Summary
Hier beschrijven we een protocol voor het produceren van oogsten naalden die kunnen worden gebruikt voor het verzamelen van full-dikte huidweefsel zonder donor site littekens. De naalden kunnen worden gecombineerd met een systeem voor het eenvoudig verzamelen om hoogvolume oogsten.
Abstract
Dit manuscript beschrijft het productieproces voor een laboratoriumapparatuur, gemaakt van off-the-shelf componenten, die kunnen worden gebruikt voor het verzamelen van microcolumns van full-dikte huidweefsel. De geringe omvang van de microcolumns kan donor sites snel genezen zonder donor site littekens, terwijl de oogsten volledig-dikte weefsel maakt de opneming van alle onderdelen van de cellulaire en extracellulaire van huidweefsel, met inbegrip van die verbonden met diepere dermale regio's en de adnexal huid structuren, die nog moeten met succes worden gereproduceerd met behulp van conventionele weefsel engineering technieken. De microcolumns kan worden toegepast direct in de huid wonden te vergroten genezing, of ze kunnen worden gebruikt als de bron van autologe cellen/weefsels voor andere weefsel engineering benaderingen. De oogsten naalden worden gemaakt door het wijzigen van de standaard injectienaalden, en ze kunnen worden alleen gebruikt voor het oogsten van kleine hoeveelheden weefsel of in combinatie met een systeem van de eenvoudige zuig gebaseerde collectie (ook gemaakt van algemeen beschikbare laboratorium benodigdheden) voor Hoogvolume oogsten om studies in grote diermodellen.
Introduction
Autologe huidtransplantatie is de steunpilaar van de reparatie van de wond, maar het is beperkt door de donor site schaarste en morbiditeit, leidt tot gezamenlijke inspanningen in de afgelopen decennia aan het ontwikkelen van nieuwe therapeutische opties ter vervanging van conventionele huidtransplantatie1,2 . Recent ontwikkelde we een alternatieve methode voor het oogsten van de huid om uit te rusten van de voordelen van full-dikte huidtransplantatie terwijl het minimaliseren van de donor site morbiditeit. Door het verzamelen van full-dikte huid in de vorm van kleine (~0.5 mm doorsnede) "microcolumns", donor sites zijn kunnen genezen van snel en zonder littekens onder normale omstandigheden (Zie de sectie discussie hieronder voor mogelijke uitzonderingen,)3. Microcolumns direct in de wond bedden te versnellen van de sluiting van de wond en het verminderen van contractie3kan worden toegepast, en herstellen van een breed scala van epidermale en dermale celtypes en functionele adnexal structuren4, waarvan vele ontbreken in conventionele split-dikte huidtransplantatie of huidige bioengineered huid substituten5. Het vermogen van microcolumns om uit te breiden genezing van hun sites van de donor te genezen zonder littekens zijn beide zelfstandig gevalideerd door andere onderzoek groepen6,7.
Eerder hebben we een laboratorium oogsten systeem zodat de collectie van microcolumns op schaal8; echter, dit systeem is samengesteld uit vele aangepaste onderdelen die niet algemeen beschikbaar zijn. Hier beschrijven we in detail het proces voor produceren oogsten naalden, evenals eenvoudige inzamelingssystemen, van meestal overal verkrijgbare componenten, die kunnen worden gebruikt gemaakt om de hoogvolume oogsten. Het apparaat beschreven in dit manuscript is geschikt voor in vitro en dierlijk werk, maar niet voor gebruik bij de mens. Een klinische apparaat met FDA goedkeuring voor het toepassen van deze techniek bij de mens is commercieel beschikbaar, maar niet hier in detail zal worden besproken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle werken met betrekking tot levende dieren en dierlijke weefselsteekproeven zijn goedgekeurd door het Massachusetts algemene ziekenhuis institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC).
1. produktie van oogsten naalden
- Installatie van de productiefase
- Beveiligen van een vrouwelijke luer lock connector op een post, en de post op een rotatie podium zo monteren dat de luer-lock in het midden van het werkgebied(Figuur 1 is).
- Plaats deze eerste fase van de rotatie verticaal en loodrecht mounten op een tweede, horizontale rotatie podium (Figuur 1B).
- Monteer de horizontale rotatie fase op een twee-as vertaling podium (Figuur 1B).
- Zet vast de combinatie op een stabiel oppervlak, zoals een optische breadboard.
- Afzonderlijk mount een roterende gereedschap naar het zelfde breadboard, met het gereedschap geplaatst in parallel met het breadboard en op ongeveer dezelfde hoogte als de luer lock connector het werkgebied rotatie/vertaling combinatie (Figuur 1C).
- Installeren van de licht-donkerscheiding tweewielers concentrisch op de rotary tool (een kleinere, lagere grit diamant cut-off wiel over een grotere, hogere grit stenen cut-off wiel) (Figuur 1D).
Opmerking: Over een 9 mm verschil tussen de diameters van de twee wielen is over het algemeen voldoende. - Positie een overhead licht bron met een verstelbare arm op de roterende gereedschap, met het licht gericht op de wielen snijden.
- Om visualisatie te verbeteren, plaatst u een ontleden Microscoop op de productie-installatie, zodat het oculair is gericht op de schijven snijden (Figuur 1C).
Opmerking: U kunt ook gebruikers kunnen Vergrootglas brillen dragen.
- Omvormen van de naald-tip
- Draag beschermende brillen en een chirurgisch masker te beletten fijne metalen deeltjes de ogen of luchtwegen.
- Kies injectienaalden van de juiste grootte, gebaseerd op experimentele vereisten meten.
- Markeren de beoogde lengte op elke oogst naald.
Opmerking: Voor het oogsten van varkens huid, 8 mm naalden zijn meestal voldoende; Hoewel de lengte kan variëren op basis van experimentele behoeften (bv., dikte van de huid doelweefsel is terechtgekomen, gauge breinaalden). In het algemeen, een 19-gauge naald werkt goed voor de huid van varkens. - Lager de naald loodrecht naar de rotary tool met de macht, met behulp van de rand van de schijf van de buitenste snijden met het stopzetten van de overtollige lengte van de naald, op het punt aangegeven in stap 1.2.3.
- De verkorte, botte naald verbinden met de vrouwelijke luer lock connector op de productiefase.
- De horizontale rotatie fase zo instellen dat de naald onder een 12° hoek parallel aan de schijven snijden op de rotary tool wordt (het veranderen van de hoek invloed op de kracht die nodig is voor het inbrengen van de naald hebben zal).
- Zet de overhead licht en haar positie aanpassen met inachtneming van de naald onder vergroting, totdat het licht uit de middellijn (in de lengte) van de naald wordt weerspiegeld.
- Macht op het roterende gereedschap, dan gebruik de vertaling fase om de nld richting de binnenste (ruit) snijden schijf(Figuur 2).
- Houden het bevorderen van de naald langzaam tegen de snijden schijf totdat de schijf snijden ongeveer de middellijn van de naald (als gevisualiseerde door het bovenlicht reflectie langs de middellijn tot).
- Langzaam het gesneden naald oppervlak van het innerlijke diamant wiel op de buitenste stenen wiel om de afwerking van het oppervlak van de gesneden naald met een fijnere Pools (Figuur 2B).
- Intrekken van de naald uit de buurt van de schijf snijden.
- Met behulp van de verticale rotatie-fase, de naald 180° draaien.
- Herhaal de stappen 1.2.9-1.2.10 om te wijzigen van de andere kant van de naald.
Opmerking: De naald moet nu twee uiteinden van het snijden van ongeveer gelijke lengte (figuur 2C en 2D). - Verwijder de naald uit de productiefase.
- Schoon de binnenkant vervelen met een metalen draad die iets kleiner is dan de inwendige diameter van de naald.
- Met behulp van een scherpe houten stok (bv., door het magnetisch uitlijnen uit het einde van de kleine houten stok op een katoen-tip applicator), Verwijder eventuele bramen die nog steeds aan de randen van de nieuwgevormde naald kunnen worden verbonden.
Opmerking: Oogsten naalden kan oppervlaktegesteldheid en gesteriliseerd met autoclaaf indien nodig.
2. de huid weefsel oogsten
- Gebruik de oogsten naalden voor het verzamelen van microcolumns van de huid van ex vivo weefsel of met levende dieren.
- Ex vivo huid weefsel dat is dun (met name van monsters waar het subcutane vet ontbreekt of weg was afgesneden), houd het doelweefsel boven de opening van een tube van 50 mL centrifuge en/of stapelen van twee stukken van weefsel boven op elkaar, om te voorkomen beschadiging van de n de uiteinden van de Eedle door hen te slaan tegen harde oppervlakken.
Opmerking: Voor in vivo oogsten van levende dieren, is het aanbevolen dat lokale lidocaïne en adrenaline worden beheerd door intradermale injectie voor analgesie en te verminderen bloeden. - Monteer de oogst apparatuur volgens de hoeveelheid microcolumns nodig, zoals hieronder beschreven.
- De optie van de laag-medium volume:
- Kleine tot middelgrote hoeveelheden microcolumns verkrijgen, vul dan een standaard spuit (10-20 mL spuiten meestal goed werken) met normale zout en sluit deze aan op een oogst naald.
- Volledig steek de oogsten naald in de donorhuid en intrekken van het.
- Druk op de zuiger van de spuit leegmaken zoutoplossing via de oogsten naald en verdrijven de microkolom die is ingediend in de boring van de naald.
- Om te versnellen het proces van de oogsten, herhaal stap 2.4.2 3 tot 5 keer alvorens het verdrijven van de microcolumns in stap 2.4.3.
Opmerking: Het is meestal handig om het verdrijven van de microcolumns in een standaard cel zeef om te verlichten van de daaropvolgende verzameling van microcolumns. - Als naalden verstopt raken, verhoogt de druk op de zuiger verdrijven het vast weefsel te verwijderen van de klomp. Als gewoon toenemende druk volstaat, droeg invoegen een metalen draad door de naald tip opening om duidelijk de klomp in de naald.
- Houd de microcolumns ondergedompeld in zout of middellange tot gebruik ter voorkoming van uitdroging.
Opmerking: Met een ervaren operator, de hierboven beschreven methode kan worden gebruikt om te oogsten van microcolumns met een snelheid van ongeveer 1 microkolom per seconde.
- Hoog volume optie:
- Maak een eenvoudig apparaat voor zuig-bijgewoonde die kan worden geconstrueerd om verzameling van grote hoeveelheden microcolumns.
Opmerking: Het apparaat bestaat uit een oogsten naald, 20 mL spuit met luer lock mondstuk, zuig adapter gewoonlijk gebruikt voor liposuctie (Figuur 3A), en steriele zuig busje. - Verwijder de zuiger uit de 20 mL spuit.
- De spuit hechten aan een zuig-adapter.
- Voltooi de vergadering door het aanbrengen van een oogst naald op de spuit (Figuur 3B).
- Gebruik een stuk van steriele zuig slang de zuig adapter verbinden met een steriele zuig busje. Zorg ervoor dat de oogst apparatuur is aangesloten op de ingang van een bus waarmee vloeistof naar stroom in de bus ongehinderd (waarvoor verbinding met een busje-poort die is gemarkeerd voor de uitstroom dan instroom).
- Sluit het apparaat aan op een negatieve druk bron.
Opmerking: De vereiste druk hangt naald diameter en lengte, zoals eerder beschreven8. Voor het apparaat beschreven in dit manuscript, is het zuigsysteem gevonden in typische operatiekamers in het algemeen voldoende. - Sluit een oogsten naald op de spuit.
- Oogst de microcolumns door het invoegen van de oogsten naald in de huid.
Opmerking: De microcolumns zal worden getrokken in de injectiespuit door afzuigen, vervolgens gespoeld in de zuig bus. - Duik met tussenpozen de oogsten naald in een container van steriele zoutoplossing tijdens de oogst procedure voor het spoelen van het systeem.
Opmerking: Deze zoute flush vervoer van de microkolom vergemakkelijkt en zorgt ervoor dat ze blijven gehydrateerd. U kunt ook kan een MFK luer-adapter worden aangesloten op de luer-lock van de spuit, en via een verbinding buizen, ook voor een hangende zoute infuus zak. - Altijd bij de hand een metaaldraad of kleinere meten naald, die iets kleiner is dan de binnendiameter van de oogsten naald. Als de naald verstopt raakt, kan het worden ontruimd door het invoegen van de metalen draad in de naald boring.
- Wanneer de gewenste hoeveelheid microcolumns hebben opgebouwd in de bus, koppel het apparaat los van de zuiging, dan giet de inhoud van de zuiging bus uit door een filter voor het verzamelen van de microcolumns.
- Maak een eenvoudig apparaat voor zuig-bijgewoonde die kan worden geconstrueerd om verzameling van grote hoeveelheden microcolumns.
- Toepassing na de oogst, een topische antibiotica zalf over de donor-sites.
Opmerking: Extra dressings zijn doorgaans niet vereist voor donor sites.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De oogsten naalden moeten zitten kundig voor verzamelen van microcolumns van full-dikte huidweefsel met ongeveer een 80-90% slagingspercentage en elke microkolom moet bevatten epidermis en dermis wat subcutaan vet (Figuur 4). Het slagingspercentage van het oogsten is laag, of is het moeilijk om het invoegen van een naald in het weefsel, is vervolgens een nieuwe naald waarschijnlijk nodig. Als het slagingspercentage voor het oogsten consequent laag, zelfs met nieuwe naalden is, dan zijn de naalden waarschijnlijk te kort.
Als gebruikt in vivo, moeten donor sites snel, zoals re epithelialization treedt meestal op binnen een paar dagen3genezen. Microcolumns kan worden toegepast direct wond bedden als aanvulling op wond genezing van3,4, of ze kunnen worden gecombineerd met verschillende matrix materialen tot een combinatie constructies. Microcolumns kan ook worden gehandhaafd in cultuur voor in vitro studies9.
Figuur 1 : Naald maken toestellen. (A) een mannelijke luer lock connector beveiligd via een post van de montage op een verticaal geplaatste rotatie podium, zodat de luer-lock in het midden van het werkgebied is. (B) de verticale rotatie-fase is loodrecht gemonteerd op een tweede, horizontale rotatie podium (zwarte pijl). De horizontale rotatie fase is bevestigd aan een twee-as vertaling stadium (witte pijl). (C) plaatsing van de rotary tool parallel aan het breadboard (witte pijl), en het ontleden Microscoop over het naald-maken-apparaat (rode pijl). (D) concentrische cut-off wielen gemonteerd op roterende hulpmiddel, met een diamant wiel aan de binnenkant (zwarte pijl) en stenen wiel op de buitenkant (witte pijl). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2 : Na het snijden de naald op de gewenste lengte, de rotary tool wordt gebruikt om nieuwe naald tips slijpen. (A) in de eerste plaats wordt het wiel van de licht-donkerscheiding diamant gebruikt om te "ruwe" snoeien om te vormen van de nieuwe cutting tips en oppervlakken. (B) na de nieuwe cutting tips worden gevormd met de diamond wheel, wordt de naald verplaatst naar het stenen wiel voor fijn polijsten. (C) Gereedgemeld oogsten naald vanaf de voorkant en (D) van de zijkant gezien. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3 : Vergadering voor het oogsten van de hoogvolume. (A) afzonderlijke onderdelen van het samenstel, met inbegrip van (links naar rechts) de zuig adapter, 20 mL spuit met luer lock mondstuk en oogsten naald. (B) komt te staan is de voltooide vergadering, klaar om te verbinden met onderdruk bron. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 4 : Representatief huid microcolumns geoogst met behulp van het apparaat beschreven in dit manuscript. Elke microkolom bevat de epidermis (1), volledige dermis (2), en sommige subcutaan vet (3). Vinkjes in de afbeelding vormen 1 mm. Dit cijfer is gewijzigd van Tam et al. 4 volgens de voorwaarden van de desbetreffende creative commons-licentie. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De hier beschreven methoden zijn bedoeld om de collectie van weefsel microcolumns in voldoende hoeveelheden voor in vivo grote dierproeven, met behulp van tools gemaakt van verkrijgbare laboratorium benodigdheden. Dit apparaat heeft eerder is gebruikt in het weefsel van de verwijderde menselijke huid4,9 , evenals levende varkens huid3oogsten. De specifieke parameters beschreven zijn die bleken te zijn meest geschikt voor gebruik in varkens. Verwacht wordt dat het dezelfde apparatuur kan worden gewijzigd en aangepast voor het verzamelen van weefsel van knaagdieren en andere kleine dieren, maar dit niet in ons laboratorium getest is.
Kritische stappen in dit protocol opnemen om ervoor te zorgen de oogsten naalden van voldoende lengte (inefficiënte oogsten is meestal te wijten aan de naalden worden te kort), houden de microcolumns ondergedompeld in vloeibare tijdens de oogst om te voorkomen dat uitdroging en spoelen van het systeem met zoutoplossing ten minste met tussenpozen (anders is er een hogere kans op verstopping van de naald boring microcolumns). De belangrijkste beperking van deze techniek is de snelheid; bijvoorbeeld, in onze demonstratie, kunnen het apparaat zuig-bijgewoonde over het algemeen oogsten 120 mg van weefsel per minuut, wat voldoende is voor een kleinere wond-meestal gebruikt in dierproeven. Het zou waarschijnlijk logistiek uitdagend om te gebruiken deze aanpak voor zeer grote wonden (bv., in grote branden letsel modellen). Naald gauge is een andere beperking - hoe kleiner de naald gauge, hoe gevoeliger het is knik, wat de belangrijkste storingsconditie van deze techniek (in tegenstelling, de techniek is relatief ongevoelig voor naald mat tijdens de procedure). Voor varkens huid gebruiken wij normaal 19-gauge naalden, die mechanisch robuust genoeg dat ze zelden gesp. Verder, elk dier experiment (meestal waarbij over 3000-5000 microcolumns) meestal vereist slechts 2 tot 3 naalden. 25-gauge is de kleinste breinaalden die hebben we met deze techniek gebruikt.
Het vermogen van kleine huid wonden weefselregeneratie stimuleren is de achterliggende gedachte achter klinische procedures zoals fractionele laser resurfacing12 en microneedling13. Deze behandelingen zijn bekend om de cosmetische uiterlijk van de huid van de photoaged te verbeteren, en recenter aangetoond dat induceren litteken verbouwen en verbeteren van de functie en cosmesis van de huid littekens14,15. De uitgebreide klinische ervaring met deze technieken biedt ook verdere validatie die huid kan genezen zonder littekens na deze microinjuries in de overgrote meerderheid van de gevallen, op enkele uitzonderingen na (fractionele laser resurfacing naar verluidt heeft een 3,8% incidentie van littekens, bijna altijd ten gevolge van infectie16, wijzen op het belang van post procedurele huidverzorging). Bovendien, kan mensen met een geschiedenis van keloïden of hypertrofische littekens gevoelig zijn voor littekens zelfs met deze kleinere letsels; Dus, behandelingen met betrekking tot de productie van microinjuries kunnen worden counterindicated.
Terwijl onze vorige onderzoeken hebben gericht op direct toepassen van microcolumns in huid wonden om genezing, de mogelijkheid om het verzamelen van aanzienlijke hoeveelheden weefsel zonder andere kunnen op lange termijn donor site morbiditeit (littekens, contractuur, enz.) bruikbaar zijn voor een breed scala van andere toepassingen. Huid microcolumns kan dienen als bron voor benaderingen met betrekking tot de uitbreiding van de cultuur of de dissociatie en de dispersie van autologe huid cellen10weefsel. Bovendien microcolumns bieden de extra voordelen van het minimaliseren van de donor site morbiditeit en met inbegrip van dermale celtypen, zoals die geassocieerd met adnexal structuren en de diverse stam/progenitor cel populaties die zich in de diepere delen van bevinden de dermis11 (die niet beschikbaar met conventionele methodes die gebruik maken van de split-dikte huid als de grondstof). Autologe microcolumns kan ook worden gebruikt in ex vivo tests om te studeren weefsel reactie op verschillende stimuli zoals drugs of cosmetische producten in die, in tegenstelling tot conventionele cel cultuur gebaseerde testen, de cellulaire en extracellulaire structuren in elk microkolom worden bijgehouden in hun respectieve natuurlijke organisatie indelingen. Meer in het algemeen, de microkolom oogsten benadering kan ook worden breed toepasbare aan het verstrekken van autologe cellen en weefsels voor diverse weefsel engineering/regeneratieve geneeskunde doeleinden (voor huid en andere organen), als het onderliggende principe van kleine donor wonden ondergaan compleet en restloos genezing dreigt te worden gegeneraliseerd naar andere weefseltypes (HLA).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs zijn mede-uitvinders op octrooien met betrekking tot de technologie die wordt beschreven in dit artikel, waarvan zij hebben ontvangen licenties en royalty's inkomsten via hun instelling, het Massachusetts General Hospital. J. Tam raadpleegt ook voor Medline Industries, Inc, die houdt van de commerciële licentie voor deze technologie.
Acknowledgments
Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door het leger, de Marine, de NIH, het luchtmacht, VA en de gezondheid zaken ter ondersteuning van de inspanning ONWRIKBAAR II, onder Award nr. W81XWH-13-2-0054. Het Amerikaanse leger medische onderzoek overname activiteit, 820 Chandler Street, Fort Detrick, MD 21702-5014 is de aanbestedende en administrerende overname kantoor. Adviezen, interpretaties, conclusies en aanbevelingen zijn die van de auteur en zijn niet noodzakelijkerwijs onderschreven door het ministerie van defensie.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Diamond wheel | Dremel | 545 | |
| Hypodermic needle (19G) | Fisher Scientific | 14-840-98 | Other needle sizes could be used, depending on experimental needs |
| Stone wheel | Dremel | 540 | |
| Syringe (20mL with luer lock) | Fisher Scientific | 22-124-967 | |
| Suction adapter | Tulip Medical | PA20BD | Optional, for high volume harvesting |
| Suction canister | Fisher Scientific | 19-898-212 | Optional, for high volume harvesting. Sterilize before use. |
| Suction tubing | Medline | DYND50216H | Optional, for high volume harvesting |
References
- Sun, B. K., Siprashvili, Z., Khavari, P. A. Advances in skin grafting and treatment of cutaneous wounds. Science. 346 (6212), 941-945 (2014).
- Singh, M., et al. Challenging the Conventional Therapy: Emerging Skin Graft Techniques for Wound Healing. Plastic and Reconstructive Surgery. 136 (4), 524-530 (2015).
- Tam, J., et al. Fractional Skin Harvesting: Autologous Skin Grafting without Donor-site Morbidity. Plastic and Reconstructive Surgery. Global Open. 1 (6), 47 (2013).
- Tam, J., et al. Reconstitution of full-thickness skin by microcolumn grafting. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (10), 2796-2805 (2017).
- Huang, C., et al. Regeneration of hair and other skin appendages: A microenvironment-centric view. Wound Repair and Regeneration. 24 (5), 759-766 (2016).
- Fernandes, J. R., et al.
- Rettinger, C. L., Fletcher, J. L., Carlsson, A. H., Chan, R. K. Accelerated epithelialization and improved wound healing metrics in porcine full-thickness wounds transplanted with full-thickness skin micrografts. Wound Repair and Regeneration. 25 (5), 816-827 (2017).
- Franco, W., et al. Fractional skin harvesting: device operational principles and deployment evaluation. Journal of Medical Devices. 8 (4), 041005 (2014).
- Rasmussen, C. A., et al. Chimeric autologous/allogeneic constructs for skin regeneration. Military Medicine. 179, 8 Suppl 71-78 (2014).
- Ter Horst, B., Chouhan, G., Moiemen, N. S., Grover, L. M. Advances in keratinocyte delivery in burn wound care. Advanced Drug Delivery Reviews. 123, 18-32 (2018).
- Wong, V. W., Levi, B., Rajadas, J., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Stem cell niches for skin regeneration. International Journal of Biomaterials. 2012, 926059 (2012).
- Manstein, D., Herron, G. S., Sink, R. K., Tanner, H., Anderson, R. R. Fractional photothermolysis: a new concept for cutaneous remodeling using microscopic patterns of thermal injury. Lasers in Surgery and Medicine. 34 (5), 426-438 (2004).
- Iriarte, C., Awosika, O., Rengifo-Pardo, M., Ehrlich, A.
- Anderson, R. R., et al. Laser treatment of traumatic scars with an emphasis on ablative fractional laser resurfacing: consensus report. Journal of the American Medical Association Dermatology. 150 (2), 187-193 (2014).
- Hogan, S., Velez, M. W., Ibrahim, O. Microneedling: a new approach for treating textural abnormalities and scars. Seminars in Cutaneous Medicine and Surgery. 36 (4), 155-163 (2017).
- Manuskiatti, W., Fitzpatrick, R. E., Goldman, M. P. Long-term effectiveness and side effects of carbon dioxide laser resurfacing for photoaged facial skin. Journal of the American Academy of Dermatology. 40 (3), 401-411 (1999).
