Summary
Ce protocole décrit la production du filament polycaprolactone (PCL) avec des microsphères de (PLA) d’acide polylactique embarqués qui contiennent decellularise matrices (DM) pour l’impression 3D de tissus structuraux des constructions de génie.
Abstract
Bioprinting 3D vise à créer des échafaudages personnalisés qui sont biologiquement actives et adaptées à la taille désirée et la géométrie. Une dorsale thermoplastique peut fournir une stabilité mécanique semblable au tissu natif tandis que les agents biologiques offrent compositions repères à des cellules progénitrices, menant à leur migration, la prolifération et la différenciation pour reconstituer les tissus originales / organes de1,2. Malheureusement, nombreux compatible d’impression 3D, polymères biorésorbables (tels que l’acide polylactique PLA) sont imprimées à une température de 210 ° C ou supérieur - températures qui nuisent aux produits biologiques. En revanche, polycaprolactone (PCL), un autre type de polyester, est un biorésorbable, 3D matériel imprimable qui a une température plus douce impression de 65 ° C. Par conséquent, il a émis l’hypothèse que matrice extracellulaire decellularise (DM) contenue dans une barrière thermique protectrice de PLA a pu être imprimé dans les filaments PCL et rester dans sa conformation fonctionnelle. Dans cet ouvrage, cartilagineuses réparation était l’application pour laquelle l’hypothèse a été vérifiée. Par conséquent, cartilages porcins a été decellularise et encapsulé dans des microsphères de (PLA) acides polylactique, qui étaient ensuite extrudés avec polycaprolactone (PCL) en filament pour produire des constructions 3D via fusionnés avec modélisation dépôts. Les constructions avec ou sans les microsphères (PLA-DM/PCL et PCL(-), respectivement) ont été évalués pour les différences dans les caractéristiques de la surface.
Introduction
Cours techniques d’ingénierie tissulaire pour applications cliniques telles que des os, du cartilage, tendons et ligament reconstruction utilisent auto - et allogreffes à réparer le tissu endommagé. Chacune de ces techniques est effectuée systématiquement comme un « gold standard » dans la pratique clinique par récolte tout d’abord le tissu du donneur par le patient ou un match cadavérique et puis en plaçant le tissu du donneur dans le défaut site2. Toutefois, ces stratégies sont limitées par la morbidité site donneur, rareté de site donneur pour les gros défauts, risque d’infection et la difficulté à trouver des greffes qui correspondent à la géométrie souhaitée. En outre, des études ont montré qu’allogreffes utilisés pour la reconstruction ont réduit les propriétés mécaniques et biologiques par rapport aux tissus natifs3. Avec ces considérations à l’esprit, ingénieurs de tissus ont récemment tourné à trois dimensions bioprinting (3D) pour produire des géométries personnalisées et complexes qui sont biologiquement actives et conçu pour défaut de taille et la forme tout en offrant suffisamment propriétés mécaniques jusqu'à ce que le remodelage biologique est complet.
Idéalement, un échafaudage imprimés 3D consisterait en une épine dorsale polymère qui peut retenir la nécessaire stabilité mécanique du tissu native, tandis que le produits biologiques constitué offrent des indices biochimiques qui entoure les cellules, menant à leur migration, prolifération, différenciation et tissus production2,5. Malheureusement, la plupart des constructions qui contiennent des composants biologiques sont faites avec des gels ou des polymères qui sont trop faibles pour résister aux forces d’en vivo vécues par les tissus ciblés pour la reconstruction automatique/allogreffe. Autres polymères tels que l’acide polylactique (PLA) sont biorésorbable, 3D imprimable et structure solide, mais sont imprimés à des températures égales ou supérieures à 210 ° C - il est impossible pour les produits biologiques être co imprimé pendant la fabrication. Polycaprolactone (PCL) est un autre polymère biorésorbable FDA affranchis, qui peut être imprimé à une température plus basse (65 ° C), qui est devenu de plus en plus populaire dans la fabrication d’implants spécifiques à un patient avec des morphologies complexes5,6 en 3D ,7,8,9. Cependant, la plupart des bioprinters à l’aide de la technologie pneumatique rendent impossible d’impression PCL à des températures inférieures, où les activités biologiques peuvent rester sain et saufs. A ce jour, l’intégration de ces polymères avec auto/allogreffes dans un nouveau biomatériau imprimable doit encore être accompli. En l’absence d’un tel matériau, une approche de vrai tissu conçu pour la reconstruction des tissus est peu probable. Par conséquent, nous avons cherché à combiner PLA, PCL et decellularise matrices allogreffe (DM) d’utiliser les avantages de chaque matière pour fabriquer une construction viable capable de reconstruire les tissus complexes. Ce processus permettrait à la résistance mécanique initiale nécessaire pour résister aux forces de in vivo et la stabilité thermique pour accueillir la fabrication additive à une construction qui induit la formation du tissu désiré.
Dans une récente tentative d’aborder les obstacles susmentionnés, nous avons montré qu’il est possible d’encapsuler la matrice extracellulaire du cartilage decellularise dans un écran PLA thermiquement protecteur qui peut être expulsé dans les filaments de PCL, conservant la capacité de DM pour influencer les cellules environnantes du hôte2. Cela a inspiré nous cherchions des approches efficaces sur le plan clinique pour la reconstruction des tissus. Dans la présente étude, nous utilisons la technologie de la plate-forme pour construire les échafaudages tout-en-un qui incluent PLA, DM et PCL (PLA-DM/PCL).
Notre objectif est d’améliorer l’efficacité et l’utilité des allogreffes utilisant la technique de la biofabrication roman proposé de récapituler avec plus de précision le tissu natif, pour finalement utiliser dans diverses applications.
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Protocol
1. obtention et microsphères de prétraitement
- Produire des microsphères avec la matrice souhaitée encapsulé (PLA-DM)2.
Remarque : Il est impératif que les microsphères sont de taille uniforme. Pour cette raison, il est essentiel de tamisage des microsphères avant toute utilisation. Bien que l’encapsulation et décellularisation matrice ont été détaillés dans les précédentes publications2, fait suite à un bref résumé du processus.- Tout d’abord, récolter des bouchons de cartilage de porc des membres postérieurs. Decellularize le cartilage dans une série de lavages avec acide 0.05 % trypsine/0,5 mm tetrasodium EDTA (EDTA), Dulbecco modifiée de l’aigle l’acide peracétique moyen (DMEM) et 1,5 % et 2,0 % Triton X-100 pendant 4 heures chacun avec eau distillée lavages avant et après chaque étape2.
- Égoutter la matrice decellularise, congeler, lyophiliser, moudre et se dissoudre dans la solution de pepsine. Après dissolution, mélanger la solution de pepsine avec PLA, qui a été dissoute dans du dichlorométhane.
- Ajouter quelques gouttes du mélange dans un polyalcool de 3 % en solution aqueuse. Centrifuger les microsphères qui en résulte, la rincer, la vidange et lyophiliser à nouveau.
Remarque : Pour plus de détails sur le processus voir le publiées antérieurement protocole n°2.
- Tamisez les microsphères.
- S’assurer que toutes les plaques de tamis ont été nettoyés à fond et sont secs avant utilisation. Si nécessaire, nettoyer tamis par ultrasons nettoyeur à assurer que toutes les sphères sont écartés de la passoire.
- Assembler le shaker passoire avec le plateau de tamis 106 µm en haut, le plateau de µm 53 après que cela et le tamis pan en bas.
- Placez les microsphères secs dans le bac de tamis plus haut et placez le couvercle sur le plateau supérieur. Vous allumez un tamisage grossier pour 8 à 10 min. Repeat sur amende pour 8 à 10 min.
NOTE : Les temps de tamis devrez peut-être être augmenté ou diminué selon le lot. - Soigneusement, enlever les plaques de tamis un et placez-les à l’envers sur un papier de grand poids. Appuyez sur les côtés doucement pour faire en sorte que la plupart des sphères est tombés sur le tamis et sur le papier.
- Jetez les sphères surdimensionnés (> 106 µm) et sphères sous-dimensionné (< 53 µm). Ajouter les sphères qui sont dans la gamme de taille de 53 à 106 µm dans un tube à centrifuger étiquetées avec le type et numéro de lot, puis placer dans un congélateur à-20 ° C jusqu'à l’utilisation ultérieure.
2. microsphères contrôle de la qualité des évaluations
Remarque : Voir la Figure 1.
- Effectuer analyse macroscopique/visuel pour vérifier que les microsphères sont harmonisés et sphérique, avec aucun agrégat présent.
- Évaluer les microsphères en utilisant une micrographie électronique à balayage (SEM).
- Pour ce faire, des microsphères de lieu sur un SEM chuck et bredouiller manteau avec or-palladium dans une atmosphère d’argon à l’aide d’une coucheuse par pulvérisation cathodique pour une épaisseur de 4 nm.
- Observer les caractéristiques de la surface, la morphologie et diamètres des microsphères en utilisant un 10 kV, accélération de la tension et une distance de travail de 10 mm pour s’assurer que la production et le tamisage des microsphères a réussi.
3. filament création pour l’impression 3D
- Mesurer et noter la masse des microsphères obtenues aux étapes 2 et 3 ; Il faut au moins 25 g.
- Ajouter la poudre de polycaprolactone (PCL) pour les microsphères pour un rapport de 1:4 poids de microsphères à PCL.
- Mélanger le mélange de poudre dans un mélangeur roulement miniature à 20 tr/min pendant 5 min puis retourner le récipient et mélanger à 20 tr/min pour un 5 min supplémentaire (voir Figure 2).
- Beaucoup des extrudeuses disponibles dans le commerce (voir la Table des matières) ont vestes isolantes étant leur température de travail prévue pour les filaments de modeling (FDM) de dépôts fondue traditionnelle. L’extrudeuse de modifier (si nécessaire) en supprimant l’isolant et l’utiliser en combinaison avec des ventilateurs de bureau (qui soufflent de l’air ambiant sur l’extrudeuse et filament extrudé) d’utiliser de l’extrudeuse à basse température.
NOTE : Ventilateurs de bureau qui soufflent de l’air ambiant pour refroidir l’extrudeuse et filament sont utiles pour cette procédure. - Programme d’installation l’installation de l’équipement pour l’extrusion. Voir la Figure 3.
- Configurer l’extrudeuse pour que sa sortie soit ~ 60 cm de l’entrée et le spouleur, avec une voie directe de la prise d’extrusion à l’entrée du spouleur.
Remarque : Le spouleur peut éventuellement être déclenché 3-4 pouces sur le banc s’il est constaté que le filament est tombante jusqu’au point de toucher la paillasse. - Placer un ventilateur de bureau ~ 15 cm de la gaine de chauffage et de l’orienter vers la gaine de chauffage offre de refroidissement à l’air ambiant dans l’ensemble de la production de filament. Placez un deuxième ventilateur de refroidissement environ à mi-chemin entre l’extrudeuse et spouleur et dirigez-la vers l’extrudat pour aider au refroidissement du filament avec l’air ambiant.
- Ajuster le positionnement selon les besoins tout au long du processus.
- Configurer l’extrudeuse pour que sa sortie soit ~ 60 cm de l’entrée et le spouleur, avec une voie directe de la prise d’extrusion à l’entrée du spouleur.
- Définir l’extrudeuse mis à jour le chauffe à 52 ° C, se tourner vers le bureau de ventilateurs de refroidissement et laissez l’instrument à venir à l’équilibre pour 20 à 30 min. veiller à ce que la buse adéquate est attachée à l’extrudeuse.
- Juste avant de commencer, remplir la trémie de l’extrudeuse avec le mélange de microsphères/PCL à l’étape 3.3. Allumez le spouleur et la vis d’extrudeuse pour initier l’extrusion du filament.
- Lorsque le filament initial est extrudé, tirez l’extrudat de la prise de l’extrusion avec une pince et le nourrir et le spouleur de filament manuellement.
- Le filament désiré prendra du temps à sortir le spouleur. À l’aide de bobines séparées ou ruban, marquer clairement quand la composition de filament visuellement semble uniforme.
- Suivre de près le processus et de modifier les paramètres si nécessaire. Ajuster la température de l’extrudeuse, extrusion auger vitesse et vitesse de spouleur pour obtenir un filament de diamètre de 1,75 mm mesurée par des étriers à. Ajustez les fans comme nécessaire pour refroidir le filament correctement pour éviter les coupes non circulaire à incandescence. Mélanger et remplir la trémie si nécessaire.
Remarque : Une attention particulière est nécessaire au cours de ce processus pour obtenir le filament adéquat pour ultérieure impression 3D. Les paramètres ci-dessus vont changer en fonction des conditions ambiantes, le niveau de remplissage et l’homogénéité du mélange dans la trémie et la dynamique de thermodynamique et d’écoulement des lots spécifiques de PCL et microsphères. - Continuer jusqu'à ce que toute la poudre a été utilisée et la trémie est presque vide d’extrusion. Ajouter la poudre PCL (sans les microsphères) dans la trémie pour rincer le mélange de microsphères qui est actuellement dans l’extrudeuse. Continuez à ajouter la poudre PCL à la trémie jusqu'à ce qu’aucuns plus de microsphères ne sont visibles dans l’extrudat.
- N’oubliez pas d’étiqueter et distincte le filament qui contient des microsphères dans la concentration désirée, comme lorsque le filament est refroidi, il est plus difficile de distinguer le filament uniform des filaments non uniforme.
- Continuer jusqu'à ce qu’il n’y a poudre minime à gauche dans la trémie d’extrusion, puis éteignez le spouleur, extrudeuse auger, élément chauffant extrudeuse et les fans.
4. impression avec le Filament
- Concevoir une géométrie de la forme désirée et la forme à l’aide d’un logiciel de conception assistée par ordinateur. Puis couper le modèle et dicter la trajectoire d’outil à l’aide de tranchage de logiciel qui est compatible avec la machine d’impression 3D utilisée.
- Charger le filament de l’étape 3 sur n’importe quelle imprimante standard de FDM, équipé de buses standard du diamètre désiré (en général 0. 4 mm). Commencer l’impression (généralement à 65-70 ° C et 300 mm/min vitesse linéaire) que le filament personnalisé est couche par couche déposée par la machine.
- Veillez à accorder une attention particulière à la première couche et ajuster les paramètres nécessaires pour obtenir une bonne qualité impression.
Remarque : Modifications peuvent être apportées à la vitesse d’impression, impression température, température de plate-forme, multiplicateur d’extrusion et d’autres paramètres. Se référer à l’imprimante et guide de dépannage du tranchage fabricant pour obtenir de l’aide.
5. contrôle de la qualité évaluation
- Placez les constructions imprimées sur des mandrins de SEM et bredouiller manteau avec or-palladium dans une atmosphère d’argon à l’aide d’une coucheuse par pulvérisation cathodique pour une épaisseur de 4 nm.
- Observer au microscope à l’aide d’un 10 kV, accélération de la tension et une distance de travail de 10 mm pour vérifier les caractéristiques de la surface et la présence ou l’absence de microsphères le cas échéant.
6. test fonctionnel des constructions de l’imprimé
Remarque : La phosphatase alcaline (ALP) peut servir comme un substitut pour la matrice decellularise pour déterminer si les protéines encapsulées sont biologiquement actifs après le processus de production de filament. ALP est utilisé parce qu’il catalyse une réaction d’un substrat, p-nitrophényl phosphate, de changer d’incolore à jaunes sous-produits, p-nitrophénol et phosphate inorganique, mais seulement si l’ALP est dans la conformation fonctionnelle.
- Imprimer une géométrie (n = 3) qui a une masse de fin d’au moins 400 mg avec le filament de microsphères ALP (PLA-ALP/PCL) à l’aide de paramètres d’impression identiques comme les échafaudages de PLA-DM/PCL. Aussi d’impression PCL-seule (PCL(-)) échafaudages de la même géométrie que les échafaudages de PLA-ALP/PCL. Les plonger dans un tampon Tris-HCl 1 mL et incuber pendant 24 h à 37 ° C et 110 tr/min rotation pour permettre la diffusion de l’enzyme.
- Ajouter 1 mL de 1 mg/mL p-nitrophényl phosphate, disodique hexahydrate dans Tris-HCl. incuber à 37 ° C, 110 tr/min pour une supplémentaire 10 h. lire l’absorbance surnageante à 415 nm.
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Representative Results
Après tamisage, microsphères devraient apparaître uniformes et être exempt de granulats. En vertu de la SEM, les microsphères tamisées peuvent avoir des petits pores sur leur surface, mais seront autrement sphériques et lisses, comme illustré à la Figure 1. Tous les filaments extrudés devraient être de diamètre uniforme et de section circulaire. Un filament qui contient des microsphères (PLA-DM/PCL) aura un peu plus mat finish tout en un PCL uniquement (filaments PCL(-)) ressemblerait plus brillant. Le filament de PLA-DM/PCL se sentirait aussi grossier au toucher que le filament PCL(-). Les échafaudages doivent être imprimés dans la géométrie souhaitée qui a été dictée par le logiciel à l’étape 4.1. La qualité de l’échafaudage et la forme doivent être reproductible et uniforme d’une impression à l’autre. Après l’impression, échafaudages avec et sans des microsphères vont être difficiles de distinguer à le œil nu, mais en vertu de la SEM, microsphères doivent être visibles sur la surface et dans les constructions. Sous SEM, PCL(-) à incandescence apparaît lisse, avec quelques stries comme un artefact de l’extrusion (Figure 4B). Microsphères devraient être visibles les deux saillants par et sous la surface de l’échafaudage de PLA-DM/PCL (voir Figure 4C). Lorsque vous utilisez ALP comme substitut pour DM, la fonctionnalité de l’enzyme dans l’échafaudage devrait être maintenue avec absorbance significativement plus élevée (t-test, p < 0,05) à 415 nm que celles des vierges PCL(-) échafaudages, 0,297 ± 0,023 et 0,166 ± 0,012, respectivement, Figure 5.
Figure 1 . Représentant macroscopique (gauche) et SEM (à droite) des images de microsphères après conditionnement et tamisage 2. note que les microsphères sont sphériques et dans la gamme de taille appropriée (53-106 µm de diamètre). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 . Mélangeur de roulement fait sur commande. Le mélangeur de laminage sur mesure est utilisé pour combiner les microsphères avec poudre PCL. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 3 . Installation de production de filament. La sortie de l’extrudeuse est situe à environ 60 cm de l’entrée du spouleur. Ventilateurs de bureau sont situés près de l’élément chauffant et environ à mi-chemin entre l’extrudeuse et le spouleur. Le spouleur peut être éventuellement élevés 3-4 pouces au-dessus de la paillasse. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 4 . Évaluation de la qualité. (A) PCL(-) (à gauche) et les PLA-DM/PCL échafaudages (à droite) sont difficiles à distinguer à le œil nu. (B) sous SEM, l’échafaudage PCL(-) apparaît généralement lisse, avec quelques stries comme des artefacts du processus d’impression. (C) sous SEM, microsphères sont visibles dans les échantillons de PLA-DM/PCL. Certains d'entre les microsphères sont indiqués à l’aide des flèches. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 5 . Des résultats représentatifs d’un test colorimétrique ALP. L’absorbance des échafaudages contenant de l’ALP (PLA-ALP/PCL) est nettement supérieur à celui de la PCL uniquement (échafaudages PCL(-)), indiquant que l’enzyme ALP catalysée la réaction d’incolore p-nitrophényl phosphate de p-nitrophénol et inorganiques phosphate. Cela démontre que la possibilité d’imprimer des protéines fonctionnelles avec le processus décrit dans ce manuscrit. * significativement différents (p < 0,05) de tous les autres groupes. Barres d’erreur indiquent la déviation standard. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
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Discussion
Decellularise les deux matrices et 3D impression PCL échafaudages indépendamment auraient dû être divulgués afin de permettre l’adhésion et la prolifération des cellules, valider leur utilisation pour cartilagineuses réparer10,11,12. L’utilisation de la matrice decellularise de génie d’approches à la réparation des tissus a été un sujet de grand intérêt et le succès dans le passé récent,2,3,14,15. Nous avons déjà noté l’augmentation de la migration, l’adhésion, la prolifération et la maintenance globale des tissus qui en résultent par rapport aux techniques traditionnelles2,15,16,17 ,,18. Beaucoup ont attribué ces résultats souhaitables pour le processus de réciprocité dynamique à travers lequel les cellules hôtes reçoivent les signaux de la matrice decellularise, répondent dynamiquement et de répliquent les repères pour les nouvelles cellules en posant plus extracellulaire qui en général, ressemble à ce qui est déjà présent19,20,21,22. Tandis que ceci a été étudié pour de nombreuses applications, nombre des processus ne sont pas faciles à reproduire et ne peut pas être adaptés pour des utilisations différentes, impossible de créer avec succès des constructions fortement axée sur le patient, incapables de créer des morphologies complexes et incapables de résister en vivo force2,3,4,13,14,15,16.
L’approche novatrice ici proposé évite l’exposition transitoire et prolongée à des températures élevées qui sont habituellement tenus par impression 3D lors de l’utilisation traditionnelle mécaniques imprimantes basées sur l’extrusion FDM avec un nouveau véhicule transporteur. Par ailleurs, le véhicule porteur (microsphères PLA) permet de protéger l’encapsulé biologique pour le laps de temps relativement court, il est exposé à la chaleur et propose une option de traitement all-in-one pour un renouvellement rapide dans la clinique2. Les méthodes proposées ci-après montrent comment créer des filaments biologiquement actives pour l’impression 3D et les échafaudages par impression 3D où une étape critique est l’extrusion du filament et l’impression de ces filaments à basse température (65 ° C). La capacité des protéines encapsulés à demeurer fonctionnel a été démontrée en utilisant ALP comme un substitut pour DM durant tout le processus. ALP a été utilisé comme l’enzyme doit être dans une conformation fonctionnelle bien précise afin de catalyser la réaction colorimétrique évaluée dans ce protocole23. Si le filament n’est pas expulsé avec une attention particulière pour le diamètre, la température et la vitesse, l’activité biologique et l’utilité pour l’impression 3D seraient sacrifiés.
Dans ce protocole, microsphères contenant decelluarized matrices (PLA-DM) étaient co-extrudé avec PCL pour faire des filaments imprimables 3D et 3D imprimés échafaudages pour cartilagineuses réparer (PLA-DM/PCL). Comme indiqué dans les étapes du protocole, une surveillance continue de la production à incandescence est essentielle pour la qualité du filament. Ajustements convient à la vitesse de l’extrusion, la vitesse du spouleur et température d’extrusion afin de maintenir le diamètre du filament souhaitée (généralement 1,75 mm). La présence des microsphères dans les échafaudages est confirmée par imagerie de SEM et de l’entretien de l’enzyme fonctionnalité est démontrée par un test de la phosphatase alcaline. Notez que ce protocole est limité par la grande quantité de microsphères requis pour la production et la résolution relativement faible des dépôts fondu aux autres modalités d’impression 3D de modélisation. Néanmoins, l’augmentation de l’activité biologique est une avancée majeure. Bien que pas l’objectif du présent protocole, des études ultérieures seront concentrera sur l’impact des microsphères sur la résistance mécanique, la migration cellulaire et la différenciation et autres caractérisations d’échafaudages. Dans l’ensemble, la technique décrite ci-après permet de matrice decellularise et autres protéines pour être imprimé à des températures plus basses que précédemment autorisé et de barrières de protection thermique afin de maintenir la fonction et la résistance mécanique2, 3.
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Disclosures
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Acknowledgments
Ce projet a été financé en partie par une subvention de la société orthopédique pédiatrique de l’Amérique du Nord (POSNA) et le National Institutes of Health accorde NIBIB R21EB025378-01 (subvention de recherche exploratoire bioingénierie).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sieve machine | Haver & Boecker Tyler | Ro-Tap RX 29-E Pure | |
| Sieve 90 um | Fisherbrand | 170328156 | No. 170 |
| Sieve 53 um | Fisherbrand | 162513588 | No. 270 |
| Sieve 106 um | Fisherbrand | 162018121 | No. 140 |
| Sputter coater | Leica | n/a | |
| Scanning Electron Microscope | Hitachi, USA | n/a | |
| Filabot EX2 | Filabot.com | FB00061 | |
| Filabot Spooler | Filabot.com | FB00073 | |
| CAPA 6506 | Perstorp | 24980-41-4 | |
| Phosphate buffered saline, PBS | Gibco | 10010023 | |
| 6" Fan | Comfort Zone, Amazon | n/a | |
| Ultrasonic Water Bath | Cole Parmer | SK-08895-13 | |
| Dreamer | FlashForge | n/a | |
| Drum Mixer | Custom made | n/a | Similar piece of equipment: https://www.coleparmer.com/i/argos-technologies-flexiroll-digital-tube-roller-shaker-120-vac/0439744?PubID=UX&persist=true&ip= no&gclid=CjwKCAjw- dXaBRAEEiwAbwCi5khGDMz0 dTjsraEsBGfhMEH7ytx LQWGUPNgUJYQ1p3vj_yxkYoI_ ixoC9GwQAvD_BwE |
| Micro Balance | Mettler Toledo, Fisher Scientific | 01-913-851 | |
| Simplify3D | Simplify3D | n/a | |
| SolidWorks | SolidWorks | n/a | |
| Microspheres | Produced in-house, see concurrently submitted JoVE submission | ||
| p-nitrophenyl phosphate, disodium salt, hexahydrate | Millipore | 4876-5GM | |
| Phosphatase, alkaline | Roche Diagnostics GmbH | 10 713 023 001 | |
| Absorbance Reader | Tecan | Sunrise | |
| Tris-HCl Buffer | Sigma-Aldrich | T6455-100ML | |
| Heated shaker | New Brunswick Scientific | Excella E24 |
References
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