Summary

マウスにおける胆道閉鎖症症候群を改善するための銀ナノ粒子法

Published: October 13, 2018
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Summary

この資料では、銀ナノ粒子実験的胆道閉鎖症マウスモデルにおける胆道閉鎖症症候群を改善するための手法について詳しく説明します。試薬の準備プロセスおよび新生仔マウス注入の技術をしっかりと理解は、新生児マウス モデル研究で用いられた方法と研究者を理解に役立ちます。

Abstract

胆道閉鎖症 (BA) は、病因はまだ完全に理解するの子供の高い死亡率と胆管炎の重症型です。ウイルス感染症は、原因の 1 つかもしれません。BA の勉強に使用する典型的な動物モデルを確立するには、アカゲザルのロタウイルスを新生児マウスに接種します。抗菌・抗ウイルス効果を発揮する銀ナノ粒子が示されています。BA マウス モデルでの機能は、この研究で評価されます。現在、BA 動物実験で BA マウスの症状を改善する方法について、一般的に症状の治療を経由で食物や他の薬物を与え。本研究の目的は、銀ナノ粒子の腹腔内投与によるマウスの BA 症候群を改善するための新しい方法を示すため、銀ナノ粒子ゲル製剤を準備するための詳細な方法を提供します。この方法は簡単で、広く適用できると ba, だけでなく、臨床治療のメカニズムの研究に使用することができます。BA マウス モデルに基づいて、マウスが黄疸を示す場合、準備された銀ナノ粒子ゲルは低い肝臓の表面に腹腔内に注入されます。生存状態を観察し、生化学的指標と肝の病理組織を検討しました。このメソッドは、BA モデルと新しい BA 治療法成立のより直感的に理解できます。

Introduction

BA は胆汁うっ滞、永続的な黄疸が特徴の形態であり、高い死亡率は、肝移植の不在。ウイルス感染が BA の病態と密接に関連します。サイトメガロ ウイルスやレオウイルス、ロタウイルスは BA1,2,3の病原体としてすべて提案されています。新生児期には、ウイルス感染に未熟な免疫システムの反応の結果余分な – と肝内胆管、胆管上皮細胞のアポトーシス、ポータルで炎症性細胞浸潤につながるに対して免疫不全領域、肝内および肝外胆管閉塞、そして最後に、肝線維症4,5,6

BA 研究の一般的に使用される動物モデルには、アカゲザルのロタウイルス (RRV) 新生仔マウスの接種が含まれます。マウスは通常、低体重と灰白色便を示す後 5-6 日、黄疸を開発しています。病気の過程における免疫応答の役割は重要、特にナチュラル キラー (NK) 細胞;アンチ NKG2D 抗体とこれらの細胞の枯渇は、BA ダメージ7を大きく軽減されます。さらに、他のセル、CD4 を含む+ T 細胞、CD8+ T 細胞、樹状細胞、T 細胞、すべて示されている疾患8,9,10,11の役割を果たします。すべてのデータは、BA の過程で免疫システムの不可欠な性質をお勧めします。

銀ナノ粒子 (AgNPs) は、12細菌感染症とウイルス感染症13,14,15を含むいくつかの感染症に対して有益な効果があると実証されています。ただし、皮膚の使用率以外いくつかの研究使用している AgNPs 臨床治療の潜在的な毒性が主な原因。動物実験で研究者は一般に口腔を介してAgNPs 投与16または静脈内投与方法17の有効性を調査しました。しかし、ない他の研究者は AgNPs 投与による新生仔マウスにおける腹腔注入実験、簡易迅速法は、肝臓の中の胆管のより直接的な影響につながる効果を研究しています。免疫システムなど、他システムへの毒性を減らします。NK 細胞活性18; に影響を与える AgNPs が示されています。したがって、我々 は BA マウス モデルで i. p. 注入を介してAgNPs 投与の治療効果をテストしました。

Protocol

すべての動物実験的プロトコルは、機関の動物の世話、太陽 Yat Sen 大学実験動物センター (#IACUC-DB-16-0602) の利用委員会によって承認されています。 1 胆道閉鎖症のマウスモデルの確立 オートクレーブ チョウ広告自由にアクセスできる、25 ° C で 12 h ダーク/ライト サイクル下特定病原体フリーの環境で妊娠中の BALB/c マウスを維持します。 RRV 株 MMU 1…

Representative Results

確立された BA マウス モデルに基づいて、感染した新生児マウス投与準備 AgNP コラーゲン混合物 2 の i. p. 注入後黄疸を示す x。マウスの生存率は毎日、チェック、肝機能検査、肝臓の病理とフローサイトメトリーを行った。無処理 BA マウスと比較して、AgNP 投与マウスは減らされた黄疸を示し、通常の体重 (図 3) を維持します。ビリルビン代謝?…

Discussion

AgNPs 展示強力な広域スペクトル抗菌特性と強力な透磁率22;さらに、抗菌医薬品23の範囲を生成する使用されます。しかし、AgNPs では、臓器内に蓄積し、毒性24,25につながる可能性がありますこの永続性をクリアに長い時間がかかります。以前研究ラット実験で単回静脈内投与後の急性毒性および遺伝毒性 AgNPs の検…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

ここで使用される AgNPs は、香港大学化学科の c. m. チェからの贈り物でした。この作品は、中国の国家自然科学基金 (第 81600399) と科学技術広州プロジェクト (No.201707010014) によって賄われていた。

Materials

BALB/c mouse Guangdong Medical Experimental Animal Center SYXK2017-0174 Animal experiment
Rhesus rotavirus (RRV) ATCC ATCC VR-1739 Establish biliary atresia mouse model
MA104 cells ATCC ATCC CRL-2378.1 For laboratory use only
DMEM Thermo Fisher 10569010 Mammalian Cell Culture
Fetal Bovine Serum Thermo Fisher 10099141 Mammalian Cell Culture
collagen Type I CORNING 354236 For research use only
PBS buffer OXOID BR0014G For washing
NaOH Sigma 1310-73-2 Adjust the PH value
AgNP Antibacterial
Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong.
Insulin syringe with integrated needle BD 9161635S For medical use
15-mL Centrifuge Tube Corning 430791 For laboratory use only
1.5-mL Microcentrifuge Tube GEB CT0200-B-N For laboratory use only
Microscope Nikon ECLIPSE-Ci For laboratory use
Dissecting/Intravital microscope Nikon SMZ 1000 For laboratory use
anti-Mouse NKp46 FITC eBioscience 11-3351 For research use only
anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 eBioscience 15-0041 For research use only
Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 DAKO 20001673 For research use only
anti-NKG2D RD MAB1547 For research use only
BD FACSCanto Flow Cytometer BD Biosciences FACS Canto Plus For laboratory use only

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Fu, M., Lin, Z., Lin, H., Tong, Y., Wang, H., Chen, H., Chen, Y., Zhang, R. A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice. J. Vis. Exp. (140), e58158, doi:10.3791/58158 (2018).

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