Summary
Detta protokoll presenterar en i vivo råtta modell av självhäftande kapsulit. Modellen innehåller en intern fixering av glenohumeral gemensamma med extra-artikulär suturen fixering för en längre tid, vilket resulterar i en minskad roterande utbud av rörelse (ROM) och ökad stelhet.
Abstract
Detta förslag syftar till att skapa en i vivo råtta modell av självhäftande kapsulit för forska potentiella behandlingsalternativ för detta villkor och andra etiologier av jämförbara artrofibros. Modellen innehåller extra-artikulär fixering av axeln i råttor via skulderbladsbrosket att överarmsbenets suturering, vilket resulterar i en sekundär kontraktur utan invaderande intraartikulär utrymmet vilket leder till minskad roterande ROM och ökad gemensamma stelhet.
Vi använde 10 Sprague-Dawley-råttor för denna studie. Baslinjen ROM mätningar togs innan glenohumeral immobilisering. Råttor utsattes för 8 veckors immobilisering innan fixering suturerna togs bort och förändringar i ROM och ledstelhet utvärderades. För att utvärdera om immobilisering resulterade i en betydande minskning i ROM, beräknades förändringar i kinematik. ROM var mätt vid varje tidpunkt under uppföljningsperioden och var jämfört med baslinjen inre och yttre ROM mätningarna. För att utvärdera stelhet, gemensamma kinetik beräknades genom att bestämma skillnaderna i vridmoment (text och tint ) behövs för att nå den inledande extern rotationen på 60 ° och inledande inåtrotation av 80 °.
Efter avlägsnande av den extra-artikulär suturen fixeringen vid uppföljande dag 0 hittade vi en 63% minskning av totala ROM jämfört med utgångsvärdet. Vi observerade kontinuerlig förbättring fram till vecka 5 av uppföljning, med de framsteg som saktar ner runt en 19% begränsning. På vecka 8 uppföljning, fanns det fortfarande en 18% begränsning av ROM. Dessutom uppföljande dag 0, Vi hittade vridmomentet ökade med 13,3 Nmm jämfört med baslinjen. Vecka 8, mättes det totala vridmomentet för att vara 1,4 ± 0,2 Nmm högre än initiala mätningar. Detta arbete införs en råtta modell av Axel självhäftande kapsulit med bestående nedsatt ROM och ökad stelhet.
Introduction
Självhäftande kapsulit i axeln kallas ofta frusen skuldra eller skuldra kontraktur. Det kännetecknas av begränsade glenohumeral rörelse och smärta, förmodligen till följd av avancerad fibros och ledkontrakturen1,2,3. Villkoret innebär fibroblast och myofibroblast cell rekrytering med en resulterande tät kollagen matris (typ I och III) i den gemensamma kapslarna2,3. Det finns många möjliga riskfaktorer för att utveckla en gemensam kontraktur, inklusive kön, diabetes mellitus, hypertyreos, traumatiska skador och långvarig immobilisering4,5,6.
Effektiva behandlingsalternativ saknas och inkluderar mestadels sjukgymnastik, med ingripande i form av kirurgisk release i extrema fall som inte har förbättrats med konservativ vård. Den bästa behandlingsmetoden förblir obestämd och har varit föremål för stort intresse i år i den medicinska område7,8. Utvecklingen av nya terapeutiska alternativ kommer att kräva en reproducerbar djurmodell för tillstånd som inte bygger på intraartikulär inducerad trauma. Den optimala självhäftande kapsulit modellen bör involvera de två viktigaste egenskaperna av sjukdomen: kontraktur av Axel kapseln och en långvarig minskning av rörelseomfång (ROM). Schollmeier et al. 9 beskrivs en av de första ledkontrakturen modellerna med en gjuten för att utveckla axel kontraktur i canines. De rapporterade också att förändringar i ROM och intraartikulär Tryck tillbaka till normala nivåer efter upphörande av immobilisering9. En viktig begränsning som nämns i studien är dock variationen i lem position mellan djur på grund av användningen av en cast-teknik. För att erhålla en mer reproducerbar modell, Kanno o.a. 10 presenteras senare en självhäftande kapsulit råtta modell använder styv intern fixering av axeln. Även om de uppnått en betydande minskning av ROM med sin modell, de dock inte ange huruvida dessa förändringar var tillfällig eller långvarig. Syftet med vår studie var att skapa en lämplig i vivo axel kontraktur råtta modell genom att undersöka effekten av långvarig extra-artikulär glenohumeral gemensamma immobilisering på ROM och ledstelhet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Studien var godkänd av institutionella djur vård och användning kommittén vid Beth Israel Deaconess Medical Center. Var försiktig att undvika onödig långvarig anestesi och för att undvika hypotermi. Djur var överlastat på varje ROM mätning session och övervakas för viktminskning.
1. studera ämnen
- Använd 10 Sprague-Dawley-råttor som är 13 veckor gammal vid tidpunkten för kirurgi och intervallet mellan 250-300 g kroppsvikt.
2. kirurgiska ingrepp
- Under anestesi och före kirurgiska immobilisering, mäta baslinjen vridmomentet som en funktion av rotationsvinkeln mellan 60° av extern rotation och 80° av inåtrotation (se steg 5).
-
Inducera anestesi med 5% isofluran genom inandning i en induktion kammare och sedan underhålla med 2% isofluran genom en Kona under hela operationen.
- Använd ett vattenbaserat värmeelement under djuret för att upprätthålla kroppstemperaturen under anestesi.
- I syfte att smärtkontroll, administrera sustained release buprenorfin subkutant med en dos på 1,2 mg/kg beroende på råttans kroppsvikt.
-
Orörlig i vänster glenohumeral fogar i en vinkel på 60 ° Abduktion (vinkeln mellan överarmsbenets axeln och skulderblads ryggraden)10 , 11.
- Börja det kirurgiska ingreppet med en bakre längsgående snitt, parallellt med humerus axeln. Gör det huden snittet precis nedanför glenohumeral gemensamma och utsträcka ca 3 cm.
- Använd 2 suturer (flätad polyester) för att immobilisera det glenohumeral gemensamt, av piercing genom den laterala kanten av skulderbladet och runt den distala två tredjedelar av överarmsbenets axeln och dra därefter åt som illustreras i figur 1A. Ta extra ansträngning för att undvika bromsande kritiska strukturer såsom armartären.
Obs: Kirurgiska tekniken har en fördel av att kunna begränsa det glenohumeral gemensamt vid 60° bortförande (Z) utan att påverka andra planer (X & Y). Genom att placera suturer runt humerus och genom den laterala kanten av skulderbladet, en tillnärmning av de två strukturerna uppnås och upprätthålls på skulderblad blade planet. Efter åtdragning suturerna, fixeras armen vid vilande position när man överväger X & Y flygplan och 60 ° för bortförande när Z plane anses. Detta är tänkt att begränsa variationen mellan de djur som kan genereras från bristande finjustering den gemensamma ståndpunkten i de tre planerna.
3. stänga snittet
- Efter ordentlig hemostas, nära huden snittet använder hud klipp.
- Avbryta anestesi och tillåter djuret att återhämta sig under tillsyn i en varm miljö. Efter djuret återfår tillräcklig medvetande att upprätthålla sternala koordinationsrubbning, returnera den tillbaka till sin bur.
- Omedelbart efter ingreppet, att djuren att återgå till normal aktivitet. Att djuren att flytta utan begränsning, förlitar sig huvudsakligen på interna suturer fixar det glenohumeral gemensamt.
- För att övervaka för eventuell infektion, att inspektera platserna som snitt dagligen under den första postoperativa veckan.
- Ta bort såret klipp på den 10: e dagen efter operation.
Obs: Det fanns ingen manipulation av muskler under förfarandet, och tekniken innebar inte någon intraartikulär trauma, därmed bevara kapsulära och artikulära kontinuitet och anatomiska integritet. Varken externa hindra eller aktivitet begränsning följdes i våra protokoll. - Ge smärtlindring med frisättning buprenorfin, injiceras subkutant med en dos på 1,2 mg/kg börjar vid induktion av anestesi och upprepas varje 72 h om det behövs.
4. suturen borttagning 8 veckor efter immobilisering
- Inducera anestesi med 5% isofluran genom inandning i en induktion kammare, då lidit med 2% isofluran genom en Kona under hela operationen. I syfte att smärtkontroll, administrera sustained release buprenorfin subkutant med en dos på 1,2 mg/kg beroende på råttans kroppsvikt.
- Gör ett snitt ovanpå ärr i föregående procedur.
- Skär suturerna och bort från överarmsbenet och skulderbladet.
- Stäng snitt med såret klipp.
- Granska webbplatsen snitt dagligen under den första veckan att upptäcka eventuella tecken på infektion. Övervaka smärta och ångest också.
- Ta bort såret klipp på den 10: e dagen efter operation.
5. range of Motion och ledstelhet mätningar
-
Mäta ROM och passiv axel mekanik före och efter immobilisering använder en anpassad enhet bestående av en arm klämma, en sensor församling och en roterande axel11. Detta utförs preoperativt (baslinje) och kontinuerligt efter suturen borttagning.
- Åtgärd ROM omedelbart efter suturen borttagning (uppföljande dag 0) och därefter två gånger i veckan.
- Minska mätningar för att en gång per vecka, vid inspelning av mindre än 10% förändring från den tidigare tidpunkten.
Obs: Efter att ha testat ROM för veckor, ROM varje djurs förändrades inte drastiskt mellan testning tidpunkter (mindre än 10% förändring). ROM tycktes platå vid denna punkt, därför kände vi att minska Testa frekvens från två gånger i veckan till en gång i veckan var tillräcklig.
- Utföra mätningar under anestesi med isofluran via precision spridare på 5% för induktion och 2% för underhåll för hela längden av förfarandet (cirka 5 minuter), för att underlätta mätningar effektivt. Använd ett vattenbaserat värmeelement under djuret för att upprätthålla kroppstemperaturen under anestesi.
- Placera djuret ordentligt för ROM mätning med hjälp av en laser-guide. Position forelimb på arm klämman i 90° framåt flexion, med fjärranalys axeln i linje med den långa axeln av humerus. Säkra forelimb av handled och armbåge som illustreras i figur 1B.
- Styra passiva forelimb rotation av en stegmotor att bedöma ROM och vridmoment på ett konsekvent sätt. Kontroll av stegmotor med en mikrokontroller. Användning ingångar från inklinometern, tillsammans med de från en torque sensor att ange början och slutet av mätningar.
- Anslut mikrokontroller till en dator och kontroll med hjälp av en in-house utvecklade MATLAB-kod.
- För baslinjen mätningarna endast, cykel sensor församlingen 3 gånger mellan 60° av extern rotation och 80° av intern rotation att få inledande vridmoment mätningar (extern: text och interna: tint) för senare jämförelse.
- För ROM mätningar, använda vridmomentvärden för varje djur på sin egen baslinje mätningar (text och tint) som förinställda ingående variablerna i programmet för att upptäcka förändringar i rotation ROM. använda baseline mätningarna som en jämförande stoppa punkt för efterföljande ROM mätningar. Förändringar upptäcktes med 0.2° upplösning.
- För stelhet mätningar, använda de ursprungliga rotation vinklarna 60° utåtrotation och inåtrotation 80° som förinställda indata i programmet för att upptäcka förändringar i vridmoment. Förändringar upptäcktes med en upplösning på 0,01 Nmm.
- Väga in djur på samma dag som varje ROM bedömning. Placera djuren på skalor och registrera deras massorna. Dessa data användes som ett verktyg för att bedöma djurhälsostatus under studien.
- Efter återhämtning, återgå råttor till sina burar och övervaka för tecken på smärta eller ångest. I hela denna testning, är inget djur lämnas utan uppsikt tills den har återfått tillräcklig medvetande för att upprätthålla sternala koordinationsrubbning.
Obs: ROM och vridmoment mätningar uppnåddes med en anpassad enhet, tidigare redovisats av vår grupp {Villa-Camacho 2015}. Enheten är en skräddarsydd jigg som består av ett skaft roteras stegmotor och kontrolleras av ett anpassat skript för MATLAB. En torque sensor och tröghetsbaserad måttenhet används för att fånga vridmoment och placera data under artikulation av preparatet.
6. besiktning Immunohistologic analys
- I slutet av mätperioden ROM 8-veckors, avliva råttor med CO2 exponering.
- Dissekera båda vänster (orörlig) och höger (frisk kontroll) axlar genom disarticulating humerus från ulna och snittning skulderbladet från nyckelbenet och brösthålan.
- Fixa exciderad axlarna i en lösning av 10% neutral buffrad formalin för 3 dagar, följt av urkalkning i en lösning av etylendiamintetraättiksyra (EDTA) syra 10% vid pH 7,4 för ytterligare 2 månader.
- Under denna process, placera prover på en shaker i en försiktig skakning cykel och förvaras vid 4 ° C. Övervaka urkalkning av glenohumeral gemensamma med veckovis microcomputed tomografi (uCT) genomsökningar.
Obs: EDTA är en kelatbildare som binder kalciumjoner från apatit kristall utsida, att successivt minska den crystal storlek12,13,14. Denna process är mycket långsam och skonsam och används för att upptäcka specifika vävnad element som måste bevaras för tekniker såsom immunhistokemi (IHC). Där EDTA decalcifies preparatet är beroende av pH och koncentrationen av lösningen. När det gäller pH, kan det variera från 7 till 7,4, med mer alkaliska lösningar accelererar urkalkning hastigheten. Lösningar med högre pH-nivåer kan dock skada viktiga vävnad element. Dessutom vanliga EDTA koncentrationen för sådana experiment ligger mellan 10% och 14%, men det är mycket viktigt att komma ihåg att den aktiva agenten töms när den binder till kalcium, så detta kräver ersättning av urkalkning vätska minst 3 till 4 gånger per vecka15. - När processen urkalkning ingicks, montera glenohumeral lederna i paraffin staplar för histologiska snittning. Orient proverna som möjliggör koronalt skivor. Skivor erhålls på 50% djup av överarmsbenets huvud (på center, mid-coronally) visas i figur 1. Utföra immunhistokemisk färgning med metoden peroxidas-anti-peroxidas betecknar närvaron av fibrotisk vävnad i leden. 4 , 9 , 10 , 16
- Utföra antigen hämtning av mikrovågsugn bestrålning av dränka bilder i en plastburk Coplin i en natriumcitrat buffertlösning (10 mM natriumcitrat, 0,05% Tween-20, pH 6,0, förvärmd för 5 min på 95 – 100 ° C) och placera i en vanlig mikrovågsugn i 10 minuter på medelhög effekt. Låt bilder svalna under 30 minuter vid rumstemperatur.
- Utföra blockering med geten serum för 30 min, och inkubera exemplaren med en primär mus mono-klonal antikropp (1: 400 spädning) till Fibronektin över natten vid 4 ° C.
- Efter inkubation med den primär antikroppen, tvätta exemplar två gånger med PBS (0,5 µg/mL) i 10 minuter; och inkubera med en sekundär antikropp, get antimouse IgG-peroxidas konjugat (1: 400 spädning) i 30 minuter.
- Tvätta exemplaren två gånger med PBS (2,5 µg/mL) på en shaker i 10 minuter och exponera till 3,30-Diaminobenzidin tetrahydro-klorid och 30% väteperoxid i mörkret för 10 min. motfärg med Carazzi hematoxylin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Rörelseomfång
Uppföljande dag 0, Vi hittade en 63% minskning av totala ROM jämfört med utgångsvärdet (P <.001). Vi observerade en gradvis förbättring av ROM förrän vecka 5 av uppföljning, när progression stannade på 19% begränsning (P < 0,001). Återstående begränsningen, 18% av totala ROM, framgick fortfarande vid 8 veckors uppföljningen (P < 0,001).
Stelhet
Uppföljande dag 0, Vi hittade en ökning med 13,3 Nmm i totala vridmoment jämfört med baslinjen (P < 0,001); 8,9 Nmm externt (P =.002) och 4,4 Nmm internt (P < 0.001), vilket resulterar i en 138,8% ökning i utåtrotation vridmoment, 159,6% öka i inåtrotation vridmoment och totalt 149,2% ökat vridmoment. På vecka 8 uppföljning, hittade vi det totala uppmätta vridmomentet vara 1,4 ± 0,2 Nmm högre än baseline (P = 0,115), med en ökning på 0,6 ± 0,1 Nmm externa vridmoment (P = 0.369) och 0,7 ± 0,2 Nmm ökning av interna vridmoment (P = 0,036). Detta indikerar att vridmomentet ökar 10% externt och 25,7% internt, för en total 17,9% ökning. I början av postoperativ vecka 3, förbättring av styvhet nått sitt tak.
Histologisk resultat
Som kan ses i figur 2A, visas gruppen intakt särskilja mellan kapseln och artikulära ytan av lårbenshuvudet och normala cellulära organisation. Dessutom observerades också normala cellulära organisation i synovial vävnad och ledbrosk. Dock kirurgiskt immobiliserade gruppen visar bevis på kapsulära sammanväxningar i sämre aspekt av glenohumeral gemensamma. Dessutom, den omgivande vävnaden verkar vara tätare jämfört med intakt axlarna, vilket leder till en hårdare kapsel med en minskad ledspringan (figur 2B). Skivor som färgas för Fibronektin visar en ökad kapsulära tjocklek i gruppen kontrakterade kirurgiska (figur 2B). jämfört med friska kontroller (figur 2A). Dessa fynd stämmer överens med tidigare rapporterade litteratur på djurmodeller av gemensamma immobilisering10 och stödja skapandet av en ordentlig kontraktur modell.
Figur 1: testa apparatur. (A) immobilisering av glenohumeral gemensamma med 2 flätad polyester suturer, passerade ordentligt mellan laterala kanten av mantel och överarmsbenet; (B) anpassad enhet för mätning av ROM och passiv axel mekanik; (a) en stepper monitor. En sensor församling bestående av b) en reaktion vridmoment sensor, och c) en sensor för bildorientering. (d) en arm klämma. (C) inre eller (D) extern rotation av glenohumeral gemensamma11. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: koronalt skivor av överarmsbenets huvud. Bild färgas för Fibronektin (IHC) erhölls vid 40 X förstoring. Skalstapeln = 200 µm. (A) frisk kontroll. (B) kirurgiska kontroll. Röda pilar beskriva gemensamma kapsulära tjocklek. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: rörelseomfång jämfört med normaliserade vridmoment för både friska och kirurgiskt begränsad råtta glenohumeral lederna. Inåtrotation betecknas som positiva, extern rotation är negativt. Skuggade regionen visar de 95% konfidensintervall (CI). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denna studie presenterar en råtta modell av självhäftande kapsulit i axeln genom intern fixering av glenohumeral gemensamma. Det visar dessutom en utökad minskning av totala ROM för minst 8 veckor efter avlägsnande av fixering. För att beräkna förändringar i ROM vid olika tidpunkter, jämfördes mätningarna djur specifika baslinjer. Omvänt, Kanno o.a. 10 används en standardiserad vridmoment för alla djur för att bestämma ex vivo ROM förändringar.
I 2008, Sarver o.a. 17 rapporterade på stelhet i axeln som härrör från icke-kirurgiska extern fixering. Deras studie visade en övergående ökning av stelhet efter immobilisering av skadade och behandlade axlar, som löstes av vecka 8 uppföljning. Ännu, i föreliggande studie fann vi inte linjära förhållandet mellan vridmoment och vinkel, snarare en polynom passar (figur 3). Vi fann dessutom endast en statistiskt signifikant skillnad i stelhet jämfört med baslinjen under bedömning av intern rotation, där en 25,7% ökning av styvheten kvarstod efter 8 veckors immobilisering.
Vi använde baslinjen ROM och stelhet mätningar för varje djur som sina egna interna kontroll. Med tanke på möjliga variationen mellan de djur18, med kontralaterala axeln av samma djur som intern kontroll ökar intern giltighet och bidrar till att minska antalen djur som krävs.
En av begränsningarna av vår studie är att apparaten används för att mäta ROM inte stabilisera skulderbladet. En råttas skulderbladet är dock mer snett orienterad med ännu mer uppåt rotation än hos människa. Med råttorna i ryggläge bör teoretiskt styra för skulderblad luta som skulderbladet vilar mot fast plätera av jiggen testning. En ytterligare begränsning av studien är att vi endast bedöma inåtrotation och extern-rotation av glenohumeral gemensamma. Detta är delvis på grund av att bortförande, flexion och overhead aktiviteter kräver noggrann extern fixering eller begränsning av de scapulothoracic gemensamt under ROM provning, vilket kräver ett annat system än vår.
Om patogenes och behandling av självhäftande kapsulit fortsätter förstås otillräckligt. Oavsett etiologi, har det visat att det är kontrakturen av kapseln som orsakar smärta och begränsar glenohumeral rörelse1,3,11. Dessutom har det föreslagits att det finns inflammatoriska utlösare som resulterar i gemensamma fibros, därigenom orsakar kontraktur10. Även om vår råtta modell inte kan imitera den inledande inflammatoriska förolämpningen av en primär kontraktur, dock replikerar det tillräckligt karakteristiska kineticsen av självhäftande kapsulit och dess patologiska förändringar10,19. Denna modell åberopar en varaktig minskning av ROM och ökad stelhet, vilket möjliggör en omfattande bedömning av nuvarande och potentiella terapeutiska behandlingar för axeln kontraktur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen
Acknowledgments
Författarna vill erkänna Mr. och Mrs. Tom och Phyllis Froeschle för ekonomiskt stöd mot detta projekt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories, Wilmington, MA, USA | 250-300 g | |
| Surgical tool: | |||
| Injection needle | BD 1' 30 guage | ||
| Needle holder | |||
| 5% isoflurane | |||
| 2% isoflurane | |||
| Nose cone | |||
| Skalpel and skalpel holder | No. 11 scalpel | ||
| Curved hemostat forceps | |||
| Staright hemostat forceps | |||
| Tissue retractor | |||
| Toothed tissue forceps | |||
| Plain tissue forceps | |||
| Dissecting scissors | |||
| Suture scissors | |||
| Skin clip applicator | Any standard staples for wound closure | ||
| Immobilization material | Ethicon | No. 2-0 braided polyester ethibond suture was used for immobilization | |
| Other materials: | |||
| Costumized device for ROM: 1)Sensor assembly, 2)pivoting axle, 3)arm clamp | Assembly that is described in relaxin paper and adhesive capsulitis paper | ||
| Orientation sensor (part of sensor assembly) | MicroStrain Inc., Williston, VT, USA | 3DM-GX3-15 | |
| Reaction torque sensor (part of sensor assembly) | Futek Inc., Irvine, CA, USA | TFF400 | |
| Stepper Motor | SparkFun Electronics, Niwot, CO 80503 | https://www.sparkfun.com/products/13656 | |
| Microcontroller | Torino, Italy). | Arduino UNO, R3 | |
| MATLAB code | MATLAB 7.13.0.564, Natick, Ma, USA | ||
| Weight Scale | Ohaus |
References
- Bunker, T. D. Time for a new name for 'frozen shoulder'. British medical journal. 290 (6477), 1233-1234 (1985).
- Bunker, T. D., Anthony, P. P. The pathology of frozen shoulder. A Dupuytren-like disease. The Journal of bone and joint surgery. British volume. 77 (5), 677-683 (1995).
- Kilian, O., et al. The frozen shoulder. Arthroscopy, histological findings and transmission electron microscopy imaging. Chirurg. 72 (11), 1303-1308 (2001).
- Wang, K., et al. Risk factors in idiopathic adhesive capsulitis: a case control study. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 22 (7), e24-e29 (2013).
- Milgrom, C., et al. Risk factors for idiopathic frozen shoulder. The Israel Medical Association Journal. 10 (5), 361-364 (2008).
- Huang, S. W., et al. Hyperthyroidism is a risk factor for developing adhesive capsulitis of the shoulder: a nationwide longitudinal population-based study. Scientific Reports. 4, 4183 (2014).
- Struyf, F., Meeus, M. Current evidence on physical therapy in patients with adhesive capsulitis: what are we missing. Clinical Rheumatology. 33 (5), 593-600 (2014).
- Song, A., Higgins, L. D., Newman, J., Jain, N. B. Glenohumeral corticosteroid injections in adhesive capsulitis: a systematic search and review. Journal Of Physical Medicine And Rehabilitation. 6 (12), 1143-1156 (2014).
- Schollmeier, G., Sarkar, K., Fukuhara, K., Uhthoff, H. K. Structural and functional changes in the canine shoulder after cessation of immobilization. Clinical Orthopaedics and Related Research. 323 (323), 310-315 (1996).
- Kanno, A., Sano, H., Itoi, E. Development of a shoulder contracture model in rats. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 19 (5), 700-708 (2010).
- Villa-Camacho, J. C., et al. In vivo kinetic evaluation of an adhesive capsulitis model in rats. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 24 (11), 1809-1816 (2015).
- Liu, H., et al. Evaluation of Decalcification Techniques for Rat Femurs Using HE and Immunohistochemical Staining. BioMed Research International. 2017, 9050754 (2017).
- Gonzalez-Chavez, S. A., Pacheco-Tena, C., Macias-Vazquez, C. E., Luevano-Flores, E. Assessment of different decalcifying protocols on Osteopontin and Osteocalcin immunostaining in whole bone specimens of arthritis rat model by confocal immunofluorescence. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 6 (10), 1972-1983 (2013).
- Sanjai, K., et al. Evaluation and comparison of decalcification agents on the human teeth. Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 16 (2), 222-227 (2012).
- Rolls, G. An Introduction to Decalcification. , (2013).
- Burry, R. W. Controls for immunocytochemistry: an update. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 59 (1), 6-12 (2011).
- Sarver, J. J., et al. After rotator cuff repair, stiffness--but not the loss in range of motion--increased transiently for immobilized shoulders in a rat model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 17 (1 Suppl), 108S-113S (2008).
- Macbride, M. Variations within Outbred Strains: Know Your Strains and Stocks | Taconic Biosciences. , Available from: https://www.taconic.com/taconic-insights/quality/variations-within-outbred-strains-know-your-strains-and-stocks.html (2016).
- Liu, Y. L., Ao, Y. F., Cui, G. Q., Zhu, J. X. Changes of histology and capsular collagen in a rat shoulder immobilization model. Chinese Medical Journal. 124 (23), 3939-3944 (2011).
