Summary
トリパノソーマ血から分離のこの方法は、哺乳類の血液細胞よりも小さい負となりその表面電荷に依存します。感染した血は配置し、陰イオン交換カラムに扱われます。このメソッド、アフリカ睡眠病の最もフィッティング診断は、免疫学的、生物学的、生化学的、薬学・分子生物調査のため精製の寄生虫を提供します。
Abstract
このメソッドでは、trypanosomes、寄生虫感染した血液から動物と人間アフリカ トリパノソーマ症 (帽子)、責任の分離をことができます。これは第一段階の帽子の診断のための最善の方法とさらにこの寄生虫の浄化方法により、血清学的調査研究します。
帽子はツェツェ バエ送信トリパノソーマ原虫 gambienseによって引き起こされるとt. b. rhodesiense.関連 trypanosomes ナガナ病の病原であります。トリパノソーマの検出は、帽子の診断、治療、フォロー アップに不可欠です。ここで説明する手法はt. b. gambiense帽子の診断のための圃場条件に合わせ、最も敏感な寄生虫検出手法を 1 時間以内に完了することができます。血液は ph 8、以前調整陰イオン交換カラム (DEAE セルロース) に階層化され溶出バッファーが追加されます。少ない負荷電の trypanosomes を通過するのに対し、高負荷電の血液細胞が列に吸着しました。収集した trypanosomes は、遠心分離によってペレットし、顕微鏡で観察。また、寄生虫は感染性を維持しながら、細胞損傷せずに用意しています。
精製 trypanosomes、免疫学的検査に必要です彼らは、trypanolysis のアッセイ帽子血清のゴールド スタンダードで使用されます。ステンド グラスの寄生虫は、フィールド血清カード凝集反応 (CATT) で利用されています。Exoantigens、バリアント表面糖などの精製された trypanosomes からの抗原は様々 なイムノアッセイでも使用されます。ここで説明した手順は、アフリカトリパノソーマ;その結果、クロマトグラフィー条件は、それぞれの種のホストの哺乳類の血をトリパノソーマ菌株、およびもっと一般を合わせられなければなりません。
これらの病原体を魅力的な簡単に精製されで使用する生化学的な分子と細胞膜受容体、シグナル伝達、遺伝子のレベルでホスト寄生虫の関係を調査するための宿主細胞との共培養を含む生物学研究式です。薬物テスト体外;遺伝子の削除、突然変異、または代謝プロセス、細胞骨格の生合成および寄生虫生存に過剰発現の調査。
Introduction
手法説明ここで trypanosomes、寄生虫血から動物と人間アフリカ トリパノソーマ症 (帽子)、責任の分離を可能します。最初の段階の帽子の診断のための最善の方法で、さらにこの寄生虫の浄化方法により、堅牢な血清学の調査。
帽子はツェツェ バエ送信トリパノソーマ属 gambienseとt. b. rhodesiense1.によって引き起こされるこれらの原虫疾患 (hemolymphatic 展開ステージ) の最初の段階の間に、血流、リンパ、間質液細胞外を乗算します。第二期 (meningoencephalitic 期) 寄生虫クロス血液脳関門; ときに開始します。この病気はその名「睡眠病」を与えている、睡眠障害などの神経学的徴候はこの第 2 段階2の典型的であります。関連 trypanosomes (t. エバンシーいる、t. の vivax、t. b. グリコシルホスファチジルイノシトール) は、動物アフリカトリパノソーマ (AAT)3の病原です。
世界保健機関 (WHO) は、2020 年までに公衆衛生問題として帽子を排除して 20304伝送を停止するを目指します。迅速診断テストの最近の導入は、改善された血清学的診断1,4,5を持っています。いくつかの分子診断テストが開発されているが、フィールド診断におけるそれらの役割の確立5されていません。グリコシルホスファチジルイノシトールグループ、動物トリパノソ6担当の寄生虫によって引き起こされる非定型の治療法のサブ種を識別するために使用されます。
血清反応偽陽性と残念なことに偽陰性の結果1を与えることができる寄生虫の検出は診断・治療・ フォロー アップは欠かせません。これらの hemoflagellate の原生生物の直接顕微鏡観察によって引き起こされるt. b. gambiense、(95% 以上) 低 parasitemias ルールは、一方、 t. b. rhodesiense、大規模なによる帽子の帽子の場合はむずかしい寄生虫の数は頻繁に血の存在です。厚いドロップやキャピラリー チューブ遠心分離 (CTC) といった様々 な濃度の技術も使用されているが、寄生虫の陰イオン交換体 (DEAE セルロース) の列によって血液からの分離遠心分離して顕微鏡観察、ペレット、最も敏感な方法です (約 50 寄生虫/ミリリットルの血液を検出できる)1,7。その結果、この陰イオン交換器 (DEAE セルロース) 法による trypanosomes の浄化は最高とまでは、可視化および帽子の診断のための血液の寄生虫を分離するための参照方法。、フィールド条件で DEAE セルロースのミニ列が使用されています、いくつかの改善は、顕微鏡観察7、8を促進しました。
下記の血液からトリパノソーマ分離法は、寄生虫の表面電荷は、哺乳類の血液細胞9より小さい負に依存します。興味深いことに、このメソッドは、50 年前、博士シーラ ランハムによって 1968 年に開発された、検出と血流 trypanosomes の準備のためのゴールド スタンダードのまま。高速、両方の動物と人間のトリパノソーマ症10の診断を許可する哺乳類の広い範囲から salivarian trypanosomes の再現です。
生活、精製された寄生虫を得るためには、感染した血液が陰イオン交換カラムに追加されます。クロマトグラフィー条件 (主に pH、イオン強度のバッファー/メディア) は、哺乳類の血液細胞と trypanosomes10の各組み合わせに各トリパノソーマ種およびもっと一般を合わせられなければならないと。溶出バッファーは、ほとんどのアフリカの trypanosomes10の pH 8 に正確に調整されます。Parasitemias は単独で顕微鏡観察によって検出するのには低すぎるので、このメソッドが寄生、患者の血液中の濃度を優先し、検査することもできます。新鮮単離 trypanosomes とこのテクニックを使用して、感染した動物から血の上の作業は無期限研究室で無菌状態で培養されている寄生虫の研究よりも様々 な調査のより適切です。
宿主-寄生生物関係は最高、寄生虫、したがって、その自然なホストに感染するt. 筋、細胞外 trypanosomes の代表である、多くの利点は、マウスの感染に伴う自然マウス寄生虫に師事、実験小動物バイオハザード安全レベル (BSL) 条件を必要としません。T. 筋は人間の病原体を含む他の多くのトリパノソーマ種とは異なり、免疫マウスを殺さない。T. 筋がないマウスの T 細胞を奪われた排除され、食品や栄養素の摂取量の11を変更することにより感染したマウスの parasitemias を増やすことができます。この寄生虫は、12の他の病原体による共同感染の免疫応答を調節します。T. 筋培養t. 筋から感染したマウス展違いからたとえば、膜 Fc 受容体の発現t. 筋無菌共生栽培、感染マウス13から精製した寄生虫に比較で失われます,14. Excreted 分泌因子 (ESF) も定性的・定量的無菌トリパノソーマ文化小さい単位、流行地域15で分離された株の間で異なります。ESF は、宿主の免疫系に表示しのでの再生ホストの初期に重要な役割免疫応答16最初の抗原です。
実験室調査のための実験感染動物でこのプロトコルは寄生虫、特に免疫抑制動物を使用するときに必要なマウスの数を最小限に抑えることのより多くの実験を促進します。マス ・ スクリーニングのトリパノソーマ症 (CATT) のためにカード凝集テストで使用されるバリアント表面糖 (Vsg) はまだラットでは反映され trypanosomes から浄化されます。フィールドで使用可能な 2 つ迅速診断テスト (個別にラップされたカセット) はまだネイティブ Vsg およびない trypanosomesの in vitro培養1,ので4,の感染モデル ソースを使用して5. これら DEAE セルロースを精製した寄生虫は、特に齧歯動物、自然または実験的感染ホストから大量に簡単に取得できるので、トリパノソーマ免疫学と生物学の研究の進歩が促進されています。
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Protocol
調査は、ケアと実験動物の使用 (NIH 出版番号 85±23、1996 の改正) のガイドラインに適合。プロトコルはローカル倫理委員会によって承認されました。
1. 動物
- 8 から 10 週古い、20-25 g は、住宅設備各実験の前に 15 日間動物を高齢者女性のスイス (の 1) マウスを保持します。保護、温度 (22 ° C) と湿度 (50%) に保持する換気ボックスに収容します。ルーム、12 時間ライト サイクルのオン/オフを制御します。
- 食べ物と水に動物無料のアクセスを与えます。痛み、苦しみや悩みを最小化し、豊かな環境を提供します。
- 住宅、クリア壁ケージ、豊かな木の棒とダン ボールのトンネルを使用します。やさしく、手のひらの上にケージから転送するトンネルに動物を描きましょう。
- 日常の虚脱、社会的孤立、身体傷害、波立たせられた髪の毛や手入れの不足の徴候を評価するために監視を実行します。
- 週 1 回各動物の重量を量る。獣医による定期的な検査を実行します。
- 自然な寄生虫は、動物の死を引き起こす寄生虫の寄生率のピーク時に採血、推定死の前日に採血します。
注: 感染性病原体とすべての実験を大学承認ガイドラインによると専用の部屋で行います。
2. バッファー、メディアの準備
- 各物質を量り、次のバッファー用蒸留水を追加します。
- 濃リン酸緩衝生理食塩水を準備 (2 x)。
Na2HPO4 (無水) (MW 141.96 g) 10.14 g
NaH2PO4∙2H2O (MW 156.01 g) 0.62 g
塩化ナトリウム (MW 58.44 g) 2.55 g
H2O に 1 L の蒸留 - リン酸緩衝生理食塩水-グルコースを準備します。
Na2HPO4 (無水) (MW 141.96 g) 5.39 g
NaH2PO4∙2H2O (MW 156.01 g) 0.31 g
塩化ナトリウム (MW 58.44 g) 1.70 g
グルコース (MW 180 g) 10 g
H2O に 1 L の蒸留 - 1 M KH2PO4を準備します。
- リン酸緩衝生理食塩水-グルコースを補う溶出バッファーを準備します。
ペニシリン (100 U/mL)、ストレプトマイシン (100 μ g/mL) とフェノール赤 (5 μ g/mL)。
- 濃リン酸緩衝生理食塩水を準備 (2 x)。
3. DEAE セルロースの調製
- DEAE セルロース準備のため 5 時間程度を予定します。
- DEAE セルロースの細い首にフラスコに蒸留水 100 g を洗って、解決し、微粒子を破棄することができます。上清が明確になるまで、洗浄を繰り返します。
- Phosphate-Buffered 生理食塩水と攪拌 x 集中 2 の 3 L を追加します。
- 1 M KH2PO4 8.0 pH を調整し、上澄みを廃棄します。
- 蒸留水で 2 回洗うし、解決に任せます。
- 洗って、2 回で 3 リットル Phosphate-Buffered 生理食塩水-グルコースを解決し、培養上清を破棄することができます。
- セルロースの量を測定し、Phosphate-Buffered 生理食塩水-ブドウ糖の等量を追加、ペットボトルに配布、-20 ° C で保存
4. 寄生虫
- 人間と動物のトリパノソーマ症流行エリアのトリパノソーマ系統を収集します。液体窒素で凍結の寄生虫を維持します。
注:トリパノソーマ筋ヒトへの病原性は、さまざまな実験によって病原性 trypanosomes を安全に置換するために使用細胞外トリパノソーマ。 - 実験室の調査は人間の病原体を必要とするの場合処理実験専用の適切なバイオハザード安全レベル (BSL) 条件および注意事項;T. b. gambiense t. b. rhodesienseの BSL3 BSL2。標準的な微生物学的方法の確立、フィールド条件で: サンプリング レート、機械的ピペッティング、表面、頻繁に除染と廃棄物の滅菌をセキュリティで保護します。
5. マウス感染
- 37 ° C の水浴中で寄生虫を急速に解凍します。
- 顕微鏡で解凍感染した血の滴を観察します。運動フォーム17の割合を測定することによって寄生虫の実行可能性を評価します。
- 寄生虫をマウス (マウスあたり 0.5 mL) 腹腔内注入します。毎日、感染後は穿刺によって尾血 20 μ L を収集し、顕微鏡で観察。いくつかの顕微鏡の分野で寄生虫を数えることによってまたは、haemocytometer を使用して、ハーバート、ラムズデン18によると寄生率を評価します。
- 寄生率各ひずみに対して定義されているしきい値に達したとき、ヘパリン (10 U/mL) を含む溶出バッファー (5 mL/マウス) に血 (1 mL/マウス) を収集します。
注: オリジナル小説仕事ランハム ゴッドフリー報告リン酸塩の最適なイオン強度バッファー pH 8.0 の原液からホスト/寄生虫数種の食塩ブドウ糖。
6. 寄生虫分離
注: この時点からすべての実験は、手袋を身に着けているティッシュ文化フードの行う必要があります。部屋の温度と使用される実験室で湿度がそれぞれ 22 ° C と 45% だった。寄生虫の分離、フィールド条件で 34 ° C で正常に実行されています。
- 垂直方向のサポートで 10 mL の注射器を置き、以前カット円形ろ紙、グラスウールやセルロース スポンジの部分を追加します。
- 8 mL のレベルに達すると 25 mL の溶出バッファーで洗浄し、DEAE セルロースを注射器に注ぐ。
- 列の上部に希釈血液 2 mL を慎重に追加し、溶出媒体を追加します。定期的に、trypanosomes の通過によると溶出バッファーを追加します。
- 遠心管中列から排水滴を収集し、定期的に寄生虫の存在を顕微鏡で確認します。
- 列排水には、寄生虫が検出されなく、遠心チューブ (1,800 × g、10 分、研究所の 4 ° C で、圃場条件における常温下) を分離します。
- 上澄みを除去し、次の調査のステップに必要な関連する媒体の 1 つの mL で寄生虫を中断します。
- 診断と寄生虫をカウントし、必要に応じて適切な培地でそれらを希釈します。
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Representative Results
浄化された trypanosomes は、医薬品のテストで使用されています。寄生虫は、特定の薬物、単独または混合19のシリアル希薄を含む文化井戸に転送されます。顕微鏡観察、運動を評価性マーカーである、のみいくつかの薬剤をテストするときに実行できる、AlamarBlue セル実行可能性の試金に対し創薬スクリーニング20中大運動アッセイの優秀な方法であります。ペンタミジン、帽子療法で使用される参照薬剤の効果は、図 1に表示されます。
マクロファージは、フィーダー細胞としての文化で非常に便利です。In vitro で開始およびトリパノソーマの開発は文化21許可します。我々 は、彼らを支持する寄生虫成長22トリパノソーマ感染哺乳類でまたは活性化マクロファージの数を増加していることを報告しています。この代替マクロファージの活性化は、寄生虫の成長のために不可欠である L-オルニチンを提供します。体外寄生虫マクロファージ共培養では、trypanosomes が分泌因子を介してマクロファージ代替活性化を誘導することが示されています。細胞外 trypanosomes を分泌する寄生虫の分化と増殖23,24 (を好む L オルニチン生産を提供するアルギナーゼ式を誘導マクロファージ マンノース結合受容体を結合するキネシン図 2)。マンノースはキネシン結合とアルギナーゼの誘導を阻害してマンノース受容体欠損マウスは、マクロファージ (図 3) キネシンのターゲットを解明します。
以来、数多くのトリパノソーマ ゲノム今・注釈、これら大量のデータ セットを活用できました。その後、我々 は、これらの寄生虫の前方および逆の遺伝学を遂行できた。これらのデータを使用して、精製された trypanosomes を特徴付けるし、べん毛のポケット (FP) とその関連骨格など重要な構造の分析に使用されている血流型。FP は遠藤と trypanosomes のエキソサイトーシスの唯一のサイト、また内システム25からの変数の表面糖タンパク質の取り引きで。べん毛ポケット襟 (FPC) は、環状形、FP が終了するが、最近少しは FPC の蛋白質成分について知られていたまでの時点で、鞭毛に接続されている構造。我々 は FPC、 TbBILBO1 の主要な蛋白質を識別し、寄生虫生存培養昆虫ツェツェ バエ フォームと血流フォーム26の両方に不可欠であるが示されています。RNAi によりTbBILBO1 のノックダウンは FP の形成を防ぎます、多く他重要な骨格構造、FPC と介入の FP の重要な目標をすべての病原性 trypanosomes の生合成を阻害します。TbBILBO1 抗体精製又は養殖寄生虫細胞をプロービング procyclic (昆虫) フォームと血流で、鞭毛を回避するリング状の構造を作成しますそれを示します。血流のフォームでは、このようなラベル付けは、図 4に示します。
精製された血流フォーム trypanosomes は多く珍しい生化学・代謝の特殊性、glycosomes (図 5参照) と呼ばれるペルオキシソームのような細胞小器官で行われるブドウ糖の新陳代謝を含む特性を許可しています。そのピルビン酸コハク酸と酢酸は、ミトコンドリア内の生産は事実上無しでの血流 trypanosomes による糖代謝から排泄される主な最終製品は、一般的に受け入れられました。対照的に、procyclic trypanosomes 酢酸及びコハク酸と酢酸の27,28にグルコース スレオニンに変換します。Trypanosomatids のエネルギー代謝は、利用可能な炭素源への適応によって評価できます。トレオニン、糖由来のピルビン酸から酢酸の血流 trypanosomes のミトコンドリアで生産だけでなく、血糖値19,20 からコハク酸の生産を確認したリバース ・ ジェネティクスとメタボローム解析を組み合わせること(図 5)。例えば、 1H NMR 分析 4 mM グルコースを含む PBS 培養血流フォーム trypanosomes によって排泄される最終製品の明らかにグルコースが、ピルビン酸 (排泄の最終製品の 85.1%) に変換は主にマイナーな生産アラニン (9.2%)、酢酸 (4.9%)コハク酸 (0.8%)29。マイナーなグルコースからピルビン酸生産と比較して代謝の面では、これらの経路は、寄生虫の増殖に不可欠です。コハク酸生産経路は、新しい抗トリパノソーマ薬の開発のための良い潜在的なターゲットとしてこうして考えることが。
図 1: In vitro効果にペンタミジンのT. b. グリコシルホスファチジルイノシトール.ペンタミジンの希釈液は、2 × 105寄生虫 50% (IC50) 寄生虫の成長を阻害する濃度を決定するために追加されました。文化の 24 時間で線量効果曲線。誤差範囲は、5 の独立した実験から平均値の標準誤差を表します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: トリパノソーマを介したアルギナーゼ誘導します。Trypanosomes が発表したキネシンはアルギナーゼ誘導につながる C 型レクチン受容体にバインドします。これは、結果します、L オルニチンとポリアミン、寄生虫増殖や分化に不可欠の生産は増加し L-アルギニンの枯渇、NOS II マクロファージによる細胞傷害性の NO のより低い生産の結果します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3:マクロファージ アルギナーゼ。コントロール マウスとマンノース受容体ノックアウト (KO) マウスのマクロファージにおけるアルギナーゼ活性キネシンやマンノース有無、48 時間培養培地で培養。誤差範囲は、5 の独立した実験から平均値の標準誤差を表します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4:TbBILBO1血流のフォームのラベルアフリカトリパノソーマ原虫セル(A) 蛍光抗体法により血流、文化形態、FITC 標識抗マウス抗体による抗 BILBO1 モノクローナル抗体を用いたプローブされて 90 13 セル後 427 のラベリングと紫外光、(Tbを用いて可視化します。BILBO1 が緑の環状信号) および DNA 結合色素 DAPI (青い信号) (B) に 10 μ m. 反 BILBO1 マウス モノクローナル抗体は希釈 1:10 PBS と二次抗体 (A. スケール バー equals の DAPI、抗 BILBO1 および位相コントラストの画像のマージ抗マウス IgM FITC) は薄くされた 1: 100 です。デジタル カメラが装備の顕微鏡撮影を行った。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 5: グルコースとトレオニン代謝血流フォーム trypanosomes の模式図。グルコースとトレオニン代謝排泄最終製品がボックス化されます。太い青色の矢印は、解糖系から排泄される主な最終製品であるピルビン酸生産につながるグルコース代謝の酵素の手順を示します。黒い矢印を表す見落としてマイナー代謝グルコースとスレオニンの劣化から寄生虫の成長に不可欠であります。指定された酵素の寄与が実験的検証: ACH、アセチル coa チオエステラーゼ (EC 3.1.2.1);商取引、酢酸: コハク酸 CoA トランスフェラーゼ (EC 2.8.3.18);AKCT、2-アミノ-3-ケト酪酸コエンザイム A リガーゼ (EC 2.3.1.29);PEPCK、ホスホエノールピルビン酸の発現 (EC 4.1.1.49);PDH、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体 (EC 1.2.4.1);TDH、トレオニン-3-デヒドロゲナーゼ (EC 1.1.1.103)。アセチル coa; 略称: AcCoAAOB、アミノ オキソ酪酸;DHAP、ジヒドロキシアセトンリン酸;G3P、グリセルアルデヒド 3-リン酸;マル、リンゴ酸;OA、オキサロ酢酸;ペップ、ホスホエノールピルビン酸;デオキシピリジノリン、ピルビン酸です。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
浄化された trypanosomes は、免疫学、生化学、細胞および分子生物学を研究するための強力な手段を表しています。データと結果の大きい広がりは他の真核細胞の30から情報を取得するために貢献してきましたし、trypanosomes から得られています。彼らは存続し、2 つの非常に異なる環境で育つことを可能にする多数のメカニズムを考案しているので trypanosomes がまた重要で興味深い研究テーマ: ツェツェ バエ ベクトルと哺乳類のホスト23, 31. trypanosomes を分離するためのさまざまな手法が報告されているとマイクロ ベースのアプローチについてのレビューは公開された32を最近します。したがって、原虫分離の再現性と堅牢な手段は不可欠です。
DEAE セルロース準備この寄生虫の準備のプロトコルで必要不可欠なステップであります。洗浄の条件は、細かい粒子を除去し、樹脂を平衡に慎重に行います、pH を正確に調整する必要があります (pH 8.0 はほとんどトリパノソーマ種のがちである)。すべての手順は、寄生虫の浄化を改善し、寄生虫の生存率と細胞の特性を維持しながら生成調整が必要。重要なは、寄生虫の生存率および感染を deae カラムを通して浄化後維持されています。ただし、いくつかの系統は他よりも壊れやすいので、浄化33後少ない感染可能性があります。したがって、外皮膜成分、寄生虫代謝、シグナル伝達、動物感染性核酸機能の分離条件の影響は評価するが、分離条件はそれに応じて合わせられなければなりません。
この手法に制限は、この手順が与えられたホストにそれぞれのトリパノソーマ種に適応するのはまた時間がかかることです。また、DEAE セルロースは高価な今です。予備の試金は分離条件、特にさまざまなイオン強度と正確な pH がありますメディアを最適化する必要があります。抗凝固薬の選択、赤血球、バフィー コート使用、および赤血球溶解の大部分を除去する前の遠心分離を含む前の列の手順は、各実験によると選択されます。1 つのパラメーター (バッファー、プロトコル、遠心分離パラメーターを通して温度) の正確な変更数が大幅に増加、精製の度合いと寄生虫の性得られる33。寄生虫種と哺乳類の血液細胞を分離することによると新しい分離パラメーターを開発する必要があります。初期のランハム ・ ゴッドフリーのプロトコルを調整は、生物学的および抗原保存t. の原因血34からの浄化を許可しています。新しい樹脂はまたテストして種35のための適切な条件で使用できます。
Trypanosomatids による排泄分泌因子 (ES) の主要な役割は強調された16を近年します。ES には、病理と trypanosomes24の間で保存されているキネシンなど、抗炎症に関与する分子が含まれています。精製された寄生虫からの ES の準備には、溶出メディア コンポーネントおよび分離の寄生虫による汚染を避けるために特に注意が必要です。
ES ベースのリーシュ マニア、関連寄生虫に対する効果的なワクチンは既に存在し、使用可能な (CaniLeish Virbac)36。協会保存分子寄生虫の生存と成長に不可欠な役割を果たして、将来 trypanosomes ワクチンのため、1 つ健康のアプローチで、動物と人間の両方の単位を表します。アフリカトリパノソーマ DEAE セルロース列の改善により、血液からの浄化のまま流行地域での低 parasitemias と自然宿主のトリパノソーマ検出や、大量に寄生虫の必要性のためのゴールド スタンダード実験。
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Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
私たち UMR 177 INTERTRYP IRD CIRAD ユニヴェルシテ ・ ド ・ ボルドーのすべてのメンバーに感謝します。この研究は、ボルドー大学から内部の資金によって支えられた、サポート LABEX ParaFrap ANR-11-LABX-0024、ANR と協会から注ぐル開発銀行 de la recherche en parasitologie et médecine トロピカルとサービス deためら助成カンボジア ・ デ ・たいしかん・ ド ・ フランス アラカルト バンギ (Centrafrique)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10 mL Pipettes | Falcon | 357,551 | |
| 2 mL Pipettes | Falcon | 352,507 | |
| Centrifugation tube 50 mL | Falcon | 352,070 | |
| Centrifuge | Sigma Aldrich | 4K15 | |
| DEAE cellulose | Santa Cruz | s/c- 211213 | 100 G |
| filter paper | Whatman | 1,001,125 | |
| Flat bottom flask narrow neck | Duran | 21 711 76 | 6000 mL |
| Glucose | VWR | 101174Y | 500 G |
| Heparin | Sigma Aldrich | H3149-50KU | 5 000 U |
| KH2PO4 | VWR | 120 26936.260 | 500 G |
| Microscope | Olympus | CH-20 | |
| Microscope coverslips | Thermofisher scientific | CB00100RA020MNT0 | |
| Microscope slides | Thermofisher scientific | AGAA000001 | |
| Na2HPO4 | VWR | 100 28026;260 | 500 G |
| NaCl | VWR | 27800.291 | 1 KG |
| NaH2PO4 | VWR | 110 33616;262 | 500 G |
| Nalgene Plastic Media Bottles size 125 mL | Thermofisher scientific | 342024-0125 | |
| Nalgene Plastic Media Bottles size 500 mL | Thermofisher scientific | 342024-0500 | |
| Pasteur Pipette | VWR | BRND125400 | |
| Penicillin 10,000 UI/Streptomycin 10,000 µg | EUROBIO | CABPES01 OU | 100 mL |
| Phenol red | Sigma Aldrich | P0290 | 100 mL |
| Syringue | Dutscher | SS+10S21381 | |
| Tissue culture hood | Thermoelectro Corporation | MSC-12 | |
| Trypanosoma brucei brucei | Institute of Tropical Medicine (Antwerp, Belgium). | ANTAT 1.1 | |
| Trypanosoma brucei gambiense | Institute of Tropical Medicine (Antwerp, Belgium). | ITMAP 1893 | |
| Trypanosoma musculi | London School of Hygiene and Tropical Medicine (UK) | Partinico II |
References
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