Summary
이 프로토콜은 쥐에 한 문 합 위 우회 (OAGB)의 성능입니다. 연산자는 길고 관 붙인 위 주머니 뒤에 손으로 수 놓은 문 합을 수행 합니다. 이 모델에 대 한 연산자 재현 biliopancreatic 인간;에 일반적인 다리 사이 동일한 비율 따라서, biliopancreatic 사지 35 cm를 측정 한다.
Abstract
이 프로토콜의 목표 bariatric 수술과, 더 구체적으로, 비만 쥐에서 OAGB의 전 임상 모델을 설정 하는 것입니다. 이 전 임상 모델을 바탕으로, 경도 연구 수 있습니다 실행 될 인간에서 bariatric 수술 후 본 결과 기본 메커니즘의 향상 된 이해를 제공 하. 이 위해 쥐 isoflurane와 일반적인 마 취하에 개복 술을 통해에 운영 한다. 첫째, 외과 의사는 길고 관 위 주머니 만듭니다: 큰 곡선 hiatal 해 부 후에, nonglandular 위 잘라 및 제거. 다음, 나머지 위 또한 위장의 동굴을 제외 하 고 위 관을 만들 위하여 알아 보. 그 후, 외과 의사 duodenojejunal 각도에서 단일 엔드-투-사이드 gastrojejunostomy 35 cm을 수행합니다. 이 다리 길이 biliopancreatic 사지 (BPL) 및 인간 bariatric 수술에서 일반적인 사지 (CL) 길이 사이 동일한 비율을 재생 하기 위하여 선정 되었습니다. 작업 aponeurotic 및 피부 폐쇄에 의해 종료 됩니다. 수 분을 피하, 근육 예방 항생제 주사, xylocaine, 진통제, 관리 및 다이어트의 진보적인 재 소개의 정수 리 주입 초기 수술 후 관리에 의하여 이루어져 있다.
Introduction
병 적인 비만 유행1증가 함께 서방 세계에서 주요 건강 문제입니다. 비만 수술 대 한 병 적인 비만2, 비만 관련 comorbidities3에 분명 혜택만 장기 효과적인 치료 남아 있습니다. Roux-en-Y 위장 우회 (RYGB) 남아 황금 표준으로 가장 오래 된 절차 중 하나를 대부분 수행 중 긴 후속4전세계. OAGB은 마리아52001에서 처음 설명한 최근 절차 이다. 그것은 RYGB6 효과적인 대 안으로 설명 하 고 몇 가지 장점을. 초기 데이터는 체중 감량과 비만 관련 comorbidities6,7의 해상도 관하여 RYGB에 유사한 효능을 나타냅니다. 또한, 협 착 증의 위험 또는 RYGB에서 jejunojejunal 문 합의 누설은 피 한다, 그리고 내부 탈 장의 위험 RYGB8보다 낮을 수 있습니다.
Bariatric 수술 후 체중 감량을 기본 생리 적 메커니즘 논란이 남아 있고 인간9에서 공부 하기가 어려울 수 있습니다. 동물 모델은 어떻게 bariatric 수술을 이해 하는 데 유용 포도 당 대사, 신경 내 분 비 수정, 또는 물림 메커니즘에 영향을 미칠 수 있습니다. 절차 사이 비교 데이터는 부족 하 고 이러한 수술의 장기적인 효과 해야 더 나은 이해10. 완전히 사전 및 수술 후 임상 치료, 표준화 불가능 하 고 만족 스러운 후속 달성 하기 어려울 수 있습니다: 첫 번째 년11에 대 한 30%로 높은 일부 연구 보고서 손실-에-따라-최대 속도.
위장의 개념은 위 주머니의 생성으로 인해 제한 절차의 조합과 십이지 장과 근 위 공장의 위장 통과에서 제외 목록에서 발생 하는 흡수 장애의 중간 정도. 현재, 다리 길이 bariatric 수술에서 여전히 토론12,13의 문제 이다. 사용 가능한 데이터 표시 절차와 아무 일치의 높은 다양성 아직 OAGB,1415에 대 한 최적의 다리 길이에 도달 했습니다. 그럼에도 불구 하 고, 많은 저자는 OAGB16,,1718에 대 한 표준으로 길이가 200 cm BPL 보고 있다. 작은 창 자의 평균 길이 약 700 c m19입니다.
RYGB의 몇몇 설치류 모델 전세계20, 주머니 크기, 다리 길이, 그리고 vagal 신경의 보존 측면에서 큰 변화 개발 되었습니다. 하지만 아주 소수의 작가 보고 실험 OAGB;의 모델 이런 이유로, theresearch 팀 bariatric 외과와 공동으로 OAGB의 모델 개발. 모델의 개발 뒤에 있는 근거 인 간에 있는 연습 위장을 모방 했다. 모델 위장의 몸과 동굴의 제외와 위 주머니의 건설을 포함합니다. 그것을 위해, 외과 의사 스테이플링 장치를 사용 하 여 nonglandular 위 절제를 만든다. 이전 프로토콜20에 비해, 팀 당 수술 예방 항생제 치료는 사망률을 줄이기 위해 추가 하기로 위장 문 합에 인간의 수술21루틴으로 연결.
이 모델에 사용 되는 쥐 다리 길이 BPL 및 인 간에 있는 CL 사이의 비율을 재현 하도록 선택 했습니다. 예비 측정 90 및 120 cm22사이 쥐에서 총 작은 창 자 길이 나타났습니다. 따라서, OAGB에 대 한 선택 하는 BPL의 길이 35 cm 이었다. 또한,이 모델은 위 주머니 허 혈을 피하고 어떤 혈관 결 찰 하지 않고 실행 합니다.
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Protocol
모든 동물 사용 유럽 공동체 지침을 준수 하 고 현지 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 (위원회 회의 d'éthique en expérimentation animale N ° 121) 등 교육 및 연구 (Ref #02285.03).
1. 동물 및 다이어트
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쥐
- 사용 하 여 무게 260-320 g, 나이의 7 주에는 높은 지방 다이어트 (HFD)에 시작 하는 남성 Wistar 쥐.
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다이어트
- 유도 HFD의 적어도 12 수술 주 다이어트 유발 된 비만. 게 쥐 무료 물과는 HFD.
참고:는 HFD 이루어져 45%를 포함 하는 순화 된 실험실 hypercaloric 설치류 다이어트 지방 ( 재료의 표참조). - 600-800 g 사이의 무게로 수술 시 쥐 비만 인지 확인 합니다.
- 유도 HFD의 적어도 12 수술 주 다이어트 유발 된 비만. 게 쥐 무료 물과는 HFD.
2입니다. 자료
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외과 장비
- 압력솥 수술 전에 모든 수술 기구.
- 절차에 필요한 모든 수술 기구 배치 ( 재료의 표참조).
- 전통과 microsurgical 악기를 사용 하 여 돋보기 안경에서 문 합을 수행 합니다.
- 쥐 온도 37 ° C의 고 열 램프 아래에서 지구 온난화 접시에 배치 됩니다 확인 하십시오. 필요에 따라 등온 전기 보드를 배치 합니다.
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마 취와 동물 준비
- 3% vol isoflurane 설치류 상자에 마 취의 유도 대 한 공기의 흡입으로 쥐 anesthetize
- 지구 온난화 접시에 쥐를 전송 하 고 동일한 흐름 율 3%에서 안 면으로 마 취를 유지. anesthetization 동물의 꼬리를 곤란 하 게 하 여 완전 한지 확인 합니다.
- 개복 술의 절 개 영역, 3 cm에 해당 앞쪽 모피를 면도-전기 면도기를 사용 하 여 동물 골반에 있는 칼에서 넓은 영역.
- 동물, 동물의 목에 중심의 뒷면에 3 cm 넓은 영역을 면도. 이 단계는 monopolar 파워 전도를 촉진 한다.
- 작업 사이트를 통해 알코올 살 균 제 솔루션 스프레이.
3입니다. 수술
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개복 술
- 알코올 기반 로컬 살 균 면도 피부에 적용 됩니다.
- 중간 피부 절 개를 칼 과정에서 메스와 길이에서 약 3 ㎝의 복 부를 엽니다. 따라 복 근 막 열고는 교육 알바 monopolar 메스와 함께.
- 복 막 구멍 피부 절 개의 전체 길이에 열리는지 확인 합니다.
자동 견인을 가진 복 막 구멍을 노출 합니다.
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큰 커브와 hiatal 해 부
- 수술가 위로 복 부 식도의 왼쪽에 선 그리고 nonglandular 위 사이 교차점에서 큰 위 곡선을 해 부.
- 점진적으로 완벽 하 게는 그의 위대한 위 곡선을 해방 하기 위해 monopolar 메스와 gastrosplenic 배 응고 각도. 다음 얇은 인 대의 단면에 의해 hiatal 영역을 노출.
- 왼쪽된 위 동맥과 수동 것을 사용 하 여 vagal 신경 보존 복 부 식도 해 부.
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위 주머니 과자
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Nonglandular 위 절제
- 35 m m 고정 적용 위 식도 접합부의 왼쪽에 선 그리고 nonglandular 위 사이 교차점에 ( 재료의 표참조) 총. Nonglandular 위는 스테이플러의 오른쪽에 있는지 확인 합니다.
- 총을 발사 하 고 절제 nonglandular 위 제거.
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위 주머니
- 두 번째 스 테 플 러 (3-3.5 m m) thoraco-복 부 (TA) 장치를 사용 하 여 적용 하는 첫 번째 스테이플링, 위 본문의 일부는 동굴을 제외 gastroesophageal 접속점의 오른쪽에 ( 재료의 표참조), 병렬.
- 두 주식 라인의 결과 위 주머니 약 0.5 c m 인지 확인 합니다.
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Nonglandular 위 절제
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OAGB
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작은 창 자 측정
- Duodenojejunal 각도를 찾습니다. 근 위 공장 결;의 중간 부분 아래에 있는 작은 창 자 부분입니다. 그것은 비모바일 부분의 쥐에서 작은 창 자입니다.
- 5 cm 긴 테이프와 함께 수동으로 duodenojejunal 각도에서 35cm를 측정 합니다. 그런 다음 공장 antimesenteric에 punctiform enterotomy를 수행 합니다.
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Gastrojejunal 문 합
- 위 주머니의 큰 곡선에 monopolar 메스와 punctiform gastrotomy 수행, 이전의 두 사이 정확 하 게 라인 주식. 위 주머니 되지 않으면 완전히 빈, 빈을 위 주머니에 부드러운 수동 압력을 수행 합니다.
- Nontraumatic 집게와 작은 바늘 홀더는 엔드-투-사이드 gastrojejunal 문 합을 수행 합니다.
- 7-0 아이 소 택 틱 폴 리 프로필 렌의 2 개의 말단 바늘으로 봉합을 시작 ( 재료의 표참조)는 enterotomy의 사지와는 gastrotomy의 2 개의 말단 봉합.
- 다음,와 같은 사용 되는 스레드는 두 개의 말단 바늘,는 문 합의 각 측면에 두 실행 봉합을 수행 합니다. 필요한 경우 작전을 촉진 하기 위하여 문 합을 반환 합니다. 가까이 배치 하 여 문 합의 품질 바늘, 적어도 7 또는 8에서 문 합의 각 측에 확인 하십시오.
- 모든 스티치에서 1 m m 와이드 serosa를 가져가 라. 부드럽게 봉합 내부의 장 및 위 점 막 묻어 하려면 어떤 점 막 스티치에 복용 하지 마십시오.
참고:이 결과 왼쪽에 biliopancreatic 다리와 오른쪽에 영양 (알) /CL terminolateral gastrojejunal 문 합. 문 합 위 주머니에 부드러운 압력으로 침투성 인지 확인 합니다.
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작은 창 자 측정
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폐쇄 및 즉각적인 치료
- 0.9 %NaCl 용액으로 복 막 구멍을 씻어 하 고 수동으로 그들의 생리 적인 위치에 복 부 장기를 대체 합니다.
- 가까운 복 부 벽의 한 실행 봉합으로 꼰 폴리에스터 봉합 2-0 ( 재료의 표참조) 클래식 바늘 홀더.
- Polyglactin 910 4-0 ( 재료의 표참조)에의 한 실행 봉합으로 피부를 닫습니다.
- 개복 술의 각 측에 1 %lidocaine 두 정수 리 주사를 수행 합니다. 곧바로 복 부 근육 aponeurosis에 리도 카 인 1%의 1 mL/kg의 총계 복용량을 관리 합니다.
4. 수술 후 관리
- 20000 단위/kg 페니실린 g.의 근육 주사 수행
- Isotonic polyionic 솔루션 칼륨 (KCl/L의 2 세대, 4 g의 NaCl/L, 및 50 g 포도 당/l)의 10 mL의 피하 주사를 수행 합니다. 이 주입에 적합 한 진통제 buprenorphine (0.1 mg/kg) 등 meloxicam (2 mg/kg)과 혼합 가능 하다.
- 그들은 완전히 깨어 때까지 램프에 의해 데워 개별 장에 쥐를 놓습니다.
- 자주 관리 적당 한 진통 및 수 화 (isotonic polyionic 솔루션)와 수술 후 치료 하려면 동물을 검사 합니다.
- 적합 한 진통제 주사, buprenorphine (0.1 mg/kg)과 피하에서 즉각적인 meloxicam (2 mg/kg), 수술 후 기간에 하루 4, 모든 12 h까지.
- 1 일 동안 물에 자유 접근을 쥐를 유지. 하루에 2/3, 게 그들 액체 다이어트에 대 한 액세스를 무료. 4 일에 액세스할 그들 광고 libitum 정상적인 규정식에.
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Representative Results
이 프로토콜 재현할 수 이며 인 간에 연습 OAGB를 싫어 하지. 이 프로토콜의 안전 게시 된 데이터23,24 12%와 25% 사이 낮은 사망률과 지원 됩니다. 유사한 사망률과 연구 팀에 다른 외과이 프로토콜을 연습 했습니다.
그럼에도 불구 하 고, 학습 설치류 수술은 복잡 한, 그리고 돋보기 안경의 사용은 필수입니다. 실제로, 미세 문 합 건설의 중요 한 단계는 최적의 손 재주를 도달 약 15 ~ 20 작업에서 학습 기간이 필요 합니다. 외과 결점은 우리의 경험에서 주요 사망 원인이 위장 방해의 anastomotic 누설 될 수 있습니다. 성공의 또 다른 열쇠는 수술 후 영양; 실제로, 초기 수술 후 고체 영양은 위험할 수 있습니다. 이 프로토콜을 안전한 것으로 입증 되었습니다 정확한 수술 후 영양 프로토콜을 제공 합니다. 인간 및 쥐에이 수술의 개념은 그림 1에 나와 있습니다. 희생 후 작업의 결과 그림 2에 제공 됩니다.
비만 쥐에 작업 꽤 약 20%의 몸 체중 감소와 인간에서 관찰 된 그 유사 했다 후 체중 감량에서 얻은 결과 수술 후 안정. 결과 그림 3에 자세히 나와 있습니다. 더 나은 인슐린 감도 및 포도 당 포용 력을 최대한 빨리 경구 혈당 검사 (OGTT)과 인슐린 내성에 의해 assayed으로 수술 후 2 주 테스트 (ITT) 관찰 되었다. 이러한 결과 그림 4에 자세히 나와 있습니다. HFD 유도 비만 인슐린 저항과 포도 당 편협 Wistar 쥐25; 홍보 설명 하고있다 비교 데이터는 우리의 단위 (미 출판)에서 수집 되었습니다. Wistar 쥐가 2 형 당뇨병의 모델 않습니다.
그림 1 : 인 간에이 쥐 모델에 OAGB의 일러스트. (A) 당연히 인간; OAGB 위 주머니 길고 관 이며는 BPL 150과 200 cm. (B) 쥐 모델은 OAGB의 사이 측정 합니다. 알/CL는 BPL의 비율 인간의 수술; 연습 한 재현 BPL 측정 35 cm. 약어: GP = 위 주머니; 아나 = 문 합; 알 = 영양 사지; CL = 일반적인 사지. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 희생 후 쥐에 OAGB의 일러스트. 약어: GP = 위 주머니; 아나 = 문 합; 알 = 영양 사지; CL = 일반적인 다리; Oes = 식도; 듀오 십이지 = 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 수술 후 OAGB 후 진화 (평균 ± SD)를 무게 및 수술 사기. 가짜 수술 비 외상 성 집게로는 개복 술과 위대한 위 곡선에 핀치의 구성 되어 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : OAGB 후 포도 당 대사 및 수술, 수술 OGTT와 ITT 샴. (A) 수술 OGTT입니다. OAGB과 가짜 쥐 경구 포도 당 내성에 복종 되기 전에 빨리 테스트 되었다 (OGTT: 1 g/kg의 몸 무게). (B) 수술 후 ITT: 몸 무게의 1 U 인슐린/kg의 주입. 쥐는 빨리 4 h 인슐린 주입을 받기 전에 되었다. 꼬리 정 맥에 혈액 수확은 t = 0에서 10, 20, 30, 60, 및 인슐린 또는 혈당 관리 후 120 분. 포도 당 혈액 포도 당 미터를 사용 하 여 측정 했다. Glycemia mg/dL ± 표준 편차로 표현 했다. 약어: OGTT = 경구 포도 당 내성 검사; ITT = 인슐린 내성 검사; BW = 몸 무게. p < 0.05 * * p < 0.01, * * * p < 0.001; 양방향 ANOVA 통계 후 테스트 합니다. 비 외상 성 집게를 사용 하 여 큰 위 곡선의 nontraumatic 대 타로는 개복 술 가짜 수술에 의하여 이루어져 있었다. 모든 데이터는 평균 ± sd.로 표시 되는 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
이 프로토콜 OAGB 인간에서 정기적으로 연습을 흉내 낸의 이점이 있다. 그것의 안전 및 쥐에 재현성 임상 및 신진 대사 결과에서 증명 되었습니다.
이 프로토콜에서 문 합 기술적인 어려움을 야기 하 고 주요 중요 한 단계입니다. 이 위해, 그것은 미세 바늘 홀더 돋보기 안경 등 특정 microsurgical 도구를 사용 하는 데 필요한입니다. 어떤 협 없이 연금술 문 합을 실현 하기 위해 그것이 필요는 문 합의 각 측에 적어도 7 ~ 8 가까운 봉합을 수행 하 고 봉합 안에 그것을 매장 하기 위해 어떤 스티치에 어떤 점 막을 복용 하지 않도록 합니다. 진보적인 수술 후 영양 뿐만 아니라 고통 및 동물 복지의 효과적인 관리 이전에 설명 된 대로 필수입니다.
그러나,이 프로토콜에는 몇 가지 제한이 있습니다. 첫째, 수술 방법은 개복 술 대신 복 강경 수술, 동물의 작은 크기 때문입니다. 위 주머니의 오른쪽에 아무 사업부가입니다. 기술적인 이유로이 선택이 했다. 그럼에도 불구 하 고, 위 주머니의 아무 repermeabilization 15 수술 후 주 후 관찰 되었습니다. 또한, 쥐에 제한적 효과 흉내 낸 어렵습니다 매우 음식에 대 한 광고 libitum 액세스를 유지 하면서. 동물 위 주머니22,24의 제한적인 효과 균형 잡히게 하기 위해 경구 섭취의 주파수를 증가할 수 있습니다. 또한, 인간의 수술, 위 절제 없는 반면 쥐의 nonglandular 위 하지 절제 하는 경우에 크게 확장 가능한 것으로 알려져 있다입니다.
밀접 하 게 인간 수술을 흉내 낸 설치류에 OAGB의 아무 프로토콜도 다른 팀에 의해 게시 되었습니다. 이 프로토콜은 수술 타당성, 안전, 및 임상 관련성 사이 좋은 균형을 제공할 수 있습니다.
이 방법은 또한 인간 악성의 이론적 위험 증가 등의 OAGB, RYGB에 비해 더 높은 malabsorptive 효과에 RYGB 및 OAGB 후 관찰 하는 생리 적 변화를 강조 하는 미래에 사용할 수 있습니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
저자 그의 지속적인 도움과 지원; 장 피에르 Marmuse 감사 하 고 싶습니다. Eglantine Voitellier, 장 바티스트 Cavin, 및 Houneyda 엘 Jindi 모델과 그림;을 설정 하기 위한 앤-샬 롯 자리와 Andreia Goncalves 동영상; 그들의 도움에 대 한 영어에서 텍스트를 편집 하기 위해 사라 제이 Zaat. Matthieu A. Siebert와 라 라 리 베-Parenti는 Fondation에서 후원 받는 라 recherché médicale (FRM)와 협회 프랑세즈 드 chirurgie (AFC) 부 어 했다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| High-Fat Diet, 45 % fat | Genestil, Royaucourt, France | C 1090-45 | http://www.genestil.com/ |
| Metzenbaum Scissors | World Precision instrument, Sarasota, US | 501739 | https://www.wpi-europe.com |
| Dumont Tweezers | World Precision instrument, Sarasota, US | 14098 | https://www.wpi-europe.com |
| Iris Forceps | World Precision instrument, Sarasota, US | 15915 | https://www.wpi-europe.com |
| Iris Scissors 10cm | World Precision instrument, Sarasota, US | 14218 | https://www.wpi-europe.com |
| Needle Holder | World Precision instrument, Sarasota, US | 14110 | https://www.wpi-europe.com |
| Alm Self Retaining Retractor | World Precision instrument, Sarasota, US | 14240 | https://www.wpi-europe.com |
| Baby Mixter Hemostatic Forceps, Right Angle | World Precision instrument, Sarasota, US | 501240 | https://www.wpi-europe.com |
| Non woven sterile swabs | LCH Medical Products, Paris, France | SN40-0755 | www.lch-medical.com |
| Galilean Binocular Loupe 2.5x | World Precision instrument, Sarasota, US | 504056 | https://www.wpi-europe.com |
| Digestive thread: Isotactic polypropylene, monofil Prolene 7-0 | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | EH7813E | www.ethicon.com |
| Parietal thread : Coated Braided Polyester Ti-Cron 2-0 | Covidien, Mannsfield, MA, USA | 3003-52 | www.covidien.com |
| Cutaneous thread : Polyglactin, VICRYL RAPIDE 4-0 | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | VR3100 | www.ethicon.com |
| ETS-Flex 35- mm staple gun | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | ATS45 | www.ethicon.com |
| Proximate Reloadable Staplers | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | XR30V | www.ethicon.com |
| TA-DST 30mm-3.5mm | Ethicon, Issy les Moulineaux, France | TX30B | www.ethicon.com |
| Alcoholic 5% Betadine | MEDA Pharma, Merignac, France | 41085 | www.medapharma.fr |
| LIDOCAINE AGUETTANT 20 mg/ml | LABORATOIRE AGUETTANT, Lyon, France | 3400940000000.0 | https://www.aguettant.fr |
| Penicillin G 5MUI | Panpharma, Luitre, France | 3.40E+12 | https://www.panpharma.eu/fr |
| Bionolyte G5 ; Sodium chloride 0.4%, glucose 5%, potassium chloride 0.2%) | Baxter, Maurepas, France | ||
| Liquid diet | Genestil, Royaucourt, France | C-0200T | http://www.genestil.com/ |
| Isoflurane 100% | Centravet, Plancoet, France | ISO007 | http://cooperative.centravet.net |
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