Summary
밀접 하 게 모방 화상 상해의 모드 하려면 임상 관찰과 동물 모델에서 연구 사이 상호 작용. 이 연구에서 가혹한 화상 상해의 돼지 모델 생리 및 병 태 생리 설정에서 실험적인 드레싱을 평가 하기 위해 설립 되었다.
Abstract
상처 치유는 동적 복구 프로세스 이며 인간의 삶에 가장 복잡 한 생물 학적 과정 이다. 화상 부상에 대응, 생물 학적 경로 변경 지연된 상처 치유의 결과로 염증 응답 손상. 절단과 같은 불리 한 결과에 지도 하는 당뇨병 환자에서 발생 자주 장애인된 상처 치유. 따라서, 드레싱 화상 상처 수리를 홍보에 유익한 효과가 필요 합니다. 그러나, 화상 상처 치료에 대 한 연구는 적절 한 동물 모델의 부족으로 인해 제한 됩니다. 우리의 이전 연구 최소 침 습 수술 기법을 사용 하 여 쥐와 돼지 모델에서 상처 치유 성능 증명. 상처 수축 제거 가혹한 화상 상해의 돼지 모델을 설명 하기 위해이 연구 목적 그리고 더 밀접 하 게 다시 epithelialization 및 새로운 조직 형성의 인간 과정에 근접. 이 프로토콜 일관 된 화상 상처를 만들고 돼지 모델에서 실험적인 드레싱의 치료에서 치유 하는 부상을 성능 검사에 대 한 자세한 절차를 제공 합니다. 6 화상 상처 만들어진 대칭 등에 있는 4 개의 층의 임상 드레싱 덮여 있었다: 실험 재료, 방수 필름 내부 중간 계층, 거 즈, 외부 중간 층의 내부 연락처 계층 그리고 접착 석고의 바깥 레이어입니다. 실험 완료 되 면 상처 폐쇄, 상처, 지역과 밴쿠버 흉터 규모 점수는 시험 되었다. 샘플에서는 각 동물 후 희생에서 절제 하는 피부의 조직학 준비 했다 고 되며 고 오신 얼룩을 사용 하 여 스테인드. 상처 치유의 맥락에서 각 드레싱의 항균 활동 또한 시험 되었다. 임상 돼지 모델에서 상처 드레싱의 응용 프로그램 epithelialization, 세포 증식과 신생의 프로세스와 관련 하 여 치유 하는 인간의 상처의 생물 학적 과정을 모방 합니다. 따라서,이 돼지 모델에는 가혹한 화상 상해에서 임상 드레싱의 효과 평가 하기 위해 배우기 쉬운, 비용 효과, 및 강력한 방법을 제공 한다.
Introduction
화상 상해 염증 성 프로세스를 시작 하 고 환자의 삶의 질에 부정적인 영향의 결과로, 사고 직후 수많은 신체 기능에 영향을 미치는 복잡 한 병 적인 효과 유도 한다. 장애인된 상처 치유 상당한 사망률 그리고 사망 환자 중 당뇨병 mellitus1,2와 발생합니다. 화상 부상으로 대부분의 환자는 화상 상처 debridement, 강력한 opioid 진통제3의 사용에도 불구 하 고 극심 한 과정으로 알려져 있는 동안 통증을 경험.
다른 포유류와 달리 돼지 인간 epithelialization, 세포 증식 및 신생 과정에 관한 여러 해 부와 생리 적인 특성을 공유. 이 돼지 특정 절차 및 연구, 잠재적으로 더 나은 모델을 만들고 그들은 쥐에 있는 유망한 결과 설명 하는 후속 연구에서 자주 사용. 이러한 특징은 전 임상 시험에서 주요 종족으로 돼지의 증가 사용에 이르렀다. 최근, 생물 의학 연구에 심혈 관 질환, 비뇨 기, 외피, 존경 및 소화 시스템의 급속 한 증가4,,56관찰 되었습니다. 이 연구 상처 수축 제거 하 고 새로운 조직의 형성과 인간의 상처 치유 과정의 더 가까운 근사치를 제공 하는 가혹한 화상 상해의 돼지 모델을 설명 하는 것을 목표로. 6 화상 상처에 돼지의 척추의 각 측면에 3 등, 대칭으로 만들어졌습니다. 다음으로, anexperimental 드레싱 인간의 상처 치유 (그림 1) 복제에 적응 될 수 있는 가혹한 화상 상해의 돼지 모델에서 시험 되었다. 상처는 4 개의 층의 구성 되는 임상 드레싱으로 덮여 있었다: 실험 재료의 내부 연락처 계층, 방수 필름 내부 중간 계층, 거 즈, 외부 중간 층 및 접착 석고의 외부 층. 방수 필름 세균 감염을 방지 하 고 가스 드레싱 침투를 허용 하는 동안 습 한 상처 환경을 유지 합니다. 거 즈의 외부 중간 레이어 방수 필름에 적용 되었고 접착성 고 약의 외부 층에 의해 보호. 실험의 완성, 폐쇄 상처, 상처 및 밴쿠버 흉터 규모 (VSS) 점수는 시험 되었다. 샘플에서는 각 동물 후 희생에서 절제 하는 피부의 조직학 준비 했다 고 hematoxylin와 (그가) 오신 얼룩을 사용 하 여 스테인드. 상처 치유의 맥락에서 각 드레싱의 항균 활동 또한이 모델에 시험 되었다. 우리의 이전 연구는 상처 치유 성능을 최소 침 습 수술 방법7을 사용 하 여 쥐와 돼지 모델에서 설명 했다. 6 각 돼지 내 등에서 상처를 굽기 때문에, 각 실험 드레싱 테스트 하 고 치유 과정에 돼지 등 다양 한 관광 명소에 상처와 관련 된 편견을 최소화 하기 위해 모든 위치에서 평가 했다. 따라서,이 연구에 가혹한 화상 상해의 돼지 모델 임상 드레싱의 평가 대 한 새로운 접근법을 제공 하 고 화상 상해에 대 한 새로운 치료의 개발을 용이 하 게. 이 연구는 화상 상처 치유의 이상 밝히기 위해 중요 한 도구를 제공 합니다.
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Protocol
동물 주제와 관련 된 절차는 국가 방위 의료 센터, 대만 (R.O.C)에서 동물 관리 위원회에 의해 승인 되었습니다. 이 연구는 실험실 동물 센터 국가 방위 의료 센터에서 실시 되었다. 돼지 20 및 25 kg 사이 무게는 되었습니다 성공적으로 계측이 프로토콜을 사용 하 여.
1. 인간 취급을 동물의 적응
- 시설에 도착, 후 려 동물 집 하지만 그들이 서로 상호 작용.
- 동물 음식과 물에 대 한 광고 libitum 액세스를 제공 합니다.
- 동물 적어도 1 주일 동안 하루에 한 번 처리 하 여 실험 연구실을 동물 시설에서 인간 취급 및 운송에 돼지를 적응.
- 구역 질, 구 토, 그리고 위장 체액의 열망을 방지 하기 위해 수술 전에 적어도 12 시간 동안 동물을 빨리.
2입니다. 진정
- 화상 상처 창조 하기 전에 동물을 통해 Zoletil 50 (25 mg/kg) 정 맥 주사 진정.
3. 삽 관 법 및 환기
- 테이블 및/또는 sternal 위치에 트롤리에 동물을 놓습니다.
- 구두 분산기와 동물의 입을 엽니다.
- 문 턱의 부족 휴식 또는 삼 키는 반사의 존재는 삽 관 법, 마스크 isoflurane 진정 작용을 유도 하는 것으로 돼지를 방해.
- 잠재적인 합병증을 방지 하기 위해 수술 중 생리 신호 모니터에 혈압, 심장 박동 및 체온을 모니터링 합니다.
4입니다. 마 취
- 유도 하 고 유지 하는 마 취; 가급적 이면 tiletamine 및 zolazepam (25 mg/kg + 25 mg/kg)의 근육 주사를 통해 동물을 anesthetize.
- 때 근육의 이완, 턱의 손실에 의해 특징 및 종을 reflexed, endotracheal 튜브와 함께 동물을 넣어야 관찰 되었다.
- 0.5-2.5의 기화 설정에서 마 취 상태에서 모든 돼지를 유지 % (v/v) isoflurane 수술의 끝까지.
- 수술 전에 뒷 다리 발가락 스푼으로 통증이 반사를 테스트 하 여 마 취의 깊이 검사 합니다. 필요한 경우 추가 마 취를 추가 하거나 몇 분 동안 기다립니다. 수술 내내 정기적으로 통증이 반사를 확인 하십시오.
5입니다. 수술 부위의 살 균
- 면도 하 고 양쪽에 겨드랑이를 척추 칼럼에서 약 25 cm 폭의 지역 동물의 피부를 청소.
- Povidone-요오드 스크럽 (75 mg/mL) 약 5 분으로 moisturized 피부를 문질러.
- Povidone-요오드 비누 젖은 살 균 gauzes를 사용 하 여 피부에서 제거 합니다.
- Povidone-요오드 로션 (100mg/mL)으로 피부를 소독.
- 세균성 전송 및 외과 사이트의 후속 오염 줄이기 위해 불 임 수술 커튼으로 동물을 커버.
6. 화상 상처 만들기
- 수술 마킹 펜을 사용 하 여 대칭으로 돼지의 등에서 6 화상 상처의 센터를 표시. 각 화상 상처 사이의 거리는 최소 상처 (그림 1A)의 반경 보다 큰 확인 하십시오.
- 글 리세 린 50 mL와 수정된 납땜와 온도 모니터링 하는 데 그것에 전자 온도계를 삽입. 뜨거운 철 약 9 cm2 (그림 1B)의 평면 영역을 소유한 다.
- 핫 플레이트 (그림 1C) 137-139 ° C에 철을가 열.
- 30 초 (그림 1C)에 대 한 어떤 힘을 적용 하지 않고 표시 된 지역에는 철을 배치 하 여 6 획 일 한 화상 상처를 만듭니다.
- 0.9% 식 염 수 솔루션 (그림 1D) 화상 상처를 씻어.
- 상처 크기를 측정 하 고 photomicrography (그림 1E)에 의해 상처를 기록 합니다.
7입니다. 드레싱의 준비
- 직접 접촉을 통해 4 층 임상 드레싱의 내부 연락처 레이어와 각 상처를 커버. 이 계층에 대 한 대문자 포함 된 드레싱 또는 대체 물질 (그림 1 층)을 사용 합니다.
- 세균 침투 (그림 1 층)에 대 한 장벽으로 임상 드레싱에 방수 필름을 적용 합니다.
- 거 즈 (0.5 ㎝ 두께)와 각 상처를 커버 하 고 드레싱 (그림 1G)의 중간 계층 역할을 종이 테이프로 해결.
- 접착성 고 약의 외부 층으로 거 즈를 보호 합니다. 드레싱의 변위를 피하기 위해 몸통에이 레이어를 확장 (그림 1 H-1J).
8. 사후 관리 및 레코딩 측정
- 모든 8-12 h, 1 주일에 대 한 마 취에서 회복 하기 전에 잠재적인 통증을 줄이기 위해 시작에 대 한 통증 관리에 대 한 buprenorphine (0.1 mg/kg, 메신저)와 돼지를 주사.
- 피드와 물 돼지 무료로 이용할을 수 있습니다.
- 처음 10 일 동안 2 일 마다 임상 드레싱을 변경 하 고 다음 6 주 동안 일주일에 두 번 공부.
- 깨끗 하 고 임상 드레싱을 다시 적용 하기 전에 상처를 측정. 드레싱 변경 시 마 취약을 관리 합니다.
- 처음 10 일 동안 2 일 마다 상처 치유 속도의 비교에 대 한 photomicrography에 의해 상처를 기록 하 고 다음 6 주 동안 일주일에 두 번 공부.
- 상처 다시 epithelialization 또는 수축 앞에서 설명한 방법에 따라 원래 상처 크기의 백분율로 계산 합니다. 상처 폐쇄의 분석은 눈 멀게 하는 이중 방식으로 실시 됐다.
- 4 개의 변수를 이루어져 있는 VSS를 사용 하 여 화상 흉터를 측정: vascularity, 높이 (두께), 유연성, 및 0, 7, 21, 및 42 후 굽기 일에 착 색. 각 변수는 4 ~ 6 가능한 점수. 총 점수 범위는 0에서 14, 0의 점수를 반영 하는 그것에 의하여 정상적인 피부.
9. 세균 성장 실험 후 화상 조직의
- 면봉 항균 테스트 후 굽기 일 0, 7, 21, 및 42에 대 한 상처.
- 100 mL의 멸 균 생리 식 염 수 0.9%와 부드럽게 균일 현 탁 액을 달성 하는 소용돌이에 면봉을 놓습니다.
- 직렬로 희석 (10− 1– 10−5)는 homogenate와 선택적이 고 비선택적 미디어, 각 희석의 100 μ를 각각 접시.
- 24-72 시간 동안 37 ° C에서 호 기성 조건 하에서 모든 희석을 품 어.
- 혈액 한 천 배지 호 기성 그람 양성 균을 5% 양 혈액 보충에 모든 희석에서 각 10 μ의 플레이트 triplicate aliquots.
- 확산 또는 형성 하는 식민지의 수를 결정 하는 데 하룻밤 한 천 배지 표면에 균일 하 게 샘플을 붓는 하 여 샘플을 품 어 단위 (CFUs).
- 밤새 부 화 후 번호판을 읽기. 양 혈액 한 천 배지를 반전 하 고 마커 및 작은 눈금자를 사용 하 여 4 개의 동등한 사분면으로 접시의 바닥을 나눕니다.
- 해 부 현미경의 스테이지 위에 접시를 놓고 각 접시에 식민지를 계산 합니다. 정의 함으로써, 식민지 최소 300 CFU 열거할 수 있어야 합니다.
- 3 복제의 각 세균성 식민지를 계산 합니다. 3의 평균 값을 복제를 계산 합니다. 접시 당 CFU 최종 희석 비율 평균 값을 곱하여 결정 합니다.
10. 안락사와 조직 고정
- 정 맥 주사 나트륨 pentobarbital 안락사 솔루션 (80-120 mg/kg)의 과다.
- 일괄적 화상 상처 조직의 기본 근육 및 unwounded 조직 주변을 포함 하는 절단을 수행 합니다.
- 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린으로 조직 수정.
- 인산 염 버퍼 솔루션 (PBS) 및 4 ° c.에 게 90 mL에 포름알데히드 (37%)의 10 mL를 혼합
- 조직 정착 액을 전송 하 고 모든 조직 정착 액에 완전히 몰입 하 되도록 컨테이너 소용돌이. 정착 액의 30 배 조직 볼륨 이어야 합니다.
- 4 ˚C에서 티슈를 하룻밤 수정.
- 조직 에탄올 탈수 하 고 파라핀 블록에 포함. 통에 4 ˚C에서 다음 단계를 수행 합니다.
- 30 분 동안 PBS로 2 회 세척.
- 탈수 조직 70% 에탄올과 8 시간, 80% 에탄올 하룻밤, 95% 에탄올에 대 한 8 시간, 그리고 100% 에탄올에서 하룻밤.
- 추가 8 시간 동안 100% 에탄올에 티슈를 품 어.
- 30 분 동안 각 크 실 렌의 세 가지 변화에 조직을 품 어.
- 갓 녹은 (52 ° C) 왁 스로는 크 실 렌을 대체 하 고 52 ° c 오븐에서 1 시간 동안 품 어.
- 신선한 왁 스는 왁 스를 바꿉니다 및 3 시간, 52 ° c 오븐에서 품 어 다음 한 번 더 교체 고 하룻밤 52 ° C에서 품 어.
- 1 시간, 조직 각 왁 스의 두 더 많은 변화를 품 어 하 고 조직을 포함 4 ° c.에 저장
- 컷 하 고 그, 파라핀 포함 섹션 얼룩 통해 100× 확대와 함께 가벼운 현미경 시각화.
- 로타리 톰을 사용 하 여 파라핀 섹션을 만듭니다.
- 3 분 동안 각 크 실 렌의 3 개의 변경 섹션을 dewax.
- 3 분, 100%, 95%, 80%와 70% 에탄올 각 티슈를 rehydrate 하 고 증류수에 담가.
- 10 분 동안 hematoxylin와 stain 고 실행 하는 수돗물에 씻어.
- 5 분 동안 0.1% 염 산 에탄올과 분화 하십시오 그리고 수돗물에 씻어.
- 1 분에 0.5% 오신와 얼룩.
- 2 분 동안 70%, 80%, 95%, 및 100% 에탄올 각 티슈를 탈수.
- 크 실 렌로 얼룩이 지 고 건조 한 증기 두건에서.
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Representative Results
화상의 지속 시간이 30 초 뜨거운 철에 의해 잘 정의 된 여백 원형 되었고 홍 (그림 1D)의 변죽으로 균일 하 게 창백한 상처에 결과. 각 동물 내는 등에 6 화상 상처 있었다. 화상 상처의 배치는 그림 1 K에서에서 묘사 했다. 화상 상처 했다 완전히 모자 포함 된 드레싱으로 덮여 흉터 형성 후 굽기 일 0, 7, 21, 및 42의 깊이 평가 하는 데 사용 하 고 다시 epithelialization에 의해 결정으로 총 검사. 화상 상처 후 굽기 일 42에 총 검사에 따라 다시 epithelialized 했다. 이 동물에 상처 크기는 상처 치유 속도 (그림 2A)를 결정 하기 위해 평가 되었습니다. 상처 지역 9, 10, 8, 및 3 c m2 에 있었다 후 굽기 일 0, 7, 21, 및 42, 각각. 상처 영역에 있는 뜻깊은 감소 후 굽기 한 일 0와 비교에 관찰 되었다. 치유 속도 상처 폐쇄를 완료 하는 시간을 나눈 상처 센터에서 최고의 평균 상처 여백 거리로 정의 했다. 상처 치료 모자 포함 된 드레싱 후 화상 날 42 (그림 2B)에 73.43±6.33% 상처 폐쇄를 보여주었다.
그림 3 0, 7, 21, 및 42 후 화상에 흉터 vascularity, 유연성, 착 색, 및 높이 VSS 점수를 보여준다. VSS 점수 후 굽기 일 21에 7.4±0.5에 만족 하 고 후 굽기 일 42에 3.33±0.58를 감소.
모든 동물 후 굽기 일 42에 희생 되었다. 피부 각 동물 후 희생에서 절제의 샘플 했다 조직학 준비 및 h 스테인드 & 샘플의 E. Histologic 시험 확인 전체 두께 화상 달성 했다 상처는 완전히 치유 (그림 4) 등장. 화상에서 발생 하는 괴 사 기본 근육 (그림 4)에 크게 영향을 주지 않고 표 피, 진 피, 상처의 피부 구성 요소에서 관찰 될 수 있었다. 실험적인 드레싱 아래 진 피 두께 5.4 m m (그림 4A) 이었다. 또한, 그림 4B에서 빨간색 화살표로 표시 된 진 피와 림프 침투의 sloughing는 H & E 염색에서 관찰 된다.
실험적인 드레싱의 항균 속성 CFU 분석 결과 사용 하 여 0, 7, 21, 및 42 후 굽기 일에 결정 했다. 결과 후 굽기 일 0과 21 후 화상 날 42 (그림 5)에 상당한 증가 다음 사이 관찰 하는 세균성 세포 숫자에 약간의 증가 보였다. 이 결과이 연구에 가혹한 화상 상해의 돼지 모델 항균 속성을 포함 하 여 실험적인 드레싱의 임상 성능 모니터링 사용 될 수 제안 합니다.
그림 1입니다. 화상 상처 창조 및 모자 포함 된 임상 드레싱의 응용. 머리 제거와 피부 요오드와 알코올의 준비, (A) 외과 마킹 펜 등은 중간의 어느 한쪽에 6 서클 개요 사용 되었다. (B) 수정된 철 글 리세 린 및 글 리세 린 온도 표시에 삽입 한 전자 온도계로 채워졌다. (C) 철은 핫 플레이트와 137-139 ° C에가 열 하 고 6 획 일 한 화상 상처의 피부 표시에 만들어진. 화상 상처를 만들려면 두 개의 전체 두께 상처를 만드는 돼지의 뒤 피부 (30 초)에 외부 힘으로 뜨거운 철을 놓습니다. (D) 모든 상처 작성 된 후 0.9% 생리 식 염 수로 상처 세척 했다. (E) 비늘은 사진 촬영을 위한 상처 옆 배치 했다. (F) 첫 번째 레이어 테스트 드레싱과 방수 필름으로 두 번째 계층으로 덮여 있다. (G) 세 번째 레이어 0.5 c m 두께 대 한의 거 즈로 덮여 이며 종이 테이프로 고정. (H-J) 접착성 고 약의 외부 층으로 거 즈를 보호 합니다. 이 레이어는 드레싱의 변위를 피하기 위해 상체를 확장 합니다. (K) 화상 상처 분포의 회로도. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2입니다. 돼지 모델에서 상처 크기의 변화입니다. (A) 상처 폐쇄의 속도 0에 원래 상처의 결정 했다. 상처 거의 완전히 계약 했다 후 화상에 42 일, 그리고 상처 영역 (B) 변경 0 42 일 후 화상 동물 모델의 사이 관찰 되었다. 그것은 지역 폐쇄 상처 전시 90 ± 4% 후 화상 날 42, 가장 큰 감소를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3. 평균 총 점수의 밴쿠버 흉터 규모 (VSS) 돼지 모델에서 후 굽기 일에 이중 맹 검 실험 설계를 사용 하 여. 흉터 평가 염색, vascularity, 유연성, 및 흉터의 높이 포함합니다. 낮은 점수는 밀접 하 게 정상적인 피부에 근접 하는 조건에 흉터를 나타냅니다 (P = 0.0005). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4입니다. Hematoxylin와에 얼룩 오신 후 하루 42 화상. (A, B) 검은 역된 삼각형 나타냅니다 복구 화상 조직. 전체 두께 상처의 형태는 원활 하 고 지속적인, 그리고 젖꼭지 레이어 닮은 hypertrophic 흉터의 기능. 네오-표 피 상처 표면을 덮고 존재 note (B) 빨간색 화살표 아래 가능한 피부 위에 화상 상처 eschar에 피부 결합 조직 침투 염증 세포를 나타냅니다. 원래 확대, × 10입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5. 다이어그램 표시 다른 시간 지점에서 상처의 계산 세균성 바 A. 후 화상의 항균 활동 0, 7, 21, 동물 모델 및 42 일 상처. 항균 활동 콜로 니 형성 단위 (CFU) 분석 결과 3 개의 독립적인 실험에 의해 평가 되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
현재 연구 가혹한 화상 상해의 돼지 모델을 설립 하 고 캡이 포함 된 드레싱을 사용 하 여 모델을 검사. 우리의 결과이 돼지 모델 항균 속성을 포함 하 여 실험적인 드레싱의 임상 성능 모니터링에 사용할 수 있습니다 것이 좋습니다. 상처 치료 속도, 상처 폐쇄 및 항균 활동 또한 VSS, H & E 얼룩, 및 항균 테스트를 사용 하 여 분석 되었다. 동물 화상 모델의 사용은 화상 상해의 이상 검토 하는 귀중 한 도구로 개발 되었습니다. 쥐-특정 시 약의 높은 번호와 복구에서 활성 분자 신호 경로 발견 하, 유전자 변형 쥐를 얻기의 실용적인 측면을 포함 하 여 실험 과목으로 쥐를 사용 하 여 특정 생물 학적 이득이 있다 프로세스입니다. 그러나, 동물 화상 모델에서 쥐를 사용 하 여의 주요 단점은 인간의 상처 치유 과정을 완전히 실패입니다. 다시 epithelialization은 빠른 방식으로9에 상처 수축에 따라 강하게 쥐에서 치유 하는 상처를 인간8, 관찰 주요 치유 방법입니다. 또한, 비-의 취약점을 hypertrophic 쥐 또는 keloid 흉터 형성 인간에서 그들의 상처 복구 프로세스의 호환성 확인. 다른 한편으로, 돼지 최근 되고있다 연구원 관심의 대상이 그들의 피부 구조는 인간의 피부와 유사 하기 때문에. 또한, 상처 치유 과정 돼지와 인간 염증, 확산, 다시 epithelialization, 리 모델링 등 생리학적으로 유사한 단계를 통해 발생 합니다. 일반적으로 돼지에서 화상 7 ~ 14 일 후 상처 형벌10,11, 타임 라인에 맞는 인간에서 관찰 발생 다시 epithelialization와 함께 21 일 치유. 돼지는 또한 쥐 상처 감염을 저항 하 게 그들의 신체 크기 때문에 큰 사망률 비교를 보여줍니다. 마우스는 일반적으로 다른 치료에서 화상 상처 상태를 평가 하는 데 사용 하는 첫 번째 모델. 또한, 다른 포유류와 달리 돼지는 인간 epithelialization, 세포 증식 및 신생 과정에 관한 다양 한 해 부와 생리 적인 특성을 공유. 이 돼지 잠재적으로 더 나은 모델을 만들고 쥐 12,13,,1415에 유망한 결과 설명 하는 후속 연구에서 자주 사용 합니다. 또한, 피부 콜라겐과 탄력 있는 콘텐츠, 피부 혈액 공급의 분포, 상처 치유, 그리고 다시 epithelialization에서 이벤트의 시퀀스 만든 돼지 상처 치유 및 재건 외과 치료15의 표준 모델 ,,1617,18. 각 동물 내에서 상단, 중간에 있는 6 개의 화상 상처 그리고 낮은 돼지의 뒤와 척추에 대칭적으로 배포. 비슷한 위치에 있지만 다른 돼지에 화상 상처를 만들 수 있습니다. 따라서, 각 실험 드레싱 테스트 하 고 치유 과정에 돼지 등 다양 한 관광 명소에 상처와 관련 된 편견을 최소화 하기 위해 서로 다른 위치에 평가 될 수 있습니다. 또한,이 연구에 가혹한 화상 상해의이 돼지 모델에서 혜택을 각 돼지 제공 보장 자체 컨트롤 하나 상처 받는 소설 치료와 차량 통제로,으로 이어지는에 상당한 감소를 동물의 수입니다.
화상 상해의 관리는 상처 치유에 주요 합병증 중 하나입니다. 인간 치유 과정은 4 개의 생물 학적 과정의 구성: hemostasis, 염증, 확산, 및 성숙. 치유 과정은 방해 또는 저 능 아, 일단 표시 하 고 주변 피부16위에 발생 하는 경향이 hypertrophic 흉터 결과 fibroblastic 확산을 촉진 합니다. 재현성 및 정확한 정량화, 석고 접착제를 사용 하 여 적절 한 접착이 필요한 시간에서 지연을 최소화 하기 위해 부상 후 즉시 합니다. 피부 자극은 임상 드레싱 주위 발진에서 접착 석고에서 일반적인 반응입니다. 따라서, 주의 가려움을 방지 하기 위해 현재 사용할 수 있는 접착제 석고의 사용에 좋습니다. 무 균 기법을 따라 하 고 철저 하 게 돼지 사이 모든 장비 (예를 들어, 캘리퍼스) 교차 오염을 피하기 위해 소독 필수 있습니다.
화상 상처 치유는 복잡 한 프로세스입니다. 상처 치유, 가려움증, 통증과 세균 오염 등 과정에 부정적인 영향을 미칠 요인의 특정 번호 확인 되었습니다. 고통을 동물의 규정식에 부정적인 영향을 있다. 충분 한 영양소 이해 없이 지연된 상처 치유 불가피 하다. 따라서, 각 돼지 했다 주입 buprenorphine (0.1 mg/kg, 메신저)와 함께 매일 7 일 동안 연속 통증을 줄이기 위해. 음식 섭취 1 주일 후 화상 상처 창조를 모니터링 했다. 음식 섭취 량 감소 buprenorphine (0.1 mg/kg, 메신저), 7 일에 관찰 되었다 일단 관리 14 날까지 계속 되었다. 세균 감염, 상처 치유에 대 한 잠재적인 위험, 염증 방 아 쇠 하 고 또한 치유 과정을 저해할 수 있습니다. 따라서, 임상 드레싱을 방지 하 고 잠재적인 오염 최소화 방수 필름 덮여 있었다. 가려움은 상처 치유 과정의 불편 한 부분 이다. 돼지 상처 치유 과정에 대 한 유리한 수 있는 가려움증을 줄이기 위해 지상에 그들의 자신의 뒤를 긁어 수 있습니다. 좋은 드레싱 화상 가속의 속성을가지고 상처 허용 흉터와 치유, 감염 및 염증 방지, 고통, 완화 및 허용 하는 간단 하 고 초기 동원19,20. 더 국 소 응용 프로그램 및/또는 상처 영역21,22의 측정에 필요한 때 드레싱을 제거할 수 있습니다. 돼지 4 레이어 임상 드레싱 적용 임상 보다 더 복잡 하 고 시간이 많이 걸리는 프로세스 이지만, 돼지 모델 마우스 모델 보다 인간의 생물학 응답에 더 가까운 근사치를 수 있습니다. 돼지 모델을 사용 하 여 많은 잠재적인 이점이 다른 종 보다 전 임상 시험에 대 한 더 나은 플랫폼을 합니다.
상처 폐쇄 효율성과 상처 영역 감소 측면에서 임상 효능 모자 포함 된 드레싱 후 굽기 일 42에 73.43±6.33% 상처 폐쇄를 공개를 사용 하 여 모니터링 했다. 또한, VSS 점수, 유효한 주관적인 규모 점수도이 연구17에서 돼지에 상처를 평가 하기 위해 사용 되었다. 그것은 임상 시험18에서 특히 실험적인 드레싱 치료 동안 hypertrophic 흉터 형성을 모니터링 하는 것이 중요입니다. 화상 상처의 치료에 캡의 적용 후 레코딩 당일과 하루 21에 비해 42 VSS 점수에 뜻깊은 변화 귀착되는. 낮은 점수는 부상된 지역 정상 피부 색깔 착 색, vascularity, 유연성, 및 높이 밀접 하 게 대략적인 상태를 복원 하려고 나타냅니다. 또한, H & E 염색의 결과 모자 취급 지역에서 그대로 지층 corneum 레이어 표시. 이 결과 가혹한 화상 상해의 돼지 모델 상처 영역, 상처 폐쇄, VSS 점수, 치료 진도 평가를 안정적으로 사용할 수 있는 제안 합니다.
이 프로토콜 가혹한 화상 상해의 돼지 모델에 실험 드레싱의 사용을 보여주는 수많은 상세 단계를 나타내고 임상 드레싱의 어떤 종류의 평가에 적용할 수 있습니다. 글 리세 린 50 mL 가득 수정된 납땜은 상처 생성 프로세스 중 137에 139 ° C 내의 온도 유지 수 있습니다. 그러나,이 메서드는 절대적으로 실제 굽기 온도 및 납땜 범위가 화상 만든 영역의 좁음을 모방 하는 무 능력 같은 제한이 있습니다. 그러나, 방법의 주요 장점은 그 한계 극복. 이 수정된 철 정확도와 전통적인 방법에 비해 쉽게 일관 된 상처를 만드는 데 사용할 수 있습니다. 또한,이 모델의 다양 한 임상 드레싱 치료 아래 열 화상 상해의 생리 및 병 태 생리 응답의 중요 한 측정을 제공합니다. 경제 이점이 외 제안 된 모델의 장점은 상대적으로 작은 외과 경험 들에서 처리 하기 쉽습니다. 임상 돼지 모델에서 상처 드레싱의 응용 인간의 상처 치유의 생물 학적 과정을 모방합니다. 따라서, 설립 하 고이 연구에서 임상 드레싱 테스트 가혹한 화상 상해의 돼지 모델 화상 상해에 대 한 새로운 치료의 개발을 촉진 한다. 이 연구는 화상 상처 치유의 이상 밝히기 위해 중요 한 도구를 제공 합니다. 결론적으로,이 돼지 모델에는 가혹한 화상 상해에서 임상 드레싱의 효과 평가 하기 위해 배우기 쉬운, 비용 효과, 및 강력한 방법을 제공 한다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 연구는 세 배 서비스 종합 병원;에서 교부 금에 의해 지원 되었다 국가 방위 의료 센터, 대만 (TSGH-C107-042); 사역의 과학 및 기술, 대만 (대부분 106-2314-B-016-014); 국가 방위 의료 센터 (MAB-106-055; MAB-106-010; MAB-107-064).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sedation: | |||
| Ketamine | Merial | 2528 ESP | 10 mL vial |
| Azaperone | China chemical & pharmaceutical | 47W406 | 100 mL vial |
| Atropine | Oriental chemical works | IN120802 | 1 mL vial |
| Anesthetic: | |||
| Tiletamine+Zolazepam | Virbac | BC91 | 5 mL vial |
| Isoflurane | Baxter | N002A225 | 100 mL vial |
| Surgery: | |||
| Hair clippers | Moser | - | - |
| Povidone iodine scrub solution | Ever star | HA161202 | 4 L barrel |
| Modified iron | - | - | - |
| 0.9% saline solution | CHI SHENG | KC130 | 500 mL vial |
| Gauze | China Surgical Dressings Center | MO15900080 | 10 x10 cm |
| CAPS | CoreLeader Biotech Co., Ltd, Taipei, Taiwan | - | - |
| Paper tape | 3M | NDC-8333-1530-01 | 2.5 cm x 9.1m |
| Waterproof film | 3M | NDC-8333-1600-40 | 10 cm x 10 m |
| Adhesive plaster | Young chemical | BH1426015 | 10 cm x 10 m |
| Dissection: | |||
| Pair of standard sharp/blunt straight scissors (14 cm) | Shinetec instruments | ST-S114 | - |
| Halstead-Mosquito (12.5 cm) | Shinetec instruments | ST-H012 | - |
| Handle(# 4) | Shinetec instruments | ST-H004 | - |
| Surgical Blade(#21) | Shinetec instruments | ST-B021 | - |
| Post-Fixation & Storage: | |||
| 50 ml Plastic centrifuge tube | Falcon | 352070 | - |
| 10% neutral buffered formalin | Leica | 3800604EG | - |
| Bacterial Growth Experiments | |||
| Blood agar plate (BAP) (TSA with 5% sheep blood) | CMP | - | 90 mm Mono |
References
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