चूहों में पित्त अविवरता सिंड्रोम उन्नति के लिए एक चांदी Nanoparticle विधि
Summary
इस लेख में विस्तार से एक प्रयोगात्मक पित्त अविवरता माउस मॉडल में पित्त अविवरता सिंड्रोम उंनति के लिए चांदी नैनोकणों पर आधारित विधि का वर्णन । एजेंट तैयारी की प्रक्रिया की एक ठोस समझ और नवजात माउस इंजेक्शन तकनीक में मदद मिलेगी नवजात माउस मॉडल अध्ययन में इस्तेमाल किया विधि के साथ शोधकर्ताओं परिचित ।
Abstract
पित्त अविवरता (BA) पित्तवाहिनीशोथ के बच्चों में उच्च मृत्यु दर के साथ एक गंभीर प्रकार है, जो एटियलजि अभी भी पूरी तरह से समझ नहीं है । वायरल संक्रमण एक संभावित कारण हो सकता है । ठेठ पशु मॉडल बीए की पढ़ाई के लिए इस्तेमाल किया inoculating द्वारा एक रीसस रोटावायरस के साथ एक नवजात चूहे की स्थापना की है । चांदी नैनोकणों जीवाणुरोधी और एंटीवायरल प्रभाव डालती दिखाया गया है; इस अध्ययन में बीए माउस मॉडल में उनके समारोह का मूल्यांकन किया जाता है । वर्तमान में, बीए पशु प्रयोगों में, बीए चूहों के लक्षणों में सुधार करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों आम तौर पर रोगसूचक भोजन या अन्य दवाओं के माध्यम से दिया उपचार कर रहे हैं. इस अध्ययन का उद्देश्य सिल्वर नैनोकणों के intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा चूहों में बीए सिंड्रोम की उन्नति के लिए एक नई विधि का प्रदर्शन करना और सिल्वर nanoparticle जेल तैयार करने की तैयारी के लिए विस्तृत तरीके प्रदान करना है । इस विधि सरल और व्यापक रूप से लागू है और बीए के तंत्र अनुसंधान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, साथ ही नैदानिक उपचार में. बीए माउस मॉडल के आधार पर, जब चूहों पीलिया प्रदर्शन, तैयार सिल्वर nanoparticle जेल निचले जिगर की सतह के लिए intraperitoneally इंजेक्शन है । अस्तित्व की स्थिति को मनाया जाता है, और जैव रासायनिक संकेतकों और यकृत histopathology की जांच कर रहे हैं । इस विधि को बीए मॉडल और उपंयास बा उपचार की स्थापना दोनों की एक अधिक सहज समझ की अनुमति देता है ।
Introduction
बीए लगातार पीलिया की विशेषता cholestasis का एक रूप है और यकृत प्रत्यारोपण के अभाव में उच्च मृत्यु दर है । वायरल संक्रमण बीए के रोगजनन के साथ निकटता से जुड़े हुए हैं । cytomegalovirus, reovirus, और रोटावायरस सभी को बीए1,2,3में रोगजनकों के रूप में सुझाए गए हैं । नवजात अवधि के दौरान, अपरिपक्व प्रतिरक्षा प्रणाली की प्रतिक्रिया प्रतिरक्षा dysregulation में एक वायरल संक्रमण के परिणाम के लिए अतिरिक्त और intrahepatic पित्त नलिकाओं, पित्त उपकला कोशिका apoptosis के लिए अग्रणी, पोर्टल में भड़काऊ सेल घुसपैठ क्षेत्र, intrahepatic और extrahepatic पित्त नली रुकावट, और अंत में, जिगर फाइब्रोसिस4,5,6।
बीए अध्ययन के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया जानवर मॉडल रीसस रोटावायरस (RRV) के साथ एक नवजात चूहे की टीका शामिल है । माउस आमतौर पर 5-6 दिनों के बाद पीलिया विकसित, एक कम शरीर के वजन और acholic मल दिखा । रोग की प्रक्रिया में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की भूमिका महत्वपूर्ण है, विशेष रूप से प्राकृतिक हत्यारा (NK) कोशिकाओं के लिए; विरोधी NKG2D एंटीबॉडी के साथ इन कोशिकाओं की कमी बहुत बीए प्रेरित नुकसान7कम कर देता है । इसके अलावा, CD4+ टी कोशिकाओं, सीडी 8+ टी कोशिकाओं, वृक्ष कोशिकाओं, और विनियामक टी कोशिकाओं सहित अन्य कोशिकाओं, सभी रोग में भूमिका निभाने के लिए दिखाया गया है8,9,10,11. सभी डेटा बीए के पाठ्यक्रम में प्रतिरक्षा प्रणाली की अपरिहार्य प्रकृति का सुझाव देते हैं ।
चांदी नैनोकणों (AgNPs) के जीवाणु संक्रमण12 और वायरल संक्रमण13,14,15सहित कुछ संक्रामक रोगों के खिलाफ लाभकारी प्रभाव है करने के लिए प्रदर्शन किया गया है । हालांकि, dermatological उपयोग के अलावा, कुछ अध्ययनों AgNPs एक नैदानिक उपचार में इस्तेमाल किया है, क्योंकि उनके संभावित विषाक्तता के ज्यादातर । पशु प्रयोगों में, शोधकर्ताओं ने आम तौर पर मौखिक16 या नसों17तरीकों के माध्यम से प्रशासित AgNPs की प्रभावकारिता का अध्ययन किया है । हालांकि, कोई अंय शोधकर्ताओं ने नवजात माउस प्रयोगों में एक intraperitoneal (आईएफसआई) इंजेक्शन के माध्यम से प्रशासित AgNPs की प्रभावकारिता का अध्ययन किया है, जो एक सरल और तेजी से जिगर और पित्त नलिकाओं पर एक और अधिक सीधा प्रभाव के लिए अग्रणी विधि है, जबकि इस तरह के प्रतिरक्षा प्रणाली के रूप में अन्य प्रणालियों के लिए विषाक्तता को कम करने. AgNPs NK सेल गतिविधि को प्रभावित करने के लिए दिखाया गया है18; इसलिए, हम AgNPs के उपचारात्मक प्रभाव का परीक्षण किया बीए माउस मॉडल में आईएफसआई इंजेक्शन के माध्यम से प्रशासित ।
Protocol
Representative Results
Discussion
AgNPs शक्तिशाली व्यापक स्पेक्ट्रम जीवाणुरोधी गुण और एक मजबूत पारगम्यता22प्रदर्शन; इसके अतिरिक्त, वे जीवाणुरोधी चिकित्सा उत्पादों की एक श्रृंखला का उत्पादन करने के लिए उपयोग किया जाता है2…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यहां AgNPs का इस्तेमाल हांगकांग विश्वविद्यालय के रसायन विज्ञान विभाग में सी. एम. आई. से उपहार में किया गया । इस काम के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन द्वारा वित्त पोषित किया गया चीन (no. ८१६००३९९) और गुआंगज़ौ के विज्ञान और प्रौद्योगिकी परियोजना (no. 201707010014) ।
Materials
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
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| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15-mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5-mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
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