Summary
Denne protokollen demonstrerer hvordan å spore et protein kjernefysiske translokasjon under varmestress med en grønn fluorescens protein (GFP) fusion protein som en markør og 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) flekker. DAPI flekker protokollen er rask og beholder GFP og protein subcellular lokalisering signaler.
Abstract
I denne protokollen, en grønn fluorescens protein (GFP) fusion protein og 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) flekker brukes til å spore protein subcellular lokalisering endringer; spesielt en kjernefysisk translokasjon under en varme stress tilstand. Proteiner reagere tilsvarende til eksterne og interne signaler. En vanlig mekanisme er å endre sin subcellular lokalisering. Denne artikkelen beskriver en protokoll for å spore protein lokalisering som ikke krever et antistoff, radioaktivt merking eller AC confocal mikroskop. I denne artikkelen brukes GFP å merke målet protein EXL-1 i C. elegans, medlem av klorid intracellulær kanal proteiner (CLICs) familien, inkludert pattedyr CLIC4. En integrert translasjonsforskning exl-1::gfp transgene linje (med en pådriver og en full genet sekvens) ble opprettet av transformasjon og γ-stråling, og uttrykker stabilt gene og gfp. Nyere forskning viste at ved varmestress, ikke oksidativt stress, EXL-1::GFP akkumuleres i kjernen. Overlappende GFP signalet med både kjerner strukturen og DAPI signaler bekrefter EXL-1 subcellular lokalisering endringene under stress. Denne protokollen presenterer to forskjellige fiksering metoder for DAPI flekk: etanol fiksering og aceton fiksering. DAPI fargeprotokoll presenteres i denne artikkelen er rask og effektiv og bevarer både GFP signalet og protein subcellular lokalisering endringene. Denne metoden krever bare fluorescens mikroskop med Nomarski, et FITC-filter og et DAPI-filter. Det er egnet for en lite laboratorium innstilling, en student forskning, high school student forskning og bioteknologi klasserom.
Introduction
En endring av protein subcellular lokalisering er en vanlig mekanisme svar på interne eller eksterne signaler som varmestress, sult, oksidativt stress, apoptose, protein fosforylering og andre. For eksempel induserer varmestress medlem FOXO DAF-16 kjernefysiske translokasjon1,2, og pro-apoptotisk BCL-2 protein bud translocates til mitokondrier etter mottak død signalering3,4. Det finnes ulike teknikker å oppdage endringene. En kombinasjon av vestlige blotting og biokjemisk isolere subcellular strukturer (f.eks, mitokondrier eller kjerner) kan godt oppnå mål3. Men krever det et spesifikt antistoff mot protein av interesse. Dermed blir et veletablert antistoff nøkkelen til suksess. En alternativ tilnærming er å merke ulike subcellular strukturer eller organeller med ulike indikatorer som grønne fluorescens protein (GFP), røde fluorescens protein (RFP), gul fluorescens protein (YFP) og mCherry, og i mellomtiden gi protein av interesse med andre indikatorer. Deretter observere dem under AC confocal mikroskop å lokalisere mål5,6. Isotopene er et alternativ valg for å merke målet proteiner og deretter oppdage deres subcellular lokalisering7. Denne metoden krever imidlertid riktig trening og håndtering av radioaktivt avfall. Under omstendigheter som mangel på et spesifikt antistoff, fravær av en skikkelig markør eller scarceness utstyr som AC confocal mikroskop må en alternativ tilnærming vurderes. For å identifisere et protein kjernefysiske translokasjon, er det attraktivt bare Merk målet proteiner med en markør og stain kjerner med kjemisk reagens 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) siden dette krever bare vanlig fluorescens mikroskop.
Immunolabeling C. elegans med antistoffer er utfordrende på grunn av lav permeabilitet eggeskall eller collagenous cuticle rundt dyret. I mellomtiden siden C. elegans proteiner er betydelig avvikende fra deres virveldyr orthologs, gir noen kommersielle selskaper C. elegans med bestemte produkter. Det er vanskelig for lite laboratorium generere C. elegans antistoffer for seg selv. Forskere i samfunnet bruker ofte merket proteiner som markører for å demonstrere en protein lokalisering eller genet uttrykk. Denne artikkelen bruker EXL-1::GFP eksempel spore et protein kjernefysiske translokasjon under varme stress8. En integrert translasjonsforskning exl-1::gfp til dyr genomet brukes stabilt uttrykke genet med gfp fusion. Forskning viste at exl-1 er uttrykt i tarmen, kroppen veggen muskler og andre subcellular strukturer8. Denne protokollen demonstrerer hvordan du synkronisere ormer til fjerde (L4) larvestadiet, utføre en varme stress eksperimentet og oppførsel DAPI flekker, etanol fiksering, aceton fiksering og bildebehandling under vanlige fluorescens mikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. løsninger
-
NGM plater
- I en 2 L Erlenmeyer bolle, Legg 3 g av NaCl, 17 g agar, 2.5 g av pepton og 975 mL av dH2O. dekket munningen av flasken med aluminiumsfolie. Autoclave kolbe for 50 min. avkjøle den i 20-30 min.
- Deretter legger sterilisert løsninger: 1 mL 1 M CaCl2, 1 mL av 5 mg/mL kolesterol i etanol, 1 mL 1 M MgSO4og 25 mL 1 M KPO4 (pH 6.0) bufferen. Swirl løsninger å blande dem godt.
- Bruker en flytende dispenser, dispensere NGM løsningen 60 mm Petri plater. Fyll platene 2/3 full av agar. Lagre dem i en lufttett beholder på 4 ° C for fremtidig bruk.
-
1 M KPO4 buffer (pH 6.0)
- Oppløse 10.83 g KH2PO4 og 3.56 g K2HPO4 i dH2O, og deretter justere det totale volumet til 100 mL. Autoclave løsningen for 15 min.
-
M9
- Oppløse 3 g KH2PO4, 6 g av Na2HPO4og 5 g av NaCl i dH2O, legge til 1 mL 1 M MgSO4, og justere det totale volumet til 1 L.
-
10 µg/mL DAPI
- Legge 1 µL av 10 mg/mL DAPI til 999 µL av dH2O.
-
95% alkohol (v/v)
- 95 mL av 100% alkohol og legge destillert vann for å justere volumet til 100 mL.
-
30% aceton (v/v)
- Legge til 30 mL av acetone dH2O og justere det totale volumet til 100 mL.
2. heat Stress
- Generere en extrachromosomal matrise linje med en translational konstruksjon av målet gener9,10. Eventuelt få slike linjer fra Caenorhabditis genetikk Center (CGC), som er en verdensomspennende ressurs for C. elegans forskning, eller fra et tidligere utgitt forskningslaboratorium.
- Integrere extrachromosomal linjene i genomet ved å utsette ormer 3800 Rad γ-stråling9. Velg deretter stabilt uttrykt linjene slik at hvert dyr uttrykker en markør protein som en GFP eller roller.
- Hvis du vil fjerne mutasjoner genereres under stråling, høylytt protest linjene minst 2 x. Bruk denne transgene linjen for å oppdage protein uttrykk mønster endringer under stress.
- Forberede NGM ormen plater som beskrevet i trinn 1.1. Strek en OP50 klone og kultur bakterier i flytende LB kjøttkraft over natten. Frø NGM platene med flytende OP50 kultur og ruge plater i en inkubator 37 ° C over natten for å vokse en plen for bakterier som matkilde for ormer. Avkjøl platene i romtemperatur i minst 30 min før bruk.
- Vokse transgene linjen på 20 ° C uten sult i minst 2 generasjoner før varme stress analysen.
- Velg 8-10 unge gravid voksne (livmor fylt med egg) til en ny orm plate, så la dem legge egg for ca 3-5 h og fjerne alle voksne fra platene.
- Hvis du vil synkronisere ormer, la eggene klekkes og vokse Larvene for ca 48 timer til fjerde (L4) larvestadiet. Undersøke vulva strukturen (en halvmåne struktur) for å identifisere L4 scenen (figur 1, pil)11.
- Plass ormen platene med L4 Larvene i en 35 ° C inkubator for 2-5 h å oppnå varmestress. Legg et termometer i inkubator å måle temperaturen.
3. DAPI flekker
-
Etanol fiksering
- Legge til 10 µL av M9 bufferen i midten av et glass lysbilde.
- Velg varme-sjokkert ormer fra trinn 2.8 og sette dem inn i M9 buffer på av objektglass.
- Alternativt, vaske platen med M9 sentrifuge det 1000 x g i 1 min i romtemperatur og forkaste nedbryting. Legge til ormer av objektglass.
- Bruk en myk vev for å drenere overflødig væske. Se dette trinnet under dissecting mikroskop.
- Legg 10 µL av 95% alkohol på ormer og la dem lufttørke. Se prosessen under dissecting mikroskop, og ikke la dyrene bli for tørr. Umiddelbart etter etanol har fordampet fra dyrene, fortsette til neste trinn.
Merk: Etanol fordamper raskt. - Gjenta trinn 3.1.4 to ganger slik at ormer er løst.
Merk: Det er normalt for dyr å se mørkere og forvrengt. - Legge til 10 µL av DAPI (10 µg/mL) til ormer. Umiddelbart dekke dem med en dekkglassvæske og forsegle lysbildet med gjennomsiktig neglelakk gel.
- Se dyrene etter ca 10 min til fluorescens mikroskop.
-
Aceton fiksering (en alternativ tilnærming)
- Vaske av varme-sjokkert platen fra trinn 2.8 med M9 sentrifuge det 1000 x g i 1 min i romtemperatur og forkaste nedbryting. Vask pellets med 1 mL av dH2O samle pellet og forkaste nedbryting.
- Legge til 400 µL av 30% aceton i 15 min. sentrifuge 1000 x g i 1 min i romtemperatur og kast nedbryting. Bruk 500 µL av dH2O vask dyrene 2 x. Kast nedbryting.
- Legge til 200 µL av DAPI (10 µg/mL), eller 4 x antall totale ormer volum, i røret i 15 min.
- Sentrifuge 1000 x g for 1 min og kast nedbryting. Vask pellet 2 x med 500 µL av dH2O. plassere ormer på glass lysbilder, dekke dem med coverslips, forsegle lysbildet med gjennomsiktig neglelakk gel og observere dyrene under fluorescens mikroskop.
4. mikroskopiske Imaging
- Slå på UV lyskilden og fluorescens mikroskop. Slå på datamaskinen koblet til mikroskopet.
- Laste inn lysbildet på fluorescens mikroskopet. Bruk en strømsparingsmodus linsen (10 X) til å finne ormer, øke forstørrelsen kraften til 400 X og fokuser på prøven.
- Åpne programvaren med mikroskopet. Klikk på "Erverv" i menyen. Klikk på "Kamera" og velg kameraet koblet til mikroskopet; Dette gjør at valgte kameraet å kommunisere med programvaren.
Merk: Forskjellige mikroskop kan variere i drift. - Under samme "Kjøp", klikk på "Flerdimensjonale erverv". Dette åpner en ny "Flerdimensjonale erverv" Navigasjon-vinduet. Klikk knappen "Multichannel", og alle tilgjengelige kanaler vises.
- Velg blå, grønn og DIC (differensial forstyrrelser kontrast) å observere prøven. "Flerdimensjonale erverv" navigasjon, la den "Blå-DAPI", "Grønn-GFP" og "Grey-DIC", "Nomarski" kanaler. Høyreklikk på andre kanaler, som "Red-rhodamine" og "White-lyse felt", lukke dem.
-
Først måle eksponeringstid for hver kanal:
- Venstreklikk "Blue-DAPI" kanal og velg det og klikk deretter på "Mål" for et levende bilde under DAPI kanalen med automatisert eksponeringstid. Et nytt vindu med et levende bilde vises.
- På venstre side i vinduet levende bilde, manuelt justere eksponeringstiden hvis nødvendig for å gjøre bildet som ønsket.
- Til slutt, klikk på "" OK "i vinduet levende bilde. Dette setter eksponeringstid under DAPI kanalen.
- Gjenta trinn 4.6 for andre kanaler, "Grønn-GFP" og "Grey-DIC", "Nomarski", å sette opp eksponering tidspunktene for disse kanalene.
- "Flerdimensjonale erverv" navigasjon, klikk på "Start" for å automatisk samle 3 bilder under i 3 forskjellige kanaler for (se ovenfor) med bestemte eksponeringstider som.
- Hvis du vil lagre filen, gå til hovedmenyen, klikk på "File" og deretter på "Lagre som". Angi filnavnet og navnet på mappen. Lagre filen som standard filformat å bevare detaljert tenkelig informasjon for fremtidig referanse.
-
Eksportere filen i andre formater:
- Gå til "Fil" og klikk på "Export". Dette vil åpne opp en eksport innstilling vinduet.
- Angitt filnavn og mappe. Se "Opprette en prosjektmappe" bedre organisere dataene. Programvaren også lar brukeren angi 4 andre alternativer: "Generer sammen bilder", "Bruk farge for bilder kanal", "Bruk kanal navn" og "Bare sammenslått bilde".
- Velg en ønsket fil fra den miste-ned menyen, som "TIF", "BMP", "PSD", eller "JPG" og andre typer. Klikk på "Start" for å eksportere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Klorid intracellulær kanal proteiner (CLIC) er multifunksjonell proteiner som er svært bevart over arter12. Mye forskning viser at CLICs regulere cellular stress, autophagy, apoptose, kreft, angiogenese og macrophage medfødte immunforsvaret i pattedyr system13,14,15,16 ,17. Det er to CLIC homologs i C. elegans: exl-1 og eks-4. Våre siste studie viste at exl-1 regulerer dyr stress management8. Vi integrert en translational exl-1::gfp -konstruksjon i en dyr genomet og skapte transgene linjene stabilt express gen exl-1 med en GFP som en markør (figur 2A og 2B). Under varmestress akkumuleres EXL-1::GFP i kjernen i regionen intestinal siden sterk GFP signalet overlapper med kjernen struktur (figur 2 C -E). For å bekrefte den subcellular lokaliseringen, ble DAPI flekker brukt som en tilnærming stain kjerner. Bruke etanol fiksering for DAPI flekker viser klart kjerner i dyr kroppen (figur 3B). Aceton fiksering også oppnår lignende resultater (figur 3E). Overlappende GFP og DAPI signalene bekrefter at EXL-1::GFP faktisk akkumulert i kjerner i regionen intestinal (Figur 3 c, F).
Figur 1: Bilder av en fjerde larver (L4) scenen C. elegans under forskjellige forstørrelse krefter. (A) 63 X, (B) 115 X og (C) 400 X forstørrelse. Piler peker til vulva av L4 ormer; Merk halvmåne struktur. Skala bar = 100 µm i alle bilder. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Under varmestress, EXL-1::GFP som er akkumuleres i kjerner i tarmen. (A) Normaski bilde av en intestinal område før heten støt. (B) et sterkt signal om GFP ble observert i instestinal regionen før heten støt. (C) Normaski bilde av intestinal område etter varme støt (piler peker til kjerner i regionen intestinal). (D) et sterkt signal om GFP akkumuleres etter varme sjokk. (E) overlappende bildet av GFP og Normaski. Alle bilder er tatt med 400 X forstørrelse. Skala bar = 50 µm i alle bilder. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: EXL-1::GFP kjernefysiske translokasjon er bekreftet av DAPI flekker. (A-C) Bruke etanol fiksering for DAPI flekker. (D-F) Bruke aceton fiksering for DAPI flekker. A og Dviser grønn farge GFP signalet i intestinal område. B og Eviser blå farge kjerner av DAPI flekker. C og F viser overlappende bilder av GFP, DAPI og Normaski. Skala bar = 50 µm i alle bilder. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Supplerende figur: Aceton fiksering bevarer prøven 60 dager etter aceton fiksering, GFP og DAPI signaler er fremdeles kan ses. (A) Green er for GFP. (B) Blue er for DAPI-signal. (C) overlappende bilde av GFP, DAPI og DIC. Alle bilder er tatt under 400 X forstørrelse. Skala bar = 50 μm. Klikk her for å laste ned denne filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne artikkelen presenteres en rask og effektiv metode for å kontrollere protein subcellular endringer fra cytoplasma til kjernen. Protein uttrykket ble vist av en GFP fusion, mens kjernen strukturen ble bekreftet av DAPI flekker (Figur 3). Siden immunostai- C. elegans proteiner er utfordrende, de fleste C. elegans protein subcellular lokaliseringer kjennetegnes ved å merke dem med markør proteiner som GFP, Laz, mCherry og andre18,19 , 20 , 21. i denne artikkelen, gfp ble brukt til å merke målet genet exl-1 for å demonstrere sin protein mobilnettet lokalisering. For å bekrefte den kjernefysiske lokaliseringen, ble DAPI flekker brukt. To alternative metoder ble presentert for den DAPI flekker. Begge viste effektivt sterk kjerner i worms innenfor en anstendig arbeide tidsramme (mindre enn 1 time). Etanol fiksering er egnet for en liten prøve samling som en kvalitet observasjon (samle mindre enn 50 ormer). Forhindre ormer tørker helt er nøkkelen. Når 95% alkohol fordamper fra ormer, fortsette til neste trinn umiddelbart. Aceton fiksering er egnet for en storstilt prøvetakingen som en kvantitativ analyse (samle over 50 dyr). Men på grunn av flere trinn vaske prøven, vil noen prøven gå tapt. Det anbefales derfor svært nøye fjerne nedbryting og beholde så mange ormer som mulig. Når de er forseglet, kan lysbilder fra aceton fiksering lagres i en uke på 4 ° C.
Denne protokollen kan tilpasses andre proteiner rundt spore subcellular lokalisering endringer. I tillegg til den varme stresset presenteres her, kan andre stress-analyser vurderes, som oksidativt stress, heavy metal stress, kosttilskudd restriksjoner og andre. Protein subcellular lokalisering endring kan også undersøkes ved å endre genetisk bakgrunn av protein av interesse. For eksempel kan transgene linjen være krysset inn en annen mutant bakgrunn, slik at romanen genetisk samspillet kan identifiseres. RNA-interferens (RNAi) kan også brukes for å slå ned bestemte gener og undersøke den resulterende protein subcellular lokalisering forandringen. Disse programmene er av stor interesse å identifisere romanen regulatoriske komponenter. For en ukjent protein, bør ulike eksperimentelle forhold testes, for eksempel testing reagens konsentrasjonen, stress tidsperioden, og de bestemte utviklingsstadier av ormene. I vår studie prøvde vi forskjellige varigheter, fra 30 minutter til 5 h, og ulike varme stress temperaturer. En varme sjokk ved 35 ° C i 3t tydelig viser en protein kjernefysiske translokasjon.
Flere programmer med DAPI farging inkludere undersøkelse av meiose og mitose ormer, spesielt i germline celler22,23,24,25, og antall kjerner i en genetisk muterte bakgrunn20,26,27.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å fortolle.
Acknowledgments
C. elegans påkjenningen brukes i denne studien var oppnådd fra Caenorhabditis genetikk sentrum, som er støttet av National Institutes of Health - Office for forskning infrastruktur programmer (P40 OD010440). Dette arbeidet ble støttet av NIH: 1R03AG048578-01 Jun Liang, CUNY-CCRG 1501 Jun Liang og PSC-CUNY 66184-00 44 og 67248-00 45 til juni Liang. Vi takker Cathy Savage-Dunn for vennlig deler hennes laboratoriet plass. Alle fluorescens bilder ble samlet på Queens College Core anlegget. Vi takker William J. Rice for hans kommentarer på manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DAPI | Biotium | 40043 | both Hoechst 33258 and Hoechst 33342 also works well |
| OP50 | CGC | OP50 | https://cgc.umn.edu/ |
| Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | https://cgc.umn.edu/ | ||
| Kim Wipe | Kimberly-Clark Corporation | soft tissue | |
| Zeiss AX10 | Zeiss | fluorescence microscope | |
| Axiovision Rel 4.8 | Zeiss | microscope software | |
| AxioCam MR Rev3 | Zeiss | digital camera | |
| Incubator | |||
| Micro centrifuge | |||
| Transparent nail polish gel | |||
| 60 mm petri dishes | |||
| Glass slides | |||
| Glass coverslips | |||
| 1-20 µL pipettor | |||
| 20-200 µL pipettor | |||
| 200-1000 µL pipettor | |||
| 1-200 µL pipet tips | |||
| 200-1000 µL pipet tips | |||
| 1.5 mL microcentrifuge tubes | |||
| Platinum wire worm pick |
References
- Essers, M. A., et al. FOXO transcription factor activation by oxidative stress mediated by the small GTPase Ral and JNK. The EMBO Journal. 23 (24), 4802-4812 (2004).
- Oh, S. W., et al. JNK regulates lifespan in Caenorhabditis elegans by modulating nuclear translocation of forkhead transcription factor/DAF-16. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (12), 4494-4499 (2005).
- Gross, A., et al. Caspase cleaved BID targets mitochondria and is required for cytochrome c release, while BCL-XL prevents this release but not tumor necrosis factor-R1/Fas death. The Journal of Biological Chemistry. 274 (2), 1156-1163 (1999).
- Doerflinger, M., Glab, J. A., Puthalakath, H. BH3-only proteins: a 20-year stock-take. The FEBS Journal. 282 (6), 1006-1016 (2015).
- Mayorova, T. D., et al. Cells containing aragonite crystals mediate responses to gravity in Trichoplax adhaerens (Placozoa), an animal lacking neurons and synapses. PLoS One. 13 (1), e0190905 (2018).
- Terron-Camero, L. C., Molina-Moya, E., Sanz-Fernandez, M., Sandalio, L. M., Romero-Puertas, M. C. Detection of reactive oxygen and nitrogen species (ROS/RNS) during hypersensitive cell death. Methods in Molecular Biology. , 97-105 (2018).
- Pedrazzini, E., Vitale, A. Protein biosynthesis and maturation in the ER. Methods in Molecular Biology. , 179-189 (2018).
- Liang, J., Shaulov, Y., Savage-Dunn, C., Boissinot, S., Hoque, T. Chloride intracellular channel proteins respond to heat stress in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 12 (9), e0184308 (2017).
- Evans, T. C. Transformation and microinjection. Wormbook. , edited by The C. elegans Research Community (2006).
- Mello, C., Fire, A.
- Yochem, J. Nomarski images for learning the anatomy, with tips for mosaic analysis. Wormbook. , edited by The C. elegans Research Community (2006).
- Dulhunty, A., Gage, P., Curtis, S., Chelvanayagam, G., Board, P. The glutathione transferase structural family includes a nuclear chloride channel and a ryanodine receptor calcium release channel modulator. The Journal of Biological Chemistry. 276 (5), 3319-3323 (2001).
- Suh, K. S., Malik, M., Shukla, A., Yuspa, S. H. CLIC4, skin homeostasis and cutaneous cancer: surprising connections. Molecular Carcinogenesis. 46 (8), 599-604 (2007).
- Yao, Q., Qu, X., Yang, Q., Wei, M., Kong, B. CLIC4 mediates TGF-beta1-induced fibroblast-to-myofibroblast transdifferentiation in ovarian cancer. Oncology Reports. 22 (3), 541-548 (2009).
- Ronnov-Jessen, L., Villadsen, R., Edwards, J. C., Petersen, O. W. Differential expression of a chloride intracellular channel gene, CLIC4, in transforming growth factor-beta1-mediated conversion of fibroblasts to myofibroblasts. The American Journal of Pathology. 161 (2), 471-480 (2002).
- He, G., et al. Role of CLIC4 in the host innate responses to bacterial lipopolysaccharide. European Journal of Immunology. 41 (5), 1221-1230 (2011).
- Zhong, J., et al. Inhibition of CLIC4 enhances autophagy and triggers mitochondrial and ER stress-induced apoptosis in human glioma U251 cells under starvation. PLoS One. 7 (6), e39378 (2012).
- Liang, J., et al. The Caenorhabditis elegans schnurri homolog sma-9 mediates stage- and cell type-specific responses to DBL-1 BMP-related signaling. Development. 130 (26), 6453-6464 (2003).
- Leopold, L. E., Heestand, B. N., Seong, S., Shtessel, L., Ahmed, S. Lack of pairing during meiosis triggers multigenerational transgene silencing in Caenorhabditis elegans. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (20), E2667-E2676 (2015).
- Schultz, R. D., Bennett, E. E., Ellis, E. A., Gumienny, T. L. Regulation of extracellular matrix organization by BMP signaling in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 9 (7), e101929 (2014).
- Matus, D. Q., et al. Invasive cell fate requires G1 cell-cycle arrest and histone deacetylase-mediated changes in gene expression. Developmental Cell. 35 (2), 162-174 (2015).
- Reddy, K. C., Villeneuve, A. M. C. elegans HIM-17 links chromatin modification and competence for initiation of meiotic recombination. Cell. 118 (4), 439-452 (2004).
- Ames, K., et al. A non-cell-autonomous role of BEC-1/BECN1/Beclin1 in coordinating cell-cycle progression and stem cell proliferation during germline development. Current Biology. 27 (6), 905-913 (2017).
- Pekar, O., et al. Linking the environment, DAF-7/TGFbeta signaling and LAG-2/DSL ligand expression in the germline stem cell niche. Development. 144 (16), 2896-2906 (2017).
- Schvarzstein, M., et al. DNA helicase HIM-6/BLM both promotes MutSgamma-dependent crossovers and antagonizes MutSgamma-independent interhomolog associations during caenorhabditis elegans meiosis. Genetics. 198 (1), 193-207 (2014).
- Flemming, A. J., Shen, Z. Z., Cunha, A., Emmons, S. W., Leroi, A. M. Somatic polyploidization and cellular proliferation drive body size evolution in nematodes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (10), 5285-5290 (2000).
- Nagamatsu, Y., Ohshima, Y. Mechanisms for the control of body size by a G-kinase and a downstream TGFbeta signal pathway in Caenorhabditis elegans. Genes to Cells. 9 (1), 39-47 (2004).
