Summary
والهدف من هذه المادة توفير تمهيدي لتطوير واستخدام نموذج أرنب سرطان VX2 لسرطان الكبد.
Abstract
ورم VX2 الأرنب نموذج حيوانية المستخدمة عادة للبحوث متعدية الجنسيات فيما يتعلق بسرطانه الخلية الكبدية (HCC) في مجال "الأشعة التداخلية". ويستخدم هذا النموذج المتحولة الخلايا الحرشفية التي يتم نشرها بسهولة وبشكل موثوق في العضلات الهيكلية من الأرانب المانحة لزرع الحصاد و allograft في نهاية المطاف في الكبد من السذاجة المستلمين. سرعة ينمو هذا الاختلاس الورم داخل كبد الأرانب المتلقية في ورم أنجيوجرافيكالي شخصية تتميز بنواة نخرية محاطة بكبسولة هايبرفاسكولار قابلة للحياة. الحجم الفعلي لتشريح الأرنب غير كافية لتيسير الأجهزة والأوعية الدموية يسمح بتطبيق واختبار مختلف التقنيات التداخلية. وعلى الرغم من هذه الفوائد، هناك ندرة في الموارد التقنية بمثابة إشارة ملموسة للباحثين العاملين مع النموذج. وهنا، نقدم مخطط بصرية شاملة للجوانب التقنية للتنمية والنمو، ونشر، واستخدام angiographic من طراز الورم VX2 أرنب للاستخدام من قبل المبتدئين والباحثين ذوي الخبرة على حد سواء.
Introduction
نموذج الورم VX2 أرنب لعبت دوراً في علاج الأورام التجريبية منذ تطويره في عام 19351،2. هذا الورم هو التي يسببها فيروس المتحولة الخلايا الحرشفية تتميز هايبرفاسكولاريتي، والنمو السريع، ونشر سهلة في الهيكل العظمى والعضلات3،4. وفي حين استخدمت نموذج الورم الأرنب VX2 للتحقيق في عدد كبير من أنواع السرطان5،6،،من78؛ تركز هذه الورقة هو سرطان الكبد9.
وغرض الأسلوب الموصوفة هو تقديم نموذج لسرطان الكبد الأولية، أو سرطانه الخلية الكبدية (HCC)، التي يمكن أن يستخدمها "الأشعة التداخلية" للبحوث متعدية الجنسيات. يمكن استخدامه لدراسات الحرائك الدوائية والعلاجية التحقيقات والجر أسلوب اختبار10،11،،من1213،،من1415.
الطريقة بالتفصيل هنا غلة مزايا متعددة على نماذج أخرى داخل نفس المجال مثل نماذج القوارض مثل الفئران، الفئران، ووودتشوكس، أو نماذج أكبر مثل الرئيسات16. إحدى الفوائد الرئيسية هي نمو الورم السريع والموثوق بها التي يسمح للباحثين بإنشاء خط ورم نشط في غضون شهر من أطرافهم هند أول نشر17. بالإضافة إلى ذلك، يحتوي هذا الورم واضحة الرؤية سونوجرافيك وهامش هايبرفاسكولار الذي يسمح لكل من ترانسارتيريال لوكوريجيونال العلاجات والعلاجات الجر. وأخيراً، والأهم من ذلك، يسمح حجم المفرج أرنب استخدام مجدية وسهلة من الناحية التقنية للأجهزة والأوعية الدموية18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ويتبع البروتوكول التالي جميع المتطلبات والمبادئ التوجيهية التي أقرتها جامعة إلينوي-شيكاغو. أنه تم استعراض وموافقة المحلية رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة قبل التنفيذ.
1-VX2 أطرافهم هند الورم التنمية
- شراء خط خلية الورم VX2 من الوطنية سرطان معهد شعبة لتشخيص مرض السرطان العلاج وعلاج الورم/الخلية خط المستودع.
ملاحظة: في هذا الوقت، يمكن العثور على كتالوج النظام على الرابط التالي: https://dtp.cancer.gov/repositories/. - إعداد تعليق خلية للحقن، ضع المتوسطة العينة و methylcellulose VX2 المجمدة في ماء فاتر حتى أنها قد تحسنت.
- نضح مل 0.5\u20121 من تعليق خلية المذابة وحجم متساوية من المتوسطة methylcellulose المذابة في محقن 5 مل.
ملاحظة: قد يساعد استخدام إبرة ز 21 أو 22 لنضح تعليق خلية وابرة قياس أكبر لنضح المتوسطة methylcellulose. ضع الحقن على الجليد.
- نضح مل 0.5\u20121 من تعليق خلية المذابة وحجم متساوية من المتوسطة methylcellulose المذابة في محقن 5 مل.
- تعد الجهة المانحة الورم أطرافهم هند أرنب لتطعيم تعليق خلية، بدءاً بالتخدير باستخدام أسيبرومازيني 1 مغ/كغ والبوبرينورفين 0.02 مغ/كغ تعطي عضليا. يحلق في موقع التلقيح (أطرافهم هند) مع لوس أنجليس كليبرز ونظيفة حلق مع وكيل القائم على الكحول أو اليود.
ملاحظة: ميلوكسيكام يمكن أن تعطي بجرعة مقدارها 0.2 مغ/كغ تحت الجلد للتسكين. فرو أرنب من الصعب أن يحلق. من المستحسن أن الباحث بأداء مسارات متعددة، تركز أولاً على إزالة الجزء الأكبر من الفراء ثم الضغط على لوس أنجليس كليبرز ضد الجلد وتسير ضد التيار. - إرفاق إبرة ز 16 حقنه 5 مل تحتوي على تعليق خلية وحقن 1 مل التعليق في بطن العضلات أطرافهم هند الأرنب المانحين، تقريبا 1 سم عمق. من المؤكد أن حراسة العصب الوركي قيد التشغيل ضمن أخدود واضح على طول عظم الفخذ.
ملاحظة: إينوكولاتيس VX2 جديدة بنجاح 88% من المواضيع حين VX2 المجمدة والمذابة فقط نجاح 33% من الساعة19.
تنبيه: الورم VX2 سوف تنمو بسرعة. الآثار الجانبية التي قد لاحظت كما تقدم الورم: زيادة معدل التنفس والخمول وانخفاض اليقظة، التغيرات السلوكية (مثلاً، العدوانية غير عادية). ونتيجة لذلك، هي توصيات لمراقبة الحيوانات عن كثب والتخطيط للحصاد ورم في غضون أسبوعين بعد التلقيح.
2-VX2 أطرافهم هند نمو الورم والحصاد
ملاحظة: افتراض تلقيح ناجحة، يجب أن يكون هناك ملموس العقيدات الورم (3\u20124 سم) في موقع الحقن في غضون أسابيع 2. عادة، هذه العقيدات سيكون ملموسا حوالي أسبوع. ومع ذلك، فمن الأفضل السماح للورم ينمو للسماح لجمع الأنسجة كافية. عادة، تكون هذه العقيدات مرتفعة فوق مستوى عضلة مدورة والراسخ. إذا كان
- جس منطقة الملقحين في 2 أسابيع من التطعيم. إذا تم الكشف عن أي نمو الورم في 2 أسابيع، تنفيذ الخطوة 1 مرة أخرى. انظر الشكل 1.
ملاحظة: وجود ورم يمكن أيضا تقييم عبر الموجات فوق الصوتية. بينما كانت هناك أي دراسات لتقييم الفرق في مقاييس نمو الورم عند نشرها من الأوراق المالية المجمدة بالمقارنة مع الأسهم الطازجة، لقد كانت تجربتنا أن ينمو الورم الأرصدة المجمدة أبطأ قليلاً وسيتم كشفها بعد مخزونها الطازجة إطار مكافحة. بغض النظر، أما الأسلوب ينبغي أن تسفر عن وجود ورم يمكن قبل أسبوعين. - تعد الجهة المانحة الورم أطرافهم هند للحصاد الورم. تخدير الأرنب مع xylazine الكيتامين و 5 ملغ/كغ 45 مغ/كغ. Euthanize بجرعة (رابعا) عن طريق الحقن الوريدي من الصوديوم بينتوباربيتال تتجاوز 390 ملغ/كغ.
- بمجرد قد تم euthanized الأرنب، يبدأ الحصاد الورم عن طريق إزالة الأنسجة الجلدية وتحت الجلد التي تغمر العقيدات الورم باستخدام مشرط مع بليد حجم أيهما تراه مناسباً الباحث. انظر الشكل 2.
- مرة واحدة وقد تم تحديد العقيدات الورم داخل العضلات أطرافهم هند، إزالة الورم كتلة باستخدام هوامش واسعة المنحنية الخطوط. لذلك، خفض النقاط مرفق تيندينوس في نهايات الدانية والبعيدة العضلات ومن ثم تتبع شفرة المبضع على طول العظم الأساسي. تقسم العينة اكسبلانتيد تعريض الورم الكبسولة وكور نخرية. انظر الشكل 3.
ملاحظة: قد الورم VX2 نواة نخرية عالية. تأكد من استخدام حماية العين السليمة وغيرها من معدات الحماية الشخصية عند الحصاد الورم، حيث يمكن أن يؤدي إلى أي ضرر يلحق بالكبسولة الورم في إخراج الضغط العالي من الحطام نخرية. - بلطف كشط الأساسية نخرية مع أداة غير حادة (مثل الملقط، هيموستاتس) لتنظيف الورم. يجب أن يسمح هذا لتصور أفضل من الكبسولة الورم ونقطة التحول بين الكبسولة والعضلات المحيطة بها. انظر الشكل 4.
- من هذه العينة، حصاد عدة قطع من ورم 1\u20122 مم تقريبا3 وتخزينها مباشرة في كوب يحتوي على درجة حرارة الغرفة عقيمة المالحة.
ملاحظة: سيتم استخدام هذه العينات الورم لغرس أحياناً اللاحقة. - مكان الورم المتبقية في طبق بتري معقم ويستحم فإنه مع المتوسطة (دميم "تعديل النسر" دولبيكو). إذا كان يتم الاحتفاظ هذه العينة الباردة على الجليد، أنه يمكن الحفاظ على التعامل مع ما يصل إلى 2\u20123 ح في وقت لاحق.
3. زرع الورم الكبد عن طريق فتح البطن
- إعداد الأرنب المتلقية لفتح البطن. تخدير الأرنب المستلم باستخدام الكيتامين 45 مغ/كغ وإكسيلازيني 5 ملغ/كغ لتحريض تليها تنبيب والصيانة مع % 1-إيسوفلوراني 3% كاللازمة. عندما يتم تخديره الأرنب، يحلق الموقع الجراحي باستخدام مقص الشعر. تنظيف منطقة شق استخدام الغسيل ثلاث مع فرك تدين والحل الإيثانول 70% وحل تدين ومن ثني البطن بطريقة جراحية معقمة.
- استخدام #15-شفرة، الشروع في فتح البطن بإجراء شق عمودي إلى أسفل خط الوسط صغيرة عن طريق الجلد أرنب بدءاً من عملية الرهابه. هذا ينبغي أن يكون جس بسهولة ويميل إلى أن يكون تقريبا حجم بيني الأمريكية. انظر الشكل 5.
- يعكس الجلد والتعرف لينيا ألبا. وينبغي أن تعكس عصابة بيضاء من الأنسجة السفر إينفيريورلي في خط الوسط. استخدم تشريح صريحا لاجتياز لينيا ألبا وفضح الصفاق. انظر الشكل 6.
ملاحظة: الصفاق يتم التعرف عليها بسهولة نظراً لأنها سوف تكون مباشرة تغمر الأمعاء، التي يمكن رؤيتها تتحرك مع التنفس.
تنبيه: الصفاق تميل إلى أن تكون ملتصقة بالامعاء الكامنة بسبب التوتر السطحي. استخدام صدمات حادة إلى تشريح لينيا ألبا يساعد على تبديد خطر تثقيب الأمعاء الكامنة. - حالما يتم كشفها الصفاق، تشريح بعناية من خلال دخول التجويف الصفاقى. ويمكن الآن تحديد الكبد. لتحسين التنقل الفضاء البطن، تمديد سم 1\u20122 شق خط الوسط إينفيريورلي عن طريق الجلد والعضلات، والصفاق.
ملاحظة: تمديد شق خط الوسط يمكن بسهولة وأمان القيام به عن طريق إدراج بعناية هيموستات منحنية في الفضاء البريتوني مع طرف منحنى تواجه ظاهرياً نحو الصفاق. ثم افتح هيموستات قليلاً واستخدام شفرة للطيف الأنسجة بين اثنين من الأسلحة هيموستات. - تحديد الفص الأيسر من الكبد من أجل تحديد موقع لغرس الورم. الفص الأيسر إينفيرو الجانبية للفص الآنسي الذي يجلس في خط الوسط.
- قبل محاولة لرسم الكبد نفاد مساحة البريتوني، ضع قطعة جافة من الشاش في الجانب السفلي من الشق.
ملاحظة: سوف توفر الشاش سطح ملتصقة على إرساء الكبد لمنعها من التراجع إلى الوراء في البطن. - استخدام الملقط أتروماتيك أو قطعة من الشاش الرطب على الأصابع، رسم الفص الأيسر من الكبد من البطن من خلال الشق بعناية والاستلقاء على شاش الجافة التي وضعت في وقت سابق. انظر الشكل 7.
تنبيه: الكبسولة الكبد حساسة ويمكن بسهولة تمزق. من المهم أن يكون لطيف عند التعامل مع هذا الجهاز لمنع التسييل الحافظة وكدمات الكبد، و/أو هيموبيريتونيوم في نهاية المطاف.
ملاحظة: عادة، الكبد وسوف تعلن نفسها بصريا عند دخول الفضاء البريتوني؛ ومع ذلك، إذا كان يتم منتفخة المعدة للأرنب، الكبد يمكن أن يدفع cranially بعيداً عن الأنظار. إذا كان هذا هو الحال، بلطف رفع جدار البطن باستخدام مجس كليلة. في هذا السيناريو، الكبد يميل إلى الانضمام إلى الجانب البطني للحجاب الحاجز بسبب التوتر السطحي بعناية منفصلة في الكبد باستخدام مجس كليلة وأنه ينبغي فصل. ثم استخدم الملقط أتروماتيك لاستخلاص الكبد. - عند هذه النقطة، يعد ورم الأنسجة لغرس وضع قطعة من الشاش الرطب على الكبد لحمايتها.
- حدد قطعة 1\u201223 مم من ورم الأنسجة التي تم إنشاؤها أثناء الخطوة 2.6 لغرس في الكبد. انظر الشكل 8.
- استخدام #11-شفرة، ثقب في أنسجة الكبد بزاوية 45 درجة مما يجعل جيب عميق 0.5 سم، مع الحرص على عدم اختراق الجانب الظهرية الكبسولة الكبد. ترك بليد في المكان بعد الثقب. انظر الشكل 9.
- أرفع الشفرة برفق في اتجاه البطني لخلق جيب صغير في السرير الكبد. تأخذ قطعة الورم باستخدام الملقط، ضع قطعة ورم في هذا الجيب ثم قم بإزالة الشفرة.
ملاحظة: يمكن إزالة الشفرة قبل إدراج قطعة الورم، بيد سوف تنزف الكبد وهذا يمكن أن يحجب موقع الثقب مما يجعل من الصعب تحديد.
تنبيه: تأكد من تقليل الاتصال للورم مع أي هياكل أخرى لمنع بذر الورم غير مقصود. يمكن تجنب هذا أيضا بتخصيص أي أدوات تستخدم للمساعدة في غرس بعد ذلك. - عند هذه النقطة، ضع قطعة من عامل مرقئ, مثل هلام الرغوة، على جيب الورم لتعزيز الأرقاء ومنع قذف قطعة الورم.
- عودة الكبد إلى البطن، مجرد تأكيد الأرقاء.
- إغلاق جدار البطن مع 3-0 خياطة بوليديوكسانوني في إبرة تفتق بسيط مستمر باستخدام الإبرة وإغلاق الجلد بخياطة الجروح 910 بوليجلاكتين 4-0 في إبرة قطع استخدام غرزة سوبكوتيكولار المستمر.
تنبيه: عند إغلاق جدار البطن، رعاية لا للتلف في الثرب أو غيرها من الهياكل الأمعاء في رمي خياطة الجروح.
ملاحظة: بينما سيستغرق هذا الورم يمكن التعرف عليها نهائياً راديوجرافيكالي ما لا يقل عن 2 أسابيع، فإنه يصل حجم قطره سم 1.5\u20122 في 3 أسابيع نمو. احرص على عدم السماح للورم الكبدي تنمو 3.5\u20124 الأسابيع الماضية حيث ستشكل الورم اكسوفيتيك انتشار الدمار وقوة محلياً.
4-VX2 الورم إعداد تعليق
- وضع مصفاة 40 ميكرومتر في مصب أنبوب 50 مل البروبيلين مخروطية الشكل. استخدام الورم من الخطوة 2.7، استخدام #15-شفرة كشط سطح الورم لجمع الورم قابلة للبقاء ووضع هذه الكشاطه إلى المصفاة.
- أغسل كشاطه الورم قابلة للتطبيق من خلال مصفاة استخدام دميم وثم الطرد المركزي الأنبوب البروبيلين 1600 لفة في الدقيقة لمدة 8 دقائق.
- بعد اكتمال أجهزة الطرد المركزي إزالة المادة طافية وتجاهل ذلك. قم بإضافة ميثيلسيلولوسي إلى كتلة الخلايا المتبقية بنسبة حجمية 1:1.
- حقن هذا التعليق في أرنب مانحة أطرافهم هند بعد 1.3\u20121.4 الخطوات. ضع تعليق المتبقية إلى مختبرين 1 مل في الأنابيب المبردة وتجميدها في نيتروجين سائل لاستخدامها في وقت لاحق.
5-أنجيوجرافيك استخدام VX2 ورم في الكبد
- إعداد الأرنب كما هو موضح في الخطوة 3، 1.
- جس الاخدود الفخذ في الفخذ. عندما تم التعرف على الاخدود، جعل شق خطية سم 2\u20123 على طول الاخدود. انظر الشكل 10.
- استخدام تشريح كليلة، تحديد وعزل فخذي الحزمة التي تحتوي على فخذي الوريد والشريان والعصب. انظر الشكل 11.
- مرة أخرى، استخدام تشريح غير حادة لفصل شريان فخذي من بقية الهياكل في الرزمة وعزل الشريان فوق مقبض مشرط. انظر الشكل 12.
- مع مجموعة مقدم 3-الفرنسية، الاستفادة من تقنية Seldinger للوصول بإبرة. أدخل جويديويري وإزالة الإبرة للنهوض غمد 3-الفرنسية إلى السفينة. انظر الشكل 13.
تحذير: تجنب استخدام القوة المفرطة في النهوض غمد 3-الفرنسية، كما يمكن أن ينتج عن هذا ترانسيكشن شريان فخذي. - تحت إرشاد الفلوري واستخدام القسطرة، جويديويري، وعامل تباين iohexol، حدد الجذع الزلاقي – يقع عادة على مستوى T12 – وثم تقدم القسطرة في الشريان الكبدي الأيسر عبر المشتركة الكبد والسليم الكبد.
- عند هذه النقطة، إدارة وكيل للاختيار عن طريق القسطرة. بمجرد إدارته الوكيل، قم بإزالة القسطرة.
- استخدام خياطة الحرير 3-0، سد شريان فخذي بروكسيمالي وديستالي إلى نقطة الإدراج من غمده. من المؤكد أن تشديد عقده الدانية إلى غمده كما يتم سحبه لمنع النزيف.
- إغلاق شق الفخذ مع خياطة الجروح 910 بوليجلاكتين 4-0 في إبرة قطع استخدام غرزة سوبكوتيكولار.
- الحفاظ على معيار الانتعاش الحيوان مراقبة والرعاية بعد العمليات الجراحية. تنفيذ القتل الرحيم ونيكروبسي حسب الحاجة باستخدام التقنيات القياسية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
عند النظر إلى الشكل 1، فمن الواضح أن كوادريسيب الأرنب هو الموسع. بالإضافة إلى ذلك، متعددة العقيدات الصغيرة المنفصلة، ربط عادة مع نمو الورم عن طريق اللفافة، مرئية. عند ملامسة، يجب أن تظهر أطرافهم حقن من أطرافهم غير مدخلة. إذا كان باحث يتطلب تأكيد نهائي أكثر من وجود الورم، يمكن استخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية لتحديد الورم جزءا لا يتجزأ من العضلات. إذا لم يتم الكشف عن وجود ورم، ينبغي إعادة حقن مع تعليق خلية ورم أطرافهم هند.
من أجل تأكيد نجاح الوصول إلى الأوعية الدموية، يلاحظ الدم العودة إلى غمده في التطلع كما يتضح في الشكل 13D. إذا كان الوصول إلى الأوعية الدموية بنجاح، سوف تسفر عن الهواء في الغمد الطموح محاولة أو يقدم مع مقاومة كبيرة عند سحب المكبس للمحاقن.
لنمو الورم الكبد، هناك طريقتان لتأكيد نجاح نشر: أنجيوجرافيكالي وفي نيكروبسي. تحديد الورم في الأوعية، قد تحدث مباشرة كما الحال في الرقم 14A حيث يرسم الورم إمدادات الدم مباشرة من الشريان الكبدي الشائعة. قد يستغرق بعض الوقت أيضا في الحالات التي يكون فيها الورم الجانبية كما الحال في الشكل 14. إذا لم يكن الورم العيان بعد حقن تباين في الشريان الكبدي الشائعة، يجب محاولة الباحث حقن التباين في الشرايين اليسار واليمين الكبد بغية تحسين فرص لتسليط الضوء على الورم. أنها قد تساعد أيضا للبحث عن الشرايين الشاذة السفر أفقياً نحو الحافة البعيدة من الكبد كما هو مبين في الشكل 14. في نيكروبسي، ينبغي أن يكون الورم العيان كما هو مبين في الشكل 15 باء (مقارنة الرقم 15 (أ)).
رقم 1: الأرنب هند أطرافهم. حلق أطرافهم هند أرنب مع الإرشادي الشامل لنمو الورم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: تتعرض أطرافهم هند. الجزء نفسه كما هو موضح الشكل1 مع تغمر الجلد يعكس كشف مساحة كبيرة من هايبرفاسكولاريتي وتلون متميزة من العضلات المحيطة تمثل مكان الورم (الخط المنقط أبيض). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: إزالة كتلة الورم وجزئين. (أ) إزالة كتلةالورم والعضلات المحيطة بها. (ب) قد تم جزئين الورم تكشف عن جدار الحافظة (رؤوس) وكور نخرية. يمكن النظر إلى عملية الورم في كل من نصفي، فضلا عن بعض الحطام نخرية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: كبسولة الورم. رؤوس الأسهم تدل على قطعة من الورم (T)، التي رسمتها الكبسولة الورم (الخط الأبيض المتقطع) من العضلات المجاورة (M). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5: تتعرض العملية الرهابه. قد انعكست الجلد والعضلات الأساسية للسماح للتصور عملية الرهابه (السهم الأسود)، والقناة الهضمية (السهم الأبيض). النجم الأبيض يدل على اتجاه الجمجمة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 6: ألبا لينيا. السطحية من الجلد واللفافة قد انعكست على السماح للتصور لينيا ألبا (السهم الأسود) يعمل في اتجاه الجمجمة إلى والذيلية. هذا المجال هو أفاسكولار، ويوفر للدم-فقدان حرية الوصول للفضاء البريتوني. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 7: فص كبد خارج الصفاق. تظهر هذه الصورة فص الكبد الذي كان يستخرج من الفضاء البريتوني بلطف وتوضع على قطعة من الشاش. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
8 الشكل: قطعة الورم بعد معالجتها لغرس. وضع قطعة من الورم المجهزة إلى الحجم المناسب لغرس بجوار غيض من #11-شفرة للمقياس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 9: إنشاء جيب في الكبد لغرس الورم. يتم إدراج #11--بليد إلى عمق المناسبة في الفص المستخرجة من الكبد. سيتم إنشاء هذا حجم مناسب بوكد لغرس قطعة الورم من الرقم 8. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 10: الاخدود الفخذ وشق الأولية. (أ) جس أطرافهم هند يسمح للتصور للاخدود الفخذ (الخط المنقط أبيض). (ب) الأولى شق في أطرافهم هند أدلى على طول الاخدود الفخذ. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 11: تحديد حزمة فخذي. تشريح حادة لشق الأولية يكشف الوريد الفخذي (السهم الأسود). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 12: تشريح حزمة فخذي والعزلة من شريان فخذي. (أ) تشريح لحزمة فخذي يسمح لنا بالتمييز على حدة (من اليسار إلى اليمين) الوريد الفخذي (FV) وشريان فخذي (اتحاد كرة القدم) والعصب الفخذي (الجبهة الوطنية). (ب) شريان فخذي معزولة عن التعامل مع مشرط. ملاحظة عمود الدم مما يسمح للتمييز من العصب الفخذي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 13: الوصول إلى الأوعية الدموية. (أ) جويديويري (ز) متقدمة في شريان فخذي (اتحاد كرة القدم) من خلال الوصول الإبرة (N) التي أدرجت سابقا في شريان فخذي. (ب) غمد (S) وديلاتور (د) متقدمة على جويديويري (ز) في شريان فخذي (اتحاد كرة القدم). (ج) غمد (S) وديلاتور متقدمة تماما في شريان فخذي (اتحاد كرة القدم) ما يصل إلى لوحة الوصل غمد. (د) يتم تأمين غمد مع الحرير بعد أن أزيلت ديلاتور وجويديويري. تطلع غلة الدم (السهم الأسود) في غمده. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 14: تصوير Angiographic من ورم في الكبد. (أ) القسطرة نصيحة (السهم الأبيض) إيصال التباين مباشرة في الشريان تغذية الورم (نجمة بيضاء). (ب) القسطرة نصيحة (السهم الأبيض) تقديم التباين في الشريان الكبدي الأيسر القاصي والإقبال على النقيض معتدلة بورم الأفقي (نجمة بيضاء). (ج) مواصلة حقن التباين في الورم من ب إظهار شريان شاذة (الخط الأبيض) مسافراً من القسطرة (السهم الأبيض) للورم (نجمة بيضاء). (د) الورم من ب بعد زيادة الإقبال على النقيض. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 15: أرنب الكبد. (أ) كبد أرنب صحية تبين الفص الأيسر الآنسي (النجم الأبيض) تغمر الفص الجانبي الأيسر (النجوم السوداء). (ب) أرنب كبد مع وجود ورم كبدي نمواً كاملا (السهم الأبيض). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الخطوة الأولى الحاسمة في منهجية الورم VX2 نشر ناجحة لورم في أطرافهم هند أرنب المانحين. الرجوع إلى الفقرة الأولى في المقطع "النتائج ممثلة" لمزيد من المعلومات بشأن هذه الخطوة.
الخطوة الحاسمة التالية، هو ضمان أن الكبسولة الورم قابلة للتطبيق يتم التعرف بشكل صحيح. سوف يكون هذا ضروريا لإعداد تعليق الورم، بل من المهم أيضا لتحديد وتوليد قطع الورم لزرع الكبد. الفاصل بين الورم قابلة للاستمرار والأنسجة العضلية المحيطة هو مشروح في الشكل 4. إذا كان هو كشط عينة الأنسجة غير صحيحة أثناء إعداد تعليق، ستفشل إكثار اللاحقة هند أطرافهم. إذا كان هذا يحدث أثناء زرع الكبد، لن يحدث نمو الورم في الكبد. وهذا لن يكون واضح حتى الأوعية.
أثناء عملية زرع الكبد، ينبغي توخي الحذر عند الاقتراب من الفص الأيسر من الكبد. في كثير من الأحيان، إذا كان الكبد بادية للعيان عند دخول الصفاق، أنها فعلا الفص الآنسي الكبد التي تراقب المشغلين. غرس في الفص الآنسي الكبد يقدم عدد قليل من القضايا لاستخدام أنجيوجرافيك. الأول هو العلاقة التشريحية للفص الآنسي مع العمود الفقري. كثيرا ما يمكن أن يكون غموض ورم فص الآنسي بالعمود الفقري في التنظير صعوبة تأكيد وعلاج الورم. بالإضافة إلى ذلك، أكثر كثيرا ما يرتبط قصور الشريان مع المفرج إمداد الفص الآنسي. وهذا يزيد من خطر الانصمام غير المستهدفة من القناة الهضمية، ويمكن أن يؤدي إلى الاسكيمية/احتشاء الأمعاء واحتمال موت الحيوان. وكما ذكر آنفا، وهذا سوف لا يمكن اعتبار فشل؛ بيد أنها تستدعي المزيد من الرعاية أثناء التصور والعلاج.
الخطوة الحاسمة الأخيرة الوصول إلى شريان فخذي ناجحة ومستقرة. كما يتضح في الشكل 12، ينبغي أن يكون شريان فخذي معزولة فوق مقبض شفرة المبضع. حين يتم ذلك الغالب للسماح للباحث القيام بمزيد من الدقة تقنية Seldinger20، فإنه ينبغي الإبقاء على طوال فترة الإجراءات. هذا سبب إزالة مقبض مشرط مرة واحدة وقد أدخلت الغمد يمكن أن تسبب الحركة غير مقصودة من الغمد ضمن المفرج المؤدية إلى غمد ضرر انسداد وممكن المفرج والهياكل المحيطة بها. إذا يصبح فكها الغمد أثناء الإجراء، تطبيق الضغط في الاخدود الفخذ الدانية للوصول إلى الموقع من أجل وقف النزيف، ويمكن أن تكون متصلة الشريان ثم. لا تحاول إعادة إدراج الغمد. يمكن محاولة الباحث للوصول من شريان فخذي كونترالاتيرال.
بينما منصة VX2 نموذج قوي في الاستخدام الحالي للبحوث متعدية الجنسيات فيما يتعلق بالعقود، فإن أوجه القصور ذات الصلة. الضعف الأساسي لهذا النموذج أنه في حالة المرض لا تقليد للعقود البشرية. الورم الناجم عن ليست مرضية مماثلة للعقود البشرية لا المكروية متني الكبد غير cirrhotic. وعلاوة على ذلك، يظهر الورم VX2 نخر داخلية كبيرة، مما يستبعد هذا النموذج من استخدام الدراسات فعالية العلاج. بعض نماذج بديلة تشمل نماذج القوارض مثل الفئران والجرذان، ووودتشوكس أو نماذج الحيوانات الكبيرة مثل الخنازير والقرود. 16 , 21 تقديم هذه البدائل جميع مختلف المزايا والعيوب؛ ومع ذلك، في رأي المؤلفين، لاستخدام أنجيوجرافيك وفعالية التكلفة، يظل الأرنب VX2 المهيمنة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وأيد منحة بحثية من ذ جربة العمل المبينة في هذا التقرير.
Acknowledgments
ونود أن نعترف بموظفي الطب البيطري في جامعة إيلينوي-"مختبر" شيكاغو الموارد البيولوجية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MethoCult (Methycellulose) | Stemcell Technologies | M3134 | |
| VX2 Cell Line | NCI | VX-2 | |
| 5 mL Syringe | BD | 309646 | |
| 16 G Needle | BD | 305197 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| Hair Clippers | Wahl | 41870-0438 | |
| Foam Insulated Box | Mr. Box Online | 10 x 10 x 4 | |
| Acepromazine | Henry Schein | 003845 | |
| Buprenorphine | Par | 42023-179-05 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 049755 | |
| Alcohol Pads | Covidien | 5033 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Xylazine | Akorn | 59399-110-20 | |
| Pentobarbital (Fatal-Plus) | Vortech | 9373 | |
| Sterile Petri Dish | Thermo Fisher | 172931 | |
| DMEM | Gibco | 11965092 | |
| Saline | Baxter | 2F7124 | |
| 15-Blade | Steris | 02-050-015 | |
| Scalpel Handle x 2 | Steris | 22-2381 | |
| Curved Hemostat | WPI | 501288 | |
| Atraumatic Forceps | Sklar | 52-5077 | |
| Gauze | Medline | NON21430LF | |
| 11-Blade | Steris | 02-050-011 | |
| Surgicel | Ethicon | 1951 | |
| 3-0 PDS / Taper | Ethicon | Z305H | |
| 4 - 0 Vicryl / Cutting | Ethicon | J392H | |
| 40 μm strainer | BD | 352340 | |
| 50 mL conical tube | Thermo Fisher | 339652 | |
| plastic pipette | Thomas Scientific | HS206371B | |
| Centrifuge | Sorvall | 75004240 | |
| 1.40 mL Tubes (Internal Thread) | Micronic | MP32131-Z20 | |
| 3-F VSI Micro-HV Introducer Kit | Vascular Solutions | Custom Order (P15180391) | |
| .018 45° angle glidewire | Terumo | RG*GA1818SA | |
| Direxion bern-shape microcatheter | Boston Scientific | M001195230 | |
| Omnipaque | GE | Y510 |
References
- Rous, P., Beard, J. W. The Progression To Carcinoma of Virus-Induced Rabbit Papillomas (Shope). The Journal of Experimental Medicine. 62 (4), 523-548 (1935).
- Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. The Journal of Experimental Medicine. 71 (6), 813-838 (1940).
- Galasko, C. S. B., Muckle, D. S. Intrasarcolemmal proliferation of the vx2 carcinoma. British Journal of Cancer. 29 (1), 59-65 (1974).
- Maruyama, H., et al. Sonographic shift of hypervascular liver tumor on blood pool harmonic images with definity: Time-related changes of contrast-enhanced appearance in rabbit VX2 tumor under extra-low acoustic power. European Journal of Radiology. 56 (1), 60-65 (2005).
- Horkan, C., et al. Radiofrequency Ablation: Effect of Pharmacologic Modulation of Hepatic and Renal Blood Flow on Coagulation Diameter in a VX2 Tumor Model. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 15 (3), 269-274 (2004).
- Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), 1-8 (2016).
- Goldberg, S. N., Gazelle, G. S., Compton, C. C., Mueller, P. R., McLoud, T. C. Radio-frequency tissue ablation of VX2 tumor nodules in the rabbit lung. Academic Radiology. 3 (11), 929-935 (1996).
- Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18 (3), 411-418 (2007).
- Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: A pictorial primer and "how to" guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20 (4), 335-340 (2014).
- Xia, X., et al. Intra-arterial interleukin-12 gene delivery combined with chemoembolization: Anti-tumor effect in a rabbit hepatocellular carcinoma (HCC) model. Acta Radiologica. 54 (6), 684-689 (2013).
- Gaba, R. C., et al. Ethiodized oil uptake does not predict doxorubicin drug delivery after chemoembolization in VX2 liver tumors. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23 (2), 265-273 (2012).
- Choi, Y. H., et al. Novel Intraarterial Therapy for Liver Cancer Using Ethylbromopyruvate Dissolved in an Iodized Oil. Academic Radiology. 18 (4), 471-478 (2011).
- Ma, H. L., Xu, Y. F., Qi, X. R., Maitani, Y., Nagai, T. Superparamagnetic iron oxide nanoparticles stabilized by alginate: Pharmacokinetics, tissue distribution, and applications in detecting liver cancers. International Journal of Pharmaceutics. 354 (1-2), 217-226 (2008).
- Wang, D., et al. Liver tumors: Monitoring embolization in rabbits with VX2 tumors -Transcatheter intraarterial first-pass perfusion MR imaging. Radiology. 245 (1), 130-139 (2007).
- Bimonte, S., et al. Radio-frequency ablation-based studies on VX2rabbit models for HCC treatment. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), (2016).
- Gaba, R., Obeid, M., Khabbaz, R., Garcia, K., Schachtschneider, K. Translational Animal Models for Liver Cancer. American Journal of Interventional Radiology. 2 (2), 1-8 (2018).
- Kuszyk, B. S., et al. Local tumor recurrence following hepatic cryoablation: radiologic-histopathologic correlation in a rabbit model. Radiology. 217 (2), 477-486 (2000).
- Geschwind, J., et al. Chemoembolization of Liver Tumor in a Rabbit Model Assessment of Tumor Cell Death with Diffusion-Weighted MR Imaging and Histologic Analysis. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 11 (10), 1245-1255 (2000).
- Virmani, S., et al. Comparison of Two Different Methods for Inoculating VX2 Tumors in Rabbit Livers and Hind Limbs. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (6), 931-936 (2008).
- Seldinger, S. I. Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography: A new technique. Acta Radiologica. 49 (SUPPL 434), 47-52 (2008).
- Schook, L. B., et al. A genetic porcine model of cancer. PLoS One. 10 (7), e0128864 (2015).
