Normalmente, o modelo de injeção de pescoço do mouse é usado para avaliar comportamentos de risco induzida por pruritogen. No entanto, o modelo fornece informações apenas sobre coceira, não dor. Aqui, um modelo de injeção de bochecha é introduzido em camundongos que podem ser usados para medir simultaneamente a dor e comportamentos relacionados a coceira.
Itch foi definido como “uma sensação cutânea desagradável que provoca um desejo de arranhar” por Rothman em 1941. Em modelos de mouse, lutas de arranhões são tipicamente contados para avaliar coceira induzida por pruritogens. No entanto, relatos anteriores mostraram que as substâncias algémicas também induzem comportamentos de arranhões em um modelo de injeção de pescoço do mouse, que é o teste mais comum usado para coçar comportamentos. Esse achado dificulta o estudo da coceira em camundongos. Em contraste, a capsaicina, um algogen comum, reduziu os comportamentos de arranhões em alguns experimentos de injeção de pescoço. Conseqüentemente, o efeito da dor em comportamentos de risco permanece obscuro. É assim necessário desenvolver um método para investigar simultaneamente a sensação da coceira e da dor usando testes comportáveis. Aqui, um modelo de injeção de bochecha é introduzido, que pode ser usado para medir simultaneamente os comportamentos relacionados à dor e coceira. Neste modelo, os pruritogens induzem comportamentos do risco quando as substâncias algesic induzem comportamentos de limpeza. Usando este modelo, o ácido lysophosphatidic (LPA), um mediador da coceira encontrado em pacientes colestática com coceira, é mostrado para induzir exclusivamente a coceira mas não a dor. Entretanto, em modelos do rato, LPA foi relatado para ser um pruritogen e um algogen. A investigação nos efeitos de LPA em um modelo da injeção do mordente do rato mostrou que o LPA induziu somente o risco, mas não limpando comportamentos. Isto indica que o LPA actua como um pruritogen similarmente nos ratos e nos seres humanos, e demonstra a utilidade de um modelo da injeção do mordente para a pesquisa do prurido.
A coceira foi originalmente caracterizada como uma sensação que induz comportamentos de arranhões para remover materiais nocivos da superfície da pele. No entanto, a coceira tem sido o foco de terapias para sensações desagradáveis causadas por muitas doenças, como dermatite atópica, lesões neurogênicas e colestase1. Nestes casos, coceira é uma sensação desagradável grave semelhante à dor. Portanto, a coceira representa um importante alvo de pesquisa. Coçar o comportamento é o principal indicador de coceira em experimentos com animais, e coçar comportamentos podem ser induzidos em camundongos injetando pruritogens na pele em seu pescoço2,3. No entanto, um estudo anterior mostrou que a capsaicina, um algogen, também induz a coçar comportamentos em um modelo de injeção de pescoço4, dificultando a discriminação de coceira na dor neste modelo. Por outro lado, verificou-se que a capsaicina reduziu os comportamentos de coçar em um modelo de injeção cervical, indicando que o efeito da dor nos comportamentos de coçar é complicado e depende das condições experimentais. Conseqüentemente, as medidas simultâneas da dor e dos comportamentos coceira-relacionados permiti-lo-iam a análise precisa de pruritogens e de algogens. Steven G. Shimada e Robert H. LaMotte conseguiram medições simultâneas de dor e comportamentos relacionados ao prurido, alterando o local da injeção do pescoço para o rosto4. No modelo de injeção de bochecha, capsaicina induzida limpando, mas não arranhando comportamentos, enquanto a histamina, um pruritogen, apenas induzido coçar comportamentos. Conseqüentemente, este modelo permite a avaliação independente da coceira e da dor, fazendo a injeção do mordente um modelo útil para a pesquisa do prurido. Ao tentar determinar se uma substância de teste é um pruritogen e/ou um algogen, este modelo fornece mais informação do que o modelo de injeção do pescoço. Este artigo descreve um método prático para executar a injeção da bochecha e a contagem dos ataques de riscar ou de limpar, e mostra a utilidade deste método para avaliar os comportamentos de risco induzidos pelo ácido lysophosphatidic (LPA).
Neste artigo, um modelo de injeção de bochecha é introduzido e mostrado para ser útil para a análise de dor e comportamentos relacionados a coceira.
Um relato prévio mostrou que as substâncias algémicas induzem comportamentos de risco em um modelo de injeção de pescoço do mouse4. Em contrapartida, a capsaicina reduziu os comportamentos de risco em outros experimentos de injeção de pescoço (Figura 3). Conseqüentemente, o efeito da dor no comportamento do risco permanece obscuro. É, portanto, necessário desenvolver um método para investigar simultaneamente a dor e coceira através de testes comportamentais. Usando um modelo da injeção do mordente, o efeito de uma substância na dor e na coceira pode ser avaliado.
Tem sido relatado previamente que o LPA intracelular ativa diretamente TRPV1 e TRPA1 como um mecanismo do prurido LPA-induzido5. Conformemente, o prurido LPA-induzido podia ser independente da histamina. Um estudo precedente igualmente mostrou que um modelo da injeção do mordente pode ser usado para a avaliação da coceira histamina-independente16. Conseqüentemente, este modelo pode ser usado para a coceira histamina-dependente e-independente.
Uma das etapas críticas neste experimento é a injeção. Porque este é um teste comportamental agudo, a anestesia não pode ser usada na etapa da injeção porque pôde afetar estes comportamentos. Consequentemente, o rato precisa de ser prendido firmemente a fim executar uma injeção precisa. Quando a preensão no animal não é segura, especial ao injetar algogens fortes, os ratos podem lutar, conduzindo a um volume e a uma profundidade imprecisos da injeção, seguidos pela dificuldade em interpretar os resultados. Ao manusear um rato, puxe a pele na nuca entre o polegar e o indicador para inibir o movimento do rato.
Outro passo crítico é a análise comportamental. Porque arranhando é muito rápido, o vídeo precisa ser observado com cuidado. Além disso, a limpeza pode ser difícil de distinguir de grooming. Portanto, o uso de produtos químicos de controle positivo, como a capsaicina, é recomendado durante o primeiro experimento. As condições de gravação e repetição também podem afetar a contagem de ambos os comportamentos. Se é difícil observar claramente os comportamentos, os espelhos podem ser usados em torno das gaiolas para realçar os ângulos de visão4.
Deve-se notar que o modelo de injeção de bochecha pode mostrar precisão quantitativa reduzida para os produtos químicos testados do que no modelo de injeção de pescoço. Como mostrado na Figura 3 e na Figura 4, a mesma quantidade de histamina induziu mais riscos no modelo cervical do que no modelo de bochecha, e apresentou menor variação no modelo de injeção cervical. Uma vez que uma substância testada foi mostrada para ser um pruritogen com baixos efeitos algesic com o modelo da injeção do mordente, o modelo da injeção da garganta é recomendado para a análise quantitativa adicional. Mesmo com essas limitações, o modelo de injeção de bochecha é útil para a avaliação precisa de substâncias de teste, especialmente no campo da pesquisa de coceira.
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos aos Drs. Steven G. Shimada e Robert H. LaMotte (Yale University School of Medicine, Connecticut) de cujos métodos (referência 4) esta técnica foi adaptada. Também agradecemos ao Sr. Kentaro Miyahara por criar as ilustrações do mouse. Este estudo foi apoiado por um Grant-in-Aid para a pesquisa científica do Ministério da educação, cultura, esportes, ciência e tecnologia no Japão (nos. 15H02501 e 15H05928 a MT, e n º 16K21691 para H.K.) e Uehara Memorial Foundation (para H.K.). Agradecemos a introdução do método de injeção de bochecha pelo Prof. LaMotte na Universidade de Yale.
capsaicin | Sigma | M2028 | |
diphenhydramine hydrochloride | Wako | 044-19772 | |
histamine | Sigma | H7125 | |
iMovie | Apple | ||
lysophosphatidic acid | Avanti Polar Lipids | 325465-93-8 | |
myjector | Terumo | ss-05M2913 | |
tween-80 | Sigma | P4780 | |
video camera | Panasonic | VX985M |