Summary
Kynurenine yolu (KP) neuroactive metabolitleri değişiklikler psikiyatrik hastalıklarda karıştığı. Bir değişmiş kynurenine yolu metabolizma vivo içinde Rodents fonksiyonel sonuçları araştıran yeni tedavi yaklaşımları aydınlatmak yardımcı olabilir. Geçerli protokol fareler bir akut kynurenine mücadelesine etkisini araştırmak için biyokimyasal ve davranışsal yaklaşımlar birleştirir.
Abstract
Triptofan bozulma kynurenine yolu (KP) psikiyatrik bozukluklar karıştığı olmuştur. Özellikle, astrocyte elde edilen metaboliti kynurenic asit (KYNA), bir antagonisti her iki N-metil-d-aspartat (NMDA) ve α7 (α7nACh) nikotinik asetilkolin reseptörü, sağlık ve hastalığında bilişsel süreçlerde karıştığı olmuştur. Şizofreni hastalarının beynindeki KYNA düzeyleri yüksek olarak, bir arıza glutamatergic ve kolinerjik reseptörler nedensel bilişsel işlev bozukluğu için hastalığın psikopatoloji bir çekirdek etki alanı ile ilgili olabilir inanılıyor. KYNA şizofreni ile bireylerde pathophysiologically önemli bir rol oynayabilir. Kemirgen beyinde endojen KYNA doğrudan bioprecursor kynurenine hayvanlarla davranarak yükseltmek mümkündür ve preklinik çalışmalar sıçanlarda akut yükselmeler KYNA öğrenme ve bellek süreçlerinin etkisi olabilir göstermiştir. Geçerli protokol bu deneysel yaklaşım ayrıntılı olarak açıklar ve kan kynurenine düzeyleri ve beyin KYNA oluşumu, (yüksek performanslı sıvı kromatografi kullanarak) bir) bir biyokimyasal analiz birleştirir b) davranışsal soruşturma için test hipokampal bağımlı bağlamsal bellek (pasif kaçınma paradigma) ve c) bir değerlendirme uyku-uyanıklık davranış [telemetric kayıtları birleştirerek electroencephalogram (EEG) ve electromyogram (EMG) sinyalleri] sıçanlarda. Birlikte ele alındığında, yüksek KYNA, uyku ve biliş arasında bir ilişki okudu ve bu protokol ayrıntılı olarak kynurenine yükselme ve KYNA oluşumu içinde vivo sıçanlarda işlevi sonuçlarını anlamak için deneysel bir yaklaşım açıklar. Bu iletişim kuralı değişimleri gözden geçirmek elde edilen sonuçlar KP ve KYNA uyku ve biliş sağlık ve hastalık Birleşik Devletleri oransal önemli roller hizmet hipotez test edecek.
Introduction
KP esansiyel amino asit triptofan1yaklaşık % 95'i aşağılayıcı için sorumludur. Memeli beyninde astrocytes alınan kynurenine neuroactive küçük molekül KYNA öncelikle enzim kynurenine aminotransferaz (KAT) II2tarafından metabolize. KYNA bir antagonisti NMDA ve α7nACh reseptörleri beyin2,3,4, görür ve ayrıca aril hidrokarbon reseptör (AHR) ve G-protein de dahil olmak üzere reseptörlerinin sinyal hedefleri reseptör 35 (GPR35) birleştiğinde5 ,6. Deneysel hayvan yükselmeler KYNA beyinde bilişsel performansları bir dizi davranışsal deneyleri2,7,8,9,10 zarar gösterilmiştir . Böylece daha fazla rol astrocyte kaynaklı moleküllerin uyku Nörobiyoloji oransal destekleme KYNA bilişsel işlevler tarafından etkileyen uyku-uyanıklık davranış11, oransal olarak önemli bir rol oynar gelişmekte olan bir hipotez öneriyor ve biliş12.
Klinik olarak, yükselmeler KYNA içinde beyin omurilik sıvısı ve otopsi beyin dokusu içinde şizofreni13,14,15,16, zayıflatıcı bir psikiyatrik bozukluk ile hastalardan bulunmuştur tarafından bilişsel bozuklukları ile karakterizedir. Şizofreni hastalarında da sık sık hastalık17şiddetlendirmek uyku bozukluğu tarafından boğulmuş. Uyku ve biliş, öğrenme ve hafıza, özellikle arasında bir ilişkisi oransal KP metabolizması ve KYNA rolünün anlaşılması şizofreni ve diğer fakir bu sonuçların tedavisi için yeni tedavilerin gelişmesine neden olabilir psikiyatrik hastalıklar.
KP metabolitleri ölçümü için güvenilir ve tutarlı bir yöntem çeşitli kuruluşlardan ortaya çıkan araştırma KP biyoloji bilimsel anlayış içine entegre edilebilir sağlamak önemlidir. Halen, kynurenine fare plazma ve KYNA sıçan beyin tarafından yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) ölçmek için yöntemler açıklanmaktadır. Yapar bir fluorimetric tespitinde huzurunda Zn2 +kullanın, Shibata18 ve daha yakın zamanda adapte ve bırakmak için sonrası sütun reaktifi olarak 500 mM çinko asetat ile derivatize için en iyi duruma getirilmiş tarafından geliştirilen ilk mevcut iletişim kuralı endojen, nanomolar miktarda KYNA beyin11algılama.
Mevcut protokolünde açıklandığı gibi de novo endojen KYNA üretimi teşvik için doğrudan bioprecursor kynurenine intraperitoneally enjekte edilir (IP) içinde rats. KYNA üretim derecesini belirlemek için biyokimyasal değerlendirmeler ile birlikte, bir kynurenine etkileri bağımlı hipokampal bellek (pasif kaçınma paradigma) meydan ve uyku-uyanıklık mimarisi (EEG ve EMG sinyalleri) de incelenen11. Bu teknikleri bir arada sıçanlarda kynurenine meydan vivo biyokimyasal ve fonksiyonel etkisini incelenmesi için izin verir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Deneysel Protokolümüze Maryland Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı Komitesi tarafından onaylanmış ve bakım ve kullanım Laboratuvar hayvanları için Ulusal Sağlık Enstitüleri'nın kılavuzu izledi.
Not: Yetişkin erkek Wistar rats (250-350 g) tüm deneylerde kullanılıyordu. Hayvanların ayrı tabur biyokimyasal analiz, Davranışsal deney ve uyku-uyanıklık kayıtları için kullanılmıştır. Hayvanlar bir ısı kontrollü tesis Maryland Psikiyatri Araştırma Merkezi'nde yer alan. Onlar ışıkları ile 12/12 h koyu döngüsü üzerinde zeitgeber zaman (ZT) 0 ZT 12 ışıkları tutuldu ve. Hayvanlar yiyecek ve su ad libitum erişim deneyler sırasında aldı. Tesis tam Akreditasyon laboratuvar hayvan bakımı için Amerikan Kurumu akredite.
1. mayi Kynurenine yönetim e doğru Rats
Not: Bu protokol için kynurenine ZT 0 (ışık aşama başlangıcı) verildi ve doku ZT 2 ve ZT 4 zamanlı kurs kynurenine metabolizması için belirlemek için denizden çıkarıldı. Serum enjekte hayvanlar bir denetim olarak kullanılmıştır. Örneğin, bir sıçan 500 gr ağırlığında ve istenilen doz 100 mg/kg'dır, fare kynurenine, 10 mg/mL solüsyon 5 mL enjeksiyon almanız gerekir.
- L-kynurenine sülfat ("kynurenine") tartmak ve 20 mL Cam şişe yerleştirin. Kynurenine buz üzerinde her zaman tutmak için emin olun.
-
İstenen konsantrasyon ulaşmak ve pH 7,6 1 N sodyum hidroksit (NaOH) kullanarak için ayarlamak için serum ekleyin. Girdap ve kynurenine tamamen çözülmüş kadar çözüm solüsyon içeren temizleyicide.
Uyarı: tüm öneri önlemleri NaOH işlerken izleyin.- Örneğin, 10 mg/mL solüsyon elde etmek için kynurenine 200 mg tartmak ve cam şişede yerleştirin. 15 mL serum fizyolojik ve girdap ekleyin ve (5-10 s, 1/8 inç çap microtip için 20 kHz) solüsyon içeren temizleyicide erimesi. NaOH kullanarak, çözüm pH ayarlayın. Son olarak, serum 20 ml sesini ayarlamak için kullanın.
- Deneysel her fare tartmak ve hayvanın vücut ağırlığı ve istenilen tedavi dozu dayalı her enjeksiyon hacmi hesaplamak. Dikkatli bir şekilde hayvan ev kendi kafesinden çıkarmak, çözüm intraperitoneally enjekte ve hayvan onun kafes dönmek.
2. Kynurenine ölçümleri kullanarak yüksek performanslı sıvı kromatografi
- Doku koleksiyonu
Not: Bu protokol için kynurenine ZT 0 (ışık aşama başlangıcı) verildi ve doku ZT 2 ve ZT 4 zamanlı kurs kynurenine metabolizması için belirlemek için denizden çıkarıldı. Serum enjekte hayvanlar bir denetim olarak kullanılmıştır.- Hayvan ötenazi için karbon dioksit kullanın. Solunum belirtileri 1dk için kesildiği tarih var sonra ikincil ötenazi yöntemi tarafından işten çıkarma uygulayın.
- Bütün gövde kan toplamak için tek kullanımlık bir huni K320 μL içeren bir 15 mL tüp içine koyun-EDTA (0,5 M). Kan vücuttan tüp drenaj izin vermek. Ters Çevir'i tekrar tekrar EDTA sağlamak için tüp boyunca karıştırılır.
- Baş aşağı kafatası ortaya çıkarmak için orta hat üst deriyi kesme Makası kullanarak. Arkadaki kafatası ve arka kafatasından öne kesti omurilik için açılışında herhangi bir aşırı boyun kas kaldırın.
- Kafatası iki tarafı açık beyin ortaya çıkarmak için yavaşça çekin ve beyin forseps ile çok zarar vermemek için dikkatli bir şekilde çıkarın. Olfaktör ampuller bir tıraş bıçağı ile kaldırın ve beyin yarım aşağı orta hat kesilmiş. Forseps kullanarak, hemibrain faiz (yani, hipokampus ve korteks) bölgelere incelemek.
- Alüminyum folyo Kuru buz üzerinde tüm disseke beyin parçaları yerleştirin. Sonra dokuyu tamamen dondurdu, 20 mL plastik şişe aktarın ve-80 ° C'de depolayın
- 10 dk. süpernatant (plazma) kaldırın ve bunları-80 ° C'de saklamak önce yeni santrifüj tüpleri içine aktarmak için 300 x g , tüm gövde kan santrifüj kapasitesi
- Numune hazırlama
- Plazma: tedavi hayvanlardan toplanan
- Plazma ile dondurulmuş tüp çözülme (bkz. Adım 2.1 doku koleksiyonu için) ıslak buz üzerinde.
- Bir yeni santrifüj tüpü Ultrasaf Su (1:2 kynurenine, 1:10 KYNA için) ile örnek sulandırmak. İçin 100 μL seyreltilmiş örnek 25 μL % 6 perklorik asit ekleyin.
Uyarı: tüm öneri önlemleri perklorik asit taşıma sırasında izleyin. - Girdap tüm örnekleri, sonra santrifüj kapasitesi onları 12.000 x g 10 min için de. Bir kez bitmiş, 100 μL süpernatant ile (her tüp) kaldırmak ve kynurenine veya KYNA belirlenmesi için bir küçük 0.25 mL microcentrifuge tüp içine koyun.
- Beyin: tedavi hayvanlardan toplanan
- Tüpler (bkz. Adım 2.1 doku koleksiyonu için) donmuş beyin örnekleri ile kuru buza koyun. Tek tek her beyin örnek üzerinde kesin bir analitik denge tartın. Tüp dönün ve kuru buza koyun.
- Sonra tüm örneklerini tartılır, tüpler ıslak buz üzerine taşıyın. Sulandırmak her örnek 1:10 w/v Ultrasaf Su ile ve bir sonicator (5-10 s, 1/8 inç çap microtip için 20 kHz) kullanarak lunaparkçı. Örneğin, beyin dokusunun 100 mg için 900 μL ultrasaf su ekleyin.
- Her seyreltilmiş aliquot 100 μL örnek için yeni bir tüp ve % 25 perklorik asit 25 μL ile acidify. Girdap, sonra 12.000 x g 10 dk de santrifüj kapasitesi.
- Santrifüjü sonra süpernatant ile 100 μL çıkarın ve KYNA tayini için küçük 0.25 mL microcentrifuge tüpler içine yerleştirin.
- Plazma: tedavi hayvanlardan toplanan
- HPLC kurulum ve çalıştırma
- 50 mM sodyum asetat mobil faz hazırlayın. 6,81 g sodyum asetat trihidrat Ultrasaf Su 1 litre içinde çözülür. PH 6.2 buzul asetik asit kullanarak için ayarlamak ve sonra vakum filtre bu temiz cam. Sodyum asetat mobil faz temiz bir 1 L cam şişe aktarın.
- 500 mM çinko asetat hazırlayın. O zaman vakum filtre 54.88 g çinko asetat Ultrasaf Su, 500 ml geçiyoruz. Bir temiz 500 mL Cam şişe aktarın. Ultrasaf Su ile 1 L şişe ve HPLC sınıf Asetonitril bir 500 mL şişe doldurun.
- Mobil faz, Ultrasaf Su ve % 100 Asetonitril içine ayrı ayrı HPLC makineden emme boru yerleştirin. Pompa ayrı ayrı mobil faz sonrası sütunu olan ve derivatization önce bir araya getiren bir peristaltik pompa ile çinko asetat çözüme.
- Kontrol panelinin üstünde belgili tanımlık makine kullanarak, %5 Asetonitril ve %95 0.5 mL/dak Ultrasaf Su temel ve istikrarlı basınç elde etmek 20-30 dakikadır çalıştırılmasına izin çalıştırmak için program.
- İstikrarlı bir temel üzerine kuran, çözüm kompozisyon % 5 Asetonitril ve % 95 sodyum asetat mobil faz olarak değiştirin. 30 dakikadır equilibrate.
- Floresans dedektörü lamba açmak ve ısınmak sağlar.
- Bu arada, aynı zamanda bir debi 0.1 mL/dak sonrası sütun pompa açmak yaklaşık 500 psi istikrarlı bir baskısı yaklaşık 20 dk sonra ulaşmak izin vermek.
- Standartları hazırlamak.
- KYNA için 1 mM hisse senedi çözüm ile başlar ve 5 standart konsantrasyonları hazırlamak için seyreltik (yani, 10 nM, 5 nM, 2.5 nM, 1 nM ve 500 pM).
Not: Bu 200 fmoles 20 μL enjeksiyon başına 10 fmoles kadar uzanan bir standart eğri üretecektir. - Kynurenine için 1 mM hisse senedi çözüm ile başlar ve 5 standart konsantrasyonları hazırlamak için seyreltik (yani, 10 mikron, 5 mikron, 2,5 μm kalınlığında, 1 mikron ve 500 nM).
Not: Bu 200 pmoles 20 μL enjeksiyon başına 10 pmoles kadar uzanan bir standart eğri üretecektir.
- KYNA için 1 mM hisse senedi çözüm ile başlar ve 5 standart konsantrasyonları hazırlamak için seyreltik (yani, 10 nM, 5 nM, 2.5 nM, 1 nM ve 500 pM).
- Örnek sıra parametrelerini kontrol etmek ve birden fazla örnekleri autoinjections için izin HPLC sistemi yazılımı kurun.
- "Örnek çalıştırmak" ekranında zaman, "dosya" ve "Create yeni örnek küme için" aşağı sürükleyin. Yeni pencere açıldığında, "Boş" seçin. Tek tek bütün standartları (bkz. Adım 2.3.8) veya örnekleri çalışması gereken sırayla listelenmektedir.
- "İşlev" sütununda standartları ve örneklere belirleyin. Standartları başlangıç ve sıra sonunda denetlesinler. Her 5 örnekleri arasında su enjekte.
- Her örnek için çalışma süresi 15 dk. 20 enjekte μL örnek için standartlar ve plazma hazırlık ayarla veya beyin homogenate hazırlık örnekten 30 μL alma.
- Kynurenine için uyarma için uyarma ve emisyon dalga boylarında (bağımlı değerlendirildi bileşik için) ayarla: 365 nm, emisyon: 480 nm ve tutma zamanı: ~ 6 dk ve KYNA için uyarma için: 344 nm, emisyon: 398 nm ve tutma zamanı: ~ 11 dk.
- Bir kez tüm parametrelerini ayarlamak ve makine equilibrated, sıra çalıştırın.
- Verileri ölçmek için "Proje göz atın" ekranına gidin. "Örnek" Ayarlar"sekmesi altında sayısal için Ayarla örnek üzerinde çift tıklatın. Tüm enjeksiyonlar listesinden tüm standartları üzerine gelin ve sağ tıklatın. Yeni pencerede, "Süreci" yı seçin, sonra "Nasıl" yanındaki "Kalibre ve Quantitate" seçmek için aþaðý açýlan menüsünü kullanın:.
- Tüm standartlara daha vurgulamak, sağ tıklayın ve "İnceleme" seçin. Chromatograms açtığınızda, "Entegre" ve sonra "her standart; kalibre" için üst düğmelerini kullanın Bu otomatik olarak standart eğri oluşturur.
- "Örnek" Ayarlar"sekmesine dönün ve örnek sette çift tıklatın. Ardından, tüm standartları vurgulayın. Süreç, ama onun yerine, "Quantitate" açılır menüsünden seçerek yukarıda tekrarlayın. Tüm örneklerini yeniden vurgulayın, sonra sağ tıklatın ve "Gözden geçirme" seçin. Chromatograms açtığınızda, "Entegre" için üst düğmelerini kullanın ve ardından "Quantitate" her örnek.
Not: Bu her örnek önceden oluşturulmuş standart eğri dayalı konsantrasyon çıktısı.
3. pasif kaçınma paradigma
Not: Bu davranış deneyler akut kynurenine meydan okuma ile bizim biyokimyasal bulgular göre dizayn edilmiştir. Beyin KYNA bir artış en üst düzeye çıkarmak için kynurenine (100 mg/kg) ZT 0, antrenmandan önce 2 h, ZT 2'de gerçekleşen aracılı hipokampal öğrenme sınamak için pasif kaçınma paradigma olarak yönetiliyordu. Cihaz bir Giyotin kapı tarafından ayrılmış ve ses yalıtımlı bir kutu içinde kontrol 2 eşit büyüklükte bölmeleri (21,3 cm yüksekliğinde, 20,3 cm genişliğinde ve 15.9 cm derin) oluşur. Test cihazları iki bölmeleri "hafif yan" ve "karanlık yüzü" denir. Hafif yan duvarlarının açıktır ve denemeler sırasında bir ışık daha fazla aydınlatmak için bu bölümü açılır gerekir. Karanlık bölme duvarları tamamen bir karartma durumu korumak için kaplıdır.
-
1. gün: eğitim deneme
- Test önce aparatı % 70 etanol ile temizleyin.
- Hayvanlar test odasına getir.
- Yavaşça deneysel hayvan cihazları ve yakın hafif yan içine yerleştirin ve aparatı kapı ve ses yalıtımlı kutusu mandalı.
- İlişkili Yazılım kullanarak, deneme başlayın. Ana ekrandan, "Dosya" ve sonra "Açık oturum" açılır menüsünden seçin. Yeni pencerede doğru prosedür ve cihaz seçilir emin olun ve "Kapat" ı tıklatın. Sonra "Yapılandırma" ve sonra "Sinyaller" seçin. Yeni pencerede doğru cihazı seçin ve "Sorun"'yi tıklatın.
Not: Yazılımın aparatı hafif tarafında açmak ve iki bölmeleri arasında Giyotin kapı açmak için bir ışık başlatacaktır. Bir Zamanlayıcı başlatılacak. - Hayvan tam olarak girdiği zaman aparatı, Giyotin kapı kapanacak ve kaçınılmaz ayak şok ve karanlık yüzü (0.56 mA 1 için s) teslim edilecektir.
- Kayıt hayvan koyu yuvası girmeden önce geçen süreyi.
- Hayvan şok aldıktan sonra 30 izin s kurtarma zaman hayvan cihazları çıkarmadan önce.
- Ev onun kafes hayvan arkada bir yer.
- Sonraki hayvan ile deneme başlamadan önce aparat temiz bir ıslak havlu ve herhangi bir dışkı Pellet dispose ile silin.
- Bütün hayvanlar eğitim almış sonra onları hayvan tesise geri.
-
2. gün: deneme testi
- Hayvanlar eğitim deneme sonra 24 saat test odasına getir. İlk hayvan için test deneme aparatı hafif yan içine yerleştirerek, kapanış kapı ve ses geçirmez kutu bağlantıIı başlar ve.
- Önceki gün aynı yazılım komutlarını kullanarak test deneme başlatmak; ışık cihazları hafif yan dönecek ve iki bölmeleri arasında Giyotin kapı açılacaktır. Bir Zamanlayıcı başlatılacak.
- Hayvan koyu yuvası girdiğinde, Giyotin kapı kapanacak. Kayıt geçen süre.
Not: Deneme yazılımı üzerinden en fazla 300 sonra sonlandırıldı hayvan test cihazları hafif tarafında kalırsa s. - Ev onların kafes içinde yeri hayvan arka ve aparatı (3.1.9. adımda açıklandığı gibi) sonraki hayvan ile deneme başlamadan önce temiz.
4. analiz uyku
- Kablosuz EEG/EMG verici cerrahi implantasyon
Not: Telemetric vericiler sterilize ve ameliyat öncesi hazırlanan gerekir.- Bir tıraş bıçağı kullanarak, yavaşça kabloyu neden ortaya çıkarmak için plastik kaplama küçük uzunluğu çıkarın. Çözüm sterilize ile dolu bir 50 mL konik tüp vericileri koyun [Örneğin, Wavecide (%2.65 oxazolidin)].
- En az 12 h için dezenfeksiyon çözümde vericileri bırakın. Ardından, ameliyat öncesi çözüm atık bir kaba aktarın. Verici steril serum fizyolojik ile yıkayın.
- Ameliyat günü, bir anestezi odasında yerleştirerek önce hayvan tartın. %100 O2ile 3-%5 isoflurane neden.
- Başarılı bir anestezi üzerine hayvan kaldırmak ve dikkatle tıraş, arkadaki vücudun sadece biraz sol ve göğüs kafesi altındaki tıraş, üst baş ve boyun, hem de küçük bir yama saç kullanarak.
- Carprofen (5 mg/kg) ameliyat sonrası analjezi için subkutan yönetmek.
- Ameliyat sırasında hayvanın vücut ısısını korumak için hayvan altında 37 ° C'de ayarla termostatik kontrollü sıcak su ısıtma yastığını yerleştirin.
- Stereotaksik çerçevede, anestezik durumu korumak ve kafa dengelemek için kulak çubuklarını yerleştirmek için bir burun konisi üzerinde hayvan yer. Traş cilt temizleme bezi betadin fırçalayın ve % 70 etanol alternatif tarafından sterilize. Opthalamic merhem onları yağlamak için gözler için geçerlidir.
- Belgili tanımlık ilk kesme önce yeterli anestezi emin olmak için ayak-çimdik testi kullanın.
- Steril neşter kullanmadan, hemen arkasında gözleri boyun arkası aşağı üzerinden bir kesi olun. Kafatası ve dorsal serviks boyun kas maruz.
- Kafatası ortaya çıkarmak gerekirse, pamuk uçlu uygulayıcıları herhangi bir membran kaldırmak için kullanın. Mikro-bulldog kelepçeleri cilt kafatası uzak tutmak için kullanılabilir. Bulun ve bregma konumunu işaretleyin. 2 burr-delik ve metal vida 2.0 mm ön Ekle / + 1.5 mm lateral ve 7,0 mm arka /-1,5 mm bregma göre yanal. Tam 2 devrimler vidaları sıkıştırın. Gazlı bez bir parça ile maruz kafatası kapağı.
- Steril Cerrahi makas kullanırken, hemen altında kaburga vücut boşluğu içine bir kesi yapmak.
- Cerrahi sayfasında, implante olması verici seri sayısını kaydetmek emin olun.
- Vücut boşluğu içinde steril vericiyi yerleştirin. Tel neden hala vücut dışında olmalı.
- Absorbe dikiş tamamı neden belgili tanımlık kesme tek bir amaç için toplandı sağlanması kas duvar oluşturacak biçimde için kullanın.
- Gazlı bez başından kaldırın ve derinin hemen altında belgili tanımlık kesme yukarı kaldırın. Bir çift deri altına kadar steril hemostats--dan belgili tanımlık baş kesme yan kesi için çalıştırın. Herhangi bir yaralanma en aza indirmek için cilt üzerinde bastır.
- Hemostats vücut kesi görünür olduğunda, onları cerrahi makas ve dört vericisi ile hemostats yol kapmak kapsayabilir herhangi bir membran küçük. Böylece teller deri altında yatıyordu ve kafatasına kadar koşmak yavaş yavaş hemostats çizin.
- 2 hangi ilan-ecek var olmak bağlı kafatası belirleyin. Forseps kullanarak, tek elle ve diğer plastik kılıf sonuna hemen altında bir tel sonu kavramak. Telin üstünde bireysel döngüler sadece yapılabilir kadar çekin.
- Sıkı bir şekilde 3-4 x maruz tel metal vida biri etrafında sarın. Güvenli bir kez tel çözülüyor gelen önlemek ve herhangi bir ilave telden klibi için sıkıştırın. Bu ikinci kurşun ve vida ile yineleyin.
- Böylece onlar rahat kafatası karşı oturup her iki EEG müşteri adayları vücut boşluğu üzerinden çek.
- Diş çimento vidalar ve kortikal ilan, bir kap içinde maruz kafatası oluşturma kapsayacak şekilde kullanın. Diş yok çimento cilt veya kas için sopa ve hiçbir keskin kenarları oluşturulur emin olun. Diş çimento kurumasını sağlar.
Not: Kap cilt üst üzerinde sütüre küçük olmalıdır. - EMG müşteri adayları, tel ve plastik kılıf sonuna 4.1.15 adımda anlatıldığı gibi kavramak. Bireysel döngüler açıkça discernable olana tel germek.
- Bu çıkmaya izin vermeden önce 2-3 mm için sağ tarafında 22 G iğne boyun kas altında çalıştırın. Nonabsorbable dikiş kullanarak, tek, gevşek dikiş gömülü iğne çevresinde koyun.
- İçine iğne EMG tel iplik ve iğne EMG tel iplik kas altında izin dışarı çekin. Kabloyu yerinde kalır ve ekstra tel küçük kas ortaya emin olmak için dikiş sıkın.
- Müşteri adayının ikinci EMG, ilk kurşun aşağı yaklaşık 1 mm 4.1.20 ve 4.1.21 numaralı adımları yineleyin.
- Böylece onlar rahat kas karşı oturup her iki EMG müşteri adayları vücut boşluğu üzerinden çek.
- Nonabsorbable dikiş baş ve boyun kesi kapatmak için kullanın. Tüm ilave tel cilt vücudun altında tuck ve yara klip vücut kesi kapatmak için kullanın.
- Lidokain merhem hayvan postoperatif ağrı ile yardımcı olmak için her iki kesik sitelerine uygulanır.
- Hayvan hayvan anesteziden kurtarıldı kadar ısıtma yastığını üzerinde oturmak belgili tanımlık kafes bırakmak ev onun kafes dönün.
Not: Hayvan kayıtları başlamadan önce 7-10 gündür kurtarmanız gerekir.
- Bir tıraş bıçağı kullanarak, yavaşça kabloyu neden ortaya çıkarmak için plastik kaplama küçük uzunluğu çıkarın. Çözüm sterilize ile dolu bir 50 mL konik tüp vericileri koyun [Örneğin, Wavecide (%2.65 oxazolidin)].
- EEG/EMG kaydı
Not: Bu iletişim kuralı ' Biz serum veya kynurenine ZT 0, idare ve hayvanın uyku uyku modundan çıkarma düzenlerini 24 h için kaydedildi.- Tüm uyku kayıtları nerede hayvanlar kayıt süresi için kesintiye olmayacak belirlenmiş bir odada tamamlayın.
- (İmplante EEG/EMG verici taşıyan) hayvan ev kafes bir alıcı biriminde yerleştirin. Bir mıknatıs kullanarak cerrahi olarak yerleştirilmiş verici açmak.
Not: vericiyi aktif hale getirildiğinde bir ışık alıcı ünitesi üzerinde görünmelidir. - EEG/EMG verileri ilişkili yazılım kullanarak kayıt kadar ayarla.
- "Deney" ve sonra "Create" açılır menüsünden seçin. Deneme adlandırın ve kaydedin. Sonra "Donanım" ve sonra "Düzenle MX2 yapılandırma" seçin.
- Yeni pencerede, deneyde kullanılan tüm vericileri seçin ve hangi alıcı pad her ile eşleştirilmiş gösterir. Hazır olduğunuzda, "Başlat Tüm sürekli" tuşuna basarak kaydı başlatın.
- Deneyler sona ermesi, "Dur tüm sürekli" ilişkili yazılım seçin ve mıknatıs kullanarak vericileri açmak.
- Kardiyak bir delik tarafından takip CO2 boğulma tarafından hayvanlara ötenazi. Verici kesik başın üst boyunca cerrahi makas ile yeniden açılması ve diş çimento ve boyun kas ücretsiz yol kesme tarafından dikkatli bir şekilde çıkarın.
- Daha sonra vücut boşluğu açın, vericiyi bulmak ve yavaş yavaş vücuttan çıkarın.
- EEG/EMG Analizi
- İlişkili Yazılım uyku-uyanıklık verileri çözümlemek için kullanın. Programı açın ve "Yeni konumu Ekle" seçin. Yeni pencerede, skor yazılımı içine alınacak verileri seçin.
Not: Bu deneme sırasında toplanan tüm ham dalga formu içeren yazılım içinde yeni bir dosya oluşturur. - El ile uyanıklık Birleşik istenen deneyler için puan. Puanlama sonra toplam süre, nöbetleri sayısı ve çeşitli uyanıklık durumları [Hızlı göz hareketleri (REM), non - REM NREM ve uyku modundan çıkarma] ortalama ne dersin süresi gibi parametreleri analiz.
Not: Analiz tüm kayıt üzerinde gerçekleştirilen veya belirli zaman ilgi için kısaltılmış. Burada, analiz ZT 0 ZT 2 arasındaki kayıt dönemi yapıldı.
- İlişkili Yazılım uyku-uyanıklık verileri çözümlemek için kullanın. Programı açın ve "Yeni konumu Ekle" seçin. Yeni pencerede, skor yazılımı içine alınacak verileri seçin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bir mayi kynurenine enjeksiyon beyin KYNA yükseltmek için bir yöntem olarak kullanımını doğrulamak için doku HPLC analiz gerçekleştirildi. Standart eğrileri (Şekil 1) ilişkili yazılım kullanarak ve doku örnekleri miktar için izin inşa edildi. Temsilcisi chromatograms kynurenine ve KYNA için Şekil 2' de sunulmuştur. Kynurenine 6 dk saklama teker gözlendi ve KYNA 11 dk bir tutma zaman vardı. KP dynamics gözlemlemek için 100 mg/kg kynurenine bu protokol için verildi ve doku hemen enjeksiyon, veya 2 veya 4 s sonrası enjeksiyon (Şekil 3a) toplanmıştır. Plazma kynurenine (Şekil 3b) ve hipokampal KYNA (Şekil 3 c) sayısal. Kynurenine metabolitleri HPLC belirlenmesi kullanılan belirli parametreler Tablo 1' de özetlenmiştir. Bu iletişim kuralı tarafından üretilen doz-yanıt eğrisi açıklamasını bir akut kynurenine enjeksiyon 2 h sonrası enjeksiyon ve onların temel 4 h sonrası enjeksiyon için döndürülen KYNA düzeylerinde elde bir tepe ile beyin KYNA düzeyleri, artırmak için bir yöntem olarak destekler.
Söz konusu biyokimyasal bulgulara dayanarak, pasif kaçınma paradigma eğitimde 2 h kynurenine enjeksiyon (Şekil 4a) sonra gerçekleştirildi. Grup arasında fark eğitim deneme (Şekil 4b) sırasında tespit edildi. Sınama mahkemede denetim hayvanlar önemli bir artış bağlamsal öğrenme gösteren karanlık tarafa girmek için gecikme süresi görüntülenir. Kynurenine ile önceki güne enjekte hayvanlar öğrenme bir açığı gösteren gecikme süresi, aynı artış göstermedi. Bu bulgulara dayanarak, akut kynurenine yükseklik, bellek edinme ve konsolidasyon, zamanında hipokampus aracılı bir görevde Engelli bir performans sonuçları sonucuna varabiliriz.
Uyku-uyanıklık mimarisi üzerine ışık aşamasında bir akut kynurenine ayrıcalık etkisini araştırmak için hayvanlar günde 1 serum ve kynurenine günde 2 ZT 0 (Şekil 5a) ile enjekte edildi. EEG/EMG sinyallerinin telemetrically tüm 48 saat süre kaydedildi. Günde 1 serum fizyolojik enjeksiyon (araç) ve günde 2 kynurenine enjeksiyon arasında karşılaştırmalar yapıldı. Sonuçları bir enjeksiyon sonra (temel bir yüzde değişim olarak sunulan) Toplam REM uyku süresi boyunca ilk 2 h (Şekil 5b) bir azalma göstermiştir. Bu uyku modundan çıkarma süresi bu zaman dönemlerde artış ve NREM uyku hafif bir azalma tarafından yansıtılmış. Bu sonuçlar bir akut kynurenine ayrıcalık bozuklukları uyku-uyanıklık dinamiklerini nedenleri gösterilmektedir.
Şekil 1: kynurenine ve KYNA enjeksiyon için standart eğrileri. Her standart 20 µL(a)kynurenine ve (B) KYNA için standart eğri oluşturmak için enjekte ettiler. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2: kynurenine ve KYNA için temsilcisi chromatograms. Standartları onların saklama kez onaylamak için bir örnek önce işletilmiştir. Bu paneller(a)serum kynurenine ve (B) beyin KYNA için temsilcisi örnek gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: serum ve hipokampal doku tarafından bir kynurenine meydan okuma takip HPLC analiz. (A)Kynurenine (100 mg/kg) veya serum mayi iğne zeitgeber zaman (ZT) 0 tarafından idare. Dokular toplanan 2 veya 4 s sonrası enjeksiyon. (B) kynurenine-yüksek serum kynurenine maruz aşağıdaki panelleri göstermek ve (C) hipokampal KYNA 2 h sonra enjeksiyon düzeyleri. P < 0,001 bir iki yönlü Bonferroni ttarafından takip varyans analizi (ANOVA) tarafından önemi gösterir-test düzeltme. N = 4-5 grup başına. Tüm veriler ortalama ± SEM vardır Bu rakam Pocivavsek ve ark. değiştirildi 11. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4: bir kynurenine ayrıcalık pasif kaçınma paradigma bağımlı hipokampal bellek etkisi. (A)Kynurenine (100 mg/kg) veya serum fizyolojik (ZT) 0 zeitgeber anda mayi enjeksiyonla idare. Hayvanlar ZT 2 görevde eğitilmiştir. 24 h eğitimden sonra hayvanların hafıza oluşumu için test edildi. (B) kynurenine eğitim öncesinde bir maruz caydırıcı karanlık bölme test gününde önlemek için gecikme süresi azalır. P < 0,01, *** P < 0,001 bir iki yönlü Bonferroni ttarafından takip varyans analizi (ANOVA) tarafından önemini belirtmek-test düzeltme. N = 8 – 14 grubu başına. Tüm veriler ortalama ± SEM vardır Bu rakam Pocivavsek ve ark. değiştirildi 11. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5: uyku-uyanıklık mimari bir kynurenine yükseklik etkisi. (A)serum (gün 1) ve kynurenine (100 mg/kg; 2. gün) mayi iğne zeitgeber zaman (ZT) 0 tarafından idare. Uyku-uyanıklık davranış sonraki 24 hızlı göz hareketleri (REM) uyku süresi düşürüldü h için (B) kaydedildi ve uyku modundan çıkarma süresi kynurenine enjeksiyon takip ilk 2 saat içinde artış olmuştur. P < 0,05 bir iki yönlü Bonferroni ttarafından takip varyans analizi (ANOVA) tarafından önemi gösterir-test düzeltme. N = 6-8 grubu başına. Tüm veriler ortalama ± SEM vardır Bu rakam Pocivavsek ve ark. değiştirildi 11. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
| Mobil faz kompozisyon | 50 mM sodyum asetat, pH 6.2 |
| %5 Asetonitril | |
| Mobil faz akış hızı | 0.5 mL/dk |
| Sonrası sütun derivatization reaktif | 500 mM çinko asetat |
| Sonrası sütun derivatization akış hızı | 0.1 ml/dk |
| Sütun türü | ReproSil-Pur C18 |
| Sütun boyutları | 4 x 150 mm2 |
| Dedektör sıcaklığı | 4,0 ºC |
| Kynurenine dalga boyu | Ör: 365, Em: 480 |
| Kynurenine tutma zamanı | ~ 6 dk |
| KYNA dalga boyu | Ör: 344, Em: 398 |
| KYNA tutma zamanı | ~ 11 dk |
Tablo 1: Parametreler kynurenine yolu metabolitleri HPLC tespiti için.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bir güvenilir değerlendirilmesi KYNA beyin için bir periferik kynurenine yönetim sonra birleştirmek ve biyokimyasal ve fonksiyonel deneyler yorumlamak çok önemlidir. Burada, yeni kullanıcıların, plazma kynurenine ve beyin KYNA sıçan ölçmek için etkili yöntemler kurmak için izin verir ayrıntılı bir iletişim kuralı mevcut. Kynurenine plazma ölçüm doğru enjeksiyon doğruladı ve beyin de novo sentezinde metaboliti KYNA ölçümü onaylar. Shibata18, huzurunda tam olarak beyin nanomolar aralığındaki endojen KYNA miktarda algılama yeteneğini de dahil olmak üzere Zn2 +, KYNA derivatize adapte açıklanan Fluorometrik HPLC yöntemi, bir çok avantajı vardır . Ayrıca, yöntem bioprecursor kynurenine plazma micromolar aralığındaki Fluorometrik dalga boylarında uyarma ve emisyon, ayarlayarak iletişim kuralında tanımlandığı gibi algılamak için adapte edilmiştir.
Belirli saatler arasında tedavi ve ötenazi gibi protokol içindeki kritik adımlar doğru zamanlı kurs beyin KYNA oluşumu belirlemek ve davranış analizi ve tasarım kılavuzu ve uyku-uyanıklık açıklanmıştır izleme deneyleri. Hipokampal aracılı öğrenme pasif kaçınma paradigması kullanarak değerlendirildi ve bir uyku-uyanıklık Analizi EEG/EMG veri telemetric kayıtları ile yapılmıştır. Beyin KYNA düzeyleri yüksek 2 h sonrası enjeksiyon olduğunu belirlendiği gibi böylece KYNA düzeyleri ZT 2 de en yüksek olduğunu pasif kaçınma görev alma oluştu biz davranış paradigma eğitim oturumu buna göre zaman aşımına uğradı. Buna ek olarak, biz de uyku-uyanıklık davranış analizi'ZT 2 zaman dilimi sırasında KYNA düzeyleri beyinde en yüksek kritik ZT 0 üzerinde duruldu. Birlikte ele alındığında, dikkatle düşünülmüş deneysel tasarım birlikte biyokimyasal ve fonksiyonel deneyler, KYNA biliş ve uyku-uyanıklık davranış11bir modülatör tanıtan bulgular köprü bize izin verdi.
Sınırlamalar bir dizi açıklanan protokolünde düşünülmelidir. KYNA endojen üretimini harekete geçirmek için doğrudan bioprecursor kynurenine periferik fareler enjekte ettiler. Kynurenine kolayca kan - beyin bariyerini aşar ve uyarılmış KP metabolizma beyin bölgeleri2çeşitli oluşur. Biz şu anda hipokampüs astrocyte elde edilen KYNA yükseklik odaklanmak; Ancak, kynurenine sistemik enjeksiyonu da metabolitleri 3-hydroxykynurenine (3-HK) ve quinolinic asit gibi KP, nörotoksik şube yükseltmek dikkate almak önemlidir. 3-HK bu KYNA yükselmeler tarafından neden karşılaştırıldığında yükselmeler nedeniyle etkileri ayrı alay için metodoloji ayarlanmalıdır. Ayrıca, perfuse yükseklik KP metabolizması beyin11 boyunca değişiklikler davranış arabuluculuk belirli beyin bölgeleri sınırlı bir içgörü sağlar.
Burada açıklanan Davranışsal deney tasarımı yaparken, biz pasif kaçınma paradigma ile ilgili mevcut yöntemler, bağlamsal bellek hipokampal aracılı girişme ayrıntılı olarak açıklandığı gibi en iyi duruma getirilmiş. Bellek üç büyük subprocesses oluşur: kodlama, konsolidasyon ve alma. Hafıza konsolidasyon işlemleri için en uygun koşullar bellek uzun vadeli depolama19,20entegre paylaşırken yeni uyku sırasında oluşur. Kemirgenler çalışmalarda hafıza konsolidasyon dar zaman windows üzerinde duruldu ve tespit gibi uyku satın alma sonra ertelendiği belleğin en hassas görünür, kynurenine ve beyin KYNA oluşumu sırasında bu duyarlı yükseltmesine seçtik zaman penceresi, satın alma ve bu makalenin hipotezi test etmek konsolidasyon, etkileyen. Bellek alınmasını kynurenine yükselmeler tarafından daha önce gösterilen21etkiledi Eğer biz ancak, şu anda did değil sınav. Bu da kemirgen bir görevi gerçekleştirmek için uğraşan beyin bölgeleri iyice düşünüp taşınmak kritik öneme sahip. Bu çalışmada ise için çoğunlukla biliş oransal olarak hippocampus rolü ilgi olsak, protokol değişiklikler bir akut kynurenine tarafından etkilenebilir için gösterilen alternatif davranış paradigmalar hayvanlar test etmek yararlı olabilir meydan, Klima ve çalışma bellek görevleri2,7,8,9,10korku gibi.
Ayrıca, beyin KYNA yükseltmesine kynurenine sistemik enjeksiyonlari yerine KYNA doğrudan infüzyonu bir ilgi alanı veya birleştirici enzim KAT II farmakolojik tarafından hedeflenen inhibisyonu düşünün için alternatif stratejiler içerir Araçlar veya mekanik hipotezler test etmek için belirli beyin bölgelerinde, moleküler knock-down yaklaşımlar. Bu yaklaşımlar da bağımsız olarak ölçülen fonksiyonel sonuçları etkileyen potansiyel olarak invazif yordamlar tanıştırabilir miyim iken, en uygun denetim koşulları ile tasarım deneyler için önemlidir.
Son olarak, uyku EEG/EMG Protokolü burada açıklanan kayıt yerine gergin, elektriksel gürültü, hareket eser ve hayvan zinciri kablonun çekti bir hayvan yaralanma riskini ortadan kaldırarak telemetric olmanın avantajı var. Fiziksel boyutları ve ağırlığı telemetric aygıt ve yerleşimi yerine subkutan intraperitoneally ameliyat sonrası kurtarma optimize içinde sıçan, doğal uyku-uyanıklık davranışı ile ücretsiz bir yakalama kablosuz kayıtları sağlar hareket aralığı. Ancak, önemli bir göz telemetric sistem kullanırken sınırlı yeteneği için katları kanalları aynı anda kaydıdır. Geçerli paradigma bir EEG kanal ve bir EMG kanal çiftleri ve REM, NREM ve uyku modundan çıkarma davranışı Puanlama için izin verir.
Şu anda açıklanan yöntemlerin bileşimini bir kynurenine ayrıcalık fonksiyonel sonuçları aydınlatmak için davranış ve biyokimyasal deneyleri içgörü sağlar. Bu protokoller KP, biliş ve uyku, daha önce keşfedilmemiş bir dinamik arasında bir ilişki göstermektedir. Burada sağlanan ayrıntılı deneysel yöntemleri kullanan kynurenine ve KYNA Nörobiyoloji hayvanlarda işlevsel etkileri bilimsel anlayışı geliştirmek. Sonuçta, bu alanda devam etmek iş sonuçları bireylerde psikiyatrik bozukluğu ve uyku aksamalar mücadele hafifletmek için yeni tedavi yaklaşımları için neden olabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu da çalışmanın kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01 NS102209) ve bir bağış Clare E. Forbes Trust tarafından finanse edildi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Wistar rats | Charles River Laboratories | adult male, 250-350 g | |
| L-kynurenine sulfate | Sai Advantium | ||
| ReproSil-Pur C18 column (4 mm x 150 mm) | Dr. Maisch GmbH | ||
| EZ Clips | Stoelting Co. | 59022 | |
| Mounting materials screws | PlasticsOne | 00-96 X 1/16 | |
| Nonabsorbable Sutures | MedRep Express | 699B | CP Medical Monomid Black Nylon Sutures, 4-0, P-3, 18", BOX of 12 |
| Absorbable Sutures | Ethicon | J310H | 4-0 Coated Vicryl Violet 1X27'' SH-1 |
| Dental Cement | Stoelting Co. | 51458 | |
| Drill Bit | Stoelting Co. | 514551 | 0.45 mm |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alliance HPLC system | |||
| E2695 separation module | Waters | 176269503 | |
| 2475 fluorescence detector | Waters | 186247500 | |
| post-column reagent manager | Waters | 725000556 | |
| Lenovo computer | Waters | 668000249 | |
| Empower software | Waters | 176706100 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Passive avoidance box for rat | |||
| Extra tall MDF sound attenuating cubicle | MedAssociates | ENV-018MD | Interior: 22" (W) x 22" (H) x 16" (D) |
| Center channel modulator shuttle box chamber | MedAssociates | ENV-010MC | |
| Stainless steel grid floor for rat | MedAssociates | ENV-010MB-GF | |
| Auto guillotine door | MedAssociates | ENV-010B-S | |
| Quick disconnect shuttle grid floor harness for rat | MedAssociates | ENV-010MB-QD | |
| Stimulus light, 1" white lens, mounted on modular panel | MedAssociates | ENV-221M | |
| Sonalert module with volume control for rat chamber | MedAssociates | ENV-223AM | |
| SmartCtrl 8 input/16 output package | MedAssociates | DIG-716P2 | |
| 8 Channel IR control for shuttle boxes | MedAssociates | ENV-253C | |
| Infrared source and dectector array strips | MedAssociates | ENV-256 | |
| Tabletop interface cabinet, 120 V 60 Hz | MedAssociates | SG-6080C | |
| Dual range constant current aversive stimulation module | MedAssociates | ENV-410B | |
| Solid state grid floor scrambler module | MedAssociates | ENV-412 | |
| Dual A/B shock control module | MedAssociates | ENV-415 | |
| 2' 3-Pin mini-molex extension | MedAssociates | SG-216A-2 | |
| 10' Shock output cable, DB-9 M/F | MedAssociates | SG-219G-10 | |
| Shuttle shock control cable 15', 6 | MedAssociates | SG-219SA | |
| Small tabletop cabinet and power supply, 120 V 60 Hz | MedAssociates | SG-6080D | |
| PCI interface package | MedAssociates | DIG-700P2-R2 | |
| Shuttle box avoidance utility package | MedAssociates | SOF-700RA-7 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sleep-Wake Monitoring Equipment | |||
| Ponehmah software | Data Sciences International (DSI) | PNP-P3P-610 | |
| MX2 8 Source Acquisition interface | Data Sciences International (DSI) | PNM-P3P-MX204 | |
| Dell computer, Optiplex 7020, Windows 7, 64 bit | Data Sciences International (DSI) | 271-0112-013 | |
| Dell 19" computer monitor | Data Sciences International (DSI) | 271-0113-001 | |
| Receivers for plastic cages, 8x | Data Sciences International (DSI) | 272-6001-001 | |
| Cisco RV130 VPN router | Data Sciences International (DSI) | RV130 | |
| Matrix 2.0 | Data Sciences International (DSI) | 271-0119-001 | |
| Network switch | Data Sciences International (DSI) | SG200-08P | |
| Neuroscore software | Data Sciences International (DSI) | 271-0171-CFG | |
| Two biopotential channels transmitter, model TL11M2-F40-EET | Data Sciences International (DSI) | 270-0134-001 |
References
- Leklem, J. E. Quantitative aspects of tryptophan metabolism in humans and other species: a review. The American Journal of Clinical Nutrition. 24 (6), 659-672 (1971).
- Pocivavsek, A., Notarangelo, F. M., Wu, H. Q., Bruno, J. P., Schwarcz, R. Astrocytes as Pharmacological Targets in the Treatment of Schizophrenia: Focus on Kynurenic Acid. Modeling the Psychophathological Dimensions of Schizophrenia - From Molecules to Behavior. Pletnikov, M. V., Waddington, J. L. , Elsevier, Academic Press. London, San Diego, Waltham, Oxford. 423-443 (2016).
- Hilmas, C., et al. The brain metabolite kynurenic acid inhibits alpha7 nicotinic receptor activity and increases non-alpha7 nicotinic receptor expression: physiopathological implications. Journal of Neuroscience. 21 (19), 7463-7473 (2001).
- Perkins, M. N., Stone, T. W. An iontophoretic investigation of the actions of convulsant kynurenines and their interaction with the endogenous excitant quinolinic acid. Brain Research. 247 (1), 184-187 (1982).
- DiNatale, B. C., et al. Kynurenic acid is a potent endogenous aryl hydrocarbon receptor ligand that synergistically induces interleukin-6 in the presence of inflammatory signaling. Toxicological Sciences. 115 (1), 89-97 (2010).
- Wang, J., et al. Kynurenic acid as a ligand for orphan G protein-coupled receptor GPR35. The Journal of Biological Chemistry. 281 (31), 22021-22028 (2006).
- Alexander, K. S., Wu, H. Q., Schwarcz, R., Bruno, J. P. Acute elevations of brain kynurenic acid impair cognitive flexibility: normalization by the alpha7 positive modulator galantamine. Psychopharmacology (Berlin). 220 (3), 627-637 (2012).
- Chess, A. C., Landers, A. M., Bucci, D. J. L-kynurenine treatment alters contextual fear conditioning and context discrimination but not cue-specific fear conditioning. Behavioural Brain Research. 201 (2), 325-331 (2009).
- Chess, A. C., Simoni, M. K., Alling, T. E., Bucci, D. J. Elevations of endogenous kynurenic acid produce spatial working memory deficits. Schizophrenia Bulletin. 33 (3), 797-804 (2007).
- Pocivavsek, A., et al. Fluctuations in endogenous kynurenic acid control hippocampal glutamate and memory. Neuropsychopharmacology. 36 (11), 2357-2367 (2011).
- Pocivavsek, A., Baratta, A. M., Mong, J. A., Viechweg, S. S. Acute Kynurenine Challenge Disrupts Sleep-Wake Architecture and Impairs Contextual Memory in Adult Rats. Sleep. 40 (11), (2017).
- Halassa, M. M., et al. Astrocytic modulation of sleep homeostasis and cognitive consequences of sleep loss. Neuron. 61 (2), 213-219 (2009).
- Erhardt, S., et al. Kynurenic acid levels are elevated in the cerebrospinal fluid of patients with schizophrenia. Neuroscience Letters. 313 (1-2), 96-98 (2001).
- Linderholm, K. R., et al. Increased levels of kynurenine and kynurenic acid in the CSF of patients with schizophrenia. Schizophrenia Bulletin. 38 (3), 426-432 (2012).
- Sathyasaikumar, K. V., et al. Impaired kynurenine pathway metabolism in the prefrontal cortex of individuals with schizophrenia. Schizophrenia Bulletin. 37 (6), 1147-1156 (2011).
- Schwarcz, R., et al. Increased cortical kynurenate content in schizophrenia. Biological Psychiatry. 50 (7), 521-530 (2001).
- Pocivavsek, A., Rowland, L. M. Basic Neuroscience Illuminates Causal Relationship Between Sleep and Memory: Translating to Schizophrenia. Schizophrenia Bulletin. 44 (1), 7-14 (2018).
- Shibata, K. Fluorimetric micro-determination of kynurenic acid, an endogenous blocker of neurotoxicity, by high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography. 430 (2), 376-380 (1988).
- Buzsaki, G. Memory consolidation during sleep: a neurophysiological perspective. Journal of Sleep Research. 7, 17-23 (1998).
- Graves, L. A., Heller, E. A., Pack, A. I., Abel, T. Sleep deprivation selectively impairs memory consolidation for contextual fear conditioning. Learning & Memory. 10 (3), 168-176 (2003).
- Yamashita, M., Yamamoto, T. Tryptophan circuit in fatigue: From blood to brain and cognition. Brain Research. 1675, 116-126 (2017).
