Summary
이 문서의 목표는 개발 및 간 암에 대 한 VX2 암 토끼 모델의 사용에 대 한 입문서를 제공 하는입니다.
Abstract
토끼 VX2 종양 간세포 암 (HCC) 중재 방사선과의 분야에 관한 조사에 변환에 대 한 일반적으로 활용 하는 동물 모델입니다. 이 모델은 쉽고 안정적으로 최종 수확 및 이식 이식 간으로 순진한 받는 사람에 대 한 기증자 토끼의 골격 근육에서 전파를 하다 편평 세포 암 종을 사용 합니다. 이 종양 이식 가능한 hypervascular 캡슐에 의해 포위 하는 괴 사 성 코어 특징 angiographically 식별 종양으로 받는 사람 토끼의 간 내에서 급속 하 게 성장. 토끼 해부학의 실제 크기는 혈관 계측 응용 프로그램에 대 한 허용 하 고 다양 한 중재 기법의 테스트를 용이 하 게 하기에 충분. 이러한 장점에도 불구 하 고 연구자는 모델 작업에 대 한 구체적인 기준으로 행동 기술 자원의 소수를 존재 합니다. 여기, 우리는 개발, 성장, 전파, 그리고 초보자와 경험이 풍부한 연구자 모두에 의해 사용 하기 위해 토끼 VX2 종양 모델의 angiographic 활용의 기술적 측면에 대 한 포괄적인 시각적 개요를 제시.
Introduction
토끼 VX2 종양 모델 19351,2의 개발 이후 실험 종양에서 역할을 담당해 왔습니다. 이 종양은는 바이러스 유도 하다 편평 세포 암 종 hypervascularity, 급속 한 성장, 및 골격 근육3,4에 쉽게 전파 특징. 토끼 VX2 종양 모델 다양 한 암5,6,,78;를 조사 하기 위해 사용 되었다 이 문서의 초점은 간 암9입니다.
설명 하는 방법의 목적은 기본 간 암, 또는 간세포 암 (HCC), 번역 상 연구에 대 한 중재 방사선에 의해 사용할 수 있는 모델을 제시 하는 것입니다. 그것은 pharmacokinetic 연구, 치료 조사 및 테스트10,11,12,13,,1415절제 방법 사용할 수 있습니다.
여기 상세한 메서드 생성, 쥐 같은 설치류 모델 등 같은 영역 내에서 다른 모델에 비해 여러 장점이 쥐, 및 woodchucks, 또는 대주교16같은 큰 모델. 주요 이점 중 하나는 첫 번째 뒷 다리 전파17개월 이내 활성 종양 라인을 설정 하는 연구를 수 있는 신속 하 고 신뢰할 수 있는 종양 성장 이다. 또한,이 종양 간단 sonographic 가시성 및 hypervascular 주변 transarterial locoregional 치료와 절제 치료 수 있다. 마지막으로, 그리고 가장 중요 한 것은, 토끼 맥 관 구조 크기 혈관 계측18의 가능 하 고 기술적으로 쉬운 사용을 허용합니다.
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Protocol
다음 프로토콜 다음과 모든 요구 사항 및 지침-일리노이의 대학에 의해 위임 된 시카고. 그것은 검토 하 고 실행 하기 전에 로컬에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회 승인.
1. VX2 뒷 다리 종양 개발
- 국립 암 연구소 사단의 암 치료 진단 및 치료 종양/셀 라인 저장소에서 VX2 종양 세포 라인을 조달.
참고:이 시점에서 주문 카탈로그에서 찾을 수 있습니다 다음 링크: https://dtp.cancer.gov/repositories/. - 그들은 해 동 때까지 세포 현 탁 액 분사를 준비 하려면 미지근한 물에 냉동된 VX2 샘플 및 스 매체를 놓습니다.
- 5 mL 주사기로 해 동된 세포 현 탁 액의 0.5\u20121 mL 및 해 동된 스 매체의 동일한 볼륨을 발음.
참고: 그것은 발음 셀 서 스 펜 션에 21 또는 22 G 바늘을 사용 하 여 더 큰 계기 바늘 스 중간 발음을 하는 데 도움이 있습니다. 얼음에 주사기를 놓습니다.
- 5 mL 주사기로 해 동된 세포 현 탁 액의 0.5\u20121 mL 및 해 동된 스 매체의 동일한 볼륨을 발음.
- 세포 현 탁 액, 1 mg/kg acepromazine 및 피하 주어진 0.02 mg/kg buprenorphine 사용 하 여 진정으로 시작의 접종에 대 한 뒷 다리 종양 기증자 토끼를 준비 합니다. 클리퍼 스와 함께 접종 사이트 (뒷 다리)를 면도 하 고 알코올 또는 요오드 기반 에이전트와 청소는 면도 있다.
참고: Meloxicam 주어질 수 있다 0.2 mg/kg의 복용량에 피하 진통에 대 한. 토끼 털은 면도 어렵다. 연구원 먼저 모피의 일괄 삭제 하 고 피부에 대 한가 위를 눌러 성미가에 초점을 맞추고 여러 개의 패스 수행 하는 것이 좋습니다. - 세포 현 탁 액을 포함 하는 5 mL 주사기에 16 G 바늘을 연결 하 고는 서 스 펜 션의 1 mL에 주입 기증자 토끼의 뒷 다리 근육의 배 약 1 cm 깊은. 좌 골 신경 대 퇴 골을 따라 만져 서 홈 내에서 실행을 감시 해야 합니다.
참고: 냉동 및 해 동 VX2 시간19의 성공적인 33%만 동안 신선한 VX2는 성공적으로 과목의 88%를 접종.
주의: VX2 종양은 빠르게 성장할 것 이다. 종양 진행으로 지적 될 수 있습니다: 증가 호흡 비율, 혼 수, 감소 경보, 또는 행동 변화 (예를 들어, 특이 한 공격). 따라서, 권고는 동물을 밀접 하 게 모니터링 하 고 접종 후 2 주 이내 종양 수확에 대 한 계획 이다.
2. VX2 뒷 다리 종양 성장과 수확
참고: 가정 성공적인 접종, 이어야 한다는 만져 서 2 주 이내 주사 사이트에서 (3\u20124 cm) 종양 결 절. 일반적으로,이 결 절 만져 서 1 주 것; 그러나, 충분 한 조직 컬렉션 수 있도록 성장 하는 종양에 게 낫다. 일반적으로,이 결 절 회사, indurated, 및 근육의 수준 보다 높은 것입니다. 경우
- 접종 2 주에 접종된 영역을 만져. 종양 성장이 감지 되 면 2 주, 1 단계를 다시 수행 합니다. 그림 1을 참조 하십시오.
참고: 종양의 존재도 초음파를 통해 평가 될 수 있습니다. 신선한 주식에 비해 냉동된 주식에서 전파 될 때 종양 성장 통계에 차이 평가 하기 위해 아무 연구 되었습니다, 그것 우리의 경험 냉동된 재고 종양 약간 느리게 성장 하 고 신선한 주식 후 감지 될 것 이다 카운터 부분입니다. 관계 없이, 방법 중 하나 2 주 harvestable 종양을 양보 한다. - 뒷 다리 종양 기증자 종양 수확 준비. 45 mg/kg 케 타 민 및 5 mg/kg xylazine와 토끼 anesthetize Sodium pentobarbital 390 mg/kg의 정 맥 (IV) 복용량 안락사.
- 토끼 안락사 되었습니다 일단 연구원 맞는 볼 어떤 크기 블레이드와 메스를 사용 하 여 종양 결 절 overlying 피부 및 피하 조직을 제거 하 여 종양을 수확 시작. 그림 2를 참조 하십시오.
- 일단 종양 결 절 뒷 다리 근육 내에서 식별 되는 종양 일괄적 넓은 곡선 여백을 사용 하 여 제거 합니다. 이것을 잘라 단 첨부 파일 포인트의 인접 하 고 원심 끝에는 근육 그리고 추적 기본 뼈 따라 메스 블레이드. 종양 캡슐과 괴 코어 노출 explanted 견본 이등분 그림 3을 참조 하십시오.
참고: VX2 종양 괴 사 성 높은 핵심이 있다. 이후 종양 캡슐에 어떤 손상을 회 저 성 파편의 높은 압력 방출 귀 착될 수 있다 종양, 수확 할 때 적절 한 눈 보호 및 다른 개인 보호 장비를 사용 해야 합니다. - 부드럽게 긁어 무딘 개체 (예: 겸 자, hemostats) 종양 청소와 괴 코어. 이 종양 캡슐의 캡슐과 주변 근육 사이 전환 포인트 더 나은 시각화에 대 한 허용 해야 합니다. 그림 4를 참조 하십시오.
- 이 샘플에서 종양의 여러 조각을 수확 약 1\u20122 m m3 즉시 실내 온도 멸 균 식 염 수를 포함 하는 컵에 보관.
참고: 이러한 종양 샘플 후속 intrahepatic 주입에 사용 됩니다. - 멸 균 페 트리 접시에 남아 있는 종양을 배치 하 고 그것에 게 Dulbecco의 수정이 글의 중간 (DMEM)와 함께 목욕. 이 표본 얼음 차가운 유지, h 2\u20123까지 나중에 처리 하기 위한 유지 수 있습니다.
3. 간 종양 이식 개복 술을 통해
- 개복 술에 대 한 받는 사람 토끼를 준비 합니다. Anesthetize 45 mg/kg 케 타 민 및 5 mg/kg xylazine를 사용 하 여 받는 사람 토끼 유도 삽 관 법 및 유지 보수 1%-3 %isoflurane 필요. 토끼 마 취 때 발기를 사용 하 여 수술 부위의 면도. Betadine 스크럽, 70% 에탄올 솔루션, betadine 솔루션, triplicate 세척을 사용 하 여 절 개 영역을 청소 하 고 메 마른 외과 패션에 복 부 드러 워 진.
- #15-블레이드를 사용 하 여, 칼 프로세스에서 시작 하는 토끼의 피부를 통해 작은 하향 세로 중간 절 개를 하 여는 개복 술을 시작 합니다. 이 쉽게 palpated 해야 하 고 미국 페니의 크기 될 하는 경향이 있다. 그림 5를 참조 하십시오.
- 피부를 반영 하 고 식별 된 교육 알바. 이 중간에 inferiorly 여행 조직의 반사 흰색 밴드 이어야 한다. 무뚝뚝한 절 개를 사용 하 여 통과 하는 교육 알바 복 노출. 그림 6을 참조 하십시오.
참고: 그것은 것입니다 수 직접 overlying 호흡으로 이동 볼 수 있다 창 자, 이후 복 식별 쉽게 됩니다.
주의: 복 경향이 있다 표면 장력으로 인해 기본 창에 부착. 무뚝뚝한 외상 해 부를 사용 하는 교육 알바 기본 창 꿰뚫기의 위험을 분산 하는 데 도움이. - 일단 복 노출은 신중 하 게 입력 하는 복 막 구멍에 그것을 통해 해 부. 간은 지금 식별할 수 있습니다. 더 나은 복 부 공간 탐색, 복 막, 피부, 근육, 통해 inferiorly 중간 절 개 1\u20122 cm을 확장.
참고: 중간 절 개를 확장 할 수 있습니다 쉽고 안전 하 게 신중 하 게 복 막 표면으로 향하도록 곡선된 팁과 복 막 공간 곡선된 hemostat를 삽입 하 여. 다음는 hemostat 약간 열고 사용 귀여운 블레이드는 hemostat의 두 팔 사이 조직. - 종양 이식에 대 한 사이트를 선택 하기 위해 간 좌 엽을 식별 합니다. 왼쪽된 엽 infero-측면에는 중간에 위치한 중간 엽 이다.
- 간 복 막 공간에서 무승부를 하기 전에 절 개의 열 등 한 부분에 거 즈의 건조 조각을 넣으십시오.
참고: 거 즈는 부착 표면 복 부에 다시 제거에서 그것을 방지 하기 위해 간을 제공할 것입니다. - 손가락에 atraumatic 집게 또는 젖은 거 즈의 조각 중 하나를 사용 하, 신중 하 게 절 개 통해 복 부의 간 좌 엽을 그릴 하 고 앞에 배치 하는 마른 거 즈에 누워. 그림 7을 참조 하십시오.
주의: 간 캡슐 민감한 이며 쉽게 파열 할 수 있다. Capsular 출혈, 간 멍이, 및 궁극적인 hemoperitoneum를 방지 하기 위해이 오르간을 처리할 때 부드러운 것이 중요 하다.
참고: 일반적으로, 간 선언 자체가 시각적으로 복 막 공간;를 입력 시 그러나, 토끼의 배가 팽창 하는 경우 간 밀릴 수 있다 cranially 보이지. 이 경우 부드럽게 무딘 프로브를 사용 하 여 복 벽을 들어올립니다. 이 시나리오에서 간 간 무딘 프로브를 사용 하 여 너무 신중 하 게 별도 표면 장력으로 인해 횡 경 막의 복 부 측면을 준수 하는 경향이 있다 하 고 분리 한다. 다음 atraumatic 집게를 사용 하 여 간 밖으로 그릴. - 이 시점에서, 종양 조직 이식에 대 한 준비 하 고 그것을 보호 하기 위해 간 젖은 거 즈의 조각 장소.
- 단계 2.6 이식에 대 한 간으로 생성 된 종양 조직의 1\u20122 mm3 조각을 선택 합니다. 그림 8을 참조 하십시오.
- #11-블레이드를 사용 하 여, 찔린 간 캡슐의 등 쪽 측면에 침투 하지 않도록 주의 복용 0.5 cm 깊은 주머니를 만드는 45 ° 각도로 간 조직 합니다. 장소에는 찔린 후 블레이드를 둡니다. 그림 9를 참조 하십시오.
- 부드럽게 간 침대에 작은 주머니를 만드는 복 부 방향으로 블레이드를 들어올립니다. 집게를 사용 하 여 종양 조각을, 종양 조각이이 주머니에 놓고 블레이드를 제거 합니다.
그러나 참고: 블레이드 종양 조각을 삽입 하기 전에 제거 될 수 있다,, 하 게 간 유혈 것 이다 하 고이 펑크 사이트 식별 하기 어려운 애매 한 수 있습니다.
주의: 의도 하지 않은 종양 뿌리기 방지 하기 위해 다른 구조와 종양의 접촉을 최소화 해야 합니다. 이것 또한 나중이 식을 지원 하기 위해 사용 되는 모든 도구를 따로 설정 하 여 피할 수 있습니다. - 이 시점에서, 종양 포켓 hemostasis 홍보 하 고 종양의 방출 방지 젤 거품 같은 hemostatic 에이전트의 조각 장소.
- 일단 hemostasis 확인 간 복 부를 반환 합니다.
- 3-0 polydioxanone 봉합 간단한 연속 사용 하는 테이퍼 바늘에 꿰 매 고 연속 subcuticular 스티치를 사용 하 여 절단 바늘에 4-0 polyglactin 910 봉합 피부와 복 부 벽을 닫습니다.
주의: 복 벽을 닫을 때 주의 하지는 omentum 봉합 던져 다른 장 구조를 손상.
참고:이 종양은 결정적으로 radiographically 식별 될 적어도 2 주를 걸릴 것입니다, 하는 동안 그것에 도달 1.5\u20122 cm 직경의 크기의 성장 3 주 합니다. 하지 이후 종양 질량 그리고 적극적으로 확산 로컬로 exophytic 형성할 것 이다 3.5\u20124 주 과거 성장 간 종양 수 있도록 주의 해야 합니다.
4. VX2 종양 정지 준비
- 프로필 렌 50 mL 원뿔 튜브의 입 속으로 40 µ m 여과기를 놓습니다. 2.7 단계에서 종양을 사용 하 여 가능한 종양을 수집 하 고 이러한 부스러기는 스 트레이너를 종양 표면 긁어 #15-블레이드를 사용 합니다.
- DMEM을 사용 하 여 거르는 통해 가능한 종양 부스러기를 세척 하 고 8 분 동안 1600 rpm에서 프로필 렌 튜브 원심.
- 원심 분리기를 완료 한 후에 상쾌한을 제거 하 고 그것을 폐기. 스 1:1 부피 비율로 나머지 셀 블록을 추가 합니다.
- 다음 단계 1.3\u20121.4 뒷 다리 기증자 토끼에이 정지를 삽입할. 극저온 튜브에 1 mL aliquots로 나머지 정지를 배치 하 고 나중 사용을 위해 액체 질소에 그들을 동결.
5. angiographic 활용 된 VX2 간 종양
- 3.1 단계에서 설명한 대로 토끼를 준비 합니다.
- 사 타 구니에 대 퇴 groove 만져 홈을 식별 하면 2\u20123 cm 선형 절 개를 따라 홈을 확인 합니다. 그림 10을 참조 하십시오.
- 무뚝뚝한 절 개를 사용 하 여 찾아서 대 퇴 정 맥, 동맥, 신경 포함 된 대 퇴 번들을 분리 합니다. 그림 11을 참조 하십시오.
- 다시, 무딘 해 부를 사용 하 여 번들에 구조의 나머지 부분에서 대 퇴 동맥을 분리 하 여 메스 핸들 위에 동맥을 분리. 그림 12를 참조 하십시오.
- 3 프랑스 중개자 키트와 함께 바늘으로 액세스 Seldinger 기술 활용. guidewire 넣고 그릇에 3-프랑스 칼 집 사전에 바늘을 제거 합니다. 그림 13을 참조 하십시오.
주의:이 대 퇴 동맥의 transection 발생할 수 3-프랑스 칼 집에 과도 한 무력을 사용 하지 마십시오. - Fluoroscopic 지도 및 카 테 터, guidewire, 및 iohexol 대비 에이전트를 사용 하 여에서 celiac 트렁크에 대 한 선택-T12 수준에 일반적으로 있는-고 다음 테 왼쪽된 간 동맥으로 간 하 고 적절 한 공통 통해 간.
- 이 시점에서 카 테 터를 통해 선택의 에이전트를 관리 합니다. 에이전트 관리는 카 테 테 르 제거.
- 3-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 선 대 퇴 동맥 proximally 고 distally 칼 집의 삽입 지점에. 출혈을 방지 하기 위해 철회로 칼 집에 인접 매듭을 강화 해야 합니다.
- Subcuticular 스티치를 사용 하 여 절단 바늘에 4-0 polyglactin 910 봉합 사 타 구니 절 개를 닫습니다.
- 표준 수술 관리 및 모니터 동물 복구를 유지 관리 합니다. 안락사를 수행 하 고 표준 기술을 사용 하 여 필요에 따라 necropsy.
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Representative Results
그림 1에서 볼 때, 그것은 분명 토끼의 quadricep 확대 됩니다. 또한, 일반적으로 근 막 통해 종양 성장 연관 여러 작은 개별 혹 볼 수 있습니다. 촉진, 시 주입된 사지 비 주입 사지 보다 나타납니다. 연구원 종양 존재의 더 확실 한 보증 하는 경우, 초음파 이미징 근육에 포함 된 종양을 식별 하기 위해 사용할 수 있습니다. 종양이 감지 되지 않으면 뒷 다리 종양 세포 현 탁 액으로 다시 주입 해야 합니다.
성공적인 혈관 접근을 확인, 칼 집에 반환 혈액 그림 13D에서 보듯이 포부에 관찰 된다. 혈관 접근에 성공 하면 미 포부 칼 집에서 공기를 얻을 것 이다 또는 주사기의 플런저를 당겨 하는 때 중요 한 저항으로 제시.
간 종양의 성장에 대 한 두 가지 성공적인 전파 확인: angiographically 및 검 시에. 제품은에 종양의 식별 발생할 수 있습니다 즉시 그림 14A 종양 직접 일반적인 간 동맥에서에서 혈액 공급을 그리는 경우입니다. 그것은 또한 종양이 경우 측면 그림 14D에 경우 시간이 좀 걸릴 수 있습니다. 일반적인 간 동맥에 대비의 주입 후 종양을 쉽게 표시 되지 않는 경우 연구원 강조 종양의 가능성을 개선 하기 위해 왼쪽 및 오른쪽 간 동맥에 주입 대비 시도 해야 합니다. 그것은 또한 탈 선 동맥 간 그림 14C에서 보듯이 원심 가장자리 쪽으로 옆으로 여행에 대 한 보고 도울 수 있습니다. 검 시에 종양 그림 15B (그림 15A비교)에서 보듯이 쉽게 표시 되어야 합니다.
그림 1: 토끼 뒷 다리 사지. 종양의 성장 질량 지표와 토끼 뒷 다리를 면도. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 뒷 다리 노출. 표시 된 그림1 overlying 피부와 같은 사지 반영 hypervascularity 및 변색 (흰색 점선) 종양의 위치를 나타내는 주변 근육에서의 큰 영역을 공개. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 종양 일괄적 제거 그리고 bisected. (A) 종양과 주변 근육 일괄적제거. (B) 종양 capsular 벽 (화살촉)과 괴 핵심을 bisected 되었습니다. 종양 과정 모두 반쪽으로 일부 회 저 성 파편에서 볼 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4: 종양 캡슐. 화살촉 종양 (T), 종양 캡슐 (흰색 점선)에 의해 인접 한 근육 (M)에서 delineated의 조각을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5: 칼 프로세스 노출. 피부와 기본 근육 칼 프로세스 (검은색 화살표) 및 용기 (흰색 화살표)의 시각화 수 있도록 반영 되었습니다. 화이트 스타 두개골 방향을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 6: 교육 알바. Overlying 피부와 근 막의 시각화 수 있도록 반영 되는 교육 알바 (검은색 화살표) 꼬리에 두개골 방향에서 실행. 이 지역은 avascular 이며 복 막 공간 혈액 손실 무료 액세스에 대 한 제공 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 7: 복 막 밖에 간 엽. 이 이미지는 부드럽게 복 막 공간에서 추출 하 고 거 즈의 조각에 배치 했다 간 엽을 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 8: 이식에 대 한 사후 처리 종양 조각. 이식에 대 한 적절 한 크기를 처리 하는 종양의 조각 옆에 팁의 #11-블레이드 규모에 대 한 배치. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 9: 간 종양 이식에 대 한 주머니 만들기. #11-블레이드 추출된 간 엽에 적절 한 깊이에 삽입 됩니다. 이 만들어집니다 적절 한 크기의 종양 조각 그림 8에서 이식에 대 한 pocked. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 10: 대 퇴 그루브와 초기 절 개. (A) 촉진 뒷 다리의 대 퇴 그루브 (흰색 점선)의 시각화에 대 한 허용. (B) 초기 뒷 다리 대 퇴 골 홈을 따라 만든 절 개. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 11: 대 퇴 번들의 Id. 초기 절 개의 무딘 해 부 대 퇴 정 맥을 (검은색 화살표)을 보여준다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 12: 대 퇴와 대 퇴 동맥의 절연의 해 부. (A) 퇴 번들의 해 부 (왼쪽에서 오른쪽) 개별적으로 구분 수 대 퇴 정 맥 (FV), 대 퇴 동맥 (FA), 그리고 대 퇴 신경 (FN). (B) 대 퇴 동맥 메스 핸들에 고립. 대 퇴 신경에서 구분에 대 한 허용 혈액 열 note 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 13: 혈관 접근. (A) guidewire (G) 대 퇴 동맥으로 삽입 이전 했다 액세스 바늘 (N)을 통해 대 퇴 동맥 (FA)로 고급 이다. (B) 덮개 (S)과 팽창 (D)는 고급 guidewire (G)을 통해 대 퇴 동맥 (FA)로. (C) 칼 집 (S) 및 팽창 고급 완전히 칼 허브까지 대 퇴 동맥 (FA)로입니다. (D) 칼은 보안 실크 팽창 및 guidewire 제거 후. 포부는 덮개에 혈액 (검은색 화살표)를 생성합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 14: 간 종양의 Angiographic 이미징. (A) 카 테 터 팁 (흰색 화살표) 종양 (화이트 스타)를 공급 하는 동맥에 직접 대조를 제공. (B) 카 테 터 팁 (흰색 화살표) 대비를 전달 하는 측면 종양 (화이트 스타)에 의해 원심 왼쪽된 간 동맥 및 중간 대비 통풍 관에. (C) 종양 (화이트 스타)를 탈 선 동맥 (흰색 선)가 카 테 터 (흰색 화살표)에서 여행을 보여주는 B에서 종양에 대비 주입을 더. (D) 종양 B에서 더 대비 통풍 관 후. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 15: 간 토끼. (A) 왼쪽된 중간 엽 (화이트 스타) 왼쪽된 측면 엽 (블랙 스타) overlying 보여주는 건강 한 토끼 간. (B) 완전히 개발 된 간장 종양 (흰색 화살표)와 함께 간 토끼는. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
VX2 종양 방법론에서 첫 번째 중요 한 단계는 기증자 토끼의 뒷 다리에 종양의 성공적인 전파입니다. 이 단계에 대 한 자세한 내용은 "대표 결과" 섹션에서 첫 번째 단락을 참조 하십시오.
다음 중요 한 단계는 가능한 종양 캡슐 올바르게 식별을 하도록 하 고 있다. 뿐만 아니라이 종양 정지 준비를 위해 필요한 것 그러나 그것은 또한 선택 하 고 생성 하는 종양 조각 간 이식에 대 한 중요 하다. 실행 가능한 종양과 주변 근육 조직 사이의 경계 그림 4에 주석을 답니다. 잘못 된 조직 샘플은 서 스 펜 션 준비 도중 긁힌 것, 이후 뒷 다리 전파 실패 합니다. 이럴 경우 간 이식 시, 간에서 종양의 성장 발생 하지 않습니다. 이 되지 않습니다 명백한 혈관까지.
간 이식 하는 동안 간 좌 엽에 접근 하는 때 배려를가지고 한다. 때때로, 복 막에 들어갈 때 간 예가 경우 연산자는 관찰 하는 간 실제로 중간 엽입니다. 간 내측 두 엽에 주입 소수를 angiographic 사용에 대 한 문제를 선물 한다. 첫 번째는 척추와 중간 엽의 해부학 관계 이다. 내측 두 엽 종양 확인 및 종양의 치료를 어렵게 fluoroscopy에 척추에 의해 종종 읽을 수 있습니다. 또한, gastroduodenal 동맥은 더 자주 관련 된 공급 하는 중간 엽 맥 관 구조와. 이 용기의 비 대상 색전술의 위험을 증가 하 고 잠재적으로 대 장 허 혈/경색과 동물의 가능한 죽음으로 이어질 수 있습니다. 앞에서 설명 했 듯이이 실패로; 자격이 되지 않습니다. 그러나, 그것은 시각화 및 처리 하는 동안 더 치료를 보증지 않습니다.
마지막 중요 한 단계는 성공 하 고 안정적인 대 퇴 동맥 액세스. 그림 12에서 보듯이 대 퇴 동맥 메스 블레이드 핸들 위에 격리 되어야 합니다. 동안 대부분 이렇게 Seldinger 기술20을 더 정확 하 게 수행 하는 연구원을 허용 하는 절차를 통해 유지 되어야 합니다. 이 때문에 일단 칼 집 도입 되었습니다 메스 핸들을 제거 맥 관 구조 칼 집의 맥 관 구조 및 주변 구조 폐색 및 가능한 손상으로 이끌어 내는 칼 집의 의도 하지 않은 동작을 발생할 수 있습니다. 칼 집 절차 동안 제거 된다, 출혈, 중지 하려면 액세스 사이트에 근 위 대 퇴 골 홈에 압력을 적용 하 고 동맥 출혈 다음 수 있습니다. 덮개를 재장착 하지 마십시오. 연구원 contralateral 대 퇴 동맥에서 액세스할 시도할 수 있습니다.
VX2 플랫폼 HCC에 관한 변환 연구에 대 한 현재 사용 강력한 모델은, 그것은 관련 된 단점에는. 이 모델의 주요 약점은 질병 상태는 인간의 HCC의 모방 하지 않습니다. 유도 된 종양은 병리학 인간의 HCC와 비슷한도 비 cirrhotic 간 parenchymal microenvironment 합니다. 또한, VX2 종양 치료 효능 연구에 대 한 사용에서이 모델을 제외 상당한 내부 괴를 보여줍니다. 일부 대체 모델 쥐, 쥐, 및 woodchucks 설치류 모델 또는 돼지 및 원숭이 등 큰 동물 모델을 포함합니다. 16 , 21 모든 이러한 대안 제공 서로 다른 장점과 단점; 그러나, angiographic 이용 및 비용 효능에 대 한 저자의 의견에서 VX2 토끼 지배 남아 있습니다.
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Disclosures
이 보고서에 묘사 된 작품 Guerbet LLC에서 연구 보조금에 의해 지원 되었다.
Acknowledgments
우리는 일리노이 대학-시카고의 생물 자원 실험실에서 수의 직원을 인정 하 고 싶습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MethoCult (Methycellulose) | Stemcell Technologies | M3134 | |
| VX2 Cell Line | NCI | VX-2 | |
| 5 mL Syringe | BD | 309646 | |
| 16 G Needle | BD | 305197 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| Hair Clippers | Wahl | 41870-0438 | |
| Foam Insulated Box | Mr. Box Online | 10 x 10 x 4 | |
| Acepromazine | Henry Schein | 003845 | |
| Buprenorphine | Par | 42023-179-05 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 049755 | |
| Alcohol Pads | Covidien | 5033 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Xylazine | Akorn | 59399-110-20 | |
| Pentobarbital (Fatal-Plus) | Vortech | 9373 | |
| Sterile Petri Dish | Thermo Fisher | 172931 | |
| DMEM | Gibco | 11965092 | |
| Saline | Baxter | 2F7124 | |
| 15-Blade | Steris | 02-050-015 | |
| Scalpel Handle x 2 | Steris | 22-2381 | |
| Curved Hemostat | WPI | 501288 | |
| Atraumatic Forceps | Sklar | 52-5077 | |
| Gauze | Medline | NON21430LF | |
| 11-Blade | Steris | 02-050-011 | |
| Surgicel | Ethicon | 1951 | |
| 3-0 PDS / Taper | Ethicon | Z305H | |
| 4 - 0 Vicryl / Cutting | Ethicon | J392H | |
| 40 μm strainer | BD | 352340 | |
| 50 mL conical tube | Thermo Fisher | 339652 | |
| plastic pipette | Thomas Scientific | HS206371B | |
| Centrifuge | Sorvall | 75004240 | |
| 1.40 mL Tubes (Internal Thread) | Micronic | MP32131-Z20 | |
| 3-F VSI Micro-HV Introducer Kit | Vascular Solutions | Custom Order (P15180391) | |
| .018 45° angle glidewire | Terumo | RG*GA1818SA | |
| Direxion bern-shape microcatheter | Boston Scientific | M001195230 | |
| Omnipaque | GE | Y510 |
References
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