Summary
מטרת מאמר זה היא לספק פריימר עבור פיתוח והשתמש בדגם ארנב קרצינומה VX2 של סרטן הכבד.
Abstract
הגידול VX2 הארנב הוא במודל חיה בדרך כלל מנוצל עבור המחקר translational לגבי קרצינומה hepatocellular (HCC) בשטח לרדיולוגיה התערבותית. מודל זה מעסיקה של אנפלסטית קרצינומה של תאים קשקשיים זה בקלות ובאמינות הופץ בשריר השלד ארנבים תורם בסופו של דבר הקציר, להשתלת השרשת לתוך הכבד תמים נמענים. שתל זה הגידול גדל במהירות בתוך הכבד של ארנבים הנמען לתוך גידול angiographically לזיהוי מאופיין על ידי גרעין נמק מוקף קפסולה hypervascular קיימא. הגודל הפיזי של האנטומיה ארנב מספיקה להקל על כלי הדם מכשור המאפשר היישום ובדיקה של טכניקות שונות התערבותית. למרות יתרונות אלו, קיימת במחסור של משאבים טכניים לפעול כהפניה בטון לחוקרים לעבוד עם המודל. במסמך זה, אנו מציגים קו מיתאר חזותי מקיף על ההיבטים הטכניים של התפתחות, צמיחה, הפצת ניצול angiographic של המודל גידול ארנב VX2 לשימוש על ידי טירון וחוקרים מנוסים כאחד.
Introduction
הדגם גידול ארנב VX2 שיחק תפקיד באונקולוגיה ניסיוני מאז הפיתוח ב- 19351,2. הגידול הזה הוא וירוס-induced אנפלסטית קרצינומה של תאים קשקשיים המאופיינת hypervascularity, צמיחה מהירה, קלה הפצת שרירי השלד3,4. ואילו הדגם גידול ארנב VX2 שימש לחקור מספר רב של סוגי סרטן5,6,7,8; המוקד של מאמר זה היא סרטן הכבד9.
מטרת השיטה המתוארת היא להציג מודל עבור סרטן כבד ראשוני, או קרצינומה hepatocellular (HCC), זה יכול להיות בשימוש על ידי רדיולוגים התערבותית המחקר translational. זה יכול לשמש עבור מחקרים פרמוקוקינטיים, חקירות טיפולית, ושיטת פולשני בדיקות10,11,12,13,14,15.
השיטה מפורט בזאת מניבה מספר יתרונות על פני דגמים אחרים בתוך מעגל אותו כגון מודלים מכרסמים כמו חולדות, עכברים, סנאים, או דגמים גדולים כמו יונקים16. אחד היתרונות העיקריים הוא צמיחת הגידול מהירה ואמינה אשר מאפשר לחוקרים לקבוע קו פעיל הגידול תוך חודש של הגפיים האחוריות הראשון הפצת17. בנוסף, הגידול הזה יש ראות sonographic פשוטה של הפריפריה hypervascular אשר מאפשר טיפולים locoregional transarterial וגם טיפולים פולשני. לבסוף, והכי חשוב, בגודל של להערכת הארנב מאפשרת ניצול ריאלי וקל טכנית של כלי דם ומכשור18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
להלן כללי התנהגות עוקב אחר כל דרישות והנחיות המנדט על ידי אוניברסיטת אילינוי - שיקגו. היא נבדקה, אושרה תושבים המקומיים אכפת לי חיה המוסדית והוועדה לשימוש לפני ביצוע.
1. VX2 התפתחות גידולים של הגפיים האחוריות
- להשיג את שורת התאים של גידול VX2 הלאומית המכון חלוקה של סרטן טיפול אבחון סרטן, טיפול הגידול תא קו במאגר.
הערה: בשלב זה, הקטלוג סדר ניתן למצוא בקישור הבא: https://dtp.cancer.gov/repositories/. - כדי להתכונן התליה תא הזרקה, הנח קפוא VX2 methylcellulose ולדגום המדיום במים פושרים עד שהם יש הקרת.
- האחות 0.5\u20121 מ"ל של התליה תא המופשרים ואמצעי אחסון שווה methylcellulose המופשרים בינוני לתוך מזרק 5-mL.
הערה: היא עשויה לסייע השימוש מחט G 21 או 22 מחוק לגמרי התליה תא ו מחט מד גדול יותר מחוק לגמרי המדיום methylcellulose. במקום תארגן את הדברים על קרח.
- האחות 0.5\u20121 מ"ל של התליה תא המופשרים ואמצעי אחסון שווה methylcellulose המופשרים בינוני לתוך מזרק 5-mL.
- להכין התורם הגידול של הגפיים האחוריות ארנב חיסון של השעיה תא, החל הרגעה באמצעות איזופרומאזין 1 מ"ג/ק"ג ו- 0.02 נקודות מ"ג/ק"ג. הבופרנורפין בהתחשב intramuscularly. לגלח את האתר חיסון (הינד האיבר). עם מספריים, נקיים מגולח עם סוכן או יוד-בסיס אלכוהול.
הערה: Meloxicam יכול להינתן במינון של 0.2 מ"ג/ק"ג subcutaneously על שיכוך כאבים. ארנב פרווה קשה להתגלח. מומלץ כי החוקר לבצע מעברים מרובים, תחילה התמקדות ניקוי בכמויות גדולות של הפרווה ואז לחיצה והסכין על העור, הולך נגד התבואה. - מחט 16 גרם לצרף המזרק 5-mL המכיל התליה תא ולהזריק 1 מ"ל של ההשעיה לתוך הבטן של השריר הגפיים האחוריות של הארנב התורם, בערך 1 ס מ עמוקה. הקפד לשמור בעצב פועל במסגרת groove מוחשי לאורך עצם הירך.
הערה: VX2 טריים inoculates 88% מהנושאים בהצלחה בזמן VX2 מוקפאים ומופשרים הוא רק מוצלח 33% של הזמן19.
התראה: הגידול VX2 יגדל במהירות. תופעות הלוואי עשוי לציין התקדמות הגידול הם: גדל קצב נשימה, עייפות, ירידה בערנות, ו/או שינויים התנהגותיים (למשל, תוקפנות יוצאת דופן). כתוצאה מכך, ההמלצות הן כדי לפקח על החיות מקרוב וכדי לתכנן לקציר הגידול בתוך שבועיים לאחר חיסון.
2. VX2 הגפיים האחוריות הגידול והקציר
הערה: בהנחה חיסון מוצלח, צריך להיות מוחשי גולה הגידול (3\u20124 ס מ) במקום ההזרקה בתוך 2 שבועות. בדרך כלל, גולה זו יהיה מוחשי בסביבות 1 בשבוע; עם זאת, עדיף לתת את הגידול לגדול כדי לאפשר לאיסוף רקמות מספיקות. בדרך כלל, גולה זה יהיה המשרד המתועב, מוגבה מעל הרמה של השריר. אם
- ימשש את האזור חוסנו ב 2 שבועות של חיסון. אם הגידול לא מזוהה ב 2 שבועות, בצע שוב את שלב 1. ראה איור 1.
הערה: הנוכחות של הגידול יכול גם להיות מוערך באמצעות אולטרסאונד. ואילו היו אין מחקרים כדי להעריך את ההבדל בין מדדי צמיחה הגידול כאשר הופץ במלאי קפוא לעומת מניות טריים, זה היה הניסיון שלנו שגדלה הגידול במלאי קפוא מעט לאט יותר, יהיה לזיהוי אחרי המניות טריים נגד חלק. בכל מקרה, אחת מהשיטות אמור להניב גידול harvestable על ידי 2 שבועות. - הכינו את התורם הגידול של הגפיים האחוריות לקציר הגידול. עזים ומתנגד הארנבת עם 45 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 5 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים. המתת חסד עם מנה (IV) תוך ורידי של סודיום פנטוברביטל העולה על 390 מ"ג/ק"ג.
- לאחר יש כבר מורדמים הארנב, להתחיל לקצור את הגידול על-ידי הסרת הרקמה עורית ו התת-עורית המכסים גולה הגידול באמצעות אזמל עם להב משנה גודל החוקר שיראה לנכון. ראה איור 2.
- לאחר הגידול גולה זוהתה בתוך השריר הגפיים האחוריות, להסיר את הגידול en bloc באמצעות לאכסדרות רחב שוליים. בשביל זה, לחתוך את הנקודות המצורף tendinous בקצות לקרע, של השריר ולאחר מכן מעקב הלהב האזמל לאורך העצם שמתחת. קטיעות הדגימה explanted לחשוף את הגידול הקפסולה ואת ליבה נמק. ראו איור 3.
הערה: הגידול VX2 יש גרעין מאוד נמק. הקפד להשתמש עיניים נאות הגנה אחרים ציוד מגן אישי בעת הקטיף הגידול, מאז כל נזק הקפסולה הגידול יכול לגרום הוצאה בלחץ גבוה של פסולת נמק. - לגרד בעדינות את ליבת נמק עם חפץ קהה (למשל מלקחיים, ועוצרי דימום) כדי לנקות את הגידול. זה אמור לאפשר כאחראית של הקפסולה הגידול, נקודת המעבר בין כמוסה שריר שמסביב. ראה איור 4.
- מאת הדוגמא, הקציר כמה חתיכות של גידול בערך 1\u20122 מ מ3 מיד לאחסן אותם בתוך כוס המכילה מלח סטרילית בטמפרטורת החדר.
הערה: דגימות הגידול אלה ישמש להשתלה intrahepatic עוקבות. - מקום הגידול שנותרו בצלחת פטרי סטריליות, רוחצים את זה עם בינוני (DMEM ששינה הנשר Dulbecco). אם שכזו נשמרת קר על קרח, זה יכול להישמר לטיפול עד 2\u20123 h מאוחר יותר.
3. גידול בכבד ההשתלה באמצעות פתיחת בטן
- להכין את הארנב הנמען פתיחת בטן. עזים ומתנגד הארנב נמען באמצעות 45 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 5 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים עבור אינדוקציה ואחריו צנרור ותחזוקה עם 1% - 3% איזופלוריין כפי הצורך. כאשר הארנב הוא מורדם, לגלח את האתר כירורגית בעזרת קוצץ שיער. לנקות את אזור החתך באמצעות שטיפת triplicate עם betadine לשפשף, 70% אתנול פתרון, והפתרון betadine, לעטוף את הבטן בצורה סטרילית כירורגי.
- באמצעות #15-להב, ליזום את פתיחת בטן על ידי ביצוע חתך קטן קו האמצע האנכי דרך עורו של הארנב החל הסרעפת. זה צריך להיות palpated בקלות, נוטה להיות בערך בגודל של פני אמריקאי. ראה איור 5.
- לשקף את העור ולזהות לינאה אלבה. זה צריך להיות להקה לבנה רעיוני של רקמות שנסע נלסון האמצע. השתמש עמום כדי לחצות לינאה אלבה ולחשוף את הצפק. ראה איור 6.
הערה: הצפק מזוהה בקלות מאז זה להיות ישירות המכסים המעי הגס, אשר ניתן לראות לנוע עם נשימה.
התראה: הצפק נוטה להיות חסיד אל המעי כבסיס עקב מתח. באמצעות פגיעת לנתח לינאה אלבה מסייעת להפיג את הסיכון של ניקוב המעי הגס המשמש כבסיס. - ברגע הצפק חשוף, לנתח בזהירות דרך כניסה חלל הצפק. עכשיו ניתן לזהות את הכבד. כדי לנווט טוב יותר את חלל הבטן, להרחיב את קו האמצע החתך 1\u20122 ס מ נלסון דרך העור, השרירים, הצפק.
הערה: הרחבת קו האמצע החתך יכול בקלות ובבטחה להיעשות על-ידי הוספת בקפידה עוצר דימום מעוקל לחלל הצפק עם קצה מעוגל הפונה באופן שטחי לכיוון הצפק. לאחר מכן לפתוח את עוצר דימום מעט, להשתמש בלהב חמודות הרקמה בין שתי הזרועות עוצר דימום. - לזהות האונה השמאלית של הכבד על מנת לבחור אתר להשתלה הגידול. האונה השמאלית היא infero-לרוחב כדי האונה המדיאלי אשר יושב האמצע.
- לפני מנסים לצייר את הכבד את כל המקום הצפק, למקם פיסת יבשה גאזה ההיבט נחות של החתך.
הערה: הגזה תספק של משטח חסיד להניח את הכבד על בניסיון למנוע את היציבה בחזרה לתוך הבטן. - באמצעות מלקחיים atraumatic או פיסת גזה רטוב על האצבעות, בזהירות לצייר האונה השמאלית של הכבד מתוך הבטן דרך החתך, תניח על הגזה יבש להציב קודם לכן. ראה איור 7.
התראה: הקפסולה הכבד הוא רגיש והוא יכול בקלות קרע. זה חיוני כדי להיות עדין בעת טיפול איבר זה כדי למנוע דימום דרכים, שטפי דם בכבד, ו/או hemoperitoneum בסופו של דבר.
הערה: בדרך כלל, הכבד יצהיר עצמה מבחינה ויזואלית עם כניסתו של חלל הצפק; עם זאת, אם בטן הארנב נפוחה, הכבד יכול להיות דחף cranially למראית עין. אם זה המקרה, הרם בעדינות לקיר הבטן באמצעות בדיקה בוטה. בתרחיש זה, הכבד נוטה לדבוק ההיבט הגחון של הסרעפת עקב מתח נפרד בקפידה רבה את הכבד באמצעות בדיקה בוטה, זה צריך לנתק. Atraumatic מלקחיים להשתמש כדי למשוך את הכבד. - בשלב זה, להכין את רקמת הגידול השרשה ומניחים פיסת גזה רטוב על הכבד כדי להגן עליו.
- בחר קטע3 מ"מ 1\u20122 של רקמת הגידול שנוצר במהלך שלב 2.6 להשתלה לתוך הכבד. ראה איור 8.
- באמצעות #11-להב, לנקב רקמת הכבד בזווית של 45 מעלות ביצוע כיס עמוק 0.5 ס מ, מטפל לא לחדור את ההיבט הגבי של הקפסולה בכבד. להשאיר את הלהב במקום לאחר ביצוע הניקוב. ראה איור 9.
- הרם בעדינות את הלהב כיוון הגחון כדי ליצור כיס קטן במיטה בכבד. תירה את הגידול באמצעות מלקחיים, למקם את החתיכה הגידול בכיס, ואז מוציא את הסכין.
הערה: ניתן להסיר את הלהב לפני הוספת היצירה הגידול, אולם, הכבד ידמם, זה ניתן להסתיר את החדירה ולכן קשה לזהות.
התראה: הקפד למזער מגע של הגידול עם כל מבנה אחר כדי למנוע גידול לא מכוונת זריעה. זה יכול להמנע גם על-ידי הגדרת הצידה כל הכלים המשמשים כדי לסייע עם ההשתלה לאחר מכן. - בשלב זה, מניחים חתיכת סוכן hemostatic, כגון ג'ל קצף מעל הכיס הגידול כדי לקדם את hemostasis וכדי למנוע הוצאה של היצירה הגידול.
- להחזיר הכבד אל הבטן, וברגע hemostasis הוא אישר.
- קרוב לקיר הבטן עם 3-0 polydioxanone תפר על מחט להתחדד באמצעות פשוטה רציפה לתפור ולסגור את העור עם התפרים 910 polyglactin 4-0 על מחט חיתוך באמצעות תפר רציף subcuticular.
התראה: בעת סגירת לקיר הבטן, תדאג שלא יגרמו נזק את omentum או מבנים אחרים המעי זריקה תפר.
הערה: בזמן הגידול הזה ייקח לפחות 2 שבועות להיות באופן מוחלט radiographically המאפשר זיהוי, זה מגיע בגודל של 1.5\u20122 ס מ קוטר אחת ב 3 שבועות של צמיחה. יש להיזהר לא לאפשר את הגידול הכבד לגדול מעבר 3.5\u20124 שבועות מאז הגידול יהוו exophytic של המוני ובתקיפות התפשטות מקומית.
4. VX2 הגידול ההשעיה הכנה
- מניחים מסננת מיקרומטר 40 לתוך הפה של שפופרת 50-mL פרופילן חרוט. באמצעות הגידול מהשלב 2.7, השתמש #15-להב לגרד את פני השטח של הגידול כדי לאסוף את הגידול קיימא ומניחים את שערות אלו לתוך מסננת.
- לשטוף את הגידול קיימא מהציפורניים שלו כדי למצוא דרך מסננת באמצעות DMEM, ואז centrifuge את הצינור פרופילן ב 1600 סיבובים במשך 8 דקות.
- בתום לצנטריפוגה, להסיר את תגובת שיקוע וזורקים אותו. לאחר מכן להוסיף methylcellulose לבלוק התאים הנותרים ביחס נפח של 1:1.
- להזריק ההשעייה לתוך ארנב תורם האיבר הינד בעקבות צעדים 1.3\u20121.4. למקם את המתלים הנותרים 1 מ"ל aliquots צינורות קריוגני ולהקפיא אותן בחנקן נוזלי לשימוש מאוחר יותר.
5. angiographic ניצול VX2 גידול בכבד
- הכינו את הארנב כפי שמתואר בשלב 3.1.
- ימשש את הקצב הירך במפשעה. כאשר החריץ זוהתה, עושים 2\u20123 ס מ ליניארי חתך לאורך החריץ. ראה איור 10.
- באמצעות עמום, אתר ולחץ לבודד את הצרור הירך המכיל את עורק הירך עורק, עצב. ראה איור 11.
- שוב, השתמש עמום כדי להפריד בין עורק הירך לבין שאר מבני הצרור ולבודד את העורק על גבי ידית ומהדקים. ראה איור 12.
- בעזרת ערכת introducer 3-צרפתית, לנצל את הטכניקה Seldinger כדי לקבל גישה עם מחט. הוספת guidewire ולהסיר את המחט כדי להתקדם מהנרתיק 3-צרפתית לתוך הכלי. ראה איור 13.
זהירות: הימנעו משימוש בכוח מופרז בקידום נדן 3-צרפתית, התוצאה יכולה להיות חיתוך של עורק הירך. - תחת fluoroscopic והכוונה באמצעות קטטר, guidewire, iohexol חדות הסוכן, בחר עבור המטען צליאק – בדרך כלל ממוקם ברמת טי12 — ואז לקדם הקטטר לתוך עורק הכבד השמאלי דרך המשותף הכבד ונכון הכבד.
- בשלב זה, לנהל את הסוכן של בחירה דרך הקטטר. פעם הסוכן מנוהלת, להסיר את הצנתר.
- באמצעות תפרים משי 3-0, מאתרים ומפסיקים את עורק הירך הציר הקרוב, יש את נקודת הכניסה של נדן. יש להקפיד להדק את הקשר proximal כדי נדן כפי זה נסוגה כדי למנוע דימום.
- סגירת החתך במפשעה עם התפרים 910 polyglactin 4-0 על מחט חיתוך באמצעות תפר subcuticular.
- לשמור על תקן שלאחר הניתוח צג והטיפול בבעלי חיים שחזור. קס, necropsy לפי הצורך באמצעות טכניקות סטנדרטי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
כאשר מסתכלים על איור 1, ברור כי quadricep של הארנב הוא מוגדל. בנוסף, מספר גושים דיסקרטית קטן, בדרך כלל מתאם עם הגידול דרך fascia, גלויים. בעת מישוש, האיבר מוזרק אמור להופיע יותר האיבר שאינם המוזרק. אם חוקר דורשת אבטחת מוחלטים יותר נוכחות הגידול, אולטראסאונד הדמיה ניתן לזהות את הגידול בתוך השריר. אם הגידול לא מזוהה, האיבר הינד צריך להיות מחדש הזריק עם השעיה תאים סרטניים.
על מנת לאשר גישה שהצליחו כלי דם, דם חזרה לתוך נדן הוא ציין על השאיפה כפי שניתן לראות באיור 13D. אם גישה לכלי הדם היה לא מוצלח, השאיפה ניסיון תשואות אוויר נדן או להציג בהתנגדות משמעותית בעת משיכת הבוכנה של המזרק.
לצמיחה גידול בכבד, קיימות שתי דרכים כדי לאשר הפצת מוצלחת: angiographically ו- necropsy. אוגרי נתונים, זיהוי של הגידול עלולה להתרחש מיד, כמו במקרה של איור 14A שבו הגידול שואבת אספקת הדם ישירות מן עורק הכבד נפוץ. זה עשוי גם לקחת זמן במקרים בהם הגידול לרוחב כמו במקרה של איור 14D. אם הגידול לא גלויות לאחר ההזרקה של ניגוד לעורק הכבד נפוץ, החוקר לנסות להזריק חדות לתוך הכבד הימני ושמאלה העורקים על מנת לשפר את הסיכויים של הדגשת את הגידול. זה עשוי גם לסייע לחפש העורקים aberrant נסיעה רוחבית כלפי הקצה הדיסטלי של הכבד, כפי שניתן לראות באיור 14C. על necropsy, הגידול צריך להיות גלויות כפי שניתן לראות באיור 15 ב (השווה להבין 15A).
איור 1: ארנב הינד האיבר. גילח ארנב הגפיים האחוריות עם המונית. מצביע על הגידול. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: נחשף איבר הינד. האיבר אותו כפי שמוצג באיור1 עם עודפי עור לידי חשיפת שטח גדול של hypervascularity ושינויי צבע שונה מזו לשריר שמסביב המייצג את המיקום של הגידול (קו מנוקד לבן). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3: הגידול הוסר en bloc , שנחצה באמצעו. (א) הגידול ושרירים שמסביב הוסר en bloc. (B) הגידול כבר נחצה כדי לחשוף את הסיבה קיר (חץ) וממשקי נמק. תהליך הגידול ניתן לראות שני חצאים, כמו גם יש שרידים נמק. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4: גידול כמוסה. ראשי חץ מציינות חתיכה של הגידול (T), אשר תחום של שרירים סמוכים (ז) הקפסולה הגידול (קו מקווקו לבן). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5: חשוף תהליך מצאתי. העור והשרירים הבסיסית יש כבר בא לידי ביטוי כדי לאפשר ויזואליזציה של תהליך מצאתי (חץ שחור), בטן (חץ לבן). כוכב לבן מציין את הכיוון הגולגולת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 6: לינאה אלבה. Fascia והעור שמעליה יש כבר בא לידי ביטוי כדי לאפשר את החזיית לינאה אלבה (חץ שחור) פועל בכיוון הגולגולת כדי סימטרית. אזור זה הוא avascular ומספק עבור אובדן דם גישה חופשית של המרחב הצפק. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 7: אונת הכבד מחוץ צפק. תמונה זו מציגה האונה (lobe) הכבד היה בעדינות שחולצו מן המרחב הצפק והניח על פיסת גזה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 8: גידול שלאחר מעובד חתיכה להשתלה. חתיכה של הגידול מעובד לגודל המתאים להשתלה להציב הטיפ של #11-להב עבור קנה מידה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 9: יצירת כיס בכבד להשתלה הגידול. להב 11 # מוכנס לעומק המתאים באונה חילוץ של הכבד. זה ייצור בגודל מתאים מנוקב עבור ההשתלה של היצירה הגידול של איור 8. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 10: הירך groove ואת החתך הראשוני. (א) מישוש של האיבר הינד מאפשר הדמיה של החריץ הירך (קו מנוקד לבן). (B) הראשוני החתך האיבר הינד שנעשו לאורך החריץ הירך. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 11: זיהוי של החבילה הירך. עמום של החתך הראשוני מגלה וריד הירך (חץ שחור). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 12: ניתוח צרור הירך ובידוד של עורק הירך. (א) דיסקציה של הקיבוץ הירך מאפשרת לנו להבחין בנפרד (משמאל לימין) וריד הירך (FV) בעורק הירך (FA), עצב הירך (FN). (B) בעורק הירך מבודדת על ידית ומהדקים. שים לב שהעמודה הדם ומאפשר הבחנה בין העצב הירך. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 13: גישה לכלי הדם. (א) guidewire (G) הוא מתקדם לתוך עורק הירך (FA) דרך המחט גישה (N) אשר בעבר הוכנס לתוך עורק הירך. (B) , נדן (S) ו מרחיב (D) מתקדמים מעל guidewire (G) לתוך עורק הירך (FA). (ג) נדן (S), מרחיב מתקדמים במלואו לתוך עורק הירך (FA) עד ה-hub נדן. (ד) נדן מאובטח עם משי לאחר שאת רוצה. ואת guidewire הוסרו. השאיפה התשואות דם (חץ שחור) נדן. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 14: Angiographic הדמיה של סרטן הכבד. (א) קצה הקטטר (חץ לבן) אספקת ניגוד ישירות לתוך העורק האכלה הגידול (כוכב לבן). (B) קטטר עצה (חץ לבן) אספקת ניגודיות דיסטלי עורק הכבד השמאלי ואת ספיגת ניגוד בינונית על ידי גידול לרוחב (כוכב לבן). (ג) עוד יותר חדות הזרקה לתוך הגידול מ B הוכחת בעורק סוטה (קו לבן) נוסע מן הקטטר (חץ לבן) לגידול (כוכב לבן). (ד) הגידול מ B לאחר עוד יותר חדות ספיגת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 15: ארנב הכבד. (א) כבד בריא ארנב מציג השמאלי המדיאלי האונה (כוכב לבן) המכסים האונה השמאלית לרוחב (כוכב שחור). (B) ארנב כבד עם גידול הכבד מפותחת (חץ לבן). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
השלב הקריטי הראשון המתודולוגיה הגידול VX2 היא הפצת מוצלחת של הגידול בתוך האיבר האחוריות של ארנבת התורם. עיין בפסקה הראשונה בסעיף "נציג תוצאות" לקבלת מידע נוסף על שלב זה.
השלב הקריטי הבא זה להבטיח כי הקפסולה הגידול קיימא מזוהים כהלכה. לא רק זה יהיה צורך להכנה ההשעיה הגידול, אלא חשוב גם לבחירה ולהעברה של יצירת גידול חתיכות להשתלה הכבד. להבחנה בין הגידול קיימא שנשאר מסומן באיור4. אם דגימת הרקמות שגוי הוא שרט במהלך השעיה הכנה, הפצת הגפיים האחוריות עוקבות ייכשל. אם הדבר יתרחש במהלך ההשתלה הכבד, הגידול בכבד לא יתרחש. זו לא תהיה נראית לעין עד מסתמים.
במהלך תהליך ההשתלה הכבד, כדאי לשים לב כאשר אתם ניגשים האונה השמאלית של הכבד. לעיתים קרובות, אם הכבד הוא בולט לעין בעת הזנת של הצפק, זה למעשה האונה המדיאלי של הכבד, מפעילי אתה צופה. השרשה לתוך האונה המדיאלי של הכבד מציג קומץ של בעיות לשימוש angiographic. הראשון הוא קשר אנטומי של האונה המדיאלי עם עמוד השדרה. גידול באונה המדיאלי ניתן לעיתים קרובות להיות מעוות על ידי עמוד השדרה על fluoroscopy מקשה על הטיפול של הגידול ואישור. בנוסף, העורק gastroduodenal קשורה לעיתים קרובות יותר להערכת הספקת האונה המדיאלי. זה מגביר את הסיכון של חסימת כלי דם-יעד של המעיים, יכול שעשויה להוביל איסכמיה/אוטם במעי ומוות אפשרי של החיה. כאמור קודם לכן, זה לא יזכו בתור כישלון; עם זאת, זה צו טיפול נוסף במהלך ויזואליזציה וטיפול.
השלב הקריטי הסופי הוא גישה יציב ומצליח בעורק הירך. כפי שניתן לראות באיור12, עורק הירך הנשאים על גבי ידית להב ומהדקים. בעוד שזה נעשה בעיקר כדי לאפשר החוקר לבצע באופן מדויק יותר את טכניקת Seldinger20, זה צריך להישמר לאורך כל ההליך. זאת משום הסרת הידית האזמל ברגע כבר הציג מהנרתיק יכול לגרום תנועה לא מכוונת של נדן בתוך להערכת שמוביל נדן סגר נזק אפשרי של להערכת והמבנים הסמוכים. אם נדן הופך רופף במהלך ההליך, הפעילו לחץ על המסלול הירך proximal לאתר גישה כדי לעצור את הדימום, אז יכול להיות מאתרים את העורק. אל תנסו להכניס מחדש נדן. החוקר יכול לנסות לקבל גישה של עורק הירך contralateral.
בעוד הפלטפורמה VX2 הוא מודל חזקים בשימוש הנוכחי עבור המחקר translational בנוגע HCC, יש חסרונות הרלוונטיים. החולשה העיקרית של מודל זה הוא את מצב המחלה שלו, לא לחקות של HCC האנושי. הגידול המושרה אינו דומה באופן פתולוגי HCC אנושי ולא microenvironment parenchymal הכבד שאינו חולה איידס. יתר על כן, הגידול VX2 מראה נמק פנימי משמעותי, אשר אינו כולל מודל זה משימוש ללימודי יעילות הטיפול. כמה מודלים חלופיים כוללים מודלים מכרסמים כגון עכברים, חולדות, י מרמיטות או דגמים בעלי חיים גדולים כגון חזירים, פרימטים. 16 , 21 חלופות אלה כל מספקים שונים יתרונות וחסרונות; עם זאת, לדעתו של המחברים, ניצול angiographic, עלות יעילות, הארנב VX2 נשאר דומיננטי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
העבודה המתוארים בדו ח זה נתמך על ידי מענק מחקר של Guerbet LLC.
Acknowledgments
ברצוננו להודות צוות וטרינרי באוניברסיטת אילינוי - מעבדה המשאבים הביולוגיים של שיקגו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MethoCult (Methycellulose) | Stemcell Technologies | M3134 | |
| VX2 Cell Line | NCI | VX-2 | |
| 5 mL Syringe | BD | 309646 | |
| 16 G Needle | BD | 305197 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| Hair Clippers | Wahl | 41870-0438 | |
| Foam Insulated Box | Mr. Box Online | 10 x 10 x 4 | |
| Acepromazine | Henry Schein | 003845 | |
| Buprenorphine | Par | 42023-179-05 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 049755 | |
| Alcohol Pads | Covidien | 5033 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Xylazine | Akorn | 59399-110-20 | |
| Pentobarbital (Fatal-Plus) | Vortech | 9373 | |
| Sterile Petri Dish | Thermo Fisher | 172931 | |
| DMEM | Gibco | 11965092 | |
| Saline | Baxter | 2F7124 | |
| 15-Blade | Steris | 02-050-015 | |
| Scalpel Handle x 2 | Steris | 22-2381 | |
| Curved Hemostat | WPI | 501288 | |
| Atraumatic Forceps | Sklar | 52-5077 | |
| Gauze | Medline | NON21430LF | |
| 11-Blade | Steris | 02-050-011 | |
| Surgicel | Ethicon | 1951 | |
| 3-0 PDS / Taper | Ethicon | Z305H | |
| 4 - 0 Vicryl / Cutting | Ethicon | J392H | |
| 40 μm strainer | BD | 352340 | |
| 50 mL conical tube | Thermo Fisher | 339652 | |
| plastic pipette | Thomas Scientific | HS206371B | |
| Centrifuge | Sorvall | 75004240 | |
| 1.40 mL Tubes (Internal Thread) | Micronic | MP32131-Z20 | |
| 3-F VSI Micro-HV Introducer Kit | Vascular Solutions | Custom Order (P15180391) | |
| .018 45° angle glidewire | Terumo | RG*GA1818SA | |
| Direxion bern-shape microcatheter | Boston Scientific | M001195230 | |
| Omnipaque | GE | Y510 |
References
- Rous, P., Beard, J. W. The Progression To Carcinoma of Virus-Induced Rabbit Papillomas (Shope). The Journal of Experimental Medicine. 62 (4), 523-548 (1935).
- Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. The Journal of Experimental Medicine. 71 (6), 813-838 (1940).
- Galasko, C. S. B., Muckle, D. S.
- Maruyama, H., et al. Sonographic shift of hypervascular liver tumor on blood pool harmonic images with definity: Time-related changes of contrast-enhanced appearance in rabbit VX2 tumor under extra-low acoustic power. European Journal of Radiology. 56 (1), 60-65 (2005).
- Horkan, C., et al. Radiofrequency Ablation: Effect of Pharmacologic Modulation of Hepatic and Renal Blood Flow on Coagulation Diameter in a VX2 Tumor Model. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 15 (3), 269-274 (2004).
- Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), 1-8 (2016).
- Goldberg, S. N., Gazelle, G. S., Compton, C. C., Mueller, P. R., McLoud, T. C. Radio-frequency tissue ablation of VX2 tumor nodules in the rabbit lung. Academic Radiology. 3 (11), 929-935 (1996).
- Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18 (3), 411-418 (2007).
- Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: A pictorial primer and "how to" guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20 (4), 335-340 (2014).
- Xia, X., et al. Intra-arterial interleukin-12 gene delivery combined with chemoembolization: Anti-tumor effect in a rabbit hepatocellular carcinoma (HCC) model. Acta Radiologica. 54 (6), 684-689 (2013).
- Gaba, R. C., et al. Ethiodized oil uptake does not predict doxorubicin drug delivery after chemoembolization in VX2 liver tumors. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23 (2), 265-273 (2012).
- Choi, Y. H., et al. Novel Intraarterial Therapy for Liver Cancer Using Ethylbromopyruvate Dissolved in an Iodized Oil. Academic Radiology. 18 (4), 471-478 (2011).
- Ma, H. L., Xu, Y. F., Qi, X. R., Maitani, Y., Nagai, T. Superparamagnetic iron oxide nanoparticles stabilized by alginate: Pharmacokinetics, tissue distribution, and applications in detecting liver cancers. International Journal of Pharmaceutics. 354 (1-2), 217-226 (2008).
- Wang, D., et al. Liver tumors: Monitoring embolization in rabbits with VX2 tumors -Transcatheter intraarterial first-pass perfusion MR imaging. Radiology. 245 (1), 130-139 (2007).
- Bimonte, S., et al. Radio-frequency ablation-based studies on VX2rabbit models for HCC treatment. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), (2016).
- Gaba, R., Obeid, M., Khabbaz, R., Garcia, K., Schachtschneider, K. Translational Animal Models for Liver Cancer. American Journal of Interventional Radiology. 2 (2), 1-8 (2018).
- Kuszyk, B. S., et al. Local tumor recurrence following hepatic cryoablation: radiologic-histopathologic correlation in a rabbit model. Radiology. 217 (2), 477-486 (2000).
- Geschwind, J., et al. Chemoembolization of Liver Tumor in a Rabbit Model Assessment of Tumor Cell Death with Diffusion-Weighted MR Imaging and Histologic Analysis. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 11 (10), 1245-1255 (2000).
- Virmani, S., et al. Comparison of Two Different Methods for Inoculating VX2 Tumors in Rabbit Livers and Hind Limbs. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (6), 931-936 (2008).
- Seldinger, S. I. Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography: A new technique. Acta Radiologica. 49 (SUPPL 434), 47-52 (2008).
- Schook, L. B., et al. A genetic porcine model of cancer. PLoS One. 10 (7), e0128864 (2015).
