Summary

Forma de nanopartículas de plata para paliar el síndrome de Atresia biliar en ratones

Published: October 13, 2018
doi:

Summary

Este artículo describe detalladamente un método basado en nanopartículas de plata para paliar el síndrome de atresia biliar en un modelo experimental de atresia biliar en ratones. Una sólida comprensión del proceso de preparación de reactivos y la técnica de inyección neonatal ratón ayudará a familiarizar a los investigadores con el método utilizado en estudios con ratones neonatales modelo.

Abstract

Atresia biliar (BA) es un tipo grave de colangitis con alta mortalidad en los niños de que la etiología es todavía no comprendida. Las infecciones virales pueden ser una posible causa. El típico modelo animal utilizado para el estudio de BA se establece por inocular un ratón neonatal con un rotavirus de rhesus. Nanopartículas de plata se ha demostrado para ejercer efectos antibacterianos y antivirales; en este estudio se evaluó su función en el modelo de ratón de BA. Actualmente, en experimentos con animales BA, los métodos utilizados para mejorar los síntomas de los ratones de BA son tratamientos sintomáticos generalmente dada a través de alimentos o a otros medicamentos. El objetivo de este estudio es para demostrar un nuevo método para paliar el síndrome de BA en ratones por la inyección intraperitoneal de nanopartículas de plata y para proporcionar métodos detallados para la preparación de la formulación de gel de nanopartículas de plata. Este método es simple y ampliamente aplicable y se puede utilizar para investigar el mecanismo de BA, así como en tratamientos clínicos. Basado en el modelo de ratón de BA, cuando los ratones presentan ictericia, el gel de nanopartículas de plata preparada se inyecta por vía intraperitoneal a la superficie del hígado más bajo. Se observa el estado de supervivencia, y se examinan los indicadores bioquímicos y la histopatología hepática. Este método permite una comprensión más intuitiva de ambos el establecimiento del modelo de BA y nuevos tratamientos de BA.

Introduction

BA es una forma de colestasis caracterizada por ictericia persistente y tiene alta mortalidad en ausencia de trasplante hepático. Las infecciones virales están estrechamente asociadas con la patogénesis de BA. El citomegalovirus, reovirus y rotavirus se han sugerido como patógenos en BA1,2,3. Durante el período neonatal, la respuesta del sistema inmune inmaduro a una infección viral produce dysregulation inmune contra extra – e intrahepáticos biliares, conduce a la apoptosis de la célula epitelial biliar, infiltración de células inflamatorias en el portal área, obstrucción del conducto biliar intrahepático y extrahepático y por último, fibrosis hepática4,5,6.

El modelo animal utilizado para estudios de licenciatura implica la inoculación del ratón neonatal con el rotavirus de rhesus (RRV). El ratón normalmente desarrolla ictericia después de 5-6 días, mostrando un bajo peso corporal y heces acólicas. El papel de la respuesta inmune en el proceso de la enfermedad es fundamental, especialmente para las células naturales del asesinas (NK); el agotamiento de estas células con el anticuerpo anti-NKG2D reduce considerablemente el daño provocado por el BA7. Además, otras células, incluyendo CD4+ T células de CD8,+ T las células, las células dendríticas y células T reguladoras, han demostrado que desempeñan un papel en la enfermedad8,9,10,11. Todos los datos sugieren el carácter imprescindible del sistema inmune en el curso de BA.

Nanopartículas de plata (AgNPs) se han demostrado para tener efectos beneficiosos contra algunas enfermedades infecciosas, incluyendo infecciones bacterianas12 y las infecciones virales13,14,15. Sin embargo, que no sean de uso dermatológico, pocos estudios han utilizado AgNPs en un tratamiento clínico, sobre todo debido a su potencial toxicidad. En experimentos con animales, los investigadores generalmente han estudiado la eficacia de AgNPs administrado via oral16 o métodos intravenosos17. Sin embargo, otros investigadores no han estudiado la eficacia de AgNPs administrado mediante una inyección intraperitoneal (i.p.) en ratones neonatales experimentos, que es un método simple y rápido hacia un efecto más directo sobre el hígado y vías biliares mientras que la reducción de la toxicidad a otros sistemas, como el sistema inmunológico. AgNPs se han demostrado para afectar NK célula actividad18; por lo tanto, hemos probado los efectos terapéuticos de AgNPs administrado vía inyección i.p. en el modelo de ratón de BA.

Protocol

Todos los protocolos experimentales de animales han sido aprobados por el cuidado de Animal institucional y Comité uso del Sun Yat-sensor del laboratorio Animal Centro Universitario (#IACUC-DB-16-0602). 1. establecer el modelo de ratón de Atresia biliar Mantener embarazadas ratones BALB/c en un ambiente libre de patógenos específico en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h a 25 ° C, con acceso a autoclave chow ad libitum. Para preparar la cepa RRV MMU 18006, ampli…

Representative Results

Basado en el modelo de ratón BA establecido, los ratones neonatales infectados se administraron una inyección i.p. de la mezcla preparada de AgNP colágeno 2 x después de que la ictericia. Supervivencia del ratón fue revisada para diario, y se realizaron pruebas de función hepática, patología del hígado y citometría de flujo. En comparación con los ratones de control sin tratar BA, los ratones tratados con AgNP demostraron ictericia reducida y mantienen su peso corporal normal (…

Discussion

AgNPs exhiben potentes propiedades antibacterianas de amplio espectro y una permeabilidad fuerte22; Además, se utilizan para producir una gama de productos médicos antibacteriano23. Sin embargo, AgNPs puede tomar mucho tiempo para borrar una vez que se acumulan en órganos, y esta persistencia puede conducir a efectos tóxicos24,25. Un estudio examinó la toxicidad aguda y genotoxicidad de AgNPs después de una in…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

AgNPs aquí fueron un regalo de C. M. Che en el Departamento de química, Universidad de Hong Kong. Este trabajo fue financiado por la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (Nº 81600399), ciencia y tecnología proyecto de Guangzhou (No.201707010014).

Materials

BALB/c mouse Guangdong Medical Experimental Animal Center SYXK2017-0174 Animal experiment
Rhesus rotavirus (RRV) ATCC ATCC VR-1739 Establish biliary atresia mouse model
MA104 cells ATCC ATCC CRL-2378.1 For laboratory use only
DMEM Thermo Fisher 10569010 Mammalian Cell Culture
Fetal Bovine Serum Thermo Fisher 10099141 Mammalian Cell Culture
collagen Type I CORNING 354236 For research use only
PBS buffer OXOID BR0014G For washing
NaOH Sigma 1310-73-2 Adjust the PH value
AgNP Antibacterial
Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.
Insulin syringe with integrated needle BD 9161635S For medical use
15-mL Centrifuge Tube Corning 430791 For laboratory use only
1.5-mL Microcentrifuge Tube GEB CT0200-B-N For laboratory use only
Microscope Nikon ECLIPSE-Ci For laboratory use
Dissecting/Intravital microscope Nikon SMZ 1000 For laboratory use
anti-Mouse NKp46 FITC eBioscience 11-3351 For research use only
anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 eBioscience 15-0041 For research use only
Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 DAKO 20001673 For research use only
anti-NKG2D RD MAB1547 For research use only
BD FACSCanto Flow Cytometer BD Biosciences FACS Canto Plus For laboratory use only

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Cite This Article
Fu, M., Lin, Z., Lin, H., Tong, Y., Wang, H., Chen, H., Chen, Y., Zhang, R. A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice. J. Vis. Exp. (140), e58158, doi:10.3791/58158 (2018).

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