Summary
臨床的観察並びに動物モデルでの研究間の相互作用を火傷のモードが必要です厳密に模倣。この研究では、重症熱傷の豚の模型は、生理学的および病態生理学的設定で実験的ドレッシングを評価するために設立されました。
Abstract
創傷治癒動的修復プロセスは、最も複雑な生物学的プロセスは、人間の生活。火傷に対し、生物学的経路の変更については、創治癒遅延の結果、炎症反応を損ないます。切断などの好ましくない結果につながる糖尿病患者に発生障害は創傷治癒頻繁。それ故に、ドレッシングの焼跡の傷の修復を促進する上で有益な効果を持っていることが必要です。しかし、バーン創傷治療に関する研究は、適切な動物モデルの欠乏により制限されます。私たちの以前の研究は、低侵襲手術手技を用いてラットと豚モデルで創傷治癒のパフォーマンスを示した。この研究の目的は創収縮がなくなります重症熱傷の豚のモデルを示すとよりは近い人間再上皮化および新しい組織の形成過程。このプロトコルは、一貫性のある熱傷創面を作成および豚モデルでの実験的ドレッシングの治療下で創傷治癒のパフォーマンスの調査のための詳細な手順を提供します。6 熱傷創面作成された対称的に、背部の臨床ドレッシング 4 つの層から成る対象: 実験材料、防水フィルムの内側の中間層、ガーゼ、外側の中間層、内側の接触層絆創膏の外側の層。実験完了、傷口の閉鎖、創傷部、バンクーバー傷跡スケール スコアを調べた。各動物の後犠牲から切除した皮膚のサンプルは、組織学的調製し、ヘマトキシリン ・ エオシン染色を使用して染色します。各ドレッシング創傷治癒のコンテキストでの抗菌活性を調べた.豚モデルで傷に臨床のドレッシングの適用は人間の創傷治癒の上皮形成、細胞増殖と血管新生のプロセスについての生物学的プロセスを模倣します。したがって、この豚モデルは、重症熱傷で臨床ドレッシングの効果を評価するために簡単に学ぶこと、コスト効果の高い、かつ堅牢な方法を提供します。
Introduction
焼跡の傷害は炎症性プロセスを開始し、患者の生活の質にマイナスの影響の結果として、事故の直後から多くの身体機能に影響を与える複雑な病理学的効果を誘導します。糖尿病1,2重要な罹患率と患者の死亡率を引き起こす障害は創傷治癒します。熱傷患者のほとんどは、強力なオピオイド鎮痛剤3の使用にもかかわらず耐え難いプロセスとして知られている熱傷創傷清拭中に痛みを経験します。
他の哺乳動物と対照をなして豚は上皮形成、細胞増殖と血管新生のプロセスに関して人間といくつかの解剖学的および生理学的特性を共有します。これにより特定の手順と研究、潜在的により良いモデル、豚、ねずみの有望な結果を示したその後の研究で使われています。これらの機能は、前臨床試験で主要な種として豚の使用の増加につながっています。最近、4,5,6に心血管、尿路、外皮、尊敬と消化器系の生物医学の研究の急速な増加が観察されました。本研究は、重症熱傷創収縮がなくなります、新しい組織の形成と人間の創傷治癒プロセスの近い近似を提供の豚モデルの実証を目指しています。6 熱傷創面は背部、豚の背骨の両側に 3 つの対称的に作成されました。次に、屋内用ロールシェイド ドレッシングを合わせる人間の創傷治癒 (図 1) を複製することができる重症の熱傷の豚モデルで調べた。傷は、4 つの層で構成されている臨床ドレッシングで覆われていた: 実験材料の内部接点層、防水フィルムの内側の中間層、ガーゼ、外側の中間層、絆創膏の外側の層。防水フィルムは、細菌感染を防止するとドレッシングに浸透してガスを許可する湿潤創傷環境を保持します。ガーゼの外側の中間層は、防水膜に適用され、絆創膏の外側の層で保護します。実験の完了時の創傷閉鎖、創傷部、バンクーバー傷跡スケール (VSS) スコアを調べた。各動物の後犠牲から切除した皮膚のサンプルは、組織学的調製し、ヘマトキシリン ・ エオシン (HE) 染色を使用して染色します。このモデルの各ドレッシング創傷治癒のコンテキストでの抗菌活性を調べた.私たちの以前の研究は、ネズミと豚を用いた低侵襲手術手技7で創傷治癒のパフォーマンスを示しています。6 書き込む各豚内甲の傷があったので、各実験のドレッシングはテストされ、豚背に別のスポットで創傷治癒過程に関連するバイアスを最小限に抑えるためにすべてのポジションで評価。したがって、本研究で重症熱傷の豚の模型は臨床ドレッシングの評価のための新しいアプローチを提供します、熱傷に対する新規治療の開発が容易になります。本研究では、熱傷創傷治癒の病態生理を明らかにする重要なツールを提供します。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
動物を対象とする手順は、国防医学院、台湾 (中興) で動物ケア委員会によって承認されています。本研究は、国防医学院で実験動物センターで行った。20 と 25 キロの間の重量を量る豚が正常にこのプロトコルを使用してインストルメントされています。
1. 人間の処理に動物の適応
- 施設に到着後, 家動物の孤独が互いに相互作用させます。
- 動物の自由への食料や水を提供します。
- 少なくとも 1 週間日に 1 回の動物を処理することによって実験室の動物の機能から人間の処理、交通機関に豚を順応させます。
- 吐き気や嘔吐、胃の液体の吸引を防ぐために手術の前に少なくとも 12 時間動物を絶食します。
2. 鎮静
- 傷やけど作成する前に、動物を介してZoletil 50 (25 mg/kg) を静脈内注射落ち着いた。
3. 気管挿管と換気
- テーブルや胸骨の位置でトロリーに動物を配置します。
- 経口スプレッダーと動物の口を開きます。
- 嚥下反射の有無を顎の不足の緩和の場合では挿管、マスクと鎮静作用を誘発するイソフルレン豚を妨げます。
- 生理学的な信号のモニターによって潜在的な合併症を防ぐために手術中に血圧、心拍数と体温を監視します。
4. 麻酔
- 誘導し、維持麻酔;できればチレタミンとチレタミン (25 mg/kg + 25 mg/kg) の投与による動物を麻酔します。
- 気管内チューブと動物を挿管時筋弛緩、顎の緊張の喪失によって特徴付けられ、そして眼瞼下に反り返った、観察されました。
- 0.5 – 2.5 の気化器設定で麻酔状態ですべての豚を維持 % (v/v) イソフルラン手術終了時まで。
- 手術前に後ろ足のつま先のピンチと痛みの反射神経をテストすることによって麻酔の深さを調べます。必要に応じて、追加の麻酔を追加または数分待ちます。定期的に手術中痛み反射神経をチェックします。
5. 手術部位の消毒
- 剃るし、両側腋窩に脊柱から約 25 cm 幅の領域に動物の皮をきれい。
- ポビドン ヨードのスクラブ (75 mg/mL) 約 5 分でしっとり肌をスクラブします。
- 濡れた滅菌ガーゼを使用して皮膚からポビドン ヨード石鹸を削除します。
- ポビドン ヨード ローション (100 mg/mL) で皮膚を消毒します。
- 細菌の転送と手術部位の後の汚染を削減する滅菌外科用ドレープの動物をカバーします。
6 バーン創傷作成
- ブタの背に対称的に六つの熱傷創面の中心をマークするのに外科用のマーカーを使用します。各やけど間の距離は、少なくとも傷 (図 1 a) の半径より大きいことを確認します。
- グリセリンの 50 mL の変更されたはんだごてを入力し、温度を監視する電子温度計を挿入します。熱いアイロンでは、約 9 cm2 (図 1 b) の平らな区域を所有しています。
- ホット プレート (図 1) を備えた鉄 137-139 ° C に熱する。
- 30 秒 (図 1) のすべての力を適用することがなくマークされた領域に鉄を置くことによって六つの均一な熱傷創面を作成します。
- 0.9% 生理食塩液 (図 1) を熱傷創面を洗浄します。
- 傷の寸法を測定し、ただし (図 1E) によって傷を記録します。
7. ドレッシングの準備
- 直接接触を介して 4 層臨床ドレッシングの内部接触層でそれぞれの傷をカバーしてください。このレイヤーのキャップを含むドレッシングや代替材料 (図 1 f) を使用します。
- 細菌の侵入 (図 1 f) に対するバリアとして機能する臨床のドレッシングに防水フィルムを適用します。
- ガーゼ (0.5 cm) 各傷をカバーし、ドレッシング (図 1) の中間層として機能する紙テープで固定します。
- ガーゼと絆創膏の外側の層を保護します。ドレッシングの変位を避けるために胴体にこのレイヤーを拡張 (図 1 H-1 j)。
8. 後燃焼ケアと測定
- すべて 8-12 h の 1 週間、麻酔から回復する前に潜在的な痛みを軽減するための痛み管理のためブプレノルフィン (0.1 mg/kg、IM) と豚を注入します。
- 飼料し、水に豚の無料アクセスをできます。
- 最初の 10 日間ごとに 2 日間臨床ドレッシングの変更その後 6 週の週二回の研究します。
- 清潔度を臨床的ドレッシングを再適用する前に傷を測定します。ドレッシングの変更時に麻酔薬を管理します。
- 最初の 10 日間ごとに 2 日間ただし創傷治癒率の比較によって傷を記録し 6 週週 2 回勉強。
- 傷再上皮化または収縮前に説明した方法に従って元の傷のサイズのパーセンテージとして計算します。二重盲検の方法で傷の閉鎖の分析を行った。
- 4 つの変数から成っている VSS を使用して熱傷瘢痕の測定: 0、7、21、および 42 の火傷後日色素沈着、柔軟性の高さ (厚さ) 血管。各変数には 4 ~ 6 点。合計得点範囲は 0 から 14、0 のスコアが反映しているという正常な皮膚。
9. 火傷後組織の細菌の増殖実験
- 火傷後日 0、7、21、および 42 の抗菌力試験のため傷、綿棒します。
- 0.9% 滅菌生理食塩と優しく均一な懸濁液を達成するために渦の 100 mL に綿棒を配置します。
- 直列 (10− 1– 10−5) 磨砕液を希釈し、それぞれ選択的かつ非選択的メディアにおけるそれぞれの希釈 100 μ L をプレートします。
- 24-72 時間インキュベートする 37 ° C で好気性の条件の下ですべての希薄。
- プレート 5% 羊血液分離好気性グラム陽性菌に添加した血液寒天培地プレート上にすべて希釈から 10 μ の帳票因数。
- 拡散またはコロニー形成数を決定するために夜通し寒天プレートの表面に均一にサンプルを注ぐことによってサンプルをインキュベート ユニット (CFUs)。
- 一晩インキュベートした後、プレートを読みます。羊血液寒天培地プレートを反転し、皿の底をマーカーと小さな定規を使用して同等の 4 つの象限に分割します。
- 解剖顕微鏡のステージ上にプレートを置き、各プレートのコロニーをカウントします。定義では、植民地を列挙できる 300 CFU の最小値が必要です。
- それぞれ 3 つのレプリケートの細菌のコロニーをカウントします。3 つの平均値の複製を計算します。最終希釈倍率の平均値を乗じてプレートごと CFU を決定します。
10. 安楽死とティッシュの固定
- ナトリウム ペントバルビ タール安楽死ソリューション (80-120 mg/kg) の過剰摂取を静脈内注入します。
- En のブロックには、基になる筋肉、周囲の無傷の組織にやけど傷組織の切除を実行します。
- 10% 中性緩衝ホルマリンで組織を固定します。
- リン酸緩衝液 (PBS) と 4 ° C でストアの 90 mL でホルムアルデヒド (37%) の 10 mL を混ぜてください。
- 定着剤に組織を転送し、すべての組織が定着剤に完全に没頭していることを確認するためのコンテナーを旋回します。固定液の量は、組織量の 30 倍の量をする必要があります。
- 4 ° C で一晩組織を修正します。
- 脱水エタノールと組織、パラフィン ブロックに埋め込みます。シェーカーで 4 ° C で次の手順を実行します。
- 30 分間を PBS で 2 回洗います。
- 脱水組織の 70% エタノール 95% エタノール, 80% エタノール一晩 8 時間 8 時間とし、100% エタノールで一晩。
- 100% エタノールで組織にさらに 8 時間孵化させなさい。
- 組織それぞれのキシレンの 3 つの変更で 30 分間インキュベートします。
- キシレンを溶かしたて (52 ° C) ワックスに置き換えるし、オーブンで 52 ° C で 1 時間インキュベートします。
- 新鮮なワックス、ワックスに置き換えると, オーブンで 52 ° C で 3 時間、もう一度交換し、52 ° C で一晩インキュベートします。
- 各ワックスの 2 つのより多くの変更と組織を 1 時間インキュベートし、ティッシュを埋め込む、4 ° C で保存
- カットで彼、パラフィン切片を染色し、を介して100× 倍率顕微鏡可視化します。
- 回転式ミクロトームを用いたパラフィン切片を作成します。
- 3 分間それぞれのキシレンの 3 つの変更を使用してセクションを dewax します。
- 100%、95%、80%、70% のエタノールと組織を 3 分間、水分補給し、蒸留水で浸します。
- 10 分間、ヘマトキシリンで染色し、水道の流水ですすぎ。
- 5 分間、0.1% 塩酸エタノールと区別するため、水道水ですすいでください。
- 1 分 0.5% エオシン染色します。
- 2 分の 70%、80%、95%、100% エタノールで組織を脱水します。
- キシレンと染色をクリアし、発煙のフード乾燥します。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
熱い鉄で 30 秒の書き込み期間は、明確に定義されたマージンと循環され、紅斑 (図 1) の縁を均一に薄い傷で起因しました。それぞれの動物の内で背部の六やけど傷があった。熱傷創面の配置は、図 1 Kで描かれていた。やけどの傷が完全にキャップを含むドレッシングで覆われ、火傷後日 0、7、21、および 42 の瘢痕形成の深さを評価するために使用し、によって決定される、再上皮化総検査。熱傷創面は、火傷後 42 日目の総検査に基づいて再 epithelialized でした。これらの動物の創傷サイズは創傷治癒率 (図 2 a) を決定する評価しました。創傷部であった 9、10、8、および 3 cm2 0、7、21、および 42、火傷後の日.創傷部の大幅な削減は、火傷後 0 日と比較して 42 日目に観察されました。治癒率は、最大平均傷マージン中心からの距離、傷傷の閉鎖を完了する時間で割った値として定義されました。傷は火傷後日 42 (図 2 b) に 73.43±6.33% の傷口の閉鎖を示したキャップ含むドレッシングと扱われます。
図 3は、火傷後日 0、7、21、および 42 の傷跡の血管、柔軟性、色素沈着、および高さについて VSS スコアを示しています。VSS スコアは、7.4±0.5 で火傷後 21 日目にピークに達したし、火傷後 42 日目の 3.33±0.58 に減少しました。
火傷後 42 日目には、すべての動物が犠牲になった。各動物の後犠牲から切除した皮膚のサンプルを組織学的に調製し、H で染色・ サンプルの E. 病理検査確認全層熱傷が達成された、傷が完全に治癒 (図 4) 登場します。火傷から生じる壊死は、基になる筋肉 (図 4) を大きく影響せず表皮、真皮、傷の真皮の成分で観察できます。実験的ドレッシングの下にある真皮の厚さ 5.4 mm (図 4 a) であった。さらに、真皮とリンパ球の浸潤の脱落と、図 4 bで赤い矢印で示したように、H & E 染色で観察されます。
0、7、21、および 42 の火傷後日 CFU アッセイを用いた実験的ドレッシングの抗菌特性を求めた。結果は、火傷後日 0 と火傷後日 42 (図 5) に大幅な増加が続く 21 の間に観察された細菌の細胞数のわずかな増加を示した。この結果は、本研究で重症熱傷の豚の模型を使用して抗菌プロパティを含む実験のドレッシングの臨床のパフォーマンスを監視できる示唆しています。
図 1。傷の作成とキャップを含む臨床ドレッシングのアプリケーションを書き込みます。脱毛とヨードとアルコールで皮膚の準備、 (A)手術用マーキングペンは、背、正中線の両側に六つの円の輪郭を使用しました。(B)変更された鉄は、グリセリンとグリセリンの温度表示に挿入電子温度計でいっぱいだった。(C)鉄はホット プレートで 137-139 ° C に加熱され、6 制服やけどの傷は皮膚の印で作成されました。熱傷創面を作成するには、2 つの全層の傷を作成する豚の背中肌 (30 秒) に外部力で熱い鉄を置きます。(D)すべての傷を作成した後、傷は 0.9% 食塩水で洗浄しました。(E)スケールは、写真を撮るため傷の横に置かれました。(F)第 1 の層は、テスト ドレッシングと防水フィルムで 2 番目の層で覆われています。(G)第 3 層に 0.5 cm の厚さについてのガーゼで覆われて、紙テープで固定します。(H-j)ガーゼと絆創膏の外側の層を保護します。この層は、ドレッシングの変位を避けるために胴体に拡張します。(K)傷やけど分布の模式図。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2。豚モデルで創傷サイズの変更。(A)傷の閉鎖率は 0 日目に元の傷の割合として決定されました。傷ほぼ完全に火傷後の 42 日を契約していたし、火傷後動物モデルの 0 に 42 日間(A)創傷部の変化を認めた。それは傷の部分は閉鎖の展示 90 ± 4% 火傷後日 42、最大の減少を示しています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3.平均総得点バンクーバー傷跡スケール (VSS) 火傷後日豚モデルで二重盲検の実験的デザインを使用しての。傷評価には、色素沈着、血管、柔軟性、および傷の高さが含まれています。低いスコアは正常な皮膚に近い状態の傷痕を示します (P = 0.0005)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4。ヘマトキシリンとエオシンで染色後 42 日を書き込みます。 (A B)黒逆三角形修理燃焼組織を示します。全層創傷の形態は滑らかで、連続的、乳頭層肥厚性瘢痕の特徴に似ています。ネオ表皮の傷表面をカバーの存在を注意してください。(B)赤の矢印は、実行可能な下の真皮上やけど傷痂皮の真皮結合組織浸潤炎症細胞を示しています。画像の倍率は × 10。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 5 。バーの図の異なる時点で傷のカウントが細菌 A。火傷後の抗菌活性は 0、7、21、動物モデルそして 42 日傷。抗菌活性は、3 つの独立した実験でコロニー形成単位 (CFU) アッセイによって評価されました。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
本研究は重症熱傷の豚の模型を設立し、キャップを含むドレッシングを使用してモデルを検討しました。この豚モデルを抗菌プロパティを含む実験のドレッシングの臨床のパフォーマンスを監視する使用ことができることが示唆されました。創傷治癒率、傷の閉鎖、および抗菌活性も VSS、H & E 染色、抗菌テストを使用して行った。動物燃焼モデルの使用は、熱傷の病態生理を確認する貴重なツールとして開発されました。ラット特定試薬の数が多いと回復でアクティブな分子のシグナル伝達経路を発見するトランスジェニックラットを取得のための実技を含めて、実験の被験者としてラットを使用して特定の生物学的利点があります。プロセス。しかし、動物燃焼モデルのラットを使用しての主要な不利な点は完全に人間の創傷治癒過程を近似するための失敗です。再上皮化は、迅速な方法9創収縮異なりますが創傷治癒過程における強く人間8観察メイン治癒アプローチです。さらの非脆弱性ラットに肥大やケロイド瘢痕形成は人間の傷の回復過程の非類似度を確認しました。その一方で、豚研究の対象となっている最近肌アーキテクチャは人間の皮膚に似ているので。さらに、創傷治癒過程で豚と人間は、炎症、増殖、再上皮化改造など生理学的によく似ている段階を発生します。一般に、再上皮化後傷傷10、11タイムラインに合う人間観察 7 日から 14 日間で発生すると 21 日間で豚で火傷を癒します。豚はまた、創傷感染により耐性の体サイズによるラットより罹患率の比較を示します。マウスは、通常、異なる処置中で燃焼傷状態を評価するために使用する最初のモデルです。さらに、他の哺乳類とは異なり豚は上皮形成、細胞増殖と血管新生のプロセスに関して人間といくつかの解剖学的および生理学的特性を共有します。これは豚を作る可能性のあるより良いモデルとマウス12,13,14,15で有望な結果を示したその後の研究で使われています。また、真皮コラーゲンと弾性コンテンツ、皮膚血管の分布、創傷治癒と再上皮化のイベントのシーケンスを行った豚創傷治癒と再建外科治療15 の標準モデル ,16,17,18。それぞれの動物の内で、中間、上部に位置する六つの熱傷創面があったと豚のバックアップし背骨を対称的に分散します。似たような場所ではなく異なる豚、熱傷創面を作成できます。したがって、各実験のドレッシングをテスト、豚背部の別のスポットで創傷治癒過程に関連するバイアスを最小限に抑えるために別の場所で評価することができます。さらに、本研究で重症熱傷のこの豚モデルも各豚を提供していますを確保するから利益の大幅な削減につながる独自のコントロール 1 つ傷は新規治療を受けて、もう一方は車両制御、動物の数です。
火傷の管理は、創傷治癒における主要な合併症の一つです。人間の癒しのプロセスは 4 つの生物学的プロセスから成る: 止血、炎症や増殖、成熟。癒しのプロセスが妨げられるまたは知的障害、それは結果が表示され、周囲の皮膚16上に発生する傾向がある肥厚性瘢痕、芽増殖を促進します。再現性と定量の正確さを確保するため、適切な接着用接着剤石膏を使用してが必要時間の遅延を最小限に抑えるために怪我をした直後です。皮膚科専門医は、臨床のドレッシングの周り発疹の結果絆創膏から一般的な反応です。したがって、注意は、かゆみを防ぐために、現在利用可能な絆創膏の使用にオススメです。無菌テクニックを次と徹底的に豚の間 (例えばキャリパー) クロス汚染を避けるためにすべての機器を消毒が不可欠であります。
やけどの傷の治癒は、複雑なプロセスです。要素数は、創傷治癒過程の痛み、かゆみ、細菌汚染などの否定的な影響があると識別されています。痛みは、動物の食事療法に否定的な影響を及ぼします。十分な養分吸収せず、創治癒遅延は避けられないです。したがって、各豚注入されたブプレノルフィン (0.1 mg/kg、IM) の毎日の痛みを軽減する 7 日間の連続。食品の摂取量は、やけどの傷作成後 1 週間をモニターしました。7、ブプレノルフィン (0.1 mg/kg、IM) の日に食品の摂取量の減少が観測された後 14 日目まで投与を続けた。細菌感染症、創傷治癒のための潜在的なリスクである可能性があります炎症をトリガーし、癒しのプロセスにさらに水を差します。したがって、臨床のドレッシングは防止し、潜在的な汚染を最小限に抑えるために防水の膜で覆われていた。かゆみは、創傷治癒過程の不快な部分はあります。豚は、創傷治癒過程のために好ましいことができるかゆみを減らすために地面に自分の背中を傷つけることがあります。良いドレッシングに燃焼を加速の特性が所有している傷の許容傷を癒し、感染症や炎症を防止する、痛みを軽減、簡単で、初期動員19,20を許可します。ドレッシングは、さらに局所アプリケーションおよび/または傷エリア21,22の測定に必要なときに削除できます。豚に 4 層臨床ドレッシングを適用することは臨床よりもさらに複雑で時間のかかるプロセスが、豚モデルでマウスのモデルよりも人間の生物学的反応に近い近似できます。豚モデルを使用して多くの潜在的な利点は、他の種よりも前臨床試験に適したプラットフォーム。
臨床的な創傷閉鎖効率と傷領域低減の面では、火傷後 42 日目で 73.43±6.33% 傷の閉鎖を明らかにキャップを含むドレッシングを使用して監視だった。さらに、VSS スコア、検証済みの主観的な尺度のスコアは、この研究17で豚の傷を評価するためにも使われました。特に臨床試験18での実験的ドレッシングによる治療中に肥厚性瘢痕形成を監視することが重要です。やけどの傷の治療にキャップのアプリケーションは火傷後 21 日目のスコアと比較して 42 日に VSS のスコアが大幅に変更になった低いスコアは、患部は正常皮膚色の色素沈着、血管、柔軟性の高さを近づける状態に復元しようとしたことを示します。さらに、H & E 染色の結果では、キャップ処理エリアにそのまま角質層が示されます。この結果では、創傷部、傷口の閉鎖、VSS のスコア、および癒しの進捗状況を評価するため、重症熱傷の豚モデルを確実に使用できますを示唆しています。
このプロトコルは、重症熱傷の豚のモデルに関する実験的ドレッシングの使用を示すため、数多くの詳細な手順を表し、臨床ドレッシングの任意の種類の評価に適用することができます。50 ml グリセリンの変更されたはんだごては、傷を作成する際に 139 137 ° C 以内の温度を維持するが可能です。ただし、このメソッドには、絶対に本物の焼跡の温度とはんだごてスコープにより作成された燃焼領域の狭さを模倣することができないなど制限があります。ただし、メソッドの主な利点は、これらの制限を克服します。この変更された鉄は、精度と従来の方法に比べて容易に一貫した傷を作成する使用できます。また、このモデルは、さまざまな臨床ドレッシングの治療で温熱熱傷の生理学的および病態生理学的応答の敏感な測定を提供します。経済的な利点のほかに、提案されたモデルの利点は、比較的小さな手術の経験を有する者に取り扱わせる簡単だです。豚モデルで傷に臨床のドレッシングの適用は人間の創傷治癒の生物学的プロセスを模倣します。したがって、豚モデルを確立し、本研究では臨床のドレッシング試した重症熱傷の熱傷に対する新規治療の開発が容易になります。本研究では、熱傷創傷治癒の病態生理を明らかにする重要なツールを提供します。結論としては、この豚モデルは、重症熱傷で臨床ドレッシングの効果を評価するために簡単に学ぶこと、コスト効果の高い、かつ堅牢な方法を提供します。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
本研究は三サービス総合病院; からの助成金によって支えられました。国防医学院、台湾 (TSGH-C107-042);省の科学と技術、台湾 (ほとんど 106-2314-B-016-014);国立防衛医療センター (MAB-106-055;MAB-106-010;MAB-107-064)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sedation: | |||
| Ketamine | Merial | 2528 ESP | 10 mL vial |
| Azaperone | China chemical & pharmaceutical | 47W406 | 100 mL vial |
| Atropine | Oriental chemical works | IN120802 | 1 mL vial |
| Anesthetic: | |||
| Tiletamine+Zolazepam | Virbac | BC91 | 5 mL vial |
| Isoflurane | Baxter | N002A225 | 100 mL vial |
| Surgery: | |||
| Hair clippers | Moser | - | - |
| Povidone iodine scrub solution | Ever star | HA161202 | 4 L barrel |
| Modified iron | - | - | - |
| 0.9% saline solution | CHI SHENG | KC130 | 500 mL vial |
| Gauze | China Surgical Dressings Center | MO15900080 | 10 x10 cm |
| CAPS | CoreLeader Biotech Co., Ltd, Taipei, Taiwan | - | - |
| Paper tape | 3M | NDC-8333-1530-01 | 2.5 cm x 9.1m |
| Waterproof film | 3M | NDC-8333-1600-40 | 10 cm x 10 m |
| Adhesive plaster | Young chemical | BH1426015 | 10 cm x 10 m |
| Dissection: | |||
| Pair of standard sharp/blunt straight scissors (14 cm) | Shinetec instruments | ST-S114 | - |
| Halstead-Mosquito (12.5 cm) | Shinetec instruments | ST-H012 | - |
| Handle(# 4) | Shinetec instruments | ST-H004 | - |
| Surgical Blade(#21) | Shinetec instruments | ST-B021 | - |
| Post-Fixation & Storage: | |||
| 50 ml Plastic centrifuge tube | Falcon | 352070 | - |
| 10% neutral buffered formalin | Leica | 3800604EG | - |
| Bacterial Growth Experiments | |||
| Blood agar plate (BAP) (TSA with 5% sheep blood) | CMP | - | 90 mm Mono |
References
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regeneration. 17, 763-771 (2009).
- Sen, C. K. Wound healing essentials: let there be oxygen. Wound Repair Regeneration. 17, 1-18 (2009).
- Verhaegen, P. D., et al. Differences in collagen architecture between keloid, hypertrophic scar, normotrophic scar, and normal skin: an objective histopathological analysis. Wound Repair Regeneration. 17, 649-656 (2009).
- Experimental Surgery and Physiology: Induced Animal Models of Human Disease. Swindle, M. M., Adams, R. J. , Williams and Wilkins. Baltimore. (1988).
- Swindle, M. M., Smith, A. C. Swine as Models in Biomedical Research. , Iowa State University Press. Ames. (1992).
- Advances in Swine in Biomedical Research. Vols 1-2. Tumbleson, M. E., Schook, L. B. , Plenum Press. New York. (1996).
- Wang, C. H., et al. Enhanced wound-healing performance of a phyto-polysaccharide-enriched dressing - a preclinical small and large animal study. International Wound Journal. 14, 1359-1369 (2017).
- Rowan, M. P., Cancio, L. C., Elster, E. A., Burmeister, D. M., Rose, L. F., Natesan, S., Chan, R. K., Christy, R. J., Chung, K. K. Burn wound healing and treatment: review and advancements. Journal of Critical Care. 19, 243 (2015).
- Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Surgical approaches to create murine models of human wound healing. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 969618, 8 (2011).
- Gaines, C., Poranki, D., Du, W., Clark, R. A., Van Dyke, M. Development of a porcine deep partial thickness burn model. Burns. 39, 311-319 (2013).
- Gnyawali, S. C., Barki, K. G., Mathew-Steiner, S. S., Dixith, S., Vanzant, D., Kim, J., Dickerson, J. L., Datta, S., Powell, H., Roy, S., Bergdall, V., Sen, C. K. High-resolution harmonics ultrasound imaging for non-invasive characterization of wound healing in a pre-clinical swine model. PLoS One. 10 (3), e0122327 (2015).
- Eaglstein, W. H., Mertz, P. M. New methods for assessing epidermal wound healing: the effects of triamcinolone acetonide and polyethelene film occlusion. Journal of Investigative Dermatology. 71, 332-384 (1978).
- Swindle, M. M., Smith, A. C. Comparative anatomy and physiology of the pig. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Sciences. 25, 1-10 (1998).
- Swindle, M. M. Swine in the Laboratory: Surgery, Anesthesia, Imaging and Experimental Techniques. , 2nd ed, CRC Press. Boca Raton. (2007).
- Mertz, P. M., et al. IL-1 as a potent inducer of wound re-epithelization. Progress in Clinical and Biological Research. 365, 473-480 (1991).
- Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation. Science Translation Medicine. 6, 265-266 (2014).
- Aryza, M. J., Baryza, G. A. The Vancouver Scar Scale: an administration tool and its interrater reliability. The Journal of Burn & Rehabilitation. 16, 535-538 (1995).
- Bystrom, A., Claesson, R., Sundqvist, G. The antibacterial effect of camphorated paramonochlorophenol, camphorated phenol and calcium hydroxide in the treatment of infected root canals. Endodontics & Dental Traumatology. 1, 170-175 (1985).
- Reig, A., Tejerina, C., Codina, J., Hidalgo, J., Mirabet, V. Application of a new cicatrization dressing in treating second-degree burns and donor sites. Annals of Burn and Fire Disasters. 4, 174 (1991).
- Hindy, A. Comparative study between sodium carboxymethyl-cellulose silver, moist exposed burn ointment, and saline-soaked dressing for treatment of facial burns. Annals of Burn and Fire Disasters. 22, 131-137 (2009).
- Galiano, R. D., et al. Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells. The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).
- Thangarajah, H., et al. The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 13505-13510 (2009).
