Summary
Burada, parafin kesit geliştirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem kesme ve geleneksel yöntemle gerekli aktarım işlemi önlemek için basit bir termostatik odası kullanarak yüzen birleştirir. Sonuç olarak, verimliliği ve bozulmamış parafin bölüm sayısı büyük ölçüde düzeldi.
Abstract
Parafin gömülü dokusunun kesit Histoloji ve patoloji yaygın olarak kullanılır. Ancak, yorucu olabilir. Bu yöntem geliştirmek için çeşitli ticari şirketler karmaşık bölümüne transfer sistemleri sıvı su kullanarak tasarladılar. Bu teknoloji basitleştirmek için kesme ve basit bir termostatik odası içinde yüzen bir araya getiren ev yapımı donanımları kullanarak basit bir yöntem oluşturdu; Bu nedenle, bölümleri otomatik olarak su yüzeyine su banyosu girin. Hippocampus yetişkin fare beyni, Yetişkin fare böbrekler, embriyonik fare beyni ve yetişkin zebra balığı gözleri kesin karşılaştırma için geleneksel parafin kesit ve sunulan yöntem kullanarak. İstatistiksel analiz bizim geliştirilmiş Yöntem kurtarmak zaman ve yüksek kalite bölümleri üretilen gösterir. Buna ek olarak, kısa bir süre içinde bütün bir örnek parafin kesit junior operatörleri için kolaydır.
Introduction
Morfolojik biyolojik araştırmada önemli bir çalışmadır. Yeni teknoloji hedeflerine doğrudan doğruya--dan tüm doku veya organizmalar1,2,3ince bölüme, numune kesme, boyama tarafından takip gözlemlemek araştırmacılar sağladı rağmen birincil kalır yöntemi fornot tek doku morfoloji aynı zamanda protein dokuda doğrudan hedefleme. Işık mikroskobu üç bölüm türlerini kullanır: Parafin, dondurulmuş ve semithin. Cryosectioning doku antigenicity korumak için ortak ve numune hazırlama basittir, tutulan doku morfoloji yoksul ve ince parça4,5için uygun olsa da. Parafin kesit iyi korunmuş morfoloji sergilenmesi için en sık kullanılan yöntemdir. Numuneler tamamen susuz ve balmumu içinde gömülü olarak, parafin blok süresiz olarak saklanır. Buna ek olarak, parafin kesit biyolojik sonda erişimi daha fazla deneylerde geliştirmek ve hücre katmanı bindirme Z yönünde azaltmak ince kesitler üretir.
Ancak, geleneksel parafin kesit sıkıcı ve Operatör beceri gerektirir. Parafin kesitler fiksasyon, dehidratasyon, gömme, kesme ve yüzen tabi. Önemlisi, Bölüm şeritler bıçaklıklı su banyosu aktarma gerekli ama zor junior operatörleri için. Özellikle kuru hava, Bölüm şeritler statik elektrik nedeniyle kandıracak ve sıcak su yüzeyine açılmak zordur. Bölüm geliştirmek için kalite maruz doku yüzeyi arasında microtome bıçak geçer, onları buzlu suda çeker veya nem microtome yakınındaki bir nemlendirici ile yükselterek mum blok soğutma nemlendirme,6,7 tavsiye edilir . Parafin kesit geliştirmek için yeni yöntemler hibrid parafin katıştırma, cryosectioning8ve ticari bölüm transfer sistemi Yardım9içerir. Her ne kadar bu yöntemler kısmen parafin geliştirmek hız ve kalite, kesit kesit çok daha ağır yapmak ve ticari bölüm aktarma sistemleri pahalıdır.
Bu protokol için bir döner microtome blade sahibine bağlı basit, ucuz ve esnek ekipman adım adım oluşturmak nasıl gösterir. Bu cihaz bir bölüm kanal, bir su banyosu ve bir ısıtıcı bir sıcaklık algılama anahtarı ile oluşur. Kesme sonra bölümleri düzinelerce bölüm kanal akışı ve böylece otomatik olarak elinde tutmasına doğrudan, su banyosu girin. Bu parafin kesit verimliliğini artırır ve bu teknoloji daha uygun hale getirir. Bu yöntem, daha yetişkin fare hipokampal bölümleri, Yetişkin fare böbrek bölümler, embriyonik 15.5 bayat (E15.5) fare beyin bölümleri ve bölümler daha kısa sürede hasat ve morfolojik daha sağlam kaldı yetişkin zebra balığı göz kullanarak. Bu yöntem, Bölüm ayrım kaybı kaçınırken hızlandırılmış parafin kesit gerektiren diğer doku örnekleri için de kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan bakım ve kullanım Komitesi Nanchang Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. montaj malzemeleri ve Microtome bağlanmak
- Parametre (ek Şekil 1) gereksinimleri başına tasarım.
- Akrilik panoları üretimi için yerel bir fabrika için parametre gönderin.
- Tüm parçaları sırayla birleştirin: kloroform 7 ticari akrilik panoları bir tanka bir bölüm kanal ve su ile banyo (Şekil 1) birleştirmek için kullanın.
Dikkat: ışık ve oksijen karşılaştığında kloroform toksik maddeler üretir. Cihaz bir duman başlıklı bir araya getirin. - Borulu elektrikli ısıtma elemanı delikten akrilik Kurulu #1 (Şekil 2A, ok ucu) yükleyin.
- Sıcaklık denetleyicisi yüklemek için küçük bir delik bir elektrikli matkap kullanarak #2 akrilik tahtada oluşturmak ve sıcaklık dedektörü (Şekil 2A, ok) yükleyin. Bir dijital termostat tank (Şekil 2A) yükleyin.
Not: Sıcaklık dedektörü su yüzeyinin altında 1 cm olmalıdır. - Güç erişim sağlamak için gerilim altında 24 V ekipman açmadan önce ayarlayın.
- Microtome bölümü atık tepsisini çıkarın.
- Bölümleri kanal tarafsız silikon dolgu macunu (Şekil 2B) ile microtome bıçak sahibi ile bağlantı.
Not: eski bıçak kolayca değiştirilir, böylece herhangi bir nötr silikon dolgu macunu bıçağın üstündeki yukarıda smear değil. - Kloroform ve tarafsız silikon dolgu macunu zaman kuvvetlendirmek için izin vermek için bir gecede kuru.
- Bıçak bıçak sahibine yükleyin. Su su banyosu (Şekil 2C) dökün. Su yüzeyinin sadece bıçak (Şekil 2B, ok başı) üstündeki dokunmatik gerekir.
2. parafin kesit
Not: Enkaz kez üst veya alt kenarlarını mum blok ve su yüzeyi üzerinde birikir. Bu enkaz düzenli olarak temizlenmiş olmalıdır.
-
Geleneksel parafin10kesit gerçekleştirin.
- Parafin gömülü numune üzerinde döner microtome kelepçe ve bıçak bıçak tutucu içinde yerleştirin.
- Çark açmak ve örnek bölüm.
- Parafin kesitli şerit 38,5 ° C sıcak su banyosu için transfer.
- Bölümler mikroskop üzerine su yüzeyinden unfolding sonra slayt alın.
- Slayt 42 ° c fırında gecede kuru.
-
Geliştirilmiş parafin (Şekil 3) kesit
- Ekipman açın.
- Kalorifer sıcaklık algılama anahtarı ile açın ve hedef sıcaklık 40.0 ° c önceden sıcak su 1 h için 38,0 ° C arasında ayarlayın.
- Parafin katıştırma tarafından alınan parafin blok değiştirmek; sonra parafin blok microtome'nın kaset kelepçe üzerinde yerleştirin ve kilitle.
Not: Parafin blok üst ve AST sınırları bir ark şekillendirme ve dar bölümleri kanalı ile akış yapamaz hale bölüm şerit önlemek için yatay olarak değiştirilmesi gerekir. - Hızlı bir şekilde örnek kesme kalın bölümler tarafından yaklaşım.
- Uygun bölümü kalınlığı (10 µm yetişkin fare beyni, Yetişkin fare böbrekler ve embriyo fare beyni, zebra balığı gözler için 4 µm) için ayarlayın. Çark açmak ve bölümleri kanal ve banyo bölümleri otomatik olarak girer.
- Numune yavaş ve düzgün kesme Darbedeki (Şekil 3A) bölüm.
Not: çark birkaç dakika durdu sonra değiştirilmiş ilk bölümünün Thethickness. Bölümleri üst üste çizik olduğunda tek kullanımlık bıçaklar değiştirilmelidir. - Bölümleri bir satırda (Şekil 3B, 3 C) yüzmek için banyo odası deliklere.
Not: baş kısmındaki odası duvara yapışır, yüzen tutmak için bir fırça kılavuzu kullanın. - Bölümler mikroskop slayta uygun. Bölümlerden sonra tamamen su banyosunda ayrı birkaç bölüm cımbız ile açılmak. O zaman Seç onları--dan mikroskop slayta (şekil 3D) su banyosu.
Not: Bu bölüm kanal ve su banyosu ön henüz tam olarak gelişeceğini olmayacak gibi bölümler su banyosu, arka çekilmesi gereken. - Slaytları gecede 42 ° C fırında yerleştirerek kuru. Slaytları sonra oda sıcaklığında süresiz olarak depolanabilir.
- Hematoksilen-eozin (HE) geliştirilmiş Yöntem8değerlendirilmesi uğruna boyama kullanın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Geliştirilmiş Yöntem sağlam parafin bölümleri sayısı arttı. Yetişkin fare hipokampal doku, Yetişkin fare böbrekler, embriyonik fare beyni ve zebra balığı gözleri bu yeni yöntem test ettik. Su tankı için eklendi ve su sıcaklığı 38,0 ° C ile 40.0 ° c arasında devam edildi Bir seri olarak doku örnekleri hazırladıktan sonra onlar kesitli ve geleneksel kesit için karşılaştırıldığında. Yeni Yöntem bölümü kaybı kaçınılması ve yetişkin fare hipokampus, Yetişkin fare böbrekler, E15.5 fare beyin ve yetişkin zebra balığı gözler (Şekil 4A4 C, 4E, 4 G) olduğu gibi bölümlerde oranı arttı. Sonuç olarak, bizim Yöntem kesit bölüm kaybını önleme ve numune başına daha fazla olduğu gibi bölümler hasat tarafından geliştirilmiş.
Geliştirilmiş yöntem örnek harcanan zaman azaldı. Geleneksel yöntem ve bizim geliştirilmiş Yöntem arasında geçen süre karşılaştırarak, biz bütün serisi (ilk bölümünden bir organ son bölümüne) kesit yetişkin fare hipokampus, Yetişkin fare böbrekler, E15.5 fare beyni ve yetişkin üzerinde gerçekleştirilen zebra balığı gözler. Sonuç geliştirilmiş Yöntem hız tüm test örneklerinde (4B rakam4 D, 4F, 4 H) kesit parafin hızlandırılmış öneririz. Genel olarak, bizim yöntem daha hızlı yüksek kalitede parafin kesit için izin.
Zebra balığı optik retina bölümlerini serisi gözlenen H ve E boyama. Zebra balığı retina optik disk parçası serisi kesit için geliştirilmiş yönteminden hasat bölümler daha iyi daha iyi bütünlüğü yöntemi (Şekil 5A, 5B) kesit geleneksel parafin gelen bu. En hasat bölümler (Şekil 5C, 5 D) kalitesi ile ilgili olarak bu iki yöntem arasında anlamlı bir fark vardı. Zaman zaman, bölümler geleneksel yönteminden hasat kalitesi nispeten düşük (Şekil 5E, 5F).
Şekil 1: 7 ticari akrilik panoları bir tanka montaj işlemi. (A)7 akrilik kurulların genel görünümü. (B-G) # 1 kartına tanktan kuruluna #7 kademeli Meclisi. (H) derleme sonra ana tank. (I) genel tank boyutu; tank yüzeyinde koruyucu membran daha fazla yükleme için kaldırıldı. L = 400 mm, L' 220 mm, H = 122 mm, W = 200 mm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: uygun monte cihazları kullanıma hazır. (A) olduğu gibi ekipman sonra döner microtome bağlı olmak. Ok göstergesi, sıcaklık dedektörü küçük delikten elektrikli matkap tarafından yüklenir. Ok başı, ısıtıcı (borulu elektrikli ısıtma elemanı) kurulu #1 delik aracılığıyla yüklenir. (B) bir, özellik microtome bıçak tutucu ve bölümleri kanal arasındaki bağlantının kesik güçlendirilmiş alanında. Ok başı, bıçak tutucu ve bölümleri kanal tarafsız silikon dolgu macunu ile bağlanır. (C) su ile B aynı döktü ve blade yüklü. (D) C. ok başı kesik alanında yan görünüm, su yüzeyi olduğunu yakın bıçak kenarı. VT: gerilim trafo; WB: su banyosu; DT: dijital termostat; B: bıçak; BH: bıçak tutucu; SC: bölümleri kanal. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: işlem kesit geliştirilmiş parafin. Sol alt köşede bulunan rakamlar sırasıyla A-D güçlendirilmiş kesikli alanlarında vardır. Ok endikasyonları, ilk bölümü. (, A') Bölüm bölümler kanal hemen ve doğrudan sonra kesme girer. (B, B') Bölümler şerit bölümleri kanal ve su banyosu sınırı geçerse. (C, C') Bu bölümleri su banyosu arka için yüzer ve tamamen gelişeceğini. (D, D') Ne zaman onlar su banyosu arka ulaşmak ve tam olarak gelişeceğini bölümleri mikroskop slayt tarafından are seçmek yukarıya. SC: bölümleri Kanal; WB, su banyosu. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4: verim ve verim oranı önemli ölçüde bütün dizi bölümleri için geliştirilmiş parça Yöntem geliştirilmiş. Verim oranı tüm kesme bölümleri olduğu gibi bölümlerde oranda egale etti. Veri gösterilen ortalama ± SEM ve aynı operatörü tarafından satın aldı. (A, C, E, G) Geliştirilmiş Yöntem engelledi yetişkin fare hipokampüs bölümünde kaybı (91.04 ± %1.429 N = 3, vs 97.63 ± %0.4864 N = 3, p 0.0120 =), Yetişkin fare böbrekler (92.30 ± %0.5689 N = 3, vs 95,99 ± %0.7055 N = 3, p 0.0153 =), E15.5 fare beyin (90.67 %1.549 ±, N = 3 vs %97.01 ± 0.2816, N = 3, p 0.0158 =) ve yetişkin zebra balığı gözler (91.27 ± %0.9734 N 4 vs 96.32 ± %0.7217 N = 4, p = 0.0059 =). (B, D, F, H) Geliştirilmiş Yöntem kaydedilen zaman karşılaştırıldığında yetişkin fare hipokampus için geleneksel yöntemi ile (126,0 ± 3.606 min vs 79.67 ± 1.856 min, N = 3, p = 0,0003), Yetişkin fare böbrekler (66.67 ± 1,764 min vs 41.33 ± 2,186 min, N = 3, p 0.0008 =), E15.5 fare br Ain (99.67 ± 3.480 min vs 52.33 ± 4.333 min, N = 3, p 0.0010 =) ve yetişkin zebra balığı gözler (48.00 ± 2,160 min vs 30,75 ± 1.797 min, N = 4, p 0.0009 =). * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0.005. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5: H ve E gözleri geleneksel yöntemlerle elde ve parafin kesit geliştirilmiş zebra balığı aynı operatör tarafından optik disk bölümünün bütün Serisi Bölüm boyama karşılaştırılır. (A)geleneksel parafin (21 Bölüm) kesit. (B) geliştirilmiş parça (24 bölümleri) alkol. (C) A6 kesikli alanı. (D) B7 kesikli alanı. (E) A17 kesikli alanı. (F) B19 virüsü ile ilişkisi kesik alanı. Yıldız, nispeten düşük kaliteli bölümlerle. Ok uçları, optik disk; Okları, Retina dokularının şiddetli gözyaşı. Ölçek çubuğu = 200 µm (A ve B); Ölçek çubuğu 50 µm (C, D, E, F) =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Ek Şekil 1: Boyut parametreleri 7 ticari akrilik kurulların. İlgili yönetim kurulu kenar uzunluğunu temsil eder. Birimleri: mm. bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Parafin bölüm morfoloji artırmak ve geleneksel parafin kesit sırasında harcanan zaman sorunu çözmek için biz bir geliştirilmiş parafin kesme ve unfolding birleştirir yöntemi kesit oluşturdu. Bu geliştirilmiş Yöntem bir bölüm kanal, bir su banyosu ve sıcaklık algılama anahtarı ile bir ısıtıcı oluşmaktadır basit ekipman kullanır. Bölüm şerit bölüm kanal üzerinden su banyosu girer ve otomatik olarak kesme sırasında yaşanıyor. Bu nedenle, bu yöntem kalite ve verimlilik, Yetişkin fare hipokampus, Yetişkin fare böbrekler, E15.5 fare beyni ve yetişkin zebra balığı gözleri parafin kesit tarafından doğrulandı kesit parafin geliştirir.
Kesit geleneksel parafin sırasında curling bölüm önlemek için birçok ayarlamalar, doku yüzey nemlendirme, balmumu bloğu soğutma, nem oranı artan ve cryosectioning6,7birleştirme gibi yapılmış olan, 8; Ancak, bu ayarlar parafin kesit daha sıkıcı yapın. Sıvı su üzerinde dayanır bir ticari bölümüne transfer sistemi daha başarılı olmuştur. Bu sistem bölümü su yüzeyinin hemen kesmek sonra bağlantı kurar ve elektrik motoru tahrik su akışı bölümleri bıçak sahibinden daha düşük sıcak su banyosu9' a aktarır. Onun mekanizma nedeniyle kesit geliştirilmiş bölüm kalitesinin statik elektrik inhibe etmez. Bu sistem bölümleri bıçak sahibinden su banyosu için el ile aktarma önler, Ayrıca, kolayca zarar hassas bölümler, bu aynı zamanda yüksek kaliteli ince kesitler elde yardımcı olur.
Bizim geliştirilmiş yöntem ile ticari bölümüne transfer sistemi bazı avantajları ile deneyimi üzerinde basit ekipman çizer. İlk olarak, hangi bölgeleri geliştirme laboratuvarları bu yöntemde halka sevdirmek ve ticari bölümüne transfer sistemi tamamlayıcı daha ucuz, cihazıdır. İkinci olarak, ekipman suda statiktir ve asla daha ince kesitler elde edinerek kesitler, rahatsız ediyor. Arka arkaya 2 µm kalınlık gelişmiş yöntemi kullanarak gözünde zebra balığı kesitli ve yüksek kalitede alınan bölümler vardı. Üçüncü olarak, daha büyük bir su banyosu tank açılmak ve aynı anda, iki işleç işbirliği yapmaya izin float için en az 40 bölümleri verir equipment, kullanılır. Bir kişi sürekli doku numune kesebilir ve diğer doğrudan bölümleri balık tutabiliriz. Bu bölümler için açılmak beklerken zamanı azaltır. Bir tek tip kesme darbesiyle ardışık kesme de bölüm kalitesini artırır.
Basit ekipmanlarımız görünümünü ve yapısını iyileştirme gerektirir. Örneğin, güç, bir ısıtıcı ve sıcaklık denetleyicisi gibi bileşenleri bu cihaz daha ayrılmaz ve taşınabilir yapmak için entegre edilebilir. Ayrıca, ticari döner microtomes farklı boyutları vardır. Diğer microtomes için bağlanmak için açı ve yüksekliği bu cihazın ayarlanmalıdır. Diğer moleküler teknikleri ile kombine parafin kesit Nörobiyoloji, doku Morfoloji ve diğer araştırma alanları11,12,13yaygın olarak kullanılır. Büyük olasılıkla, bu yöntem klinik muayene verimliliği14,15 ve diğer biyolojik örnekler burada kullanılan üç doku türlerinin ötesinde artırabilirsiniz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar bu aygıt üzerinde bir patente sahip ve hiçbir rakip ilgi bildirin.
Acknowledgments
Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin tarafından (Grant No 31400936, 31460260) destek verdi ve doğal Bilim Vakfı, Jiangxi eyaletinin Çin (20171BAB215020). Biz de Nanchang üniversite ve Queen Mary University of London arasındaki ortak program bu eser destek için teşekkür ederiz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Incubator | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 64-17-5 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| Heated Paraffin Embedding Module | Leica | ||
| Commercial acrylic board | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 67-66-3 | |
| Tubular electric heating element(12 V 200 W) | |||
| Temperature controller(12 V 120 W) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| Rotary microtome | Leica | ||
| Neutral silicone sealant | Link the water channel with the microtome knife holder | ||
| Voltage transformer | Dearll | S-250-12 | |
| Disposable blade | Accu-Edge | 4689 | |
| Hematoxylin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Eosin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| Microscope | Carl Zeiss | ||
| Hydrochloric acid | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| Water bath for paraffin sections | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - Cold Plate | Leica | ||
| paraffin repellent spray | Thermo Scientific | 9990420 |
References
- Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
- Fujita, S. Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography. Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).
- Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. R. Organ printing: Computer-aided jet-based 3D tissue engineering. Trends in Biotechnology. 21 (4), 157-161 (2003).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Cryosectioning tissues. Cold Spring Harbor Protocols. 3 (8), (2008).
- Viebahn, C., Luttenberg, H. P. A modified anti-roll plate as a remedy for the ill-effects of electrical charge during cryosectioning. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 37 (7), 1157-1160 (1989).
- Onozato, M. L., Hammond, S., Merren, M., Yagi, Y. Evaluation of a completely automated tissue-sectioning machine for paraffin blocks. Journal of Clinical Pathology. 66 (2), 151-154 (2013).
- Sabaliauskas, N. A., et al. High-throughput zebrafish histology. Methods. 39 (3), 246-254 (2006).
- Chen, T. K., et al. Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples. Journal of Visualized Experiments. (117), e54754 (2016).
- Kucherenko, M. M., et al. Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles. Journal of Visualized Experiments. (46), e2438 (2010).
- Cornell, W. C., et al. Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis. Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).
- Whiteland, J. L., et al. Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).
- Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification. Journal of Visualized Experiments. (125), e55796 (2017).
- Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus. Journal of Visualized Experiments. (82), e50933 (2013).
- Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples. American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).
- Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. Staining Protocols for Human Pancreatic Islets. Journal of Visualized Experiments. (63), e4068 (2012).
