: पेश करने के लिए चुनौतीपूर्ण बना । दरअसल, लेखक जो इन orthotopic टीका और mastectomy मॉडल की स्थापना की लंबी और कठोर परीक्षण और त्रुटि की प्रक्रिया के माध्यम से चला गया । कैंसर कोशिका टीका के बाद tumorigenesis की सफलता दर एक पशु अध्ययन3की सफलता और दक्षता निर्धारित करने के लिए महत्वपूर्ण कारकों में से एक है । सेल लाइन और कोशिकाओं की संख्या inoculate करने के लिए, टीका साइट, और चूहों के तनाव सभी महत्वपूर्ण कारक हैं । यह सर्वविदित है कि वहां पशु व्यक्तिगत मतभेदों के कारण प्रयोगों के परिणामों में भारी बदलाव कर रहे हैं, इन विट्रो तकनीक की तुलना में । इसलिए, एक मानक तकनीक के साथ एक अच्छी तरह से स्थापित मॉडल का उपयोग करने के लिए स्थिर परिणाम प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है, पशु प्रयोगों की दक्षता में सुधार, और भ्रामक परिणामों से बचने के लिए.

यह कागज अच्छी तरह से स्थापित तकनीक4 स्तन कैंसर orthotopic और mastectomy माउस मॉडल उत्पंन करने के लिए प्रदान करता है । इन तरीकों का उद्देश्य है 1) मानव स्तन कैंसर प्रगति और उपचार के पाठ्यक्रमों की नकल करने के लिए, और 2) vivo प्रयोगों में अधिक से अधिक दक्षता और उच्च सफलता दर के साथ आचरण करने के लिए अन्य स्तन कैंसर टीका या mastectomy तकनीक की तुलना में. orthotopic कैंसर सेल टीका में, मानव स्तन कैंसर प्रगति की नकल करने के लिए, हम एक टीका साइट है, जो छाती में स्थित है के रूप में #2 स्तन वसा पैड का चयन करें । अध्ययन के अधिकांश में, स्तन कैंसर की कोशिकाओं inoculated चमड़े के नीचे5हैं । इस तकनीक को शल्य चिकित्सा की आवश्यकता नहीं है और, इस प्रकार, यह सरल और सीधा है । हालांकि, चमड़े के नीचे microenvironment स्तन ग्रंथि microenvironment, जो अलग कैंसर प्रगति और यहां तक कि आणविक प्रोफाइल6,7में परिणाम से काफी अलग है । कुछ अध्ययनों #4 स्तन ग्रंथि, जो पेट में स्थित है का उपयोग करें, एक टीका6साइट के रूप में । हालांकि, के बाद से #4 स्तन ग्रंथियों के पेट में स्थित हैं, सबसे आम मेटास्टेटिक पैटर्न पेरिटोनियल कार्सिनोमामयता7है, जो मेटास्टेटिक स्तन कैंसर8के 10% से कम के साथ होता है । स्तन कैंसर यहां प्रस्तुत तकनीक द्वारा उत्पंन, #2 स्तन ग्रंथि में, metastasizes फेफड़ों के लिए, जो सबसे आम स्तन कैंसर मेटास्टेटिक9साइटों में से एक है ।

इस तकनीक के साथ, लक्ष्य भी अंय स्तन कैंसर टीका तकनीकों की तुलना में ंयूनतम ट्यूमर आकार परिवर्तनशीलता के साथ एक उच्च tumorigenesis दर प्राप्त करने के लिए है । ऐसा करने के लिए, कैंसर एक चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण में निलंबित कोशिकाओं को प्रत्यक्ष दृष्टि के तहत एक औसत पूर्वकाल छाती दीवार चीरा के माध्यम से inoculated हैं । इस तकनीक ट्यूमर आकार और चमड़े के नीचे या गैर सर्जिकल इंजेक्शन की तुलना में आकार में कम परिवर्तनशीलता के साथ एक उच्च tumorigenesis दर पैदा करता है, के रूप में पहले3,7की सूचना दी ।

हम भी एक माउस कट्टरपंथी mastectomy तकनीक है जिसमें orthotopic स्तन ट्यूमर आसपास के ऊतकों और कांख लिम्फ नोड्स के साथ संप्रदाय है परिचय । नैदानिक सेटिंग में, दूर मेटास्टेसिस रोग के बिना स्तन कैंसर रोगियों के लिए देखभाल के मानक mastectomy10,11है । एक mastectomy से पहले, कांख लिम्फ नोड मेटास्टेसिस इमेजिंग और प्रहरी लिम्फ नोड बायोप्सी द्वारा सर्वेक्षण किया जाता है । यदि कांख लिम्फ नोड मेटास्टेसिस का कोई सबूत नहीं है, रोगी तो एक कुल या आंशिक mastectomy, जिसमें कांख लिम्फ नोड लकीर लोप है के साथ इलाज किया जाता है । कुल mastectomy एक तकनीक है पूरे स्तन ऊतक, जबकि आंशिक mastectomy आसपास के सामांय स्तन ऊतक के एक मार्जिन के साथ ही, इस प्रकार शेष सामांय स्तन ऊतक के संरक्षण के साथ स्तन कैंसर है, जबकि ब्लॉक एन रोगी. हालांकि, रोगियों जो एक आंशिक mastectomy के बाद सामान्य स्तन ऊतक शेष की रक्षा करने के लिए स्थानीय पुनरावृत्ति10से बचने के लिए पश्चात रेडियोथेरेपी की आवश्यकता. रोगियों जो कांख लिम्फ नोड मेटास्टेसिस कट्टरपंथी mastectomy जो सभी सामान्य स्तन ऊतक और कांख लिम्फ नोड्स और आक्रमण के ऊतकों के साथ स्तन कैंसर को निकालता है शुरू करने के लिए10,11ब्लॉक । माउस मॉडल में, कांख लिम्फ नोड मेटास्टेसिस और/या पोस्ट ऑपरेटिव विकिरण के लिए निगरानी उचित या संभव नहीं है । इस प्रकार, हम कट्टरपंथी mastectomy तकनीक का उपयोग करने के लिए स्थानीय या कांख लिम्फ नोड मेटास्टेसिस से बचने ।

पूंछ नस के माध्यम से कैंसर सेल टीका सबसे आम फेफड़ों मेटास्टेसिस माउस मॉडल12, तथाकथित "प्रयोगात्मक मेटास्टेसिस" है । इस मॉडल को उत्पंन करने के लिए आसान है और सर्जरी की आवश्यकता नहीं है; हालांकि, यह मानव स्तन कैंसर प्रगति जो अलग मेटास्टेटिक रोग व्यवहार में परिणाम हो सकता है नकल नहीं करता है । मानव स्तन कैंसर उपचार पाठ्यक्रम की नकल करने के लिए जहां मेटास्टेसिस अक्सर mastectomy के बाद होता है, प्राथमिक ट्यूमर orthotopic कैंसर कोशिका टीका के बाद हटा दिया जाता है । इस तकनीक को सरल ट्यूमर लकीर की तुलना में कम स्थानीय पुनरावृत्ति पैदा करता है, के रूप में पहले13की रिपोर्ट, और उपंयास चिकित्सकीय, पूर्व नैदानिक अध्ययन के लिए उपयोगी है, और मेटास्टेटिक स्तन कैंसर अनुसंधान अध्ययन के लिए । यहां वर्णित तकनीक सबसे स्तन कैंसर orthotopic मॉडल प्रयोगों के लिए लागू कर रहे हैं । हालांकि, यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण microenvironment को प्रभावित कर सकते है और सर्जरी तनाव को प्रभावित कर सकते है/ इसलिए, microenvironment और/या तनाव/प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का अध्ययन जांचकर्ताओं संभावित कारकों के बारे में पता होना चाहिए ।

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Protocol

रोसवेल पार्क व्यापक कैंसर केंद्र संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति से अनुमोदन सभी प्रयोगों के लिए प्राप्त किया गया था ।

नोट: नौ से बारह सप्ताह की बूढ़ी मादा बालब/ 4T1-luc2 कोशिकाओं, एक माउस स्तन ग्रंथिकर्कटता सेल लाइन बालब से व्युत्पंन/सी चूहों कि एक्सप्रेस luciferase के लिए इंजीनियर किया गया है, उपयोग किया जाता है । इन कोशिकाओं को 10% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) के साथ रोसवेल पार्क मेमोरियल इंस्टीट्यूट (RPMI) १६४० मध्यम में संस्कृति रहे हैं ।

1. उपकरणों की तैयारी

  1. एक जमे हुए चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण (जैसे, Matrigel) एक ऊतक संस्कृति हूड में बर्फ पर गल ।
  2. शल्य चिकित्सा उपकरणों के दो सेट साफ और आटोक्लेव (microdissection कैंची, Adson संदंश, और एक सुई धारक) सर्जरी से पहले. तैयार निष्फल 5-0 रेशम टांके और सूखे बाँझ (जब सीरियल सर्जरी की योजना बनाई है) ।
  3. एक क्लिपर का उपयोग कर चूहों के मध्य सीने के बाल क्लिप और सर्जरी के समय से पहले कान छिद्रण द्वारा पहचान के लिए चूहों निशान.
  4. प्रक्रिया तालिका तैयार करें, जिसे तुरंत कार्रवाई के लिए उपयोग किया जा सकता है ।
    1. एक शोषक पैड फैला है और टेप के साथ कोनों को ठीक, टेप के साथ संज्ञाहरण नाक शंकु फिक्स, ऑपरेटिंग अंतरिक्ष के बगल में बाँझ और संक्रमित (chlorhexidine, आयोडीन, और ७५% इथेनॉल) रखा, और आपरेशन के क्रम में चूहों जगह है ।

2. कोशिकाओं की तैयारी (10 चूहों के लिए)

नोट: कोशिकाओं को कम सेल व्यवहार्यता से बचने के लिए पकवान से अलग होने के बाद 1 घंटे के भीतर inoculated किया जाना चाहिए । विशेष रूप से, सेल निलंबन की डिश से कोशिकाओं को अलग करने के बाद अपने व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए 15 मिनट के भीतर जिलेटिन प्रोटीन मिश्रण में मिलाया जाना चाहिए ।

  1. संस्कृति 4T1-luc2 कोशिकाओं, एक चूहा स्तन ग्रंथिकर्कटता सेल लाइन में व्यक्त luciferase, RPMI १६४० मीडिया में एक FBS मशीन में 10% humidified के साथ ३७ ° c में 5% CO2में ।
  2. 10 मिलीलीटर सीरम वैज्ञानिक पिपेट का उपयोग करके अनुयाई 4T1-luc2 कोशिकाओं को फॉस्फेट-बफर खारा (पंजाब) के साथ 10-सेमी डिश में धो लें । एक P1000 पिपेट का उपयोग कर trypsin ०.२५% की 1 मिलीलीटर जोड़ें और, फिर, 5 मिनट के लिए ३७ डिग्री सेल्सियस पर नमूना मशीन । फिर, 5 मिलीलीटर सीरम वैज्ञानिक पिपेट का उपयोग करके ग्रोथ मीडिया (RPMI-१६४० के साथ 10% FBS) के 4 मिलीलीटर जोड़ें और एक ऊतक संस्कृति हुड में 15 मिलीलीटर शंकु ट्यूब के लिए सेल निलंबन हस्तांतरण । 5 मिनट के लिए १८० x g पर सेल निलंबन केंद्रापसारक ।
  3. महाप्राण supernatant और पंजाब के 2 मिलीलीटर में कोशिकाओं resuspend; फिर, hemocytometer का उपयोग कर कक्षों की गणना करें ।
  4. 2 एक्स 106 4T1-luc2 कोशिकाओं के ४० μL में ठंडा पंजाबियों (पीएच ७.४, 4 डिग्री सेल्सियस) ऊतक संस्कृति हूड में निलंबित ।
  5. टिशू कल्चर हुड में बर्फ पर एक १.५ मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब में जिलेटिन प्रोटीन मिश्रण की ३६० μL के साथ ४०-μL सेल सस्पेंशन मिक्स ।
    नोट: अंतिम एकाग्रता 1 x 105/20 μL (1:9 पंजाबियों: चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण) है । orthotopic मॉडल के लिए (कोई mastectomy), 1 x 104/अंतिम एकाग्रता के 20 μL का इस्तेमाल किया गया था, इच्छामृत्यु मानदंडों तक पहुंचने से बचने के लिए (ट्यूमर का आकार > 2 सेमी) दो हफ्तों के भीतर ।

3. कैंसर सेल टीका

  1. 2-4% isoflurane और ०.२ L/मिनट ऑक्सीजन के प्रवाह के साथ संज्ञाहरण प्रेरण कक्ष में चूहों रखो जब तक चूहों को शांति से सांस (2-3 मिनट) ।
  2. माउस समझ और सुई ०.०५ मिलीग्राम/kg buprenorphine इसके कंधे में चमड़े के नीचे ।
  3. एक पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी से पर्याप्त संज्ञाहरण की पुष्टि करें । माउस मुखौटा है, जो 2-4% isoflurane और 2 L/ंयूनतम ऑक्सीजन एक चारकोल कनस्तर इकाई से जुड़ी प्रवाह के साथ सांस लेना संज्ञाहरण की अनुमति देता है के छेद में माउस की नाक डालें ।
  4. माउस के अंग लैब टेप का उपयोग कर नियंत्रित और chlorhexidine, आयोडीन, और ७५% इथेनॉल का उपयोग कर अपनी त्वचा को निष्फल, कपास झाड़ू का उपयोग कर ।
  5. पूर्वकाल छाती की दीवार बाँझ microdissection कैंची का उपयोग के बीच में एक 5 मिमी त्वचा चीरा बनाओ, चीरा के बगल में सही पक्ष त्वचा लिफ्ट और कैंची का उपयोग छाती दीवार से त्वचा को अलग, और फिर, सही पर्दाफाश करने के लिए त्वचा पलटना #2 स्तन वसा पैड ।
  6. ध्यान से 20 μL कैंसर सेल निलंबन के एक २८.५ जी सुई के माध्यम से प्रत्यक्ष दृष्टि के तहत घाव के माध्यम से वसा पैड में एक 1 मिलीलीटर इंसुलिन सिरिंज का उपयोग कर के इंजेक्शन ।
    नोट: सुई घाव के माध्यम से चला जाता है, नहीं त्वचा । 5 एस के लिए वसा पैड में सुई पकड़े रखने से पहले इसे खींच बाहर है, जो चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण के लिए समय जमना के लिए अनुमति देता है ।
  7. सिलाई द्वारा त्वचा चीरा बंद करो, बाँझ 5-0 गैर अवशोषित टांके का उपयोग.
  8. सर्जरी के बाद, एक साफ पिंजरे में जानवरों को लौटने और उंहें निगरानी जब तक वे बरामद कर लिया है और स्वतंत्र रूप से चल रहे है (के बाद ~ 1-2 मिनट) । यदि एक पशु शल्य चिकित्सा के 24 ज के भीतर अच्छे स्वास्थ्य में नहीं दिखाई देता है, प्रशासन buprenorphine (०.२ मिलीग्राम/
  9. संज्ञाहरण के तहत टांके निकालें (चरण ३.१ देखें) सर्जरी के बाद 7 डी ।

4. Mastectomy

नोट: mastectomy का समय बहुत महत्वपूर्ण है । यदि यह बहुत जल्दी किया जाता है, फेफड़ों मेटास्टेसिस नहीं होती है । यदि यह बहुत देर हो चुकी है, प्राथमिक ट्यूमर प्रमुख रक्त वाहिकाओं, जो एक पूरा oncologic लकीर चुनौतीपूर्ण बनाने पर आक्रमण किया है । इस प्रकार, एकाधिक समय अंक mastectomy के लिए परीक्षण किया गया जो समय बिंदु निर्धारित करने के लिए मेटास्टेसिस के लिए प्रतीक्षा में उचित संतुलन का उत्पादन पहले लकीर भी चुनौतीपूर्ण बन गया । ५० से अधिक माउस प्रयोगों में ऐसा करने के बाद, यह प्रदर्शन किया गया था कि mastectomy पर 8 दिनों के बाद कैंसर सेल टीका (या जब ट्यूमर आकार तक पहुँच जाता है 5 मिमी) था कि शेष13को प्राप्त करने के लिए आदर्श समय बिंदु.

  1. Anesthetize एक माउस के साथ 2-4% साँस isoflurane और इंजेक्षन buprenorphine (देखें चरण ३.१ और ३.२).
  2. माउस को नियंत्रित और अपनी त्वचा निष्फल (३.४ कदम देखें) ।
  3. एक 5 मिमी त्वचा चीरा शल्य निशान है कि प्रारंभिक कैंसर कोशिका टीका पर किया गया था से छोड़ दिया करने के लिए 2 मिमी, microdissection कैंची का उपयोग कर । ट्यूमर को दूर करने के लिए forelimb की जड़ की ओर चीरा का विस्तार, शल्य चिकित्सा निशान सहित त्वचा, और ट्यूमर के साथ संपर्क में घाव, साथ ही कांख लिम्फ नोड बेसिन जिसमें समय के अधिकांश नहीं दिखाई लिम्फ नोड mastect के समय में मौजूद है omy13. सुनिश्चित करें कि कांख नस नुकसान नहीं है ।
  4. सिलाई द्वारा त्वचा दोषों को बंद करें, एक "Y" के आकार में बाँझ 5-0 गैर अवशोषित टांके का उपयोग.
  5. एक ही चरण में ३.८ के रूप में, एक साफ पिंजरे और मॉनिटर करने के लिए माउस वापस जब तक वे बरामद किया है ।
  6. संज्ञाहरण के तहत टांके निकालें (चरण ३.१ देखें) 7 सर्जरी के बाद दिन ।

5. प्राथमिक ट्यूमर (Orthotopic टीका बिना Mastectomy) या लंग मेटास्टेसिस (Mastectomy Model) के Bioluminescent ठहराव

नोट: प्राथमिक ट्यूमर बोझ ठहराव के लिए, bioluminescence orthotopic टीका के बाद दिन से 2x एक सप्ताह मापा जाता है । फेफड़ों मेटास्टेसिस ठहराव के लिए, bioluminescence mastectomy के बाद दिन से एक सप्ताह 2x मापा जाता है ।

  1. Dulbecco के फॉस्फेट में डी-luciferin भंग-एक ऊतक संस्कृति हूड में 15 मिलीग्राम/एमएल के एक अंतिम एकाग्रता के लिए खारा (DPBS) । Aliquot यह प्रकाश में ढाल १.५ मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूबों । पर पतला समाधान स्टोर-८० ° c ।
    नोट: एक 20 जी माउस के लिए, पतला D-luciferin के २०० µ l की आवश्यकता है ।
  2. इमेजिंग सॉफ़्टवेयर खोलें और प्रारंभकरेंक्लिक करें ।
    नोट: चार्ज-युग्मित डिवाइस (सीसीडी) को ठंडा करने में लगभग 15 मिनट का समय लगता है । जब सीसीडी सेट तापमान तक पहुंच जाता है, तो तापमान बार का रंग लाल से लेकर ग्रीन तक बदलता है ।
  3. Anesthetize 2-4% isoflurane के साथ एक समर्पित प्रेरण चैंबर इमेजिंग करने से पहले में चूहों (चरण ३.१ देखें) ।
  4. चूहों को तौलना ।
  5. सुई १५० मिलीग्राम/kg D-luciferin intraperitoneally मध्य पेट के बिंदु पर, एक २८.५ G नीडल का उपयोग कर ।
  6. लापरवाह स्थिति में इमेजिंग प्रणाली के अंदर एक नाक शंकु के साथ प्रत्येक माउस फिट (एक ही समय में पांच चूहों की एक अधिकतम जगह) । इमेजिंग के दौरान नाक शंकु के माध्यम से 1%-3% isoflurane (१००% ऑक्सीजन में) में संज्ञाहरण बनाए रखें ।
  7. ५० मिनट के लिए चोटी bioluminescence का पता लगाने के लिए एक छवि हर 5 मिनट पर कब्जा (या पुष्टि की चोटी bioluminescence करने के लिए) ।
    1. ऑटोके रूप में Luminescence का चयन करें , माध्यमके रूप में बिन्नी , और डीके रूप में देखने के क्षेत्र ।
    2. छवि कैप्चर करने के लिए मोल क्लिक करें ।
  8. उनके पिंजरे (ओं) को चूहों लौटें और उंहें निगरानी जब तक वे बरामद किया है (३.८ कदम देखें) ।

6. पूर्व Vivo इमेजिंग द्वारा फेफड़ों मेटास्टेसिस ट्यूमर बोझ ठहराव

नोट: लंग मेटास्टेसिस ठहराव orthotopic टीका दोनों के साथ और बिना mastectomy मॉडल के लिए लागू है । mastectomy मॉडल में, पूर्व vivo इमेजिंग या अस्तित्व अवलोकन, उद्देश्य के आधार पर चुना जाता है. orthotopic टीका (बिना mastectomy) मॉडल में, ज्यादातर मामलों प्राथमिक ट्यूमर आकार इच्छामृत्यु मानदंड (> 2 सेमी) लगभग 21 दिनों के बाद टीका का उत्पादन ।

  1. कैंसर कोशिका टीका द्वारा पूर्व vivo इमेजिंग के बाद फेफड़ों के मेटास्टेटिक घावों को 21 दिनों तक बढ़ाता है ।
  2. एक समर्पित प्रेरण कक्ष में 2-4% isoflurane के साथ चूहों Anesthetize (चरण ३.१ देखें) ।
  3. चूहों को तौलना ।
  4. सुई १५० मिलीग्राम/kg D-luciferin intraperitoneally (चरण ५.६ देखें) ।
  5. गर्भाशय ग्रीवा विस्थापन, 15 मिनट के बाद इंजेक्शन के द्वारा चूहों Euthanize ।
  6. मध्य पेट में त्वचा और आँख काटने से पेट खुला, घुमावदार मेयो कैंची का उपयोग कर. दोनों सही और बाईं ओर चीरा का विस्तार । डायाफ्राम visualized है जब तक संदंश के साथ जिगर बाहर खींचो; फिर, डायाफ्राम काट ।
  7. घुमावदार मेयो कैंची का प्रयोग, caudad से द्विपक्षीय पसलियों में कटौती (12 पसलियों) cephalad (1 पसलियों) पूर्वकाल छाती दीवार flipping द्वारा फेफड़ों को बेनकाब करने के लिए ।
  8. वक्ष घेघा, जो रीढ़ की हड्डी के लिए फेफड़ों को जोड़ने, संदंश का उपयोग कर फेफड़ों को उठाने से और फिर, microdissection कैंची का उपयोग घेघा में कटौती की तरह लग रहा है की पहचान करें ।
  9. संदंश का उपयोग कर द्विपक्षीय फेफड़ों और दिल लिफ्ट (कर्षण नीचे खींच लागू करने, caudad करने के लिए cephalad की दिशा में) और, फिर, श्वासनली और प्रमुख जहाजों cephalad पर फेफड़ों के शीर्ष में कटौती, microdissection कैंची का उपयोग.
    नोट: यह शरीर से फेफड़ों और दिल के अलगाव के लिए अनुमति देता है ।
  10. microdissection कैंची का उपयोग कर फेफड़ों से दिल निकालें ।
  11. फेफड़ों को 10 सेमी पेट्री डिश में डाल दें ।
  12. (luciferin इंजेक्शन के बाद 20 मिनट) इच्छामृत्यु के बाद 5 मिनट (चरणों 5.7.1 और 5.7.2 देखें) bioluminescence छवि पर कब्जा ।

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Representative Results

orthotopic मॉडल का उद्देश्य मानव कैंसर प्रगति की नकल है (यानी, प्राथमिक ट्यूमर के विकास के बाद लिम्फ नोड मेटास्टेसिस और फिर दूर फेफड़ों मेटास्टेसिस)15. कैंसर सेल टीका के बाद, bioluminescence नियमित रूप से quantified है (दो से तीन बार/ फेफड़ों में bioluminescence गहरी और प्राथमिक घावों की तुलना में छोटा है । bioluminescence मुख्य रूप से जीवित चूहों3 (चित्रा 1b और 1C) में प्राथमिक ट्यूमर बोझ को दर्शाता है । ट्यूमर का आकार भी कैलिपर माप द्वारा मापा गया था । ट्यूमर की मात्रा निंनलिखित समीकरण का उपयोग कर अनुमान लगाया गया था: volume = (लंबाई) x (चौड़ाई)2/ bioluminescence और कैलिपर माप द्वारा ट्यूमर के बोझ के ठहराव प्रतिनिधि परिणामों में समान रुझान दिखाया (आंकड़ा 1b और 1 d); हालांकि, हमें कभी-कभार फ़र्क पड़ता है । हमें लगता है कि प्राथमिक ट्यूमर बोझ bioluminescence का उपयोग बढ़ाता है और अधिक सटीक कैलिपर द्वारा ट्यूमर के आकार को मापने की तुलना में जब ट्यूमर का आकार १.५ सेमी से कम है । क्योंकि यह व्यवहार्य कैंसर कोशिकाओं को दर्शाता है, यहां तक कि कोशिकाओं की एक छोटी संख्या bioluminescence द्वारा पता लगाया जा सकता है, और केवल कैंसर कोशिकाओं ट्यूमर के अंदर पता लगाया जा सकता है, प्रतिरक्षा कोशिकाओं या आसपास के stromal कोशिकाओं3घुसपैठ सहित नहीं. यह मॉडल विरोधी कैंसर दवा और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं3,7,16द्वारा मध्यस्थता ट्यूमर प्रतिगमन की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने में उपयोगी है. फेफड़ों मेटास्टेसिस के ट्यूमर का बोझ भी इस मॉडल (चित्रा 1E) में पूर्व vivo इमेजिंग द्वारा quantified जा सकता है; हालांकि, सीमा है कि चूहों मेटास्टेटिक ट्यूमर बोझ यों तो euthanized होना चाहिए ।

mastectomy मॉडल के प्रयोजन के लिए है 1) मानव स्तन कैंसर, जो प्राथमिक ट्यूमर17के सर्जिकल हटाने की देखभाल के उपचार के मानक प्रतिलिपि, और 2) vivo में मेटास्टेटिक ट्यूमर बोझ के धारावाहिक ठहराव अनुमति देते हैं । यह मॉडल उपंयास चिकित्सकीय13के विकास के नैदानिक अध्ययन में विशेष रूप से उपयोगी है । के रूप में पहले से प्रकाशित, एक Src अवरोध करनेवाला, AZD0530, जो नैदानिक चूहों मॉडल में प्रभावकारिता दिखाया लेकिन स्तन कैंसर के इलाज के लिए एक नैदानिक परीक्षण में विफल रहा है, प्राथमिक mastectomy बिना orthotopic टीका उपयोग घाव में प्रभावकारिता दिखाया लेकिन नहीं फेफड़ों मेटास्टेसिस में mastectomy यहां प्रस्तुत मॉडल का उपयोग । हालांकि विरोधी कैंसर दवाओं (जैसे, anthracyclines) neoadjuvant चिकित्सा प्राथमिक स्तन ट्यूमर का इलाज करने के लिए के रूप में मनुष्य में इस्तेमाल कर रहे हैं, दवाओं के विशाल बहुमत सहायक चिकित्सा के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं, जहां दवाओं सर्जरी के बाद पुनरावृत्ति के जोखिम को कम करने के लिए दिया जाता है नैदानिक undetect कैंसर या मेटास्टेटिक कैंसर1,7,18के लिए प्रशामक उपचार के रूप में इलाज. इस प्रकार, यह mastectomy मॉडल स्थापित किया गया था, जो मानव उपचार प्रक्रिया11नकल ।

कैंसर कोशिका टीका के आठ दिन बाद, प्राथमिक ट्यूमर शल्य चिकित्सा (चित्रा 2) हटा दिया है । मेटास्टेटिक घावों के लिए किसी भी दवा efficacies का परीक्षण करने के लिए, यह mastectomy के बाद administrated किया जाना चाहिए । यह मॉडल फेफड़ों मेटास्टेटिक घाव ठहराव के लिए अनुमति देता है, साथ ही पूरे शरीर मेटास्टेटिक घाव ठहराव, जब तक मेटास्टेटिक ट्यूमर के बोझ के रूप में vivo इमेजिंग में एक जासूसी bioluminescence का उपयोग किया है । पूर्वकाल छाती दीवार स्थानीय पुनरावृत्ति दर काफी कम है । हमारे अनुभव में, स्थानीय पुनरावृत्ति दर ५० चूहों के प्रयोगों से अधिक में 5% से कम था. हालांकि, यदि पश्चात दिन 1 bioluminescence से अधिक 1.00 e + 06 फोटॉनों (10x अंय व्यक्तियों की तुलना में बड़ा), वहां एक स्थानीय अवशिष्ट ट्यूमर के एक उच्च संभावना है13। वहाँ बचे हुए कैंसर की कोशिकाओं मौजूद हैं, तो एक स्पष्ट ट्यूमर दो सप्ताह के भीतर दिखाई देता है । जब वहां एक स्थानीय अवशिष्ट ट्यूमर है, bioluminescence मुख्य रूप से किसी भी मेटास्टेटिक घावों के बजाय कि स्थानीय पुनरावृत्ति को दर्शाता है । स्थानीय अवशिष्ट ट्यूमर दूर मेटास्टेसिस19से बहुत अलग ढंग से व्यवहार करने के लिए जाना जाता है; इस प्रकार, उन जानवरों को स्थानीय पुनरावर्तन के साथ (< 5% हमारे अनुभव में) किसी भी और विश्लेषण से बाहर रखा जाना चाहिए । यह mastectomy मॉडल भी जानवरों euthanize करने के लिए बिना धारावाहिक मेटास्टेटिक ट्यूमर बोझ की निगरानी के लिए अनुमति देता है । इसके अलावा, इस तरह के bioluminescent निगरानी पूर्व vivo फेफड़े मेटास्टेसिस ठहराव द्वारा पुष्टि की जा सकती है । इसके बजाय पूर्व vivo इमेजिंग द्वारा फेफड़ों मेटास्टेसिस को बढ़ाता है, इस प्रकार पशुओं euthanize करने वाले, शल्य चिकित्सा उपचार के बाद चूहों अस्तित्व भी एक अनुवाद नैदानिक समापन बिंदु के रूप में निगरानी की जा सकती है (चित्रा 2d) । के बाद से वहाँ कोई प्राथमिक घाव है, चूहों इच्छामृत्यु ट्यूमर मानदंड है जो आम तौर पर > 2 सेमी या प्राथमिक ट्यूमर के अल्सर के एक ट्यूमर आकार के रूप में परिभाषित कर रहे हैं को पूरा नहीं कर सकते । इस 4T1 mastectomy मॉडल में मेटास्टेसिस के कारण कैंसर सेल टीका के बाद ६० दिनों के भीतर सभी चूहों की मृत्यु हो गई ।

Figure 1
चित्रा 1: mastectomy के बिना orthotopic मॉडल का अवलोकन. (क) इस पैनल 4T1 syngeneic मॉडल का उपयोग orthotopic मॉडल का एक समय पाठ्यक्रम से पता चलता है । (ख) यह पैनल एक orthotopic मॉडल के पूरे शरीर bioluminescence है जो मुख्य रूप से प्राथमिक ट्यूमर को दर्शाता है दिखाता है । त्रुटि पट्टी माध्य (n = 10) की मानक त्रुटि को इंगित करती है । (ग) यह पैनल पूरे शरीर bioluminescence (एक ही माउस के) के धारावाहिक छवियों को दर्शाता है । स्केल बार 1 सेमी इंगित करता है । (घ) इस पैनल के पैनल बीके वास्तविक ट्यूमर आकार से पता चलता है, कैलिपर्स द्वारा मापा । त्रुटि पट्टी माध्य (n = 10) की मानक त्रुटि को इंगित करती है । (ङ) यह पैनल 10 orthotopic मॉडल चूहों (n = 10) के फेफड़े ex vivo bioluminescence छवियां दिखाता है । स्केल बार 1 सेमी इंगित करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: mastectomy मॉडल का अवलोकन. (क) यह पैनल 4T1 orthotopic syngeneic आरोपण के बाद mastectomy मॉडल का एक टाइम कोर्स दिखाता है. स्केल बार 1 सेमी इंगित करता है । (ख) यह पैनल mastectomy मॉडल के पूरे-बॉडी bioluminescence को दिखाता है, जो मुख्य रूप से मेटास्टेटिक घावों को दर्शाता है । त्रुटि पट्टी माध्य (n = 10) की मानक त्रुटि को इंगित करती है । (ग) यह पैनल पूरे शरीर bioluminescence (एक ही माउस के) के धारावाहिक छवियों को दर्शाता है । पूर्व vivo इमेजिंग का उपयोग, यह संकेत था कि फेफड़ों मेटास्टेसिस से थे, और कोई स्थानीय पुनरावृत्ति फेफड़ों को हटाने के बाद पूरे शरीर इमेजिंग द्वारा पुष्टि की गई थी । स्केल बार = 1 cm. (D) यह पैनल किसी भी दवा उपचार के बिना mastectomy मॉडल के कापलान-Meier जीवन रक्षा वक्र को दर्शाता है । चूहे जब किसी वीभत्स हालत से इच्छामृत्यु मानदंड पर पहुँचे तो euthanized थे. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

पिछले एक दशक के लिए, हम कई murine कैंसर मॉडल, स्तन कैंसर मॉडल3,7,13,16,20,21सहित स्थापित किया गया है । पहले, हम का प्रदर्शन किया है कि स्तन कैंसर सेल orthotopic प्रत्यक्ष दृष्टि के तहत स्तनों में ग्रंथि ऊतक टीका कम आकार परिवर्तनशीलता के साथ एक बड़ा ट्यूमर का उत्पादन एक शल्य चीरा के बिना निप्पल के आसपास कोशिकाओं इंजेक्शन की तुलना में7 . इस मॉडल पर एक चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण में एक सेल निलंबन का उपयोग करके सुधार किया गया है । जिलेटिन प्रोटीन मिश्रण निलंबित कोशिकाओं द्वारा उत्पंन ट्यूमर की आकृतियों कम परिवर्तनशीलता के साथ दौर थे, जबकि पंजाबियों द्वारा उत्पंन-निलंबित कोशिकाओं स्तन ग्रंथि3में बिखरे हुए थे ।

हम आगे की पुष्टि की है कि शल्य चिकित्सा orthotopic आरोपण विधि द्वारा उत्पंन ट्यूमर यहां प्रस्तुत उच्च जीन जिसका संपर्क नेटवर्क कैंसर प्रगति में महत्वपूर्ण गैर सर्जिकल या चमड़े के नीचे द्वारा उत्पंन उन की तुलना में व्यक्त कर रहे है इंजेक्शन7. इन निष्कर्षों का मतलब है कि इस मॉडल की नकल मानव स्तन कैंसर बेहतर गैर सर्जिकल orthotopic या चमड़े के नीचे आरोपण7की तुलना में । हम यह भी प्रदर्शित किया है कि इस मॉडल के लिए allogenic अस्वीकृति3का उपयोग कर स्तन कैंसर के प्रतिरक्षा मध्यस्थता प्रतिगमन का मूल्यांकन उपयुक्त है । हालांकि, त्वचा चीरा भी ट्यूमर के आसपास सूजन पैदा कर सकता है14। इसलिए, अंवेषक द्वारा परीक्षण परिकल्पना पर निर्भर करता है, यह एक संभव प्राप्त कारक के रूप में सूजन पर विचार करने के लिए महत्वपूर्ण है ।

neoadjuvant सेटिंग के अलावा, प्रणालीगत चिकित्सा के विशाल बहुमत प्राथमिक स्तन ट्यूमर शल्य चिकित्सा11हटा दिया जाता है के बाद प्रशासित रहे हैं । तिथि करने के लिए, नई दवा के विकास के लिए नैदानिक अध्ययन के बहुमत प्राथमिक ट्यूमर में दवा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन, लेकिन नहीं मेटास्टेटिक घावों में1,18. पशु मॉडल और मानव उपचार के बीच यह विसंगति महत्वपूर्ण है क्योंकि मेटास्टेटिक घावों के जीन प्रोफ़ाइल प्राथमिक घावों22के उन लोगों से काफी अलग है, जो कैंसर जीव विज्ञान और उपचार के लिए महत्वपूर्ण निहितार्थ है , विशेष रूप से लक्षित थेरेपी22के युग में । इसलिए, सहायक चिकित्सा के लिए दवा की प्रभावकारिता मेटास्टेटिक घावों में मूल्यांकन किया जाना चाहिए, केवल प्राथमिक ट्यूमर में नहीं. हम orthotopic टीका के बाद लिम्फ नोड और फेफड़े मेटास्टेसिस गठन के समय सत्यापित, 4T1 स्तन कैंसर orthotopic मॉडल16का उपयोग । हम यह भी दर्शाया कि प्राथमिक ट्यूमर के एक लकीर मेटास्टेटिक स्तन कैंसर mastectomy मॉडल23का उपयोग में अस्तित्व में सुधार । इस प्रकार, हम orthotopic कैंसर कोशिका आरोपण के बाद एक mastectomy मॉडल स्थापित करने की कोशिश की । हालांकि, इस कम स्थानीय पुनरावर्तन मॉडल को स्थापित करने के लिए एक लंबा समय व्यतीत किया गया था । क्योंकि कैंसर की कोशिकाओं को सर्जिकल चीरा के माध्यम से इंजेक्ट कर रहे हैं, कैंसर कोशिकाओं को आसानी से घाव में विस्थापित । इसके अलावा, कैंसर की कोशिकाओं को ट्यूमर के साथ सीधे संपर्क में ऊतकों पर आक्रमण, इस तरह के आसपास के सीने में दीवार की मांसपेशी और त्वचा के रूप में । कैंसर की कोशिकाओं को भी mastectomy के समय में एक दृश्य कांख मास के गठन के बिना लिम्फ नोड्स कांख करने के लिए metastasize । जबकि ट्यूमर को हटाने के एक आसान तकनीक हो सकता है, ऐसा करने से स्तन कैंसर के इलाज में mastectomy के लिए अनुवाद योग्य नहीं है क्योंकि यह स्थानीय पुनरावृत्ति13का कारण बनता है । इस प्रकार, इस "कट्टरपंथी mastectomy मॉडल" के लिए पूर्वकाल छाती की दीवार और कांख लिम्फ नोड बेसिन से सभी कैंसर कोशिकाओं को दूर करने के क्रम में स्थापित किया गया था, जैसा कि चित्रा 2में वर्णित है । हम प्रोटोकॉल और फेफड़े पूर्व vivo इमेजिंग द्वारा फेफड़ों मेटास्टेसिस की पुष्टि की है, और फेफड़ों को हटाने के बाद कोई चमक घाव पूरे शरीर इमेजिंग द्वारा मौजूद था । इस 4T1 orthotopic मॉडल में, कैंसर कोशिकाओं अंततः फेफड़ों के लिए metastasize, 21 दिनों के भीतर सभी मामलों में । हालांकि, मेटास्टेसिस के समय प्राथमिक ट्यूमर आकार पर निर्भर करता है; इस प्रकार, कम प्राथमिक ट्यूमर आकार परिवर्तनशीलता न केवल प्राथमिक ट्यूमर पर भी मेटास्टेटिक ट्यूमर बोझ की निगरानी के लिए महत्वपूर्ण है । चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण का उपयोग करके, ट्यूमर का आकार परिवर्तनशीलता कम किया जा सकता है । हालांकि, चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण भी ट्यूमर microenvironment को प्रभावित कर सकते हैं । इसलिए, चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण का उपयोग के साथ जुड़े संभावित निराधार कारकों पर विचार किया जाना चाहिए, अंवेषक की परिकल्पना पर निर्भर करता है ।

इन तकनीकों और luciferase-व्यक्त कैंसर कोशिकाओं का उपयोग कम माप त्रुटि के साथ ठहराव ट्यूमर बोझ के लिए अनुमति देते हैं, यहां तक कि गैर स्पष्ट ट्यूमर में । वहां दो रिपोर्टर प्रणाली, bioluminescent और फ्लोरोसेंट, रहते पशुओं में संकेतों कल्पना कर रहे हैं । जबकि यह बताया गया है कि bioluminescence और प्रतिदीप्ति दोनों का सिग्नल ठहराव के लिए काफी ब्राइट हो सकता है, जब टारगेट सिग्नल बहुत कम होता है तो प्रतिदीप्ति का बैकग्राउंड सिग्नल अधिक होता है, जो कि परख की सटीकता को कम करता है । इसके विपरीत, bioluminescence कम पृष्ठभूमि हस्तक्षेप24के साथ एक कम संकेत पर अधिक से अधिक सटीकता के साथ पता चला है. तदनुसार, अधिकांश जांचकर्ताओं रहते पशु प्रयोगों24,25में bioluminescence रिपोर्टर सिस्टम का उपयोग करना पसंद करते हैं । हालांकि, bioluminescence द्वारा ट्यूमर बोझ ठहराव अपनी सीमाएं हैं । Luciferase-व्यक्त कोशिकाओं चमक जब luciferin हृदय छिड़काव26द्वारा कैंसर की कोशिकाओं तक पहुंचता है । यदि घाव हाइपोक्सिया और/या hypoperfusion का एक क्षेत्र है, luciferin कोशिकाओं को दिया और bioluminescence मान सकता है, तो, वास्तविक ट्यूमर बोझ से कम होना मापा जा नहीं है । वास्तव में, हम अनुचित bioluminescence ठहराव अनुभव किया है जब ट्यूमर आकार से अधिक १.५ सेमी तक पहुंच गया । हम मानते है कि यह वर्णित hypoxic और/या hypoperfused शर्त के कारण है । इस प्रकार, जब ट्यूमर एक स्पष्ट आकार तक पहुंचता है, ट्यूमर बोझ दोनों bioluminescence और कैलिपर माप द्वारा quantified है । bioluminescence ठहराव की एक महत्वपूर्ण सीमा पर विचार करना चूहों का काला फर है. फर भी हटा दिया जाता है के बाद, वहाँ त्वचा पर रंजकता है27. जबकि bioluminescence का पता लगाया जा सकता है और काले फर से चूहों में quantified, यह कमी आई है और, इसलिए यह जरूरी है क एक दूसरे के लए एक ही फर रंग के चूहों की तुलना की जाए ताकि bioluminescent ठहराव पर फर रंग के पाए जाने वाले प्रभावों को कम कया जा सके. luciferase-व्यक्त कोशिकाओं के उपयोग के अध्ययन के लिए कुछ अद्वितीय मोडल प्रदान करता है । उदाहरण के लिए, स्रावी luciferase28bioluminescence रक्त या मूत्र को मापने के द्वारा ट्यूमर बोझ ठहराव के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । यहां प्रस्तुत मॉडल में, गैर स्रावी luciferase के साथ जीवित पशुओं में व्यवहार्य कैंसर कोशिकाओं के प्रत्यक्ष ट्यूमर बोझ ठहराव सरल और सीधा है, जो रक्त या मूत्र के नमूनों को इकट्ठा करने की आवश्यकता नहीं है ।

मॉडल है जो यहां शुरू की इसी तरह, कम परिवर्तनशीलता के साथ tumorigenesis की एक उच्च सफलता दर उत्पादन द्वारा एक अधिक कुशल पशु प्रयोग के उत्पादन के निष्कर्षों को साबित करने के लिए महत्वपूर्ण है । वर्तमान मॉडल में, एक बार एक अंवेषक तकनीक सीखा है, यह एक १००% tumorigenesis दर को प्राप्त करने के लिए आसान है । हमने अपने द्वारा पेश किए गए मॉडलों के अलावा उच्च tumorigenesis दरें भी हासिल कीं; इसके अलावा, हम एक बृहदांत्र कैंसर orthotopic एक चिपचिपा प्रोटीन मिश्रण में सेल निलंबन का उपयोग मॉडल, bioluminescence प्रौद्योगिकी के साथ एक साथ की स्थापना की है ट्यूमर के बोझ को बढ़ाता है21। अंत में, यहां प्रस्तुत पशु मॉडल एक उपयुक्त murine मॉडल कैंसर अध्ययन संचालित करने के लिए प्रदान करता है ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

यह काम NIH ग्रांट R01CA160688 और सुसान जी Komen फाउंडेशन जांचकर्ता शुरू अनुसंधान अनुदान (IIR12222224) द्वारा समर्थित किया गया था K.T. चूहों bioluminescence छवियों को साझा संसाधन शोधों इमेजिंग द्वारा प्राप्त किए गए रोसवेल पार्क में साझा संसाधन व्यापक कैंसर केंद्र है, जो कैंसर केंद्र सहायता अनुदान (P30CA01656) और साझा इंस्ट्रूमेंटेशन अनुदान (S10OD016450) द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro Dissection Scissors Roboz RS-5983 For cancer cell inoculation and masstectomy
Adson Forceps Roboz RS-5233 For cancer cell inoculation and masstectomy
Needle Holder Roboz RS-7830 For cancer cell inoculation and masstectomy
Mayo Roboz RS-6873 For ex vivo
5-0 silk sutures Look 774B For cancer cell inoculation and masstectomy
Dry sterilant (Germinator 500) Braintree Scientific GER 5287-120V For cancer cell inoculation and masstectomy
Clipper Wahl 9908-717 For cancer cell inoculation and masstectomy
Matrigel Corning 354234 For cancer cell inoculation
D-Luciferin, potassium salt GOLD-Bio LUCK-1K For bioluminescence quantification
Roswell Park Memorial Insitute 1640 Gibco 11875093 For cell culture
Fetal Bovine Serub Gibco 10437028 For cell culture
Trypsin-EDTA (0.25%) Gibco 25200056 For cell culture

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References

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Katsuta, E., Oshi, M., Rashid, O. M., Takabe, K. Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy. J. Vis. Exp. (141), e57849, doi:10.3791/57849 (2018).

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