Summary
Bu makalenin amacı kalkınma ve karaciğer kanseri için VX2 Karsinomu tavşan modeli kullanımını bir astar sağlamaktır.
Abstract
Tavşan VX2 hepatosellüler karsinom (HCC) girişimsel radyoloji alanında ilgili translasyonel araştırma için yaygın olarak kullanılan bir hayvan modeli tümördür. Bu model bir Anaplastik Skuamöz Hücre Karsinomu kolayca ve güvenle nihai hasat ve homogreft implantasyonu karaciğer içine saf alıcılar için donör tavşan iskelet kas yayılır kullanır. Bu tümör greft alıcı tavşan karaciğer içinde uygun hypervascular kapsül tarafından çevrili nekrotik bir çekirdek ile karakterize bir angiographically olarak tanımlanabilir tümör içine hızla büyür. Tavşan anatomisi fiziksel boyutunu uygulama için izin ve çeşitli girişimsel teknikleri test vasküler araçları kolaylaştırmak yeterlidir. Bu avantajlar rağmen bir model ile çalışan araştırmacılar için somut bir referans olarak hareket etmek teknik kaynaklar yetersizliği bulunmaktadır. Burada, biz geliştirme, büyüme, yayma ve Anjiyografik kullanımı acemi ve tecrübeli araştırmacılar hem için tavşan VX2 tümör modelinin teknik özellikleri için kapsamlı bir görsel taslak mevcut.
Introduction
Tavşan VX2 tümör model gelişimi 19351,2beri deneysel Onkoloji bir rol oynamıştır. Bu bir virüs kaynaklı Anaplastik skuamöz hücreli hypervascularity, hızlı büyüme ve kolay yayılma iskelet kas3,4ile karakterize karsinom tümördür. Tavşan VX2 tümör modeli çok sayıda kanser5,6,7,8araştırmak için kullanılan süre; Bu yazının odak karaciğer kanseri9' dur.
Açıklanan yöntemin amacı primer karaciğer kanseri veya girişimsel radyologlar tarafından translasyonel araştırma için kullanılabilir hepatosellüler karsinom (HCC), için bir model sunmaktır. Farmakokinetik çalışmaları, terapötik araştırmalar ve ablatif yöntemi10,11,12,13,14,15test için kullanılabilir.
Burada ayrıntılı yöntemi diğer modelleri fareler gibi kemirgen modelleri gibi aynı küre içinde birden çok avantajlar verimleri fareler ve dağ sıçanları veya daha büyük modelleri primatlar16gibi. Araştırmacılar ilk hind uzuv yayılma17bir ay içinde bir aktif tümör hattı kurmayı sağlayan hızlı ve güvenilir tümör büyüme birincil yararları biridir. Ayrıca, bu tümör basit ultrasonografik görünürlük ve transarterial lokal tedaviler ve ablatif tedaviler için izin veren bir hypervascular çevre var. Son olarak ve en önemlisi, tavşan damarlara boyutunu vasküler araçları18mümkün ve teknik olarak kolay kullanımı izin verir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Aşağıdaki iletişim kuralı tüm gereksinimleri ve University of Illinois - görevlendirilmiş yönergeleri Chicago izler. Bu gözden geçirildi ve yerel tarafından onaylı kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi önce yürütme.
1. VX2 Hind uzuv tümör gelişimi
- VX2 tümör hücre kültürünü Ulusal Kanser Enstitüsü Division, kanser tedavi teşhis ve tedavi tümör/hücre satırı deposu tedarik.
Not: Şu anda, aşağıdaki bağlantıdan sipariş kataloğu bulunabilir: https://dtp.cancer.gov/repositories/. - Enjeksiyon için hücre süspansiyon hazırlamak için onlar çözdürülen kadar donmuş VX2 örnek ve methylcellulose orta ılık suya koyun.
- 0.5\u20121 mL çözdürülen hücre süspansiyon ve çözülmüş methylcellulose orta eşit bir hacmi 5 mL şırınga Aspire edin.
Not: Hücre süspansiyon Aspire için 21 ya da 22 G iğne ve methylcellulose orta Aspire için daha büyük bir ölçüm iğne kullanmak için yardımcı olabilir. Şırıngaları buza koyun.
- 0.5\u20121 mL çözdürülen hücre süspansiyon ve çözülmüş methylcellulose orta eşit bir hacmi 5 mL şırınga Aspire edin.
- Arka bacak tümör donör tavşan hücre süspansiyon, 1 mg/kg acepromazine ve 0,02 mg/kg buprenorfin intramüsküler verilen kullanarak sedasyon ile başlayan, aşılama için hazır olun. Aşı Makinası (arka kol) makasları ile tıraş ve temiz tıraşlı bir alkol veya iyot tabanlı aracı ile vardır.
Not: Meloksikam 0.2 mg/kg doz subkutan analjezi için verilebilir. Tavşan kürk tıraş etmek zordur. Bu araştırmacı bir toplu kürk takas ve cilt karşı clippers basarak ve ters gidiyor ilk odaklanan birden çok geçiş yapmak tavsiye edilir. - 16 G iğne hücre süspansiyon içeren 5 mL şırınga ekleyin ve 1 mL süspansiyon arka bacak kas donör tavşan göbeğine kabaca 1 cm derin enjekte. Siyatik sinir uyluk boyunca elle tutulur bir oluk içinde çalışan korumak emin olun.
Not: yalnızca saat%1933 başarılı olsa da dondurulmuş ve çözülmüş VX2 taze VX2 başarıyla deneklerin % 88 inoculates.
Dikkat: VX2 tümör hızla büyüyecek. Yan etkileri, tümör ilerledikçe olarak kaydetti olabilir: solunum hızı, uyuşukluk, azalan uyanıklığı ve/veya davranış değişiklikleri (Örneğin, sıradışı saldırganlık) arttı. Sonuç olarak, hayvanları yakından izlemek için ve tümör hasat için aşı sonra iki hafta içinde planlamak için öneriler vardır.
2. VX2 Hind uzuv tümör büyüme ve hasat
Not: başarılı aşılama varsayarsak, orada-meli var olmak bir elle tutulur (3\u20124 cm) tümör nodül 2 hafta içinde enjeksiyon yerinde. Genellikle, bu nodül yaklaşık 1 hafta aşikar olacaktır; Ancak, tümör yeterli doku toplama için izin vermek için büyümeye izin iyidir. Genellikle, bu nodül sağlam, sertlesmis ve kas seviyesinin üzerinde yükseltilmiş olacaktır. Eğer
- İnoculated alan aşı üzerinden 2 hafta muayene et. Hiçbir tümör büyüme 2 haftalık algılanırsa, adım 1 yeniden uygulayın. Bkz: Şekil 1.
Not: Tümör varlığı da ultrason ile tespit edilebilir. Ne zaman taze stok karşılaştırıldığında donmuş stoktan yayılma tümör büyüme ölçümleri arasındaki farkı değerlendirmek için hiçbir çalışmaları olmuştur iken, donmuş hisse senedi tümör biraz daha yavaş büyür bizim deneyim oldu ve sonra onun taze stok tespit olacak Counter bölümü. Ne olursa olsun, her iki yöntem harvestable bir tümör tarafından 2 hafta verim. - Arka bacak tümör donör tümör hasat için hazırlayın. Tavşan ile 45 mg/kg ketamin ve 5 mg/kg xylazine anestezi. Sodyum Fentobarbital 390 mg/kg aşan bir intravenöz (IV) dozu ile ötenazi.
- Tavşan euthanized kez neşter araştırmacı uygun gördüğü bir hangi boyut bıçak kullanarak tümör nodül örten kutanöz ve subkutanöz doku kaldırarak tümör hasat başlar. Bkz: Şekil 2.
- Bir kez tümör nodül hind bacak kas içinde olduğu belirlendi, geniş eğrisel kenar boşluklarını kullanmak tümör en bloc çıkarın. Bu, proksimal ve distal ucunda tendinous ek puan uygun kas ve sonra izleme neşter bıçak boyunca temel kemik. Tümör kapsülü ve nekrotik çekirdek ortaya explanted numune bisect. Şekil 3' e bakın.
Not: Son derece nekrotik bir çekirdek VX2 tümör var. Tümör kapsülü herhangi bir hasar nekrotik enkaz yüksek basınç çýkartýlmasýný neden olabilir beri tümör, hasat zaman uygun göz koruma ve diğer kişisel koruyucu donanımları kullandığınızdan emin olun. - Yavaşça körelmiş (Örneğin forseps, hemostats) tümör temizlemek için nekrotik core kazı. Bu tümör kapsülü ve kapsül ve çevresindeki kas arasında geçiş noktası daha iyi görselleştirme için izin vermelidir. Bkz. Şekil 4.
- Bu örnek, tümör gibi birkaç hasat yaklaşık 1\u20122 mm3 ve hemen oda sıcaklığında steril serum fizyolojik içeren bir kaba depolayabilirsiniz.
Not: Bu tümör örnekler sonraki intrahepatic implantasyon için kullanılacaktır. - Kalan tümör steril Petri kabına yerleştirin ve Dulbecco'nın modifiye kartal Orta (DMEM) ile banyo. Bu örnek üzerinde buz soğuk tutuluyorsa, s 2\u20123 kadar daha sonra işleme için korunabilir.
3. karaciğer tümörü implantasyon laparotomi ile
- Alıcı tavşan laparotomi için hazırlayın. 45 mg/kg ketamin ve 5 mg/kg xylazine kullanarak alıcı tavşan anestezi indüksiyon ardından entübasyon ve bakım % 1-% 3 isoflurane olarak gerekli. Ne zaman tavşan anestezi, saç kesme makineleri kullanarak cerrahi sitesi tıraş. İneklemek yıkama betadin bodur, % 70 etanol çözüm, betadin kullanarak ve çözüm ile kesi alanı temizleyin ve karın bir steril cerrahi moda asmak.
- #15-bıçak kullanarak, laparotomi xiphoid işleminden başlayarak tavşan deri yoluyla bir küçük aşağı doğru dikey ensizyon yaparak başlatmak. Bu kolayca palpe ve kabaca bir Amerikan kuruş boyutunu olma eğilimindedir. Bkz. Şekil 5.
- Cilt yansıtmak ve tanımlamak linea alba. Bu doku kasılır orta hat içinde seyahat bir yansıtıcı beyaz grup olmalıdır. Künt diseksiyon çapraz kullanmak linea alba ve karın zarını maruz. Bkz. Şekil 6.
Not: doğrudan solunum ile hareket görülebilir bağırsak örten bu yana Karın zarını kolayca tanımlanır.
Dikkat: Karın zarını olma eğilimindedir yüzey gerilimi nedeniyle temel bağırsak yapışık. Künt travma incelemek için kullanarak linea alba temel bağırsak perfore riski dağıtmak için yardımcı olur. - Karın zarını maruz sonra dikkatli bir şekilde bu periton boşluğuna girmek için incelemek. Karaciğer şimdi tespit edilebilir. Karın boşluğu daha iyi gezinmek için orta hat kesi 1\u20122 cm kasılır deri, kas ve karın zarını aracılığıyla genişletmek.
Not: ensizyon uzanan kolayca ve güvenli bir şekilde dikkatle kavisli bir hemostat periton uzaya yüzeysel olarak Karın zarını doğru bakacak şekilde kavisli ucu ekleyerek yapılabilir. O zaman hemostat biraz açıp da hemostat iki kolu arasındaki doku şirin bir bıçak kullanın. - Karaciğer sol lob tümörü implantasyon için bir site seçin için tanımlayın. Sol lob infero-lateral orta hat içinde oturan orta lob için.
- Karaciğer periton alanınız çizmek denemeden önce gazlı bez kuru bir parça belgili tanımlık kesme aşağı yönü de yerleştirin.
Not: Gazlı bez karaciğer geri karın geri çeker önlemek için koymak için yapisan bir yüzey sağlar. - Atravmatik forseps veya ıslak gazlı bez parçası üzerinde parmaklarını kullanarak, dikkatle dışarı belgili tanımlık kesme yoluyla karın karaciğer sol lob çizmek ve kuru gazlı bez daha önce yerleştirilmiş uzan. Bkz. Şekil 7.
Dikkat: Karaciğer kapsülü duyarlıdır ve -ebilmek kolayca yırtılması. Kapsüler taşma payı, karaciğer morarma, ve/veya nihai hemoperitoneum önlemek için bu organ ele alırken nazik olmak önemlidir.
Not: Genellikle, karaciğer kendini görsel olarak periton boşluğu girdikten sonra ilan edecek; tavşan mide şişmiş, ancak, karaciğer cranially önünden itti olabilir. Bu durumda ise, yavaşça karın duvarı künt bir sonda kullanarak kaldırın. Bu senaryoda, karaciğer karaciğer künt bir sonda kullanarak diyafram yüzey gerilimi çok dikkatle ayrı nedeniyle ventral yönünü uygun eğilimindedir ve ayırmak. Sonra atravmatik forseps karaciğer ortaya çıkarmak için kullanın. - Bu noktada, tümör doku implantasyon için hazırlamak ve onu korumak için karaciğer üzerinde ıslak gazlı bez bir parça yerleştirin.
- Adım 2.6 implantasyon için karaciğer sırasında oluşturulan tümör doku bir 1\u20122 mm3 parça seçin. Bkz. Şekil 8.
- #11-bıçak kullanarak, karaciğer doku karaciğer kapsülü dorsal yönünü nüfuz değil dikkat çekici bir 0.5 cm derin cep yapma 45 ° açıyla delik. Bıçak ponksiyon yaptıktan sonra yerde bırakın. Bkz. Şekil 9.
- Yavaşça bıçak küçük bir cep karaciğer yatakta oluşturmak için bir ventral yönde kaldırın. Forseps kullanarak tümör parça alın, tümör parça cebinde yerleştirin ve sonra bıçak kaldırın.
Not: Bıçak-ebilmek var olmak çıkarmak tümör parça ekleyerek önce ancak, karaciğer kanayacak ve bunu tanımlamak üzere bir delik sitesi belirsiz.
Uyarı: iletişim kasıtsız tümör tohum önlemek için diğer yapıları ile tümör en aza indirmek emin olun. Bu da bir kenara sonra implantasyon ile yardımcı olmak için kullanılan herhangi bir alet ayarlayarak önlenebilir. - Bu noktada, jel köpük gibi kan durdurucu sargı Aracısı bir parça tümör cep hemostaz teşvik etmek ve tümör parça çýkartýlmasýný önlemek için yerleştirin.
- Hemostaz onayladıktan sonra karaciğer karında, dönün.
- Karın duvarı ile 3-0 basit bir sürekli kullanarak konik bir iğne üzerinde polydioxanone dikiş dikiş ve 4-0 polyglactin 910 dikişler üzerinde sürekli subcuticular dikiş kullanarak kesme iğne ile cilt kapatın kapatın.
Dikkat: karın duvarı kapatırken, omentumun veya diğer bir dikiş atmak bağırsak yapılarda zarar vermemeye özen.
Not: Bu tümör röntgenlerle kesin olarak tanımlanabilir olması için en az 2 hafta alırken, bu 1.5\u20122 cm çapında bir boyutunu büyüme 3 haftalıkken ulaşır. Hepatik tümör tümör kitle ve agresif yerel olarak yayılmış bir exophytic oluşturacak bu yana 3.5\u20124 hafta büyümeye izin vermemek dikkatli olun.
4. VX2 Tümör süspansiyon hazırlama
- Bir 40 µm süzgeç 50 mL konik propilen tüp ağız içine yerleştirin. Adım 2.7 tümöründen kullanarak, bir # 15'lik neşter uygun tümör toplamak ve bu parçaları süzgeç yerleştirmek için tümör yüzey kazımak için kullanın.
- DMEM kullanarak bir süzgeç aracılığıyla uygun tümör vücut yıkama ve propilen tüp 1600 rpm 8 dk santrifüj kapasitesi.
- Santrifüj tamamlandıktan sonra süpernatant kaldırmak ve o atın. Daha sonra methylcellulose 1:1 hacimsel oranı kalan hücre bloğunda ekleyin.
- Bu süspansiyon aşağıdaki adımları 1.3\u20121.4 hind kol donör tavşan enjekte. 1 mL aliquots kriyojenik tüpler içinde kalan süspansiyon yerleştirin ve bunları daha sonra kullanmak için sıvı azot dondurmak.
5. anjiyografik VX2 kullanımı karaciğer tümörü
- Tavşan 3.1. adımda açıklandığı şekilde hazırlayın.
- Kasık femur oluk muayene et. Tanımlanan oluk, oluk boyunca bir 2\u20123 cm doğrusal kesi olun. Bkz: Şekil 10.
- Künt diseksiyon kullanarak bulun ve femoral ven, damar ve sinir içeren femur paket yalıtmak. Bkz. Şekil 11.
- Yine, künt diseksiyon femoral arter pakette bulunan yapıların geri kalanından ayırmak ve bir neşter tanıtıcı üstüne arter izole etmek için kullanın. Bkz. Şekil 12.
- 3-Fransızca uygulayıcıya kiti ile bir iğne ile erişim için Seldinger tekniği kullanmak. Bir embolisinin ekleyip 3-Fransızca kılıf gemi ilerlemek için iğne kaldırabilirsiniz. Bkz. Şekil 13.
Dikkat: Bu femoral arter transeksiyon içinde neden olabileceğinden 3-Fransızca kılıf ilerleyen aşırı güç kullanmaktan kaçının. - Floroskopik kılavuz ve kateter, embolisinin ve iohexol kontrast Aracısı kullanarak altında Çölyak bagajı için seçin — genellikle T12 düzeyinde bulunan — ve sonra kateter yolu ile ortak hepatik ve uygun sol hepatik arter önceden karaciğer.
- Bu noktada, Ajan seçtiğiniz kateter aracılığıyla yönetmek. Aracı yönetilen sonra kateter kaldırın.
- 3-0 ipek sütür kullanarak, femoral arter uzağından ve klemple kılıf ekleme noktasını ligate. Kanama önlemek için çekilmiş gibi için kılıf proksimal düğüm sıkın emin olun.
- Kasık kesi ile 4-0 polyglactin 910 dikiş subcuticular dikiş kullanarak kesme iğne üzerine kapatın.
- Standart ameliyat sonrası bakım ve monitör hayvan kurtarma korumak. Ötenazi gerçekleştirmek ve standart yöntemlerle gerektiği gibi necropsy.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 1' de ararken, tavşan uyluk genişletilir açıktır. Ayrıca, genellikle tümör büyüme ile fasya ile korele birden çok küçük ayrık nodüller görülebilir. Palpasyonla eklenen bacak sigara enjekte uzuv görüntülenmesi gerekir. Bir araştırmacı tümör varlığının daha kesin güvence gerektiriyorsa, ultrason görüntüleme kas içinde gömülü tümör tanımlamak için kullanılabilir. Bir tümör algılanmazsa, arka bacak bir tümör hücre süspansiyon ile yeniden enjekte olmalıdır.
Kan kılıf dönüş başarılı vasküler erişim onaylamak için Şekil 13 diçinde görüldüğü gibi aspirasyon üzerinde görülmektedir. Vasküler erişim başarısız olsaydı, teşebbüs aspirasyon kılıf havada verim veya şırınga pistonu çekerek önemli direnç ile mevcut.
Karaciğer tümörü büyümesi için başarılı yayılma onaylamak için iki yol vardır: angiographically ve Nekropsi. Anjiyografi üzerinde nerede doğrudan ortak hepatik arter kan akımı tümör çizer Şekil 14A olduğu gibi tümör tanımlaması hemen ortaya çıkabilir. O da Şekil 14D' de olduğu gibi tümör yanal olduğu durumlarda biraz zaman alabilir. Tümör kontrast enjeksiyon ortak hepatik arter içine sonra kolayca görünür durumda değilse, araştırmacı kontrast vurgulayarak tümör olasılığını artırmak için sol ve sağ hepatik arter enjekte denemeniz gerekir. Bu da anormal damar yanal olarak Şekil 14Ciçinde görülen karaciğer distal kenarı doğru seyahat aramak için yardımcı olabilir. Nekropsi üzerinde tümör Şekil 15B (karşılaştırmak-e doğru Şekil 15A) görüldüğü kolayca görünür olmalıdır.
Şekil 1: tavşan hind uzuv. Tavşan hind uzuv tümör büyüme kitle gösterge ile traş. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: maruz hind uzuv. Aynı bacak örten deri ile gösterilen Şekil1 olarak hypervascularity ve renk değişikliği çevreleyen kas tümörü (beyaz noktalı çizgi) konumunu temsil eden--dan farklı geniş bir alanda ifşa yansıtıyordu. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: Tümör en bloc kaldırıldı ve böldüğü. (A) tümör ve çevresindeki kas en blockaldırıldı. (B) tümör nekrotizan çekirdek ve kapsüler duvar (ok uçları) ortaya çıkarmak için böldüğü. Tümör işlem hem yarım yanı sıra bazı nekrotik enkaz görülebilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4: tümör kapsülü. Ok başları bitişik kas (M) tümör Kapsülü (kesikli beyaz çizgi) tarafından belirlenen tümör (T), bir parça göstermek. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5: maruz xiphoid işlemi. Cilt ve temel kas xiphoid süreci (siyah ok) ve gut (beyaz ok) görselleştirme için izin vermek için yansıtıyordu. Beyaz yıldız kafatası yönünü gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 6: Linea alba. Örten deri ve fasya yansıyan görselleştirme için izin vermek için linea alba (siyah ok) kaudal için kafatası bir yöne koşuyor. Bu alanı avasküler ve kan kaybı için periton alanı ücretsiz erişim sağlar. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 7: lob karaciğer Karın zarını dışında. Bu görüntü bir lob yavaşça periton uzaydan çıkarılan ve gazlı bez parçasının üzerine yerleştirilen karaciğer gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 8: implantasyon sonrası işlenmiş tümör taşımı. İmplantasyon için uygun boyut oluşturur, tümör parçası ipucu, bir #11-bıçak ölçek için yanına yerleştirilmiş. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 9: tümör implantasyon için karaciğerde bir cep oluşturma. #11-bıçak karaciğer ayıklanan lob uygun derinlik için eklenir. Bu uygun ölçekli bir tümör parça Şekil8 implantasyonu için pocked-ecek yaratmak. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 10: femur groove ve ilk kesik. (A) hind uzuv palpasyonla femur groove (beyaz noktalı çizgi) görselleştirme için sağlar. (B) hind uzuv femur oluk yapılan kesi ilk. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 11: femur paket tanımlaması. Belgili tanımlık ilk kesme künt diseksiyon femoral ven (siyah ok) ortaya koymaktadır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 12: femur paket ve yalıtım femoral arter diseksiyonu. (A) femur paket diseksiyon (soldan sağa) tek tek ayırt etmemizi sağlar femoral ven (GD), femoral arter (FA) ve femoral sinir (FN). (B) femoral neşter tutamacı izole arter. Femoral sinir ayrım için izin kan sütun not edin. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 13: vasküler erişim. (A) bir embolisinin (G) femoral arter (FA) daha önce femoral arter eklenmiş erişim iğne (N) aracılığıyla gelişmiş. (B) bir kılıf (S) ve dilatör (D) femoral arter (FA) embolisinin (G) üzerinde ileri seviyededir. (C) Kılıf (S) ve dilatör tam içine kadar kılıf hub femoral arter (FA) ileri seviyededir. (D) dilatör ve embolisinin kaldırdıktan sonra kılıf ipek ile sabitlenir. Aspirasyon kan Kılıf (siyah ok) verir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 14: hepatik tümör anjiyografik görüntüleme. (A) doğrudan tümör (beyaz yıldız) besleme arter kontrast teslim kateter ucu (beyaz ok). (B) kontrast distal sol hepatik arter ve ılımlı kontrast alımı yanal tümör (beyaz yıldız) tarafından teslim kateter ucu (beyaz ok). (C) tümör (beyaz yıldız) anormal bir arter kateter (beyaz ok) seyahat (beyaz çizgi) gösteren b kontrast enjeksiyon tümör içine daha fazla. (D) daha fazla kontrast alımı sonra tümör b. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 15: tavşan karaciğer. (A) sol yan lob (siyah yıldız) örten sol orta lob (beyaz yıldız) gösterilen bir sağlıklı tavşan karaciğer. (B) bir tavşan bir tam gelişmiş hepatik tümörle (beyaz ok) karaciğer. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
İlk kritik adım VX2 tümör yöntembilim başarılı bir donör tavşan hind bacak bir tümör yayılması olduğunu. Bu adım hakkında daha fazla bilgi için "Temsilcisi sonuçlar" bölümünde ilk paragrafa bakın.
Sonraki kritik adım uygun tümör kapsülü düzgün tespit garanti etmektedir. Sadece bu tümör süspansiyon hazırlama için gerekli olacaktır, ama seçmek ve hepatik implantasyon için tümör adet üreten için önemlidir. Canlı tümör ve çevresindeki kas dokusu arasında sınır Şekil 4' te açıklama eklenir. Yanlış doku örneği süspansiyon hazırlama sırasında alıntı sonraki hind uzuv yayma başarısız olur. Hepatik implantasyonu-bu durum ortaya çıkarsa, karaciğer tümör büyüme oluşmaz. Bu kadar anjiyografi belirgin olmayacaktır.
Hepatik implantasyon işlemi sırasında karaciğer sol lob yaklaşırken özen gösterilmelidir. Oftentimes, karaciğer kolayca görünür ise, Karın zarını girerken, aslında orta lob operatörleri gözlemleyerek karaciğer olur. Orta lob içine implantasyonu karaciğer sorunları anjiyografik kullanmak için bir avuç sunar. İlk omurga ile orta lob'ın anatomik ilişkidir. Orta lob tümörü kez onay ve tümör tedavisinde zorlaştırır floroskop omurgasında tarafından karartılmış. Ayrıca, gastroduodenal arter daha sık orta lob tedarik damarlara ile ilişkilidir. Bu gut olmayan hedef embolizasyon riski artar ve potansiyel olarak bağırsak iskemi/infarktüsü ve olası ölüm hayvan yol açabilir. Daha önce de belirtildiği gibi bu bir başarısızlık olarak geçerli olmayacaktır; Ancak, bu görselleştirme ve tedavi sırasında daha fazla bakım garanti etmez.
Son önemli adım başarılı ve istikrarlı femoral arter erişimdir. Şekil 12' da görüldüğü gibi femoral arter bir neşter bıçak sapı yalıtılması gerekir. Bu çoğunlukla araştırmacı Seldinger tekniği20daha doğru bir şekilde gerçekleştirmek izin vermek için yapılır iken, yordam saklanması gerekebilir. Bu çünkü bir kez kılıf tanıttı bistüri sapı kaldırılması kılıf damarlara ve çevresindeki yapılar tıkanıklığı ve olası zarar kılıf giden damarlara içinde istenmeyen hareket neden olabilir. Kılıf işlem sırasında yerinden olur, kanamayı durdurmak için erişim siteye Proksimal femur oluk içinde basınç uygulayın ve arter sonra bakmaksızın. Kılıf yeniden eklemeye çalışmayın. Araştırmacı kontralateral femoral arter erişim kazanmaya çalışır.
VX2 platformu ile ilgili HCC translasyonel araştırma için geçerli kullanmak güçlü bir modeli olmakla birlikte, ilgili eksiklikler var mı. Birincil bu modelin, hastalık durumunda bu bir insan HCC taklit değil zayıflıktır. İndüklenen tümör için insan HCC patolojik olarak benzer değil ne sigara sirozlu karaciğer parenkima microenvironment. Ayrıca, VX2 tümör tedavi etkinlik çalışmaları için kullan bu modeli hariç önemli iç nekroz gösterir. Bazı alternatif modeller fare, sıçan ve dağ sıçanları gibi kemirgen modelleri ya da maymunlar ve domuzlar gibi daha büyük hayvan modelleri içerir. 16 , 21 farklı avantajları ve dezavantajları bu alternatifleri tüm sağlamak; Ancak, yazarlar, maliyet etkinliği ve Anjiyografik yararlanma için görüşü VX2 tavşan baskın kalır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Bu raporda tasvir iş araştırma bursu Guerbet LLC tarafından desteklenmiştir.
Acknowledgments
-Chicago'nun biyolojik kaynakların laboratuvar Illinois Üniversitesi'nde Veterinerlik personel kabul etmek istiyoruz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MethoCult (Methycellulose) | Stemcell Technologies | M3134 | |
| VX2 Cell Line | NCI | VX-2 | |
| 5 mL Syringe | BD | 309646 | |
| 16 G Needle | BD | 305197 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| Hair Clippers | Wahl | 41870-0438 | |
| Foam Insulated Box | Mr. Box Online | 10 x 10 x 4 | |
| Acepromazine | Henry Schein | 003845 | |
| Buprenorphine | Par | 42023-179-05 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 049755 | |
| Alcohol Pads | Covidien | 5033 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Xylazine | Akorn | 59399-110-20 | |
| Pentobarbital (Fatal-Plus) | Vortech | 9373 | |
| Sterile Petri Dish | Thermo Fisher | 172931 | |
| DMEM | Gibco | 11965092 | |
| Saline | Baxter | 2F7124 | |
| 15-Blade | Steris | 02-050-015 | |
| Scalpel Handle x 2 | Steris | 22-2381 | |
| Curved Hemostat | WPI | 501288 | |
| Atraumatic Forceps | Sklar | 52-5077 | |
| Gauze | Medline | NON21430LF | |
| 11-Blade | Steris | 02-050-011 | |
| Surgicel | Ethicon | 1951 | |
| 3-0 PDS / Taper | Ethicon | Z305H | |
| 4 - 0 Vicryl / Cutting | Ethicon | J392H | |
| 40 μm strainer | BD | 352340 | |
| 50 mL conical tube | Thermo Fisher | 339652 | |
| plastic pipette | Thomas Scientific | HS206371B | |
| Centrifuge | Sorvall | 75004240 | |
| 1.40 mL Tubes (Internal Thread) | Micronic | MP32131-Z20 | |
| 3-F VSI Micro-HV Introducer Kit | Vascular Solutions | Custom Order (P15180391) | |
| .018 45° angle glidewire | Terumo | RG*GA1818SA | |
| Direxion bern-shape microcatheter | Boston Scientific | M001195230 | |
| Omnipaque | GE | Y510 |
References
- Rous, P., Beard, J. W. The Progression To Carcinoma of Virus-Induced Rabbit Papillomas (Shope). The Journal of Experimental Medicine. 62 (4), 523-548 (1935).
- Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. The Journal of Experimental Medicine. 71 (6), 813-838 (1940).
- Galasko, C. S. B., Muckle, D. S.
- Maruyama, H., et al. Sonographic shift of hypervascular liver tumor on blood pool harmonic images with definity: Time-related changes of contrast-enhanced appearance in rabbit VX2 tumor under extra-low acoustic power. European Journal of Radiology. 56 (1), 60-65 (2005).
- Horkan, C., et al. Radiofrequency Ablation: Effect of Pharmacologic Modulation of Hepatic and Renal Blood Flow on Coagulation Diameter in a VX2 Tumor Model. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 15 (3), 269-274 (2004).
- Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), 1-8 (2016).
- Goldberg, S. N., Gazelle, G. S., Compton, C. C., Mueller, P. R., McLoud, T. C. Radio-frequency tissue ablation of VX2 tumor nodules in the rabbit lung. Academic Radiology. 3 (11), 929-935 (1996).
- Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18 (3), 411-418 (2007).
- Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: A pictorial primer and "how to" guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20 (4), 335-340 (2014).
- Xia, X., et al. Intra-arterial interleukin-12 gene delivery combined with chemoembolization: Anti-tumor effect in a rabbit hepatocellular carcinoma (HCC) model. Acta Radiologica. 54 (6), 684-689 (2013).
- Gaba, R. C., et al. Ethiodized oil uptake does not predict doxorubicin drug delivery after chemoembolization in VX2 liver tumors. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23 (2), 265-273 (2012).
- Choi, Y. H., et al. Novel Intraarterial Therapy for Liver Cancer Using Ethylbromopyruvate Dissolved in an Iodized Oil. Academic Radiology. 18 (4), 471-478 (2011).
- Ma, H. L., Xu, Y. F., Qi, X. R., Maitani, Y., Nagai, T. Superparamagnetic iron oxide nanoparticles stabilized by alginate: Pharmacokinetics, tissue distribution, and applications in detecting liver cancers. International Journal of Pharmaceutics. 354 (1-2), 217-226 (2008).
- Wang, D., et al. Liver tumors: Monitoring embolization in rabbits with VX2 tumors -Transcatheter intraarterial first-pass perfusion MR imaging. Radiology. 245 (1), 130-139 (2007).
- Bimonte, S., et al. Radio-frequency ablation-based studies on VX2rabbit models for HCC treatment. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), (2016).
- Gaba, R., Obeid, M., Khabbaz, R., Garcia, K., Schachtschneider, K. Translational Animal Models for Liver Cancer. American Journal of Interventional Radiology. 2 (2), 1-8 (2018).
- Kuszyk, B. S., et al. Local tumor recurrence following hepatic cryoablation: radiologic-histopathologic correlation in a rabbit model. Radiology. 217 (2), 477-486 (2000).
- Geschwind, J., et al. Chemoembolization of Liver Tumor in a Rabbit Model Assessment of Tumor Cell Death with Diffusion-Weighted MR Imaging and Histologic Analysis. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 11 (10), 1245-1255 (2000).
- Virmani, S., et al. Comparison of Two Different Methods for Inoculating VX2 Tumors in Rabbit Livers and Hind Limbs. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (6), 931-936 (2008).
- Seldinger, S. I. Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography: A new technique. Acta Radiologica. 49 (SUPPL 434), 47-52 (2008).
- Schook, L. B., et al. A genetic porcine model of cancer. PLoS One. 10 (7), e0128864 (2015).
