Summary
Målet med denne artikel er at give en primer for udvikling og anvendelse af VX2 karcinom kanin model for leverkræft.
Abstract
Kanin VX2 tumor er en dyremodel almindeligt udnyttet for Translationel forskning vedrørende hepatocellulært carcinom (HCC) inden for interventionel radiologi. Denne model beskæftiger en Anaplastisk planocellulært karcinom, er nemt og pålideligt opformeret i skeletmuskulatur af donor kaniner til eventuel høst og allograft implantering i leveren af naive modtagere. Denne tumor graft vokser hurtigt i leveren af modtagerens kaniner ind i en angiographically identificerbare tumor karakteriseret ved en nekrotisk kerne omgivet af en levedygtig hypervascular kapsel. Den fysiske størrelse af kanin anatomi er tilstrækkelig til at fremme vaskulær instrumentation giver mulighed for anvendelse og afprøvning af forskellige interventionelle teknikker. Trods disse fordele findes der en sparsomme tekniske ressourcer til at handle som en konkret henvisning til forskere, der arbejder med modellen. Heri, præsenterer vi en omfattende visuel disposition for de tekniske aspekter af udvikling, vækst, formering og Angiografisk udnyttelse af kanin VX2 tumor model til brug for nybegyndere og erfarne forskere både.
Introduction
Kanin VX2 tumor model har spillet en rolle i eksperimentel onkologi siden sin udvikling i 19351,2. Denne tumor er en virus-induceret Anaplastisk planocellulært karcinom karakteriseret ved hypervascularity, hurtig vækst og let formering i skeletmuskulatur3,4. Mens kanin VX2 tumor model er blevet brugt til at undersøge en lang række kræftformer5,6,7,8; fokus i dette papir er leverkræft9.
Formålet med metoden er at fremlægge en model for primær leverkræft eller hepatocellulært carcinom (HCC), der kan bruges af Interventionel radiologer for Translationel forskning. Det kan bruges til Farmakokinetiske undersøgelser, terapeutiske undersøgelser og ablativ metode afprøvning10,11,12,13,14,15.
Den metode beskrevet heri giver flere fordele i forhold til andre modeller i det samme område som gnavere modeller som rotter, mus, og woodchucks eller større modeller som primater16. En af de primære fordele er den hurtige og pålidelige tumorvækst, som gør det muligt for forskere at etablere en aktiv tumor linje inden for en måned efter første hind lemmer formering17. Denne tumor har desuden ligetil sonographic synlighed og en hypervascular periferi, som giver mulighed for både transarterial locoregionale behandlinger og ablativ behandlinger. Endelig, og vigtigst, tillader størrelsen af kanin Vaskulaturen gennemførlige og teknisk let udnyttelse af vaskulære instrumentation18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende protokol følger alle kravene og retningslinjerne mandat fra University of Illinois - Chicago. Det blev gennemgået og godkendt af lokalt institutionelle Animal Care og brug Udvalget inden udførelse.
1. VX2 Hind lemmer Tumor udvikling
- Skaffe VX2 tumor cellelinje fra National Cancer Institute Division af kræft behandling diagnose og behandling Tumor/celle linje Repository.
Bemærk: På dette tidspunkt, Bestil kataloget kan findes på følgende link: https://dtp.cancer.gov/repositories/. - For at forberede cellesuspension til injektion, skal du placere den frosne VX2 prøve og methylcellulose medium i lunkent vand, indtil de har optøet.
- Opsug 0.5\u20121 mL af den optøede cellesuspension og et lige saa stort volumen af optøede methylcellulose medium i en 5-mL sprøjte.
Bemærk: Det kan hjælpe for at bruge en 21 eller 22 G kanyle til Opsug cellesuspension og en større gauge kanyle til Aspirér methylcellulose medium. Placer sprøjter på is.
- Opsug 0.5\u20121 mL af den optøede cellesuspension og et lige saa stort volumen af optøede methylcellulose medium i en 5-mL sprøjte.
- Forberede hind lemmer tumor donor kanin til podning af cellesuspension, begyndende med sedation ved hjælp af 1 mg/kg Acepromazin og 0,02 mg/kg buprenorphin gives intramuskulært. Barbere webstedet podning (hind lemmer) med neglesaks og ren den glatbarberet er med en alkohol - eller jod-baserede agent.
Bemærkning: Meloxicam kan gives i en dosis på 0,2 mg/kg subkutant for analgesi. Kaninpels er vanskeligt at barbere. Det anbefales, at forskeren foretager flere gennemløb, først med fokus på clearing en hovedparten af pels og derefter trykke på neglesaks mod huden og gå imod korn. - Vedhæfte en 16 G nål til 5 mL sprøjte indeholdende cellesuspension og indsprøjte 1 mL af suspensionen i maven af hind lemmer muskler af donor kanin, ca 1 cm dyb. Sørg for at bevogte iskiasnerven kører inden for en håndgribelig rille langs lårbenet.
Bemærk: Frisk VX2 held inokulerede 88% af forsøgspersonerne mens frosne eller optøede VX2 er kun vellykkede 33% af tid19.
Forsigtig: VX2 tumor vil vokse hurtigt. Bivirkninger, der kan noteres som tumor skrider frem: øget respirationsfrekvens, sløvhed, nedsat årvågenhed og adfærdsmæssige ændringer (f.eks., usædvanlige aggressivitet). Anbefalinger er derfor nøje overvåge dyrene og til at planlægge for tumor høsten inden to uger efter podning.
2. VX2 Hind lemmer tumorvækst og høst
Note: Forudsat vellykket podning, der bør være en håndgribelig (3\u20124 cm) tumor knude på injektionsstedet inden for 2 uger. Normalt er vil denne knude blive håndgribelig ca 1 uge; Det er dog bedre at lade tumor vokser til at give mulighed for tilstrækkelig væv samling. Typisk, denne knude vil være fast, indurated og ophøjet over niveauet af musklen. Hvis
- Palpere den podede område på 2 uger fra podning. Hvis ingen tumorvækst er fundet på 2 uger, udføre trin 1 igen. Se figur 1.
Bemærk: Tilstedeværelsen af tumor kan også vurderes via ultralyd. Mens der har været nogen undersøgelser at vurdere forskellen i tumor vækst metrics når opformeret fra frosne materiel i forhold til frisk lager, det er vores erfaring, at de frosne stock tumor vokser lidt langsommere og vil kunne påvises efter sin friske lager Counter del. Uanset hvad, bør enten metoden give en fangstklare tumor af 2 uger. - Forberede tumor høst hind lemmer tumor donor. Bedøver kanin med 45 mg/kg ketamin og 5 mg/kg xylazin. Aflive med en intravenøs (IV) dosis af natrium pentobarbital over 390 mg/kg.
- Når kaninen er blevet aflivet, begynde høst tumor ved at fjerne den kutant og subkutant væv overliggende tumor knude ved hjælp af en skalpel med uanset hvilken størrelse blade forskeren ser passer. Se figur 2.
- Når tumor nodule er blevet identificeret inden for hind lemmer muskler, fjerne den svulst blokoverførslen ved hjælp af bred krum margener. For dette, skæres tendinous fastgøringspunkter på den proksimale og distale ende af den muskel og derefter spore skalpel blade langs den underliggende knogle. Gennemskære eksplanterede modellen udsætte tumor kapsel og nekrotisk kerne. Se figur 3.
Bemærk: VX2 tumor har en yderst nekrotisk kerne. Sørg for at bruge rigtige øjenbeskyttelse og andre personlige værnemidler når hovedkød tumor, da eventuelle skader på tumor kapslen kan resultere i højtryk udslyngning af nekrotisk debris. - Forsigtigt skrabe nekrotisk kernen med en stump genstand (f.eks. pincet, hemostats) til at rense tumor. Dette bør give mulighed for bedre visualisering af tumor kapsel og overgangspunktet mellem kapsel og omkringliggende muskler. Se figur 4.
- Fra denne prøve, høst flere stykker af tumor ca 1\u20122 mm3 og umiddelbart gemme dem i en kop, der indeholder stuetemperatur sterilt saltvand.
Bemærk: Disse tumor prøver vil blive brugt til efterfølgende intrahepatisk implantation. - Placer de resterende tumor i en steril petriskål og bade det med Dulbeccos modificerede Eagle Medium (DMEM). Hvis denne model holdes kold på is, kan det blive bevaret til håndtering af op til 2\u20123 h senere.
3. levertumor Implantation via laparotomi
- Forberede den modtagende kanin for laparotomi. Bedøver den modtagende kanin ved hjælp af 45 mg/kg ketamin og 5 mg/kg xylazin for induktion efterfulgt af intubation og vedligeholdelse med 1% - 3% isofluran som nødvendigt. Når kaninen er bedøvede, barbere operationsstedet ved hjælp af hårklippemaskiner. Rens området indsnit ved hjælp af tredobbelt vask med betadine krat, 70% ethanol opløsning og betadine løsning, og drapere maven i en steril kirurgiske mode.
- Brug en #15-klinge, indlede laparotomi ved at gøre en lille nedad lodret midterlinjen snit gennem den kanin huden starter fra formet som et sværd proces. Dette bør være let palpering og tendens til at være nogenlunde på størrelse med en amerikansk penny. Se figur 5.
- Afspejler huden og identificere de linea alba. Dette bør være en reflekterende hvid bandet af væv, rejser inferiorly i midterlinjen. Bruge stump dissektion for at krydse den linea alba og udsætte bughinden. Se figur 6.
Bemærk: Bughinde er let identificeres, da det vil direkte overliggende tarmen, som kan ses flytte med respiration.
Forsigtig: Bughinden tendens til at være tilhænger til den underliggende tarm på grund af overfladespænding. Ved hjælp af stumpe traumer til dissekere den linea alba hjælper med at sprede risikoen for perforering af den underliggende tarm. - Når bughinden er udsat, omhyggeligt dissekere gennem det at komme ind i bughulen. Leveren kan nu identificeres. For at bedre navigere den abdominale plads, udvide midterlinjen snit 1\u20122 cm inferiorly gennem hud, muskler og bughinden.
Bemærk: Udvide midterlinjen snit kan nemt og sikkert gøres ved omhyggeligt indsætte en buet hemostat i det peritoneal rum med buede spidsen vender overfladisk mod bughinden. Derefter åbne hemostat lidt og brug en kniv til at søde vævet mellem de to grene af hemostat. - Identificere den venstre lap af leveren for at vælge et websted for tumor implantation. Venstre lap er infero-lateralt for den mediale lap, som sidder i midterlinjen.
- Før du forsøger at tegne leveren den peritoneale plads, skal du placere et tørt stykke gaze på ringere aspekt af snittet.
Bemærk: Gaze vil give en vedhængende overflade for at lægge leveren på at forhindre tilbagetrækningskraften tilbage ind i maven. - Ved hjælp af enten atraumatisk pincet eller et stykke vådt gaze over fingrene, forsigtigt trække den venstre lap af leveren ud af maven gennem incisionen og lægge den på den tør gaze placeret tidligere. Se figur 7.
FORSIGTIGHED: Leversygdom kapslen er følsomme og kan nemt brud. Det er afgørende at være blid, når du håndterer dette organ for at forhindre kapsulær bløder, leveren blå mærker, og/eller eventuelle hemoperitoneum.
Bemærk: Normalt, leveren vil erklære sig visuelt ved at indtaste den peritoneale plads; men hvis den kanin mave er udspilet, leveren kan blive skubbet cranially ude af syne. Hvis dette er tilfældet, forsigtigt løfte den abdominale væg ved hjælp af en stump sonde. I dette scenario, leveren har tendens til at overholde den ventrale aspekt af membran på grund af overfladespænding så omhyggeligt separat leveren ved hjælp af en stump sonde og det bør frigøre. Derefter bruge atraumatisk pincet til at trække leveren. - På dette tidspunkt, forberede implantation tumor væv og placere et stykke vådt gaze over leveren til at beskytte den.
- Vælg en 1\u20122 mm3 stykke af tumor væv, der blev genereret under trin 2,6 til implantation i leveren. Se figur 8.
- Brug en #11-klinge, punktere levervæv i en 45° vinkel gør en 0,5 cm dyb lomme, pas på ikke at trænge igennem den dorsale aspekt af leveren kapslen. Forlade bladet på plads efter at at punktere. Se figur 9.
- Forsigtigt løfte vingen i en ventrale retning for at skabe en lille lomme i leveren sengen. Tage tumor stykke bruge tang, Placér tumor i denne lomme og derefter fjerne bladet.
Bemærk: Klingen kan fjernes før indsættelse af tumor stykke, dog leveren vil bløde og det kan sløre punktering websted gør det vanskeligt at identificere.
Forsigtig: Sørg for at minimere kontakt af tumor med nogen andre strukturer til at forhindre utilsigtet tumor såning. Dette kan også undgås ved at afsætte alle værktøjer, der anvendes til at bistå med implantation bagefter. - På dette punkt, Læg et stykke af hemostatic agent, som gel skum, over tumor lommen at fremme hæmostase og forhindre udslyngning af tumor stykke.
- Returnere leveren til maven, når hæmostase er bekræftet.
- Luk den abdominale væg med 3-0 polydioxanone sutur på koniske nål ved hjælp af en simpel kontinuerlig sy og lukke huden med 4-0 polyglactin 910 suturer på en skæring nålen ved hjælp af kontinuerlig subcuticular Sting.
Forsigtig: Når du lukker den abdominale væg, passe på ikke for at beskadige omentum eller andre tarm strukturer i en sutur kast.
Bemærk: Mens denne tumor vil tage mindst 2 uger til endeligt vurdere kan identificeres, når det en størrelse på 1.5\u20122 cm diameter på 3 uger af vækst. Vær omhyggelig med ikke at tillade den hepatiske tumor til at vokse forbi 3.5\u20124 uger da tumoren vil danne en exophytic masse og aggressivt spredes lokalt.
4. VX2 Tumor Suspension forberedelse
- Placer en 40 µm si ind i munden af en 50 mL konisk propylen tube. Brug tumor fra trin 2.7, bruge en #15-bladet for at skrabe tumor overfladen for at indsamle levedygtige tumor og placere disse afskrab i sien.
- Vaske levedygtige tumor afskrab gennem en si ved hjælp af DMEM og derefter centrifugeres propylen røret på 1600 rpm for 8 min.
- Når centrifugen er fuldført, Fjern supernatanten og kassér den. Derefter tilføje methylcellulose til resterende cellen blok i forholdet 1:1 volumetriske.
- Indsprøjte denne suspension i en hind lemmer donor kanin efter trin 1.3\u20121.4. Placer de resterende suspension i 1 mL alikvoter i kryogene rør og fryse dem i flydende nitrogen til senere brug.
5. Angiografisk udnyttelse af VX2 levertumor
- Forberede kaninen, som beskrevet i trin 3.1.
- Palpere femoralis rillen i lysken. Når rillen er blevet identificeret, skal en 2\u20123 cm lineær indsnit langs rillen. Se figur 10.
- Bruger stump dissektion, lokalisere og isolere femoral bundtet indeholdende femoral vene, arterie og nerve. Se Figur 11.
- Igen, bruge stump dissektion at adskille arteria femoralis fra resten af strukturer i bundtet og isolere arterie på toppen af en skalpel håndtag. Se figur 12.
- Med en 3-fransk introducerende kit, udnytte Seldinger teknik for at få adgang med en nål. Indsæt en guidewire og fjerne nålen for at fremme den 3-fransk kappe i fartøjet. Se Figur 13.
Forsigtig: Undgå at bruge overdreven kraft i at fremme den 3-fransk kappe, da dette kan resultere i transection af den femorale arterie. - Marker under fluoroskopisk vejledning og ved hjælp af et kateter, guidewire og iohexol kontraststof, for cøliaki stammen — typisk placeret på T12 plan — og derefter rykke kateteret ind i den venstre hepatiske arterie via den fælles hepatiske og korrekt hepatisk.
- På dette tidspunkt, administrere agent for valg gennem kateteret. Når agenten administreres, fjerne kateteret.
- Bruger 3-0 silke sutur, ligate arteria femoralis proksimalt og distalt til indsætningspunktet i hylsteret. Sørg for at stramme knuden proksimalt for kappe, som det er tilbage til at forhindre blødning.
- Luk lysken snit med 4-0 polyglactin 910 suturer på en skæring nålen ved hjælp af en subcuticular søm.
- Vedligeholde standard postoperativ pleje og overvåge dyrs opsving. Udføre aktiv dødshjælp og necropsy efter behov ved hjælp af standardteknikker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Når man ser på figur 1, er det klart, at quadricep af kanin er forstørret. Derudover er flere små diskrete knuder, typisk korrelerede med tumorvækst gennem fascien, synlige. Ved palpation anføres den injicerede lemmer end de ikke-indsprøjtning lemmer. Hvis en forsker kræver mere definitiv kvalitetssikring af tumor tilstedeværelse, kan ultrasound imaging bruges til at identificere tumor indlejret i musklen. Hvis en tumor ikke er registreret, skal hind lemmer injiceres på ny med en tumor cellesuspension.
For at bekræfte vellykket vaskulær adgang, er blod tilbage i hylsteret observeret på aspiration som det ses i fig. 13D. Hvis vaskulær adgang var forgæves, vil forsøgte aspiration give luft i skeden eller præsentere med betydelig modstand, når du trækker stemplet af sprøjten.
For levertumor vækst, der er to måder at bekræfte succesrig formering: angiographically og om obduktion. På angiografi forekomme identifikation af tumor umiddelbart som er tilfældet i figur 14A hvor tumoren trækker blodforsyning direkte fra den fælles hepatiske arterie. Det kan også tage lidt tid i tilfælde, hvor tumoren er laterale som er tilfældet i figur 14D. Hvis svulsten ikke er umiddelbart synligt efter injektion af kontrast i den fælles hepatiske arterie, bør forskeren forsøge at tilføre venstre og højre hepatiske arterier kontrast for at forbedre chancerne for at fremhæve tumor. Det kan også hjælpe til at lede efter afvigende arterier rejse sideværts mod den bageste kant af leveren som det ses i figur 14C. På obduktion, bør tumor være let synlige, som det ses i figur 15B (Sammenlign med figur 15A).
Figur 1: kanin hind lemmer. Barberet kanin hind lemmer med masse vejledende af tumorvækst. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: udsat hind lemmer. Den samme lemmer som vist figur1 med overliggende hud afspejles afslører et stort område af hypervascularity og misfarvning adskiller sig fra de omkringliggende muskler der repræsenterer placeringen af tumor (hvide stiplede linje). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Tumor fjernet blokoverførslen og gennemskæres. (A) Tumor og omkringliggende muskler fjernet under ét. (B) Tumor har været gennemskæres for at afsløre sin kapsulær væg (pilespidser) og nekrotisk kerne. Tumor proces kan ses i begge halvdele samt nogle nekrotisk vragrester. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Tumor kapsel. Pilespidser betegne et stykke af tumor (T), som er afgrænset fra tilstødende muskler (M) af tumor kapsel (stiplet hvid linje). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: udsat formet som et sværd proces. Huden og underliggende muskler er kommet til at give mulighed for visualisering af formet som et sværd proces (sort pil) og tarm (hvid pil). Den hvide stjerne angiver kraniel retning. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6: Linea alba. Overliggende hud og fascie afspejles til visualisering af den linea alba (sort pil) kører i et kranie til caudale retning. Dette område er avascular og giver for blodtab gratis adgang den peritoneale plads. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7: lap af leveren udenfor bughinden. Dette billede viser en lap af leveren, der var forsigtigt udvundet fra den peritoneale plads og placeret på et stykke gaze. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 8: efterbehandlet tumor stykke for implantation. Et stykke af tumor forarbejdet til en passende størrelse til implantation placeret ved spidsen af en #11-vinge til skala. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 9: at skabe en lomme i leveren til tumor implantation. En #11-bladet er indsat til passende dybde i den udpakkede lap af leveren. Dette vil skabe en passende størrelse pocked til implantation af tumoren stykke fra figur 8. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 10: femoralis rillen og første snit. (A) Palpation af hind lemmer giver mulighed for visualisering af den femoralis rillen (hvide stiplede linje). (B) indledende indsnit i hind lemmer langs femoralis rillen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 11: identifikation af den femorale bundt. Stump dissektion af den første indsnit afslører femoral vene (sort pil). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 12: dissektion af collum bundle og isolation af femorale arterie. (A) dissektion af den femorale bundt tillader os at individuelt skelne (fra venstre mod højre) femoral vene (FV), femoralis arterie (FA) og femoralis nerve (FN). (B) den femorale arterie isoleret på en skalpel håndtag. Bemærk kolonnen blod giver mulighed til forskel fra den femorale nerve. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 13: vaskulær adgang. (A) en guidewire (G) er avancerede i arteria femoralis (FA) gennem adgang nål (N), som var tidligere indsat i arteria femoralis. (B) en kappe (S) og dilator (D) er fremskreden over guidewire (G) i arteria femoralis (FA). (C) kappe (S) og dilator er avancerede fuldt i arteria femoralis (FA) op til hubben kappe. (D) kappe er sikret med silke efter dilator og guidewire er blevet fjernet. Aspiration udbytter blod (sort pil) i skeden. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 14: Angiografisk billeddannelse af hepatisk tumor. (A) kateter tip (hvid pil) levere kontrast direkte ind i arterien fodring tumor (hvid stjerne). (B) kateter tip (hvid pil) levere kontrast i distale venstre hepatisk arterie og moderat kontrast optagelse af laterale tumor (hvid stjerne). (C) yderligere indsprøjtning af kontrast i tumor fra B viser en afvigende arterie (hvid streg) rejser fra kateter (hvid pil) til tumor (hvid stjerne). (D) tumor fra B efter yderligere kontrast optagelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 15: kanin leveren. (A) en sund kanin leveren viser venstre mediale lap (hvid stjerne) overliggende den venstre laterale lap (sort stjerne). (B) en kanin lever med en fuldt udviklet hepatisk tumor (hvid pil). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den første afgørende skridt i VX2 tumor metode er succesrig formering af en tumor i hind lemmer af en donor kanin. Henvise til det første afsnit i afsnittet "Repræsentant resultater" for flere oplysninger om dette trin.
Det næste vigtige skridt er at sikre, at levedygtige tumor kapsel er korrekt identificeret. Ikke blot vil dette være nødvendigt for tumor suspension forberedelse, men det er også vigtigt for at vælge og generere tumor stykker for hepatisk implantation. Afgrænsningen mellem levedygtige tumor og omkringliggende muskelvæv er kommenteret i figur 4. Hvis den forkerte vævsprøve er skrabet under suspension forberedelse, mislykkes efterfølgende hind lemmer formering. Hvis dette sker under hepatisk implantation, vil tumorvækst i leveren ikke forekomme. Dette vil ikke være synlige indtil angiografi.
Bør udvises forsigtighed under hepatisk implantation proces, når man nærmer sig den venstre lap af leveren. Oftentimes, hvis leveren er umiddelbart indlysende, når du indtaster bughinden, er det faktisk den mediale lap af leveren, der operatører er at observere. Implantering i den mediale lap af leveren præsenterer en håndfuld spørgsmål til Angiografisk brug. Først er den mediale lap anatomiske forhold med rygsøjlen. En medial lap tumor kan ofte blive korrumperet af rygsøjlen på fluoroskopi vanskeliggør bekræftelse og behandling af tumor. Derudover er den gastroduodenale arterie mere ofte forbundet med Vaskulaturen levere den mediale lap. Dette øger risikoen for ikke-målarter embolisering af tarmen og kan potentielt føre til tarm iskæmi/infarkt og eventuel død af dyret. Som nævnt tidligere, vil dette ikke betragtes som en fiasko; men garanterer det mere pleje under visualisering og behandling.
Den sidste kritiske trin er vellykket og stabil femorale arterie adgang. Som det ses i figur 12, bør arteria femoralis isoleres på toppen af en skalpel kniv håndtag. Mens dette sker primært for at tillade forsker mere præcist udføre Seldinger teknik20, bør det fastholdes under hele proceduren. Dette er fordi at fjerne skalpel håndtag, når kappe er blevet indført kan medføre utilsigtet bevægelse af kappe inden for Vaskulaturen fører til jakke okklusion og eventuel beskadigelse af vaskulatur og omgivende strukturer. Hvis kappe bliver fortrængt under proceduren, anvende pres i femoralis rillen proksimalt for webstedet adgang for at stoppe blødningen, og arterien kan så være forbundet. Forsøg ikke at genindsætte kappe. Forskeren kan forsøge at få adgang fra de kontralaterale femorale arterie.
Mens VX2-platformen er en robust model i aktuel brug for Translationel forskning vedrørende HCC, har det relevante mangler. Den primære svaghed ved denne model er, at dets sygdom tilstand ikke efterligner den, en menneskelig HCC. Tumor induceret er ikke patologisk ligner menneskelige HCC eller er den ikke-cirrhotic lever parenkymalt mikromiljø. Derudover viser VX2 tumor betydelige interne nekrose, der udelukker denne model fra brug til behandling virkning undersøgelser. Nogle alternative modeller omfatter gnavere modeller som mus, rotter, og woodchucks eller større dyremodeller såsom grise og primater. 16 , 21 disse alternativer alle giver forskellige fordele og ulemper; dog i udtalelsen fra forfatterne til Angiografisk udnyttelse og omkostninger effektivitet, stadig VX2 kanin dominerende.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Det arbejde, der er afbildet i denne betænkning blev støttet af forskning tilskud fra Guerbet LLC.
Acknowledgments
Vi vil gerne anerkende det veterinaere personale på University of Illinois - Chicagos biologiske ressourcer laboratorium.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MethoCult (Methycellulose) | Stemcell Technologies | M3134 | |
| VX2 Cell Line | NCI | VX-2 | |
| 5 mL Syringe | BD | 309646 | |
| 16 G Needle | BD | 305197 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| Hair Clippers | Wahl | 41870-0438 | |
| Foam Insulated Box | Mr. Box Online | 10 x 10 x 4 | |
| Acepromazine | Henry Schein | 003845 | |
| Buprenorphine | Par | 42023-179-05 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 049755 | |
| Alcohol Pads | Covidien | 5033 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Xylazine | Akorn | 59399-110-20 | |
| Pentobarbital (Fatal-Plus) | Vortech | 9373 | |
| Sterile Petri Dish | Thermo Fisher | 172931 | |
| DMEM | Gibco | 11965092 | |
| Saline | Baxter | 2F7124 | |
| 15-Blade | Steris | 02-050-015 | |
| Scalpel Handle x 2 | Steris | 22-2381 | |
| Curved Hemostat | WPI | 501288 | |
| Atraumatic Forceps | Sklar | 52-5077 | |
| Gauze | Medline | NON21430LF | |
| 11-Blade | Steris | 02-050-011 | |
| Surgicel | Ethicon | 1951 | |
| 3-0 PDS / Taper | Ethicon | Z305H | |
| 4 - 0 Vicryl / Cutting | Ethicon | J392H | |
| 40 μm strainer | BD | 352340 | |
| 50 mL conical tube | Thermo Fisher | 339652 | |
| plastic pipette | Thomas Scientific | HS206371B | |
| Centrifuge | Sorvall | 75004240 | |
| 1.40 mL Tubes (Internal Thread) | Micronic | MP32131-Z20 | |
| 3-F VSI Micro-HV Introducer Kit | Vascular Solutions | Custom Order (P15180391) | |
| .018 45° angle glidewire | Terumo | RG*GA1818SA | |
| Direxion bern-shape microcatheter | Boston Scientific | M001195230 | |
| Omnipaque | GE | Y510 |
References
- Rous, P., Beard, J. W. The Progression To Carcinoma of Virus-Induced Rabbit Papillomas (Shope). The Journal of Experimental Medicine. 62 (4), 523-548 (1935).
- Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. The Journal of Experimental Medicine. 71 (6), 813-838 (1940).
- Galasko, C. S. B., Muckle, D. S.
- Maruyama, H., et al. Sonographic shift of hypervascular liver tumor on blood pool harmonic images with definity: Time-related changes of contrast-enhanced appearance in rabbit VX2 tumor under extra-low acoustic power. European Journal of Radiology. 56 (1), 60-65 (2005).
- Horkan, C., et al. Radiofrequency Ablation: Effect of Pharmacologic Modulation of Hepatic and Renal Blood Flow on Coagulation Diameter in a VX2 Tumor Model. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 15 (3), 269-274 (2004).
- Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), 1-8 (2016).
- Goldberg, S. N., Gazelle, G. S., Compton, C. C., Mueller, P. R., McLoud, T. C. Radio-frequency tissue ablation of VX2 tumor nodules in the rabbit lung. Academic Radiology. 3 (11), 929-935 (1996).
- Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18 (3), 411-418 (2007).
- Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: A pictorial primer and "how to" guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20 (4), 335-340 (2014).
- Xia, X., et al. Intra-arterial interleukin-12 gene delivery combined with chemoembolization: Anti-tumor effect in a rabbit hepatocellular carcinoma (HCC) model. Acta Radiologica. 54 (6), 684-689 (2013).
- Gaba, R. C., et al. Ethiodized oil uptake does not predict doxorubicin drug delivery after chemoembolization in VX2 liver tumors. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23 (2), 265-273 (2012).
- Choi, Y. H., et al. Novel Intraarterial Therapy for Liver Cancer Using Ethylbromopyruvate Dissolved in an Iodized Oil. Academic Radiology. 18 (4), 471-478 (2011).
- Ma, H. L., Xu, Y. F., Qi, X. R., Maitani, Y., Nagai, T. Superparamagnetic iron oxide nanoparticles stabilized by alginate: Pharmacokinetics, tissue distribution, and applications in detecting liver cancers. International Journal of Pharmaceutics. 354 (1-2), 217-226 (2008).
- Wang, D., et al. Liver tumors: Monitoring embolization in rabbits with VX2 tumors -Transcatheter intraarterial first-pass perfusion MR imaging. Radiology. 245 (1), 130-139 (2007).
- Bimonte, S., et al. Radio-frequency ablation-based studies on VX2rabbit models for HCC treatment. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), (2016).
- Gaba, R., Obeid, M., Khabbaz, R., Garcia, K., Schachtschneider, K. Translational Animal Models for Liver Cancer. American Journal of Interventional Radiology. 2 (2), 1-8 (2018).
- Kuszyk, B. S., et al. Local tumor recurrence following hepatic cryoablation: radiologic-histopathologic correlation in a rabbit model. Radiology. 217 (2), 477-486 (2000).
- Geschwind, J., et al. Chemoembolization of Liver Tumor in a Rabbit Model Assessment of Tumor Cell Death with Diffusion-Weighted MR Imaging and Histologic Analysis. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 11 (10), 1245-1255 (2000).
- Virmani, S., et al. Comparison of Two Different Methods for Inoculating VX2 Tumors in Rabbit Livers and Hind Limbs. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (6), 931-936 (2008).
- Seldinger, S. I. Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography: A new technique. Acta Radiologica. 49 (SUPPL 434), 47-52 (2008).
- Schook, L. B., et al. A genetic porcine model of cancer. PLoS One. 10 (7), e0128864 (2015).
