전형적으로, 마우스 넥 주사 모델은 pruritogen 유도된 스크래치 거동을 평가하기 위해 사용된다. 그러나 모델은 통증이 아닌 가려움에 대한 정보만 제공합니다. 여기에서, 뺨 주입 모형은 동시에 고통과 가려움 관련 행동을 측정하기 위하여 이용될 수 있는 마우스에서 소개됩니다.
가려움증은 1941년 로스만이 “긁으려는 욕망을 불러일으키는 불쾌한 상처 감각”으로 정의되었습니다. 마우스 모델에서 스크래치 시합은 일반적으로 pruritogens에 의해 유도 된 가려움을 평가 하기 위해 계산 됩니다. 그러나, 이전 보고서는 알지 물질또한 마우스 목 주입 모델에서 긁힘 행동을 유도 하는 것으로 나타났습니다., 스크래킹 행동에 사용 되는 가장 일반적인 테스트는. 이 발견은 마우스에 있는 가려움을 공부하는 것을 어렵게 만듭니다. 대조적으로, capsaicin, 일반적인 algogen, 일부 목 주입 실험에서 긁힘 행동을 감소. 따라서 긁힘 행동에 대한 통증의 영향은 불분명합니다. 따라서 행동 테스트를 사용하여 가려움증과 통증 감각을 동시에 조사하는 방법을 개발할 필요가 있습니다. 여기에서, 뺨 주입 모형은 동시에 고통 및 가려움 관련 행동을 측정하기 위하여 이용될 수 있는 소개됩니다. 이 모델에서, 소양제는 긁힘 행동을 유도하고, 알지 물질은 와이핑 동작을 유도한다. 이 모형을 사용하여, 리소포스파티딕산 (LPA), 가려움증을 가진 담낭 환자에서 찾아낸 가려움중간제는, 독점적으로 가려움을 유도하기 위하여 보이지만 고통이 아닙니다. 그러나, 마우스 모델에서, LPA는 pruritogen 및 algogen 둘 다 보고 되었습니다. 마우스 뺨 주입 모델에서 LPA의 효과에 대 한 조사 는 LPA만 긁힘을 유도 하는 것으로 나타났습니다., 하지만 동작을 닦아. 이것은 LPA가 마우스와 인간에서 유사하게 pruritogen 역할을 한다는 것을 나타내고, 가려움 연구를 위한 뺨 주입 모형의 유용성을 보여줍니다.
가려움은 원래 피부 표면에서 유해한 물질을 제거하는 긁힘 행동을 유도하는 감각으로 특징지어졌습니다. 그러나, 가려움증은 아토피성 피부염, 신경성 병변 및 담즙정체1과같은 많은 질병에 의한 불쾌한 감각에 대한 치료법의 초점이었다. 이러한 경우 가려움증은 통증과 유사한 심각한 불쾌한 감각입니다. 따라서, 가려움은 중요한 연구 대상을 나타낸다. 긁힘 행동은 동물 실험에서 가려움증의 주요 지표이며, 스크래칭 행동은 목에 피부에 pruritogens를 주입하여 마우스에서 유도 될 수있다2,3. 그러나, 이전 연구는 capsaicin, algogen, 또한 목 주입 모델4에긁힘 행동을 유도, 어려운이 모델에 통증에서 가려움을 구별 하는 만들기. 대조적으로, capsaicin는 목 주입 모형에 있는 긁는 행동을 감소시켰습니다, 긁는 행동에 고통의 효력이 복잡하고 실험 조건에 달려 있다는 것을 나타내는. 따라서 통증과 가려움 관련 행동을 동시에 측정하면 프리리토겐과 유발 물질의 정확한 분석을 가능하게 할 수 있습니다. 스티븐 G. 시마다와 로버트 H. 라모트는 목에서 뺨으로 주사 부위를 변경하여 통증과 가려움관련 행동을 동시에 측정하는 데성공했습니다 4. 뺨 주입 모델에서, capsaicin 유도 닦아, 하지만 스크래핑 행동, 히스타민 동안, pruritogen, 만 긁는 행동을 유도. 따라서이 모델은 가려움과 통증의 독립적 인 평가를 가능하게하여 뺨 주입을 가려움 연구에 유용한 모델로 만듭니다. 시험 물질이 pruritogen 및/또는 algogen인지 확인하려고 할 때, 이 모형은 목 주입 모형 보다는 더 많은 정보를 제공합니다. 이 문서에서는 뺨 주입을 수행하고 긁힘 또는 닦음의 시합을 계산하기위한 실용적인 방법을 설명하고, 리소포스파티산 (LPA)에 의해 유도 된 긁힘 행동을 평가하기위한이 방법의 유용성을 보여줍니다.
이 기사에서는 뺨 주입 모델이 도입되어 통증 및 가려움관련 행동을 분석하는 데 유용한 것으로 나타났습니다.
이전 보고서는 알지 물질이 마우스 목 주입 모델4에서긁힘 행동을 유도하는 것으로 나타났습니다. 대조적으로, capsaicin는 그밖 목 주입 실험에 있는 스크래치 행동을 감소시냈습니다(그림 3). 따라서 긁힘 행동에 대한 통증의 영향은 불분명합니다. 따라서 행동 테스트를 통해 통증과 가려움증을 동시에 조사하는 방법을 개발할 필요가 있습니다. 뺨 주입 모델을 사용하여 통증과 가려움증에 대한 물질의 효과를 평가 할 수 있습니다.
이전에는 세포내 LPA가 LPA 유도 가려움의 기전으로서 TRPV1 및 TRPA1을 직접 활성화한다고 보고되었다5. 따라서, LPA-유도 가려움은 히스타민 독립적일 수 있었다. 이전 연구는 또한 뺨 주입 모델이 히스타민 독립적 인 가려움의 평가에 사용될 수 있음을 보여주었다16. 따라서,이 모델은 히스타민 의존성 및 -독립적 인 가려움모두에 사용할 수 있습니다.
이 실험에서 중요한 단계 중 하나는 주사입니다. 이것은 심각한 행동 시험이기 때문에, 마취는 이 행동에 영향을 미칠 수 있기 때문에 주입 단계에서 사용될 수 없습니다. 따라서 정확한 주입을 수행하기 위해서는 마우스를 안전하게 고정해야 합니다. 동물에 보류가 안전하지 않은 경우, 특히 강한 알고겐을 주입 할 때, 마우스는 부정확한 주입 볼륨과 깊이로 이어지는 투쟁 할 수 있습니다, 결과를 해석하는 데 어려움이 뒤따랐다. 마우스를 다룰 때 엄지와 집게 손가락 사이의 목덜미에 피부를 당겨 마우스의 움직임을 억제합니다.
또 다른 중요한 단계는 행동 분석입니다. 긁힘은 매우 빠르기 때문에 비디오를 주의 깊게 시청해야합니다. 또한, 닦는 손질과 구별하기 어려울 수 있습니다. 따라서 첫 번째 실험 에서 capsaicin과 같은 긍정적 인 제어 화학 물질을 사용하는 것이 좋습니다. 기록 및 재생 조건은 두 동작의 계산에도 영향을 줄 수 있습니다. 동작을 명확하게 관찰하기 어려운 경우 케이지 주변에 거울을 사용하여 시야각을 향상시킬 수 있습니다4.
뺨 주입 모델은 목 주입 모델보다 시험 된 화학 물질에 대한 감소 된 정량적 정확도를 나타낼 수 있음을 주목해야한다. 도 3 및 도 4에도시된 바와 같이, 동일한 양의 히스타민은 뺨 모델에서보다 목 모델에서 더 많은 긁힘 거동을 유도하고, 목 주사 모델에서 더 작은 편차를 보였다. 일단 시험된 물질이 뺨 주입 모형을 가진 낮은 algesic 효력을 가진 pruritogen인 것을 보여주면, 목 주입 모형은 추가 정량 분석을 위해 추천됩니다. 이러한 한계에도 불구하고 뺨 주입 모델은 특히 가려움증 연구 분야에서 시험 물질의 정확한 평가에 유용합니다.
The authors have nothing to disclose.
우리는 박사 스티븐 G. 시마다와 로버트 H. LaMotte (의학의 예일 대학 대학, 코네티컷) 누구의 방법 (참조 4) 이 기술이 적응된 에 감사드립니다. 또한 마우스 일러스트를 만들어 주신 미야하라 켄타로 씨에게도 감사드립니다. 이 연구는 일본 문부과학성(15H02501 및 15H05928~M.T.), 16K21691 호, 우에하라 기념재단(H.K.)의 과학연구 보조금 지원으로 지원되었습니다. 우리는 예일 대학에서 교수 라모테에 의해 뺨 주입 방법의 도입을 주셔서 감사합니다.
capsaicin | Sigma | M2028 | |
diphenhydramine hydrochloride | Wako | 044-19772 | |
histamine | Sigma | H7125 | |
iMovie | Apple | ||
lysophosphatidic acid | Avanti Polar Lipids | 325465-93-8 | |
myjector | Terumo | ss-05M2913 | |
tween-80 | Sigma | P4780 | |
video camera | Panasonic | VX985M |