Summary
כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לשפר את חלוקתה פרפין. שיטה זו משלבת חיתוך צף באמצעות תא תרמוסטטי פשוטות כדי למנוע את תהליך ההעברה הנדרש על-ידי השיטה המקובלת. כתוצאה מכך, את היעילות ואת מספר קטעים שלמים פרפין היו השתפרה מאוד.
Abstract
חלוקתה של הרקמה פרפין-מוטבע הוא בשימוש נרחב כיום מגוון של פתולוגיה. עם זאת, מייגע. כדי לשפר את שיטה זו, מספר חברות מסחריות פיתחו מערכות העברת מקטע מורכבים באמצעות מים נוזלים. כדי לפשט את הטכנולוגיה הזאת, יצרנו שיטה פשוטה באמצעות ציוד ביתי המשלב הביתור ועל צף בתוך תא תרמוסטטי פשוטה; לכן, הסעיפים להזין באופן אוטומטי את המים הרותחים על פני המים. ההיפוקמפוס מוח העכבר למבוגרים, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר מתחלקים, עיניים למבוגרים דג זברה נחתכו באמצעות חלוקתה הפרפין קונבנציונליים והן בשיטת הציג להשוואה. ניתוח סטטיסטי מראה שיפור השיטה שלנו הזמן שנחסך המיוצר חלקים באיכות גבוהה יותר. בנוסף, פרפין חלוקתה של הדגימה כל תוך זמן קצר קל עבור מפעילי ג'וניור.
Introduction
מחקר מורפולוגי חשוב במחקר הביולוגי. למרות הטכנולוגיה החדשה אפשרה לחוקרים לבחון את המטרות שלהם ישירות מן כל רקמות או אורגניזמים1,2,3, חיתוך הדגימה למקטעים דק, ואחריו מכתים, נשאר הראשית מורפולוגיה של רקמות היחיד של שיטה ולא לקחת כסף אבל גם חלבון מיקוד ישירות בתוך הרקמה. מיקרוסקופ אור עושה שימוש בשלושה סוגי המקטעים: פרפין, מוקפאים, ולא semithin. למרות cryosectioning נפוץ להגנה על רקמות antigenicity, הכנת הדגימה היא פשוטה, המורפולוגיה רקמות יתרת הוא עני, מצוייה דק אופטים4,5. פרפין חלוקתה היא השיטה השכיחה בתערוכה מורפולוגיה השתמרה היטב. דגימות הן מיובשת לגמרי, המוטבעות שעווה, ניתן לאחסן את אבני פרפין ללא הגבלת זמן. בנוסף, פרפין חלוקתה מייצרת חלקים דקים לשפר את הגישה בדיקה ביולוגית בניסויים נוספים ולהפחית תא כיסוי שכבת בכיוון Z.
עם זאת, חלוקתה הפרפין קונבנציונליים הוא מייגע, דורש מיומנות מפעיל. פרפין מקטעים לעבור קיבוע התייבשות, הטבעה, חותכים, צף. חשוב, העברת סרטים סעיף מהמחזיק סכין לאמבט מים הוא הכרחי, אבל קשה עבור מפעילי ג'וניור. בעיקר אוויר יבש, הסרטים סעיף חשל עקב חשמל סטטי ולכן קשה נפרשים על פני מים חמים. כדי לשפר את סעיף איכות, הרטבה השטח חשוף רקמות בין מיקרוטום להב מעברים, קירור הבלוקים השעווה הטבעית אותם במי קרח, או העלאת הלחות עם מכשיר לחות ליד האזמל הקטן מומלץ6,7 . שיטות חדשות לשיפור פרפין חלוקתה כוללים היברידית הטבעה פרפין, cryosectioning8ו מחלקה מסחרית העברת מערכת סיוע9. למרות השיטות לשפר באופן חלקי פרפין חלוקתה מהירות ואיכות, הם גורמים חלוקתה הרבה יותר מסורבלת, מערכות העברת מקטע מסחריים יקרים.
ב פרוטוקול זה, נדגים כיצד ליצור פשוט, זול וגמיש ציוד צעד אחר צעד, אשר ניתן לחבר בעל להב מיקרוטום רוטרי. ציוד זה כולל ערוץ סעיף באמבט מים, תנור עם מתג זיהוי טמפרטורה. לאחר חיתוך, עשרות סעיפים לזרום לתוך הערוץ מדור והזן את המים הרותחים ישירות, ובכך התגלגלות באופן אוטומטי. זה משפר את היעילות של פרפין חלוקתה, הופך את הטכנולוגיה הזו נוחה יותר. שימוש זו שיטה, הבוגרים יותר בעכבר מקטעים בהיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות מקטעים, עובריים 15.5 מיושן (E15.5) העכבר המוח, ומקטעים עין דג זברה בוגרת מקטעים היו קוצרים בפחות זמן, נשארה יותר מורפולוגית. שיטה זו יכולה לשמש גם עבור דגימות רקמה אחרים הדורשים פרפין מואצת חלוקתה תוך הימנעות איבוד ההבחנה סעיף.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה של אוניברסיטת נאנצ'אנג.
1. להרכיב את הציוד ולחבר את האזמל הקטן
- עיצוב הפרמטר לפי הדרישות (Supplementary איור 1).
- להגיש את הפרמטר במפעל מקומי לייצור לוחות אקריליק.
- להרכיב את כל החלקים ברצף: שימוש בכלורופורם לשילוב 7 לוחות אקריליק מסחריים לתוך טנק עם סעיף ערוץ ומים אמבטיה (איור 1).
התראה: כלורופורם מייצר חומרים רעילים כאשר היא עונה אור וחמצן. להרכיב את המנגנון בשכונה fume. - התקנת הרכיב חשמליים דרך החור בלוח אקריליק #1 (איור 2 א, ראש חץ).
- כדי להתקין את בקר טמפרטורה, ליצור חור קטן על הלוח אקריליק #2 באמצעות מקדחה חשמלית, ולהתקין גלאי טמפרטורה (איור 2 א, חץ). להתקין תרמוסטט דיגיטלית על הטנק (איור 2 א).
הערה: גלאי טמפרטורה צריך להיות בתוך 1 ס מ מתחת לפני המים. - כדי לספק גישה כוח, להתאים את המתח מתחת 24 V לפני הפעלת הציוד.
- הסר את המגש פסולת סעיף האזמל הקטן.
- קישור התעלה מקטעים עם בעל להב מיקרוטום עם איטום סיליקון ניטראלי (איור 2B).
הערה: לא ימרחו כלשהו איטום סיליקון ניטראלי מעל החלק העליון של הלהב כך הלהב הישן מוחלף בקלות. - יבש לילה כדי לאפשר את הכלורופורם ואת הזמן איטום סיליקון ניטראלי לגבש.
- התקן את הלהב בעל להב. יוצקים מים לאמבט המים (איור 2C). פני המים צריך רק לגעת העליון של הלהב (ראש חץבאיור 2D, ).
2. פרפין חלוקתה
הערה: פסולת לצבור לעיתים קרובות על הקצה העליון או התחתון של הרחוב שעווה, פני המים. יש לנקות את הלכלוך הזה באופן קבוע.
-
לבצע הפרפין קונבנציונליים חלוקתה10.
- תהדק את הדגימה פרפין-מוטבע על מיקרוטום סיבוביים ולמקם את הלהב בעל להב.
- להפוך את handwheel, סעיף הדגימה.
- העברת הכלים פרפין למחלקה לאמבט מים חמים 38.5 מעלות צלזיוס.
- לאסוף שהסעיפים אל המיקרוסקופ שקופית של פני המים לאחר התגלגלות.
- יבש את השקופיות בתנור ב 42 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
-
פרפין משופרת חלוקתה (איור 3)
- הפעל את הציוד.
- לפתוח את התנור עם מתג זיהוי טמפרטורה ולהגדיר את הטמפרטורה יישוב בין C º 38.0 40.0 מעלות לשעה מראש לחמם את המים.
- לשנות לבלוק פראפין שרכשה פרפין להטביע; אז במקום לבלוק פראפין על המלחציים קלטת של מיקרוטום ונעל אותה.
הערה: גבולות לכוחו של הרחוב פרפין צריך להיות שונה בצורה אופקית כדי למנוע רצועת סעיף מ ויוצרים קשת ולהיות מסוגלים לזרום דרך ערוץ קטעים צרים. - במהירות הגישה המדגם על ידי חיתוך להקשיה.
- התאם בעובי סעיף מתאים (10 מיקרומטר מוח העכבר למבוגרים, למבוגרים העכבר הכליות של העובר מוח העכבר, 4 מיקרומטר לעיניים דג זברה). להפוך את handwheel ואת הסעיפים יזין באופן אוטומטי את המקטעים ערוץ ואמבט.
- בסעיף הדגימה במשיחה חיתוך איטית ואחידה (איור 3 א).
הערה: Thethickness של המקטע הראשון תשונה לאחר handwheel הופסק למשך מספר דקות. יש להחליף את הלהבים חד פעמי כאשר הסעיפים יש שריטות רצופים. - מדריך הסעיפים לחדר אמבטיה לצוף בקו (איור 3B, ג 3).
הערה: אם שבאזור head לאנאפוליס הקיר קאמרית, השתמש מדריך מברשת לשמור אותו צף. - דבקים סעיפים על גבי שקופיות מיקרוסקופ. לאחר הסעיפים לחלוטין נפרשים באמבט מים, מספר מקטעים נפרדים עם פינצטה. אז להרים מהאמבטיה מים על גבי שקופיות מיקרוסקופ (דמות תלת-ממד).
הערה: סעיפים יש לאסוף מן הצד האחורי של האמבט במים, כמו אלה בערוץ חלקים, החלק הפנימי. של האמבטיה מים לא עדיין יהיה מלא פרש. - יבש את השקופיות על-ידי הצבתם בתנור 42 º C למשך הלילה. השקופיות ואז ניתן לאחסן בטמפרטורת החדר ללא הגבלת זמן.
- השתמש Hematoxylin-אאוזין (HE) צביעת לצורך הערכה של שיטה משופרת8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
השיטה משופרת גדל מספר קטעים שלמים פרפין. בדקנו שיטה חדשה על רקמות בהיפוקמפוס העכבר למבוגרים, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר מתחלקים עיני דג זברה. מים נוסף למיכל, טמפרטורת המים נשמר בין 38.0 ° C עד 40.0 מעלות צלזיוס. לאחר באופן סדרתי הכנת את דגימות הרקמות, היו למחלקה, בהשוואה חלוקתה קונבנציונלי. השיטה החדשה נמנע מקטע הפסד והגדילה את הפרופורציה של מקטעים שלמים העכבר למבוגרים ההיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר E15.5, ובעיניים דג זברה למבוגרים (איור 4A4 C, 4E, 4 G). לסיכום, השיטה שלנו לשפר את חלוקתה על ידי מניעת אובדן סעיף קצירת מקטעים שלמים יותר לכל דגימה.
השיטה משופרת ירד הזמן המושקע לכל הדגימה. ב השוואת את משך הזמן בין השיטה המקובלת שלנו שיטה משופרת, ביצענו כל-סדרת חלוקתה (מהסעיף הראשון בסעיף האחרון של איבר) על העכבר למבוגרים ההיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר E15.5, מבוגר דג זברה עיניים. התוצאות מראים כי השיטה משופרת מואצת פרפין חלוקתה מהירות כל הדגימות שנבדקו (איור 4B4 D, 4F, 4 שעות). באופן כללי, השיטה שלנו מותר עבור מהר יותר באיכות גבוהה פרפין חלוקתה.
סדרת קטעים של הרשתית אופטיים דג זברה נצפתה על ידי צביעת H ו- E. עבור סדרת חלוקתה של המקטע תקליטורים אופטיים של הרשתית דג זברה, הסעיפים שנקטפו השיטה משופר היו יותר טובים יש שלמות יותר מאשר אלה של הפרפין קונבנציונליים חלוקתה שיטה (איור 5A, 5B). היה הבדל משמעותי בין שתי השיטות לגבי האיכות של מקטעים שנקטפו ביותר (איור 5C, 5 D). לעיתים, האיכות של קטעים מן השיטה המקובלת היו נמוכות יחסית (איור 5E, 5F).
איור 1: התהליך להרכבת לוחות אקריליק מסחריים 7 לתוך טנק. (א) הכולל תצוגה של לוחות אקריליק 7. (B-G) הרכבה stepwise של הטנק מלוח # 1 ללוח #7. (H) טנק הראשי לאחר ההרכבה. (I) גודל מיכל כללי; קרום מגן על פני מיכל הוסרה עבור התקנה נוספת. L = 400 מ מ, L' = 220 מ מ, H = 122 מ מ, רוחב = 200 מ מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: ציוד שהורכב כראוי מוכן לשימוש. ציוד (A) ללא פגע לאחר שמקשרים את האזמל הקטן רוטרי. חץ אינדיקציה, גלאי טמפרטורה מותקן דרך החור קטן מאת מקדחה חשמלית. ראש חץ, החימום (רכיב חשמליים) מותקן דרך החור בלוח #1. (B) אזור מקווקו מוגבר ב- A, תכונה של הקשר בין בעל להב מיקרוטום בערוץ מקטעים. ראש חץ, להב בעל סעיפים ערוץ מחוברים באמצעות איטום סיליקון ניטראלי. (ג) בדיוק כמו ב', עם המים יצק והתקין להב. (ד) צפה מהצד של האזור מקווקו בראש חץ ג, פני המים הוא קרוב לקצה להב. VT: שנאי מתח; WB: תנורים; DT: תרמוסטט דיגיטלית; ב': להב; BH: בעל להב; SC: סעיפים ערוץ. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3: פרפין משופרת חלוקתה תהליך. הדמויות הממוקם בפינה השמאלית התחתונה הם האזורים מקווקו מוגבר ב- A-D בהתאמה. חץ אינדיקציות, החלק הראשון. (A, A') המקטע מזין את המקטעים מיד וערוץ ישירות אחרי חיתוך. (ב', ב') הכלים מקטעים חוצה את הגבול בין האמבטיה ערוץ ומים מקטעים. (C, C') הסעיפים לצוף אל הצד האחורי של האמבט במים, פרש לגמרי. (D, D') הסעיפים לאסוף על ידי שקופיות מיקרוסקופ כאשר הם מגיעים. הצד האחורי של האמבטיה מים והם פרש לגמרי. SC: סעיפים ערוץ; WB, המים הרותחים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4: השיטה אופטים משופרת שיפור קצב תפוקה ויעילות באופן משמעותי עבור מקטעים שלמים-סדרת. שיעור תשואה שווה את הפרופורציה של מקטעים שלמים בכל המקטעים לחתוך. נתונים כמוצג את זאת אומרת ± SEM, שנרכשה על ידי מפעיל אותו. (A, C, E, G) השיטה משופרת מנעה אובדן סעיף של ההיפוקמפוס העכבר למבוגרים (± 91.04 1.429% N = 3, לעומת 97.63 ± 0.4864% N = 3, p = 0.0120), למבוגרים העכבר הכליות (± 92.30 0.5689% N = 3, לעומת 95.99 ± 0.7055% N = 3, p = 0.0153), מוח העכבר E15.5 (90.67 ± 1.549%, N = 3 לעומת 97.01 ± 0.2816%, N = 3, p = 0.0158), ועיניים דג זברה למבוגרים (± 91.27 0.9734% N = 4 vs 96.32 ± 0.7217% N = 4, p = 0.0059). (B, D, F, H) הפעם שיטה משופרת הציל לעומת השיטה המקובלת על ההיפוקמפוס העכבר למבוגרים (126.0 ± 3.606 דקות לעומת 79.67 ± 1.856 מין, N = 3, p = 0.0003), למבוגרים העכבר הכליות (66.67 ± 1.764 min לעומת 41.33 ± 2.186 מין, N = 3, p = 0.0008), E15.5 העכבר br לימור (99.67 ± 3.480 min לעומת 52.33 ± 4.333 מין, N = 3, p = 0.0010), ועיניים דג זברה למבוגרים (48.00 ± 2.160 min לעומת 30.75 ± 1.797 מין, N = 4, p = 0.0009). * P < 0.05, * * P < 0.01, * * * P < 0.005. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5: H ו- E מכתים הסעיפים כל-סדרה של המקטע תקליטורים אופטיים של דג זברה העיניים שנרכשה מן השיטות המקובלת ומשופר פרפין חלוקתה על ידי מפעיל אותו מושווים. (א) הפרפין קונבנציונליים חלוקתה (סעיפים 21). (B) משופר שעוות פרפין אופטים (סעיפים 24). (ג) אזור מקווקו של A6. (ד) שטח מקווקו של B7. (E) מקווקו באזורבית A17. (F) אזור מקווקו B19. כוכביות, הסעיפים בעלי איכות ירודה יחסית. ראשי חץ, דיסקים אופטיים; חיצים, חמור דמעה של רקמות ברשתית. סרגל קנה מידה = 200 מיקרומטר (A ו- B); סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר (C, D, E, F). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
משלים איור 1: הפרמטרים ממד של לוחות אקריליק מסחריים 7. המספר מייצג את אורך השוליים המנהלים המתאימים. יחידות: מ מ. אנא לחץ כאן כדי להוריד את הקובץ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
כדי לשפר מורפולוגיה סעיף פרפין לפתור את הבעיה של זמן מבוזבז במהלך הפרפין קונבנציונליים חלוקתה, יצרנו של פרפין משופרת חלוקתה שיטה המשלבת חיתוך התגלגלות. שיטה משופרת זו מסתמכת על ציוד פשוטה שכוללת ערוץ סעיף, אמבט מים, תנור עם מתג זיהוי טמפרטורה. הכלים סעיף נכנס לאמבט מים דרך ערוץ סעיף, מתגלה באופן אוטומטי בעת גזירה. לכן, בשיטה זו משפרת את הפרפין חלוקתה איכות ויעילות, אשר אומתה באמצעות פרפין חלוקתה של העכבר למבוגרים ההיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר E15.5, והעיניים דג זברה למבוגרים.
כדי להימנע סעיף קרלינג במהלך הפרפין קונבנציונליים חלוקתה, התאמות רבות נעשו, כגון הרטבה השטח רקמות, קירור הרחוב שעווה, הגברת הלחות, שילוב cryosectioning6,7, 8; עם זאת, התאמות אלה הופכים פרפין חלוקתה יותר מייגע. מערכת העברת מקטע המסחרי המסתמך על מים נוזלים היה מוצלח יותר. במערכת זו, הסעיף יוצר קשר עם פני המים מיד לאחר חיתוך, ומעבירה זרם המים מבוססת על מנוע חשמלי הסעיפים ממחזיק להב אמבט מים חמים נמוך9. בשל מנגנון שלה, חשמל סטטי לא לעכב את חלוקתה, והתוצאה היא איכות משופרת סעיף. בנוסף, כמו מערכת זו מונע באופן ידני העברת קטעים מבעל להב המים הרותחים, בקלות לגרום נזק חלקים שבירים, היא גם מסייעת להשגת סעיפים דקים איכותיים.
בשיטה שלנו משופרת, ציוד פשוט מצייר על החוויה של מערכת העברת מקטע מסחרי עם כמה יתרונות. ראשית, הציוד הוא זול יותר, אשר יכול פופולרי בשיטה זו במעבדות בפיתוח אזורים, ייתכן משלימים מערכת העברת מקטע מסחרי. שנית, המים הציוד הוא סטטי, לעולם אינה מפריעה הסעיפים, כך שניתן לרכוש חלקים דק יותר. אנחנו ברציפות למחלקה עיני דג זברה עובי 2 מיקרומטר, באמצעות השיטה משופרת, הסעיפים שנרכשו היו באיכות גבוהה יותר. שלישית, מיכל גדול של אמבט מים משמש את הציוד, מה שמקנה לפחות 40 מקטעים כדי לגולל ולרחף בו זמנית, ומאפשר בשתי החברות לשתף פעולה. אדם אחד יכול לחתוך את הדגימה רקמות ללא הרף ודגים השני יכול ישירות את הסעיפים. זה מפחית את הזמן מחכים מקטעים להתגלות. חיתוך רצופים עם שבץ חיתוך אחיד משפר גם את איכות סעיף.
המבנה והמראה של הציוד שלנו פשוט דורש שיפור. לדוגמה, ניתן לשלב את הרכיבים, כגון הכוח, תנור של בקר טמפרטורה, כדי להפוך את הציוד הזה יותר נפרד ונייד. בנוסף, מיקרוטומים רוטרי מסחריים בעלי גדלים שונים. כדי להתחבר מיקרוטומים אחרים, הזווית והגובה של ציוד זה צריך להיות מותאם. פרפין חלוקתה בשילוב עם טכניקות מולקולריות אחרות הוא בשימוש נרחב לנוירוביולוגיה, ומורפולוגיה רקמות אחרות מחקר שדות11,12,13. באופן פוטנציאלי, בשיטה זו ניתן לשפר את הבדיקה הקלינית יעילות14,15 ו אחרים דגימות ביולוגיות מעבר סוגי רקמות שלושה היה כאן.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים יש פטנט על התקן זה והצהר אין אינטרסים מתחרים.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (מענק מס 31400936, 31460260), את מדעי הטבע קרן של ג'יאנגשי פרובינציה של סין (20171BAB215020). אנו מודים גם את תוכנית משותפת בין אוניברסיטת נאנצ'אנג המלכה מרי אוניברסיטת לונדון לתמיכה עבודה זו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Incubator | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 64-17-5 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| Heated Paraffin Embedding Module | Leica | ||
| Commercial acrylic board | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 67-66-3 | |
| Tubular electric heating element(12 V 200 W) | |||
| Temperature controller(12 V 120 W) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| Rotary microtome | Leica | ||
| Neutral silicone sealant | Link the water channel with the microtome knife holder | ||
| Voltage transformer | Dearll | S-250-12 | |
| Disposable blade | Accu-Edge | 4689 | |
| Hematoxylin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Eosin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| Microscope | Carl Zeiss | ||
| Hydrochloric acid | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| Water bath for paraffin sections | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - Cold Plate | Leica | ||
| paraffin repellent spray | Thermo Scientific | 9990420 |
References
- Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
- Fujita, S. Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography. Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).
- Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. R. Organ printing: Computer-aided jet-based 3D tissue engineering. Trends in Biotechnology. 21 (4), 157-161 (2003).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Cryosectioning tissues. Cold Spring Harbor Protocols. 3 (8), (2008).
- Viebahn, C., Luttenberg, H. P. A modified anti-roll plate as a remedy for the ill-effects of electrical charge during cryosectioning. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 37 (7), 1157-1160 (1989).
- Onozato, M. L., Hammond, S., Merren, M., Yagi, Y. Evaluation of a completely automated tissue-sectioning machine for paraffin blocks. Journal of Clinical Pathology. 66 (2), 151-154 (2013).
- Sabaliauskas, N. A., et al. High-throughput zebrafish histology. Methods. 39 (3), 246-254 (2006).
- Chen, T. K., et al. Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples. Journal of Visualized Experiments. (117), e54754 (2016).
- Kucherenko, M. M., et al. Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles. Journal of Visualized Experiments. (46), e2438 (2010).
- Cornell, W. C., et al. Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis. Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).
- Whiteland, J. L., et al. Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).
- Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification. Journal of Visualized Experiments. (125), e55796 (2017).
- Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus. Journal of Visualized Experiments. (82), e50933 (2013).
- Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples. American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).
- Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. Staining Protocols for Human Pancreatic Islets. Journal of Visualized Experiments. (63), e4068 (2012).
