यह लेख निकोटीन uncaging द्वारा माउस मस्तिष्क स्लाइस में कोर्टेक्स acetylcholine रिसेप्टर्स (nAChRs) का अध्ययन करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करता है. जब एक साथ पैच दबाना रिकॉर्डिंग और 2-फोटॉन लेजर माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग के साथ युग्मित, निकोटीन uncaging सेलुलर आकृति विज्ञान के साथ कोर्टेक्स रिसेप्टर समारोह जोड़ता है, कोलीनर्जिक तंत्रिका जीव विज्ञान की एक गहरी समझ प्रदान.
Acetylcholine (पीटीएच) रिसेप्टर्स के माध्यम से कार्य करता है के लिए ंयूरॉन प्रक्रियाओं की एक किस्म मिलाना, लेकिन यह गया है, जहां इस समारोह से बाहर किया जाता है कोशिकाओं के भीतर उपसेलुलर स्थान के साथ इस तरह के लिए पीटीएच रिसेप्टर समारोह लिंक चुनौतीपूर्ण है । कोर्टेक्स के सेलुलर स्थान का अध्ययन करने के लिए (nAChRs) देशी मस्तिष्क ऊतक में, एक ऑप्टिकल विधि electrophysiological रिकॉर्डिंग के दौरान असतत झिल्ली के पास अलहदा स्थानों पर निकोटीन की सटीक रिहाई के लिए विकसित किया गया था. मस्तिष्क स्लाइस में पैच clamped न्यूरॉन्स डाई से भर रहे हैं 2 के दौरान उनकी आकृति विज्ञान कल्पना करने के लिए फोटॉन लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी, और निकोटीन uncaging एक या एक से अधिक सेलुलर झिल्ली के पास एक ४०५ एनएम लेजर बीम ध्यान केंद्रित करके एक प्रकाश फ्लैश के साथ मार डाला है. सेलुलर वर्तमान विक्षेपन मापा जाता है, और एक उच्च संकल्प तीन आयामी (3 डी) की छवि दर्ज ंयूरॉन सेलुलर आकृति विज्ञान के साथ nAChR प्रतिक्रियाओं के सामंजस्य की अनुमति देने के लिए किया जाता है । इस विधि जटिल ऊतक की तैयारी में nAChR कार्यात्मक वितरण के विस्तृत विश्लेषण के लिए अनुमति देता है, कोलीनर्जिक neurotransmission की समझ बढ़ाने का वादा ।
कोलीनर्जिक संकेतन ध्यान नियंत्रण, इच्छाशक्ति आंदोलन, और1,2इनाम सहित कई मस्तिष्क प्रक्रियाओं, संग्राहक है । दवाओं है कि acetylcholine (कोलीनर्जिक) संचरण बढ़ाने के लिए अल्जाइमर रोग के साथ जुड़े संज्ञानात्मक हानि के इलाज के लिए उपयोग किया जाता है, अनुभूति3में सिस्टम के लिए एक महत्वपूर्ण भूमिका का अर्थ है । स्वस्थ और रोगग्रस्त राज्यों में कोलीनर्जिक रिसेप्टर्स और सर्किट की एक बेहतर समझ कई तंत्रिका विज्ञान के रोगों के लिए अच्छा चिकित्सकीय दृष्टिकोण के लिए नेतृत्व कर सकते हैं/
कोर्टेक्स (nAChRs) ligand के एक परिवार gated आयन चैनल है कि फ्लक्स cations के जवाब में अंतर्जात या तंबाकू उत्पादों से निकोटीन exogenous । तथ्य यह है कि वे बहुत पहले न्यूरोट्रांसमीटर रिसेप्टर्स के बीच थे को देखते हुए4वर्णित किया जा करने के लिए, nAChR औषध विज्ञान और मांसपेशी फाइबर में स्थान अच्छी तरह से समझ में आता है मांसपेशी प्रकार रिसेप्टर्स. इसके विपरीत, अपेक्षाकृत थोड़ा औषध विज्ञान और मस्तिष्क में देशी nAChRs के उपसेलुलर वितरण के बारे में जाना जाता है । ज्ञान में यह अंतर हाल ही में एक उपंयास रासायनिक जांच कि सेलुलर इमेजिंग और electrophysiological5रिकॉर्डिंग के दौरान मस्तिष्क के ऊतकों में nAChRs के स्थानिकी प्रतिबंधित और तेजी से सक्रियण के लिए अनुमति देता है विकसित करके संबोधित किया गया था । यहां, प्रमुख methodological कदम इस दृष्टिकोण में शामिल है, की क्षमता को बढ़ाने के समग्र लक्ष्य के साथ वर्णित कर रहे है nAChR कार्य को न्यूरॉन संरचना के साथ कनेक्ट ।
Photoactivatable निकोटीन (PA-Nic; रासायनिक नाम: 1-[7-[बीआईएस (carboxymethyl)-अमीनो] अनंतमूलि-4-yl] मिथाइल-निकोटीन) के साथ photolyzed जा सकता है ~ ४०५ एनएम लेजर चमक को कुशलतापूर्वक जारी निकोटीन5,6। uncaging करने से पहले, पीए-एनआईसी समाधान में स्थिर है और कोई अप्रिय औषधीय या photochemical सुविधाओं का प्रदर्शन5. photolysis के बाद, जारी निकोटीन जाहिर है nAChRs सक्रिय करता है और uncaging शोधकार्य औषधीय5निष्क्रिय कर रहे हैं । एक सतत-तरंग लेजर एक उत्पादन शक्ति के साथ photolysis प्रकाश स्रोत के रूप में प्रयोग किया जाता है > 1 नमूने पर मापा मेगावाट । जब स्थानीयकृत, लक्षित फोटो उत्तेजना 2-फोटॉन लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी (2PLSM) के साथ सेलुलर झिल्ली का पता लगाने की क्षमता के साथ संयुक्त है, और इस दृष्टिकोण के दो प्रमुख लाभ पूरी तरह से महसूस कर रहे हैं: photolysis गति और स्थानिक परिशुद्धता.
अधिकांश मामलों में, PA-Nic के photolysis मस्तिष्क स्लाइस के भीतर रिसेप्टर्स करने के लिए nAChR लाइगैंडों देने के अन्य तरीकों से बेहतर है. इस तरह के दृष्टिकोण एक puffer पिपेट8 के माध्यम से स्नान आवेदन7 और स्थानीय दवा वितरण शामिल हैं । जबकि पूर्व दृष्टिकोण पर लागू दवा के दीर्घकालिक प्रभाव पर जोर देता है, उत्तरार्द्ध दृष्टिकोण परीक्षणों और कोशिकाओं के बीच प्रतिक्रिया कैनेटीक्स में परिवर्तनशीलता से पीड़ित कर सकते हैं । इन वैकल्पिक दृष्टिकोण के न तो पर्याप्त रूप से एक ही ंयूरॉन से अलग सेलुलर स्थानों में रिसेप्टर गतिविधियों भेद कर सकते हैं । Optogenetically-सक्रिय रिलीज के लिए उपयोग किया गया है की जांच के लिए देशी nAChRs9,10,11, लेकिन यह उपयोगी साबित नहीं है सेलुलर nAChR स्थानों मानचित्रण के लिए । इसके अलावा, सबसे इस दृष्टिकोण का उपयोग अध्ययन एक ChR2-व्यक्त बैक्टीरियल कृत्रिम गुणसूत्र ट्रांसजेनिक माउस के साथ असामान्य कोलीनर्जिक संचरण पर भरोसा किया है12,13,14, 15 , 16 , 17. शी.
PA-Nic photolysis कोलीनर्जिक रिसेप्टर्स का अध्ययन करने के लिए केवल ऑप्टिकल दृष्टिकोण नहीं है । एक बंदी carbachol को कार्यात्मक रूप से कल्चरल सेल18 और ब्रेन स्लाइस19में पीटीएच रिसेप्टर गतिविधियों को मैप करने के लिए इस्तेमाल किया गया था, लेकिन पीए-एनआईसी के विकास के दौरान तुलनात्मक अध्ययन के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध नहीं था । एक ruthenium बीआईएस (bipyridine)-निकोटीन जटिल (रूबि-निकोटीन) को निकोटीन uncaging20के लिए अनुमति देने के लिए सूचित किया गया था, लेकिन रूबि के वाणिज्यिक तैयारी-निकोटीन एक सिर से सिर तुलना अध्ययन5में पीए एनआईसी के लिए अवर साबित कर दिया. यह गैर के साथ इस तरह के तुलनात्मक प्रयोगों को दोहराने उपयोगी हो सकता है वाणिज्यिक, उच्च शुद्ध रूबि-निकोटीन, के रूप में अपनी दिखाई अवशोषण कोलीनर्जिक अध्ययन के लिए PA-एनआईसी की सुविधाओं की तारीफ कर सकता है । अंत में, nAChRs भी ऑप्टिकली फोटो स्विच लाइगैंडों और आनुवंशिक रूप से संशोधित रिसेप्टर्स21का एक संयोजन का उपयोग कर हेरफेर किया गया है । यह दृष्टिकोण फिलीस्तीनी अथॉरिटी के पूरक है मस्तिष्क ऊतक में एनआईसी photolysis, की क्षमता के साथ/संशोधित nAChR दोनों एक लाभ और एक खामी के रूप में देखा की आनुवंशिक लक्ष्यीकरण की आवश्यकता है ।
इस दृष्टिकोण की कई प्रमुख आवश्यकताओं पर ध्यान दिया जाना चाहिए । सबसे पहले, एक उपयुक्त दृश्य विधि को सही ंयूरॉन झिल्ली का पता लगाने की जरूरत है । पारंपरिक महामारी के साथ इमेजिंग-प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी जब प्रसंस्कृत कोशिकाओं का अध्ययन पर्याप्त हो सकता है, लेकिन मस्तिष्क स्लाइस या अन्य मोटी ऊतक की तैयारी, 2PLSM या फोकल माइक्रोस्कोपी में न्यूरॉन्स से रिकॉर्डिंग के लिए एक आवश्यकता है. दूसरा, एक उपयुक्त विधि photolysis लेजर बीम की स्थिति की जरूरत है । इस दृष्टिकोण दो स्वतंत्र एक्स-वाई के साथ एक दोहरे गैल्वेनोमीटर स्कैन सिर का इस्तेमाल इमेजिंग बीम और प्वाइंट photoactivation uncaging लेजर बीम22,23,24का उपयोग कर के रैस्टर स्कैनिंग के लिए दर्पण । अंय, और अधिक सीमित समाधान संभव है, जैसे (1) एक एकल गैल्वेनोमीटर स्कैन सिर कि वैकल्पिक रूप से रैस्टर इमेजिंग बीम और uncaging बीम, या (2) बस देखने के क्षेत्र के केंद्र के लिए uncaging किरण निर्देशित ऐसी है कि सेल के लिए लाया जाता है स्कैन फ़्लैश photolysis के लिए यह स्थिति । तीसरे, एक प्रणाली एक साथ electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए आवश्यक है अगर एक प्रयोगों के दौरान शारीरिक संकेतों को इकट्ठा करना चाहता है । उपर्युक्त आवश्यकताओं को एक उपयुक्त सभी ऑप्टिकल इमेजिंग तकनीक के साथ मुलाकात की जा सकती है, जैसा कि हाल ही में5वर्णित है । नीचे, एक विस्तृत प्रोटोकॉल शामिल है जो इस approach के प्रमुख चरणों का वर्णन करता है ।
PA-एनआईसी आवेदन/वितरण विधि का चुनाव इस स्थानीयकृत फोटो उत्तेजना तकनीक में सबसे महत्वपूर्ण कदम है । दो तरीकों, स्नान आवेदन और स्थानीय छिड़काव, प्रत्येक प्रस्ताव अलग लाभ और सीमाएं हैं । चुनाव मुख्यतः ब्याज के सेल प्रकार में nAChR कार्यात्मक अभिव्यक्ति स्तर से प्रभावित है । यह अक्सर स्नान आवेदन का उपयोग करने के लिए बेहतर है जब कार्यात्मक अभिव्यक्ति स्तर उच्च रहे हैं, के रूप में स्नान आवेदन एक वर्दी जांच दर्ज की गई सेल के आसपास एकाग्रता के लिए अनुमति देता है, डेटा व्याख्या की सुविधा । स्नान आवेदन भी ऊतक में एक दूसरे छिड़काव पिपेट के लिए की जरूरत समाप्त, पूरी प्रक्रिया को आसान बनाने. हालांकि, महंगे यौगिकों के स्नान आवेदन प्रयोग प्रति अधिक लागत ।
आमतौर पर, समस्या निवारण क्यों कोई nAChR सक्रियण फ़्लैश photolysis निंनलिखित देखा है समझने की कोशिश कर शामिल है । जब एक सेल प्रकार है कि पहले PA-एनआईसी के साथ अध्ययन नहीं किया गया है के साथ काम कर रहे, जांचकर्ता स्थानीय कश-के आवेदन करना चाहिए या निकोटीन के लिए निर्धारित है कि पर्याप्त रिसेप्टर्स कार्यात्मक5व्यक्त कर रहे हैं । सत्यापित करने के लिए कि प्रणाली photolysis प्रतिक्रियाओं का पता लगाने में सक्षम है, नियंत्रण प्रयोगों औसत दर्जे का habenula ंयूरॉंस में किया जाना चाहिए कि बड़ी मात्रा में रिसेप्टर30व्यक्त करते हैं । इस मस्तिष्क क्षेत्र में, PA-एनआईसी स्नान आवेदन संभव है, जो सत्यापन प्रयोगों के लिए बेहतर है । केवल ये मांयता प्रयोग करने के बाद एक को एक अध्ययन कक्ष प्रकार पर ले जाना चाहिए । यदि प्रयोगात्मक प्रणाली को मान्य किया गया है और प्रतिक्रियाओं बहुत छोटे या undetect रहते हैं, यह PA-Nic की एकाग्रता में वृद्धि करने के लिए वारंट किया जा सकता है, फ्लैश तीव्रता या नाड़ी अवधि में वृद्धि, nAChR को बढ़ाने के लिए एक nAChR सकारात्मक allosteric संग्राहक जोड़ें गतिविधि6, या इनमें से कुछ संयोजन ।
कभी-कभार, uncaging प्रतिसाद भी बड़े होते हैं, जिनमें महत्वपूर्ण nAChR सक्रियण के साथ अप्रत्यक्ष वोल्टेज gated Na+ चैनल सक्रियण और अनबंद आवक धाराओं के कारण खराब स्थान दबाना होता है. इन कलाकृतियों, जो पूरी तरह से अस्पष्ट nAChR आवक धाराओं और डेटा व्याख्या असंभव बनाने, रिकॉर्डिंग पिपेट में QX-३१४ (2 मिमी) के शामिल किए जाने से समाप्त किया जा सकता है । वे भी पीए एनआईसी की एकाग्रता को कम करने या फ्लैश तीव्रता या नाड़ी अवधि को कम करने से समाप्त किया जा सकता है । सभी दृश्य प्रकाश फोटो उत्तेजना प्रयोगों में, देखभाल जब उत्तेजना साइटों का चयन करने के लिए अनायास उत्तेजना/photolysis ऊपर या नीचे वांछित फोकल विमान से बचने के लिए प्रयोग किया जाना चाहिए । इसके अतिरिक्त और जब लागू, लेजर शक्ति हमेशा शारीरिक प्रतिक्रियाओं को पुन: पेश करने के लिए titrated होना चाहिए । यह विशेष रूप से जेड के बारे में पता होना महत्वपूर्ण है अक्ष photostimulation जब बंदी लाइगैंडों के साथ काम कर रहे हैं, के रूप में लाइगैंडों कि ऊपर/फोकल स्पॉट नीचे अभी भी फैलाना और जैविक प्रणाली (यानी के साथ बातचीत कर सकते हैं, रिसेप्टर्स) अध्ययन के तहत ।
पीए-एनआईसी लेजर फ्लैश photolysis सभी जांचकर्ताओं के लिए उपयुक्त नहीं हो सकता है, के रूप में कई सीमाएं मौजूद हैं । पहले एक उपयुक्त सेट अप की अपेक्षाकृत उच्च लागत है । जब बरकरार मस्तिष्क स्लाइस के साथ काम कर रहे हैं, dendrites की तरह छोटे व्यास संरचनाओं के पास uncaging एक परिष्कृत दृश्य प्रणाली जैसे एक 2-फोटॉन माइक्रोस्कोप के रूप में की आवश्यकता है । एक तिवारी की उच्च लागत के अलावा: नीलमणि, स्वरित्र आईआर स्पंदित लेजर 2 प्रदर्शन के लिए-फोटॉन माइक्रोस्कोपी, एक दोहरे गैल्वेनोमीटर प्रणाली स्वतंत्र रूप से स्थिति में सक्षम दो लेजर बीम आगे प्रणाली लागत बढ़ जाती है । कुल सिस्टम लागत एक घर निर्मित प्रणाली का उपयोग करके कम किया जा सकता है अगर अन्वेषक पर्याप्त विशेषज्ञता और निर्माण करने के लिए समय है, समस्या निवारण, और इस तरह के एक प्रणाली को बनाए रखने. एक दूसरी सीमा अक्सर कम nAChR कार्यात्मक अभिव्यक्ति है, जो आंशिक रूप से कदम उठाने के रूप में ऊपर उल्लेख किया है, लेकिन यह सफलता की गारंटी नहीं हो सकता है का शमन शामिल है । आमतौर पर, अगर एक उपाय नहीं कर सकते ligand-सक्रिय धाराओं के बाद पफ-एगोनिस्ट के आवेदन, फिलीस्तीनी अथॉरिटी-एनआईसी फ्लैश photolysis वोल्टेज दबाना के तहत स्वीकार्य परिणाम नहीं हो सकता है । एक तीसरी सीमा पीए एनआईसी के आंतरिक प्रतिदीप्ति शामिल है । pa-एनआईसी अवशोषित ~ ४०५ एनएम प्रकाश और हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन के रूप में एक समान श्रेणी में उत्सर्जन करता है (GFP) या Alexa ४८८5। जब पीए-एनआईसी सांद्रता ~ 1 मिमी से अधिक है, इस प्रतिदीप्ति संपत्ति यह एक साथ करने के लिए चुनौतीपूर्ण ंयूरॉंस संरचनाओं कल्पना कर सकते हैं । इस को कम करने के लिए, यह छिड़काव पिपेट से पीए-एनआईसी के प्रवाह को आसानी से नियंत्रित करने के लिए सक्षम होना करने के लिए महत्वपूर्ण है । समय पर, PA-एनआईसी प्रवाह फ्लोरोसेंट अणुओं को दूर फैलाना करने की अनुमति देने के लिए बंद कर दिया गया था । इस uncaging बीम के स्थान की स्थिति की जाँच के लिए ंयूरॉन के पुनः इमेजिंग की अनुमति दी । उल्लेख करने के लिए एक चौथी संभावित सीमा photolysis के लिए ४०५ एनएम प्रकाश का उपयोग शामिल है । ऐसे ४०५ एनएम के रूप में छोटे तरंग दैर्ध्य और अधिक जटिल ऊतक में एक मस्तिष्क टुकड़ा के रूप में तितर बितर करने के लिए प्रवण हैं । इस प्रकार, एक दिया फ्लैश तीव्रता और अवधि में, uncaging प्रतिक्रिया आयाम और क्षय कैनेटीक्स अंतर से स्लाइस के भीतर uncaging ध्यान की गहराई से प्रभावित हो सकता है । nAChRs के जैविक पहलुओं के बारे में निष्कर्ष खाते में इस महत्वपूर्ण चेतावनी लेना चाहिए ।
इस स्थानीयकृत लेजर फ़्लैश photolysis तकनीक हाल ही में nAChR तंत्रिका जीव विज्ञान के बारे में नए विवरण को उजागर किया गया है । उदाहरण के लिए, जीर्ण निकोटीन जोखिम औसत दर्जे का habenula ंयूरॉंस में perisomatic और वृक्ष nAChR समारोह को बढ़ाता है5। यह भी प्रदर्शन में मदद करने के लिए इस्तेमाल किया गया था, पहली बार के लिए, कि ventral tegmental क्षेत्र ग्लूटामेट ंयूरॉंस उनके perisomatic और वृक्ष सेलुलर कंपार्टमेंट6में कार्यात्मक nAChRs व्यक्त करते हैं । इस तकनीक के कई संभावित भविष्य का उपयोग करता है, और दृष्टिकोण अंय प्रमुख ंयूरॉन प्रकार है कि nAChRs व्यक्त करने के लिए जाना जाता है के लिए लागू किया जा सकता है, जैसे cortical हवामहल न्यूरॉन्स31 या न्यूरॉन्स सेरेब्रल प्रांतस्था में३२, striatum३३ , व हिप्पोकैम्पस19. इस तकनीक को भी औषध विज्ञान और/या nAChR जीन संपादन३४ के साथ जोड़ा जा सकता है अलग ंयूरॉन डिब्बों के लिए विशिष्ट रिसेप्टर उपप्रकारों information । दृष्टिकोण आसानी से अंय अनंतमूलि-बंदी यौगिकों, सहित के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, लेकिन तक सीमित नहीं है, उन फिलीस्तीनी अथॉरिटी के साथ समानांतर में विकसित-एनआईसी5। अंत में, PA-एनआईसी फ़्लैश photolysis एक दिन में इस्तेमाल किया जा सकता है एक जाग/व्यवहार जानवर उपंयास व्यवहार औषधि मानदंड में है निकोटीन कार्रवाई का अध्ययन ।
The authors have nothing to disclose.
लेखक निंनलिखित उत्तर पश्चिमी मुख्य जांचकर्ताओं के प्रयोगशाला सदस्यों को धंयवाद: रयान Drenan, डी जेंस Surmeier, Yevgenia Kozorovitskiy, और अनीस ठेकेदार । यह काम अमेरिका के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (NIH) (पलाश DA035942 और DA040626 को R.M.D.), PhRMA फाउंडेशन (M.C.A. को फैलोशिप), और HHMI द्वारा समर्थित किया गया.
Instruments, Consumables, and Miscellaneous Chemicals | |||
Multiclamp 700B | Molecular Devices Corp. | Patch clamp amplifier | |
Pneumatic Picopump | World Precision Instruments | PV820 | |
Micropipette puller | Sutter Instrument Co | P-97 | |
Temperature Controller | Warner Instruments | TC-324C | |
Vibrating blade microtome | Leica Biosystems | VT1200S | |
Ultrafree-MC Centrifugal Filter | MilliporeSigma | UFC30GV0S | internal solution filter |
Borosilicate Glass Capillaries | World Precision Instruments | 1B150F-4 | patch and local application pipette |
(-)-Nicotine hydrogen tartrate salt | Glentham | GL9693 | nicotine salt |
7-carboxymethylamino-4-methyl coumarin | Janelia Research Campus | PA-Nic by-product | |
1-[7-[bis(carboxymethyl)- amino]coumarin-4-yl]methyl-nicotine | Janelia Research Campus | PA-Nic | |
Euthasol (Pentobarbital Sodium and Phenytoin Sodium) | Virbac | ANADA #200-071 | |
Alexa FluorTM 488 Hydrazide | ThermoFisher | A10436 | green fill dye |
Alexa FluorTM 568 Hydrazide | ThermoFisher | A10437 | red fill dye |
6-carboxy-AF594 (Alexa Fluor 594) | Janelia Research Campus | red fill dye | |
QX 314 chloride | Tocris | 2313 | voltage-gated sodium channel blocker |
Power Meter | ThorLabs | S120C | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Chemicals for Solutions | |||
N-Methyl-D-glucamine | Sigma | M2004 | |
Potassium chloride | Sigma | P3911 | |
Sodium phosphate monobasic monohydrate | Sigma | S9638 | |
Sodium bicarbonate | Sigma | S6014 | |
HEPES | Sigma | H3375 | |
D-(+)-Glucose | Sigma | G5767 | |
(+)-Sodium L-ascorbate | Sigma | A4034 | |
Thiourea | Sigma | T8656 | |
Sodium pyruvate | Sigma | P2256 | |
Magnesium sulfate heptahydrate | Sigma | 230391 | |
Calcium chloride dihydrate | Sigma | 223506 | |
Sodium chloride | Sigma | S9625 | |
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N′,N′-tetraacetic acid | Sigma | E3889 | |
Adenosine 5′-triphosphate magnesium salt | Sigma | A9187 | |
Guanosine 5′-triphosphate sodium salt hydrate | Sigma | G8877 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Components of 2-Photon Microscope | |||
Ultima Laser Scanner for Olympus BX51 Microscope | Bruker Nano, Inc. | imaging software and galvos | |
Imaging X-Y galvanometers | Cambridge Technology | ||
Mai Tai HP1040 | Spectra-Physics | Tuneable IR laser | |
Pockels cell M350-80-02-BK with M302RM Driver | Conoptics, Inc. | for IR laser attenuation | |
Integrating Sphere Photodiode Power Sensor | Thorlabs, Inc | laser power pick-off photodiode | |
Uncaging X-Y galvanometers | Cambridge Technology | ||
Helios 2-Line Laser Launch | Bruker Nano, Inc. | uncaging laser components | |
OBIS LX/LS 405 nm (100 mW) | Coherent, Inc. | ||
OBIS LX/LS 473 nm (75 mW) | Coherent, Inc. | ||
Point-Photoactivation / Fiber Input Module for Limo Sidecar – Uncaging | Bruker Nano, Inc. | ||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Upright Microscope | Olympus | BX51WIF | Upright microscope chasis |
Objective: Olympus M Plan FL 10x; NA 0.3 WD 11 mm | Olympus | 10x objective | |
Objective: Olympus M Plan Fluorite 60x/1.0 WD=2mm NIR | Olympus | 60x water-dipping objective | |
X-Cite 110, four-LED LLG coupled epi-fluorescence light source | Excelitas Technologies | LED Light Source | |
Epi-Fluorescence Filter: ET-GFP (FITC/CY2) for Epi-Turret | Chroma Technologies | LED Filter for blue light excitation | |
Epi-Fluorescence Filter: ET-DsRed (TRITC/CY3) for Epi-Turret | Chroma Technologies | LED Filter for green light excitation | |
B&W CCD camera; Watec, 0.5in B/W CCD | Watec Co., LTD. | CCD camera for patch clamp recording | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
External Detectors – Dual Reflected Emission – Olympus Upright (Multi-Alkali, GaAsP) | Bruker Nano, Inc. | ||
Multi-alkali side-on PMT | Hamamatsu | R3896 | red channel PMT |
595/50m | Chroma Technologies | red channel emission filter | |
565lpxr | Chroma Technologies | dichroic beam splitter | |
GaAsP end-on PMT | Hamamatsu | 7422PA-40 | green channel PMT |
525/70m | Chroma Technologies | green channel emission filter | |
High-Speed Shutter for Hamamatsu H7422 PMT | Vincent Associates / Bruker | 517329 | PMT shutter mount |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Dodt Gradient Contrast Transmission Detection Module | Bruker Nano, Inc. | ||
Multi-alkali side-on PMT | Hamamatsu | R3896 | Dodt PMT |