Summary
Murine lukket femur fraktur modellen er en kraftig plattform å studere brudd healing og romanen strategier akselerere bein gjenfødelse. Målet med denne kirurgiske protokollen er å generere ensidige lukket femur brudd i mus med en mulig intramedulær stål stang for å stabilisere femur.
Abstract
Benbrudd pålegge en enorm sosio-økonomisk byrde på pasienter, i tillegg til betydelig påvirker deres livskvalitet. Strategier som fremmer effektiv benet healing er fraværende og i høy etterspørsel. Effektiv og reproduserbar dyr modeller av brudd healing er nødvendig å forstå de komplekse biologiske prosessene knyttet bein gjenfødelse. Mange dyr modeller av brudd healing er generert gjennom årene; imidlertid murine brudd modeller har nylig dukket opp som kraftige verktøy for å studere bein helbredelse. En rekke åpne og lukkede modeller har blitt utviklet, men lukket femur fraktur modellen skiller seg ut som en enkel metode for å generere raske og reproduserbar resultater i en fysiologisk relevant måte. Målet med denne kirurgiske protokollen er å generere ensidige lukket femur brudd i mus og tilrettelegge en post brudd stabilisering av femur ved å sette inn en mulig intramedulær stål stang. Selv om en spiker eller en skrue større aksial og roterende stabilitet, gir bruk av en mulig intramedulær stang en tilstrekkelig stabilisering for konsekvent helbredende resultater uten produserer nye feil i benvevet eller skade nærliggende myk vev. Røntgen imaging brukes til å overvåke utviklingen av callus formasjon, benete union og påfølgende ombygging av benete callus. Bein helbredende resultatene er vanligvis forbundet med styrke helbredet benet og målt med torsjonsmessig testing. Likevel er forstå tidlige cellulære og molekylære hendelser knyttet til brudd reparasjon kritisk i studiet av bein vev gjenfødelse. Lukket femur fraktur modellen i mus med mulig intramedulær innfesting fungerer som en attraktiv plattform å studere bein brudd healing og vurdere strategier for å akselerere healing.
Introduction
Frakturer er blant de mest vanlige skadene oppstår i bevegelsesapparatet og er forbundet med en enorm sosioøkonomiske byrde, inkludert behandlingskostnader som er anslått til å overgå 25 milliarder dollar årlig i USA1, 2. Selv om fleste frakturer leges uten problemer, er healing knyttet til betydelige nedetid og produktivitetstap. Ca 5-10% av alle brudd føre til forsinket helbredelse eller ikke-union, på grunn av alder eller andre underliggende kroniske helseproblemer, som osteoporose og diabetes mellitus3,4,5. Ingen FDA-godkjent farmakologiske behandlinger er tilgjengelige til å fremme effektiv benet helbredelse og forkorte utvinning tid.
Brudd healing er en kompleks og svært dynamisk prosess som involverer koordinering av flere celletyper. Derfor er en omfattende forståelse av mobilnettet og molekylære hendelser knyttet bein gjenfødelse avgjørende for identifikasjon av terapeutiske mål som akselerere denne prosessen. Som med andre menneskelige sykdommer er etablering av en svært mottakelig og reproduserbar dyremodell avgjørende i studiet av bein helbredelse. Større dyr, som sauer og svin, har bein remodeling egenskaper og biomekanikk ligner på mennesker, men er dyre, krever betydelig helbredende tid, og er ikke lett mottakelig for genetisk manipulasjon6. På den annen side, tilbyr små dyr modeller, for eksempel rotter og mus, mange fordeler, inkludert en enkel håndtering, lave kostnader vedlikehold, kort avl sykluser og en kortere helbredende tid7. Videre er musen genomet fullt sekvensielt, slik at for rask manipulasjon og generasjon av genetisk varianter. Dermed er musen en effektiv modellsystem å studere menneskelig sykdom, skade, og reparere8. Hos mennesker øke samtidige som osteoporose og diabetes mellitus sannsynligheten for en forsinket helbredelse. En rekke eksisterende musen modeller er tilgjengelig for å studere virkningene av samtidige som osteoporose og diabetes mellitus på benet skade og helbredelse. Pasienter som lider av osteoporose har en markert redusert Ben formasjon under fasen av brudd healing9. Ovariectomized (OVX) mus utstilling rask bentap og forsinket bein healing samme som observert i postmenopausal osteoporose10,11. I tillegg mange musen modeller av type I og type II diabetes etterligne i lav bein masse fenotyper og svekket brudd healing sett i mennesker11. Videre murine brudd modellene tjene som en allsidig plattform å studere komplekse biologiske prosessene som oppstår i callus og utforske romanen strategier som akselerere bein vev gjenfødelse.
Til tross for forskjeller i benbygning og metabolisme, prosessen til beinbrudd healing er svært like i mus og mennesker, involverer en kombinasjon av endochondral og intramembranous forbening etterfulgt av ubalanse. Endochondral forbening innebærer rekruttering av progenitor celler til mindre mekanisk stabile regioner rundt brudd gapet, hvor de differensieres til chondrocytes hypertrofi og mineralize brusk for å produsere en myk callus. Den andre bølgen av progenitor celler infiltrere callus og differensiere i eldre osteoblasts som skiller nye bein matrix12,13,14,15. Under intramembranous forbening, progenitors av periostal og endosteal flater direkte skille ut matrix sekresjon osteoblasts og lette den bygge bro av brudd gapet9,11,12 ,13. Sammen, resultere endochondral og intramembranous ossifications i utviklingen av en hard callus, som er videre remodeled over tid å danne en sterk sekundær bein støtter mekaniske belastninger13,14 ,15. Hos friske mennesker tar den helbredende prosessen ca 3 måneder, sammenlignet med bare 35 dager i mus16.
Brudd healing har ofte blitt studert bruker enten åpen eller lukket kirurgisk modeller17. Åpne kirurgiske metoder, som generering av en kritisk størrelse defekt eller fullføre osteotomi, standardisere skade plasseringen og geometri å redusere avvik forårsaket av comminuted sprekker. Rotasjonsosteotomi tjene som en utmerket modell å studere underliggende mekanismen bak en ikke-union fordi healing er ofte forsinket i forhold til lukket frakturer. Videre er en rigid ytre fiksering nødvendig for å stabilisere osteotomized bein, betyr fornyelse primært avhengig av den intramembranous forbening. Åpne kirurgiske metoder bruke enheter som låsing negler, pin-klipp og låsing plater for å gi aksial og roterende stabilitet brukket lem; men slike enheter er dyrt og krever betydelig mer tid i kirurgi18,19,20,21. På den annen side, er lukket modeller stabilisert med en enkelt mulig intramedulær fiksering enhet, slik at nok ustabilitet å stimulere endochondral healing. Resultatet lukket brudd modeller ikke lett etterligne betingelsene for en ikke-union. Intern fiksering teknikker, som mulig intramedulær pinner, negler og komprimering skruer, er fordelaktig som de er billige, enkle å bruke, og minimere tiden i kirurgi21,22,23. I noen tilfeller mulig intramedulær pinner settes før brudd, men bøying av mulig intramedulær pin kan føre til angulation eller forskyvning av brukket femur, bidra til en variabel callus størrelse og helbredelse. Frakturstedet plasseringen og geometri er vanskeligere å standardisere i lukket modeller, som er generert ved hjelp av en tre-punkts bøying enhet, der en vekt slippes på diaphysis. Men med riktig teknikk tilbyr denne kirurgiske rask og konsekvent resultater. Videre fungerer lukket brudd modellen som et klinisk relevante verktøy for å studere brudd skyldes høy kraft effekt eller mekanisk stress22.
Denne kirurgiske protokollen ble tilpasset fra tidligere beskrevet metoder ved hjelp av et mulig intramedulær pin for å stabilisere brukket femurs i rotter og mus22,24,25. Først en mulig intramedulær p med liten diameter settes inn gjennom intracondylar hakket å etablere et punkt av oppføringen, og en guidewire er innført før generering tverrgående brudd på femur midshaft bruker en gravitasjon-avhengige tre-punkts bøyd enhet. Etter den vellykkede generasjonen av en lukket femur brudd, en mulig intramedulær stang med større diameter er innarbeidet over guidekabelen å stabilisere brukket femur. Denne metoden unngår risikoen for forsinket healing skyldes angulation av mulig intramedulær pin under sprekken, som plassering av rod etter brudd tillater reposisjonering og optimalisert stabilisering av skadde femur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende ble utført med godkjennelse fra Indiana University School av medisin institusjonelle Animal Care og bruk Committee (IACUC). Alle overlevelse operasjoner ble utført under sterile forhold som skissert av NIH retningslinjene. Smerte og risiko for infeksjoner ble administrert av riktig smertestillende og antibiotika for å sikre et vellykket resultat.
1. anestesi og forberedelse
- Veie musen og bedøve det med en blanding av ketamin (100 mg/kg) og xylazine (10 mg/kg) administreres via intraperitoneal (IP) ruten. Plasser musen i en tom bur og overvåke det før det er fullt bedøvet.
- Kontroller at musen er bedøvet bruker en tå knipe refleks. Ophthalmica salve gjelde øynene å beskytte dem mot tørke ut.
- Fjerne fur fra høyre ben. Tørke ned kirurgiske området med en jod-basert scrub og 70% etanol. Skrubbe kirurgiske området starter i midten av kneet og gjør en sirkulær feie utover. Gjenta dette 3 x med fersk scrubs, med 70% etanol.
- Administrere en preoperativ dose av buprenorfin hydrochloride analgesi (0,03 mg/kg) subcutaneously for umiddelbar postoperativ smerte ledelse.
- Plass musen på en oppvarming pad dekket av et sterilt kirurgisk pad.
2. kirurgisk tilnærming
Merk: Før sprekken, vekten og slipp høyden bør empirisk fastsettes for bestemt belastning, alder og kjønn av mus før operasjonen. Denne kirurgiske prosedyren er optimalisert for C57BJ6 mannlige mus for 10 ukens av alderen.
- Plasser musen på ryggen og flex kneet til operativ beinet. Bruke en skalpell blad, lage en 1,5 cm snitt sentrert over kneleddet.
- Gjøres ved å forskyve patella ved hjelp av pinsett for å avsløre distale femur. Sett inn en 1.5 - i lange 25-gauge rustfritt stål sprøyte nål i midten av trochlear sporet ned lengden på medullær kanalen i en retrograd måte og gjennom den proksimale enden av femur. Ta et røntgenbilde for å sikre riktig plassering av pin.
Merk: P bør avslutte dorsal side på å lage en bane for guidewire. - Sende en 4 - i lange 36-gauge tungsten guidewire gjennom skaftet av nålen, skriver inn gjennom huben på distale femur og spennende skråkant på dorsal side av musen.
- Etter vellykket plasseringen av guidewire, forsiktig fjerne 25-gauge nålen ved å trekke forsiktig på hub mens du holder lem og i guidewire i stedet. Bekreft plassering av guidewire av X-ray.
- Holde en 391 g vekt fra en høyde på 34.6 cm over virkningen platen (figur 1A). Posisjon femur vannrett over to støtte poeng, slik at regionene intertrokanterisk og supracondylar av femur hvile på støtte ambolter (figur 1B) og den laterale siden av lem vender lasting punktet (figur 1 c ). Miste vekt og fjern forsiktig musen fra enheten etter brudd.
- Bekrefte brudd plasseringen av X-ray.
- Sett inn 24-gauge rustfritt stål hypodermic slangen over guidewire å stabilisere brukket femur.
Merk: Dette programmet krever litt kraft inngangspunktet ble generert ved hjelp av en nål med mindre diameter. Denne forskjellen i diameter forhindrer at en potensiell overføring av 24-gauge stangen gjennom den proksimale enden av femur. Dybden av innsetting kan merkes manuelt som sløv slangen møter til kortikalt beinvev i forhold til større trokanter. - Kontroller plasseringen av stål stangen og stabilisering av brukket femur av X-ray før guidewire.
- Kutt overflødig slangen på distale femur med wire cutters. Begrave den utsatte rør under overflaten av Kondyler ved hjelp av pinsett bruke en mild nedadgående styrke, være forsiktig med å dislocate kneleddet.
- Omplasser patella ved hjelp av pinsett. Lukk snitt området med en 5-0 absorberbare Sutur.
3. postoperativ behandling
- Etter operasjonen, kan mus injiseres med opptil 500 µL av sterilt saltvann via IP-ruten for å hjelpe dem i deres postoperative gjenvinning.
- Overvåke dyrene på en oppvarmet utvinning seng før de vekke fra kirurgi. Når oppegående, returnere dem til deres bur.
- Fortsette å følge nøye musene i flere dager etter kirurgi for å sikre de er healing på riktig måte, og gjenopprette mobilitet. Administrere buprenorfin hydrochloride analgesi (0,03 mg/kg) subcutaneously hver 6t innen 3 dager etter operasjonen og etter behov etterpå. Unngå bruk av ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler (NSAID) som de har vist å svekke bein healing etter operasjonen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den vellykkede implementeringen av den kirurgiske prosedyren ble overvåket med røntgen bildebehandling. Viktige trinn omfatter innsetting av et mulig intramedulær p, plasseringen av en guidekabel, induksjon av tverrgående brudd på femur midshaft og riktig stabilisering med en mulig intramedulær stang (figur 2Ajeg - 2Aiv). Helbredende progresjon av brudd callus var overvåket med ukentlige røntgen bilder opp til 28 dager etter operasjonen (figur 2B). På 10-16 dager etter brudd, chondrocytes gjennomgikk hypertrofi og produsert mineralholdig brusk for å danne en fremtredende myk callus.
Det er viktig å forstå tidlige cellulære og molekylære hendelser som er involvert i endochondral og intramembranous ossifications når studere bein brudd healing. Femurs var farget med toluidine blå på 7 og 14 dager etter brudd visualisere dannelsen av en brusk matrise ved brudd gap (figur 3A). Brusk dannelsen var synlig 7 dager etter brudd og justert med brudd gapet ved dag 14 etter brudd.
Etter dannelsen av den myke callus, osteoklast resorbed calcified brusk og moden osteoblasts syntetisert ny benmatriks. I utgangspunktet bein matrix avsetning innenfor callus var romlig uspesifisert, men en ombygging av calcified brusk, over tid, produsert mer definerte strukturer i Sentral-regionen og utkanten av brudd callus. Type 1 kollagen (Kol1) er en viktig komponent av bein matrise, og dets uttrykk viste romlig organisering og relative antall bein matrisen som var tilstede 14 dager etter brudd (figur 3B). Sammen viser disse dataene koordinert produksjon av brusk og primær bein matrise under endochondral helbredelse.
Deretter under dager 17-35 etter brudd, ble primær bein gradvis ombygd for å danne en sterk sekundær bein som minner om den kortikale midshaft12. Microcomputed tomografi (mikro-CT) analyse viste callus volumet reduseres med ca 50% mellom 14 og 28 etter brudd, som indikerer en effektiv ombygging av callus (figur 4A - 4B). Selv om røntgen Bildeteknikker gir en verdifull vurdering av bein innhold og mikroarkitektur, burde torsjonsmessig prøving bli gjennomført til riktig vurdere bein styrke i forhold til ikke-skadde kontralateral femur.
Figur 1: et diagram av brudd apparatet og plassering av musen under generering av brudd. (A) dette panelet viser et diagram over apparater å generere frakturer og en identifikasjon av komponenter: (A1) effekt plate, (A2) nøtter og gjengede stenger, (A3) øvre plattformen, (A4) vertikale innlegg, (A5) våren og skaft, (A6) lavere plattformen, (A7) støtte scenen, (A8) i kantknappen og (A 9) base. Pilene viser en nedadgående forskyvning av gjengede stenger og skaft etter en vekt slippes på virkningen platen. (B) frakturer genereres på midten av diaphysis med et (B1) giljotinen blad mens de intertrokanterisk og supracondylar regionene i femur støttes av (B-2) ambolter. (C) disse bildene viser plasseringen av musen hind lem over støtte ambolter før generering av brudd. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: brudd induksjon og helbredelse progresjon overvåket med bruk av røntgenfotograferingen. (A) røntgen bilder av mus ble tatt hele operasjonen viser (Ai) innsetting av en 25-gauge nål retrograd gjennom lengden på femur, (alle) plassering av 30-gauge tungsten guidewire før ( Aiii) generering av tverrgående brudd, og (Aiv) stabilisering av brukket femur med 24-måle stang. (B) ukentlige røntgen bilder ble brukt til å overvåke utviklingen av healing opp til 28 dager etter brudd. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: brusk dannelse og nye bein matrix avsetning under endochondral forbening. (A) dette panelet viser histologiske deler av 7 - og 14-dagers gammel calluses farget med toluidine blå. Callus periferien er uthevet i rødt. (B) dette panelet viser immunohistochemistry flekker for kollagen type 1 uttrykk som green inne brudd callus 14 dager etter brudd (40 X og 100 X forstørrelse). Prøvene ble counterstained med DAPI å visualisere kjerner som blå. Bil = brusk; BM = benmarg; Oktober = gamle kortikalt benvev; Mus = muskel. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Micro-CT analyse av brudd callus. (A) dette panelet viser langsgående og cross-sectional mikro-CT-bilder av sprekken callus på 14 og 28 dager etter brudd (n = 6/gruppe). (B) dette panelet viser mener callus volumet (mm3) på 14 og 28 dager etter brudd. Feilfeltene representerer et standardavvik. Statistisk sammenligningen mellom behandling gruppene ble utført en kort 2-tailed Student t-test. Standardavvik; p < 0,05. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Målet med denne kirurgiske prosedyren er å generere standardisert lukket femur brudd i mus. En viktig fordel med denne modellen er at interne fiksering foregår etter generering av sprekken, og dermed unngå en angulation av mulig intramedulær stangen. Kanskje er det viktigste aspektet ved denne protokollen generasjon av en standardisert tverrgående brudd på femur midshaft, som brudd geometrien er avhengig anvendt bøying kraften og plasseringen av hind lem. Upassende plassering av femur under bøying øyeblikket kan føre til skrå eller comminuted sprekker. Vekt og slipp høyden må være empirisk forhåndsbestemt, som de er avhengig av alder, kjønn og belastning av mus. Anvendt styrken kontrolleres videre på nytt ved hjelp av et materiale testing machine utstyrt med en tre-punkts bøying apparater i stedet for en falt vekt24. Imidlertid er generere brudd med en falt vekt en klinisk relevante modell av høy effekt eller stress-relaterte skader.
I tillegg kan komplikasjoner utvikle under kirurgiske prosedyren. Guidewire kan bli dislocated etter generering av sprekken, fører til en forskyvning av skadde femur under stabilisering med mulig intramedulær stangen. Dette kan forebygges ved å overvåke med røntgen bilder før og etter generasjonen av frakturer. Ved comminuted frakturer, bør dyr utelukkes fra studien. Videre bør dyr overvåkes nøye etter operasjonen for overføringen av mulig intramedulær stangen, som dette kunne påvirke mobilitet og helbredelse av skadde lem. En begrensning av teknikken er at i vivo mikro-CT eller magnetisk resonans imaging (MRI) analyser er ikke mulig, som rustfritt stål mulig intramedulær stang ville kompromiss bildekvaliteten. Disse analysene kan derfor bare være utført ex vivo, etter at forsiktig mulig intramedulær stangen.
Men det er mange murine brudd modeller, lukket femur fraktur modellen skiller seg ut som en enkel, effektiv og klinisk relevante metoden å studere bein gjenfødelse. Intern fiksering med en mulig intramedulær stang, som beskrevet i denne protokollen, gir tilstrekkelig stabilitet for konsekvent bein healing, men kan fortsatt ha en viss grad av aksial og roterende bevegelse av skadde femur. Mens åpne modeller som rotasjonsosteotomi tillater generering av standardiserte "brudd", de krever en rigid ytre fiksering av bein, og helbredelse avhengig intramembranous forbening. Akutt lange bein sprekker helbrede vanligvis gjennom en kombinasjon av endochondral og intramembranous forbening. Derfor gir lukket femur frakturer beskrevet i denne protokollen en fysiologisk relevante modell for å studere den underliggende mekanismen av bein healing. Fremtidige studier med murine lukket femur brudd ville ha nytte av utviklingen av en radiolucent mulig intramedulær stang å tillate i vivo imaging teknikker, som bruk av kontrast fargestoffer måle dannelsen av nye blodkar i den skadet lem. Sammen murine lukket femur fraktur modellen er en attraktiv plattform å studere cellulære og molekylære hendelser knyttet bein skade og regenerasjon og identifisere romanen terapeutiske mål å akselerere bein helbredelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne av dette manuskriptet har ingenting å avsløre. Forfatterne videre staten at det er ingen restriksjoner på full tilgang til alle materialet som brukes i studien rapporterte i dette manuskriptet.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av bevilgninger fra Department of Defense (DoD) oss hæren medisinsk forskning og materiell kommandoen (USAMRMC) Congressionally regissert Medical Research programmer (CDMRP) (PR121604) og nasjonale institutter for Arthritis og Musculoskeletal og hudsykdommer (NIAMS), NIH R01 AR068332 til Uma Sankar.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Oster Minimax Trimmer | Animal World Network | 78049-100 | |
| POVIDONE-IODINE | Thermo Fisher Scientific | 395516 | |
| OPHTHALMIC OINTMENT | Thermo Fisher Scientific | NC0490117 | |
| Styker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific Corporation | TP-700 | |
| 1ml Sub-Q Syringe | Thermo Fisher Scientific | 309597 | |
| ENCORE Sensi-Touch PF | Moore Medical LLC | 30347 | Latex, powder-free surgical glove |
| PrecisionGlide 25G Hypodermic Needles | Thermo Fisher Scientific | 14-826-49 | |
| Ultra-High-Temperature Tungsten Wire, | McMaster-Carr | 3775K37 | 0.005" Diameter, 1/16 lb. Spool, 380' Long |
| 304 stainless steel, 24G thin walled tubing | Microgroup Inc | 304h24tw-5ft | |
| #15 Scalpel Blades | Fine Science Tools | 10015-00 | |
| #10 Scalpel Blades | Fine Science Tools | 10010-00 | |
| Narrow Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | Serrated/Straight/12cm |
| Iris Forceps | Fine Science Tools | 11066-07 | 1x2 Teeth/Straight/7cm |
| Dissector Scissors | Fine Science Tools | 14081-09 | Slim Blades/Angled to Side/Sharp-Sharp/10cm |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14058-11 | ToughCut/Straight/Sharp-Sharp/11.5cm |
| Olsen-Hegar Needle Holder with Suture Cutter | Fine Science Tools | 12002-12 | Straight/Serrated/12cm/with Lock |
| Crile Hemostat | Fine Science Tools | 13004-14 | Serrated/Straight/14cm |
| Tungsten Wire Cutter | ACE Surgical Supply Co., Inc. | 08-051-90 | ACE #150 Wire Cutter, tungsten carbide tips |
| 3-0 VICRYL Suture | Ethicon Suture | J423H | 3-0 VICRYL UNDYED 27" FS-2 CUTTING |
| piXarray 100 Digital Specimen Radiography System | Bioptics, Inc | Cabinet x-ray system | |
| Einhorn 3-Point Bending Device | N/A | N/A | Custom Built |
References
- Schnell, S., Friedman, S. M., Mendelson, D. A., Bingham, K. W., Kates, S. L. The 1-Year Mortality of Patients Treated in a Hip Fracture Program for Elders. Geriatric Orthopaedic Surgery & Rehabilitation. 1 (1), 6-14 (2010).
- Burge, R., et al. Incidence and economic burden of osteoporosis-related fractures in the United States, 2005-2025. Journal of Bone and Mineral Research. 22 (3), 465-475 (2007).
- Cunningham, B. P., Brazina, S., Morshed, S., Miclau, T. III Fracture healing: A review of clinical, imaging and laboratory diagnostic options. Injury. 48, S69-S75 (2017).
- Einhorn, T. A. Can an anti-fracture agent heal fractures? Clinical Cases in Mineral and Bone Metabolism. 7 (1), 11-14 (2010).
- Hak, D. J., et al. Delayed union and nonunions: epidemiology, clinical issues, and financial aspects. Injury. 45, Suppl 2. S3-S7 (2014).
- Decker, S., Reifenrath, J., Omar, M., Krettek, C., Muller, C. W. Non-osteotomy and osteotomy large animal fracture models in orthopedic trauma research. Orthopaedic Reviews (Pavia). 6 (4), 5575 (2014).
- Histing, T., et al. Small animal bone healing models: standards, tips, and pitfalls results of a consensus meeting. Bone. 49 (4), 591-599 (2011).
- Jacenko, O., Olsen, B. R. Transgenic mouse models in studies of skeletal disorders. Journal of Rheumatology Supplement. 43, 39-41 (1995).
- Nikolaou, V. S., Efstathopoulos, N., Kontakis, G., Kanakaris, N. K., Giannoudis, P. V. The influence of osteoporosis in femoral fracture healing time. Injury. 40 (6), 663-668 (2009).
- Bain, S. D., Bailey, M. C., Celino, D. L., Lantry, M. M., Edwards, M. W. High-dose estrogen inhibits bone resorption and stimulates bone formation in the ovariectomized mouse. Journal of Bone and Mineral Research. 8 (4), 435-442 (1993).
- Haffner-Luntzer, M., Kovtun, A., Rapp, A. E., Ignatius, A. Mouse Models in Bone Fracture Healing Research. Current Molecular Biology Reports. 2 (2), 101-111 (2016).
- Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. Fracture healing: mechanisms and interventions. Nature Reviews in Rheumatology. 11 (1), 45-54 (2015).
- Schindeler, A., McDonald, M. M., Bokko, P., Little, D. G. Bone remodeling during fracture repair: The cellular picture. Seminar in Cellular and Developmental Biology. 19 (5), 459-466 (2008).
- Ai-Aql, Z. S., Alagl, A. S., Graves, D. T., Gerstenfeld, L. C., Einhorn, T. A. Molecular mechanisms controlling bone formation during fracture healing and distraction osteogenesis. Journal of Dental Research. 87 (2), 107-118 (2008).
- Gerstenfeld, L. C., et al. Three-dimensional Reconstruction of Fracture Callus Morphogenesis. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 54 (11), 1215-1228 (2006).
- Marsell, R., Einhorn, T. A. Emerging bone healing therapies. Journal of Orthopaedic Trauma. 24, Suppl 1. S4-S8 (2010).
- Lybrand, K., Bragdon, B., Gerstenfeld, L. Mouse models of bone healing: fracture, marrow ablation, and distraction osteogenesis. Current Protocols of Mouse Biology. 5 (1), 35-49 (2015).
- Garcia, P., et al. The LockingMouseNail--a new implant for standardized stable osteosynthesis in mice. Journal of Surgical Research. 169 (2), 220-226 (2011).
- Histing, T., et al. An internal locking plate to study intramembranous bone healing in a mouse femur fracture model. Journal of Orthopaedic Research. 28 (3), 397-402 (2010).
- Garcia, P., et al. A new technique for internal fixation of femoral fractures in mice: impact of stability on fracture healing. Journal of Biomechistry. 41 (8), 1689-1696 (2008).
- Holstein, J. H., et al. Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration. Journal of Orthopaedic Trauma. 23 (5 Suppl), S31-S38 (2009).
- Bonnarens, F., Einhorn, T. A. Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone. Journal of Orthopaedic Research. 2 (1), 97-101 (1984).
- Holstein, J. H., Menger, M. D., Culemann, U., Meier, C., Pohlemann, T. Development of a locking femur nail for mice. Journal of Biomechistry. 40 (1), 215-219 (2007).
- McBride-Gagyi, S. H., McKenzie, J. A., Buettmann, E. G., Gardner, M. J., Silva, M. J. Bmp2 conditional knockout in osteoblasts and endothelial cells does not impair bone formation after injury or mechanical loading in adult mice. Bone. 81, 533-543 (2015).
- Williams, J. N., et al. Inhibition of CaMKK2 Enhances Fracture Healing by Stimulating Indian Hedgehog Signaling and Accelerating Endochondral Ossification. Journal of Bone and Mineral Research. , (2018).
