عاده ، يتم استخدام نموذج حقن الرقبة الماوس لتقييم السلوكيات الخدش المستحثة pruritogen. ومع ذلك ، فان النموذج يوفر المعلومات فقط علي الحكة ، وليس الم. هنا ، يتم إدخال نموذج حقن الخد في الفئران التي يمكن استخدامها لقياس الم والسلوكيات المتعلقة بالحكة في وقت واحد.
تم تعريف الحكة بأنها “إحساس جلدي غير سار يثير الرغبة في الخدش” من قبل روثمان في 1941. في نماذج الماوس ، يتم احتساب نوبات الخدش عاده لتقييم الحكة الناجمة عن pruritogens. ومع ذلك ، فقد أظهرت التقارير السابقة ان المواد الجينات تحفز أيضا سلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة الماوس ، وهو الاختبار الأكثر شيوعا المستخدمة لسلوكيات الخدش. هذا الاستنتاج يجعل من الصعب دراسة حكه في الفئران. وعلي النقيض من ذلك, capsaicin, algogen المشتركة, انخفاض السلوكيات الخدش في بعض التجارب حقن الرقبة. ولذلك ، فان تاثير الم علي سلوكيات الخدش لا يزال غير واضح. التالي فمن الضروري لتطوير طريقه للتحقيق في وقت واحد حكه والإحساس بالم باستخدام الاختبارات السلوكية. هنا ، يتم إدخال نموذج حقن الخد الذي يمكن استخدامه في وقت واحد قياس الم-والسلوكيات المتعلقة الحكة. في هذا النموذج ، pruritogens تحفز السلوكيات الخدش في حين ان المواد الجينات تحفز السلوكيات المسح. باستخدام هذا النموذج ، حمض الليفوفوسفاتيديك (lpa) ، وهو الوسيط حكه وجدت في المرضي الركودي مع حكه ، ويظهر للحث علي حصرا حكه ولكن ليس الم. ومع ذلك ، في نماذج الماوس ، وقد أفيد ان LPA علي حد سواء pruritogen و algogen. واظهر التحقيق في اثار LPA في نموذج حقن الخد الماوس ان LPA المستحثة فقط الخدش ، ولكن ليس مسح السلوكيات. وهذا يشير إلى ان LPA بمثابه pruritogen بالمثل في الفئران والبشر ، ويوضح فائده نموذج حقن الخد للبحث حكه.
وقد وصفت حكه في الأصل بأنها ضجة التي يدفع السلوكيات الخدش لأزاله المواد الضارة من سطح الجلد. ومع ذلك ، كانت حكه التركيز من العلاجات لأحاسيس غير ساره الناجمة عن العديد من الامراض مثل التهاب الجلد التاتبي ، وآلافات العصبية ، وركود صفراوي1. في هذه الحالات ، حكه هو إحساس غير ساره خطيره مماثله للألم. لذلك ، تمثل الحكة هدفا بحثيا هاما. السلوك الخدش هو المؤشر الأساسي للحكة في التجارب الحيوانية ، ويمكن ان يسبب السلوكيات الخدش في الفئران عن طريق حقن pruritogens في الجلد علي رقبتهم2،3. ومع ذلك ، أظهرت دراسة سابقه ان كابسايسين ، algogen ، ويدفع أيضا السلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة4، مما يجعل من الصعب التمييز حكه من الم في هذا النموذج. في المقابل, وقد وجد ان كابسايسين خفض السلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة, مشيرا إلى ان تاثير الم علي السلوكيات الخدش معقده ويعتمد علي الظروف التجريبية. ولذلك ، فان القياسات المتزامنة للألم والسلوكيات المتعلقة بالحكة من شانها ان تمكن من تحليل دقيق لل pruritogens و algogens. ستيفن g. Shimada وروبرت h. LaMotte نجح في قياسات متزامنة من الم والسلوكيات المتعلقة حكه عن طريق تغيير موقع الحقن من الرقبة إلى الخد4. في نموذج حقن الخد ، كابسايسين المستحثة المسح ، ولكن لا خدش السلوكيات ، في حين الهستامين ، pruritogen ، التي تسببت فقط السلوكيات الخدش. ولذلك ، فان هذا النموذج يتيح التقييم المستقل للحكة والم ، مما يجعل حقن الخد نموذجا مفيدا للبحوث الحكة. عند محاولة تحديد ما إذا كانت ماده اختبار هي pruritogen و/أو algogen ، يوفر هذا النموذج المزيد من المعلومات من نموذج حقن الرقبة. توضح هذه المقالة طريقه عمليه لاجراء حقن الخد وعد نوبات الخدش أو المسح ، وتبين فائده هذه الطريقة لتقييم سلوكيات الخدش المستحثة بحمض الليفوفوسفاتيديك (LPA).
في هذه المقالة ، يتم تقديم نموذج حقن الخد وتبين ان تكون مفيده لتحليل الم والسلوكيات المتعلقة بالحكة.
واظهر تقرير سابق ان المواد الجينات تحفز السلوكيات الخدش في نموذج حقن الرقبة الماوس4. وفي المقابل ، قلل كابسايسين من سلوكيات الخدش في تجارب حقن العنق الأخرى (الشكل 3). ولذلك ، فان تاثير الم علي سلوك الخدش لا يزال غير واضح. التالي فمن الضروري لتطوير طريقه للتحقيق في وقت واحد الم والحكة من خلال الاختبارات السلوكية. باستخدام نموذج حقن الخد ، يمكن تقييم تاثير ماده علي كل من الم والحكة.
وقد سبق الإبلاغ عن ان LPA داخل الخلايا ينشط مباشره TRPV1 و TRPA1 كاليه من حكه المستحثة LPA5. وفقا لذلك ، يمكن ان تكون حكه الناجمة عن LPA الهستامين مستقله. وأظهرت دراسة سابقه أيضا انه يمكن استخدام نموذج حقن الخد لتقييم حكه المستقلة الهستامين16. ولذلك ، يمكن استخدام هذا النموذج لحكه تعتمد علي الهيستامين ومستقله علي حد سواء.
واحده من الخطوات الحاسمة في هذه التجربة هو الحقن. لان هذا هو اختبار سلوكي حاد ، لا يمكن استخدام التخدير في خطوه الحقن لأنه قد يؤثر علي هذه السلوكيات. ولذلك ، الماوس يحتاج إلى ان تعقد بشكل أمن من أجل اجراء حقن دقيق. عندما الإمساك علي الحيوانية ليست أمنه ، وخاصه عند حقن algogens قويه ، قد الفئران النضال ، مما يؤدي إلى حجم الحقن غير دقيقه وعمق ، تليها صعوبة في تفسير النتائج. عند التعامل مع الماوس ، وسحب الجلد علي مؤخر بين الإبهام والسبابة لمنع حركه الماوس.
ومن الخطوات الحاسمة الأخرى التحليل السلوكي. لان الخدش هو سريع جدا ، والفيديو يحتاج إلى ان يراقب بعناية. وعلاوة علي ذلك ، يمكن ان يكون من الصعب التمييز من الاستمالة. ولذلك ، يوصي باستخدام المواد الكيميائية الايجابيه للسيطرة مثل كابسايسين اثناء التجربة الاولي. ويمكن أيضا ان تؤثر شروط التسجيل وأعاده التشغيل علي عد كلا السلوكين. إذا كان من الصعب مراقبه السلوكيات بوضوح ، يمكن استخدام المرايا حول الأقفاص لتعزيز زوايا المشاهدة4.
وتجدر الاشاره إلى ان نموذج حقن الخد قد تظهر دقه كميه منخفضه للمواد الكيميائية المختبرة مما كانت عليه في نموذج حقن الرقبة. كما هو مبين في الشكل 3 والشكل 4، فان نفس الكمية من الهستامين التي تسببت في السلوكيات الخدش أكثر في نموذج الرقبة مما كانت عليه في نموذج الخد ، وأظهرت اختلافا أصغر في نموذج حقن الرقبة. مره واحده وقد ثبت ماده اختبار ان يكون pruritogen مع الآثار الجينات منخفضه مع نموذج حقن الخد, ويوصي نموذج حقن الرقبة للتحليل الكمي اضافيه. حتى مع هذه القيود ، نموذج حقن الخد مفيد للتقييم الدقيق للمواد الاختبار ، وخاصه في مجال البحوث حكه.
The authors have nothing to disclose.
ونحن ممتنون للسيد ستيفن ج. شيمادا وروبرت ه. لأموت (جامعه ييل كليه الطب ، كونيتيكت) من الأساليب التي (المرجع 4) تم تكييف هذه التقنية. ونشكر أيضا السيد كينتارو ميهارا علي إنشاء الرسوم التوضيحية بالفاره. وكانت هذه الدراسة مدعومة بمنحه معونة للبحوث العلمية من وزاره التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا في اليابان (الرقمان 15H02501 و 15H02501 إلى M.T. و No. 16K21691 إلى H.K.) ومؤسسه اوهارا التذكارية (إلى H.K.). ونحن نقدر إدخال طريقه حقن الخد من قبل البروفيسور لاميوت في جامعه ييل.
capsaicin | Sigma | M2028 | |
diphenhydramine hydrochloride | Wako | 044-19772 | |
histamine | Sigma | H7125 | |
iMovie | Apple | ||
lysophosphatidic acid | Avanti Polar Lipids | 325465-93-8 | |
myjector | Terumo | ss-05M2913 | |
tween-80 | Sigma | P4780 | |
video camera | Panasonic | VX985M |