Tipik olarak, fare boyun enjeksiyon modeli pruritogen kaynaklı çizilme davranışlarını değerlendirmek için kullanılır. Ancak, model sadece kaşıntı değil, ağrı hakkında bilgi sağlar. Burada, aynı anda ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışları ölçmek için kullanılabilir farelerde bir yanak enjeksiyon modeli tanıtıldı.
Itch, 1941’de Rothman tarafından “çizilme arzusunu kışkırtan hoş olmayan bir kutanöz his” olarak tanımlandı. Fare modellerinde, çizik nöbetleri genellikle pruritogens tarafından indüklenen kaşıntı değerlendirmek için sayılır. Ancak, önceki raporlar algezik maddeler de davranışları çizilme için kullanılan en yaygın test olan bir fare boyun enjeksiyon modeli, çizilme davranışları neden göstermiştir. Bu bulgu farelerde kaşıntı çalışmayı zorlaştırır. Buna karşılık, kapsaisin, ortak bir algojen, bazı boyun enjeksiyonu deneylerinde azaltılmış çizilme davranışları. Bu nedenle ağrının çizilme davranışları üzerindeki etkisi belirsizliğini korumaktadır. Bu nedenle aynı anda davranış testleri kullanarak kaşıntı ve ağrı hissi araştırmak için bir yöntem geliştirmek için gereklidir. Burada, aynı anda ağrı ölçmek için kullanılabilecek bir yanak enjeksiyon modeli tanıtıldı- ve kaşıntı ile ilgili davranışları. Bu modelde, pruritogens algesic maddeler silme davranışları neden ise çizilme davranışları neden olur. Bu modeli kullanarak, kaşıntı ile kolestatik hastalarda bulunan bir kaşıntı mediator olan lysophosphatidic asit (LPA), sadece kaşıntı değil, ağrı neden gösterilmiştir. Ancak, fare modellerinde, LPA hem bir pruritojen ve bir algojen olduğu bildirilmiştir. Bir fare yanak enjeksiyon modelinde LPA etkileri içine Soruşturma LPA sadece çizilmeye neden olduğunu gösterdi, ama davranışları silme değil. Bu LPA fareler ve insanlarda benzer bir pruritogen olarak davranır gösterir, ve kaşıntı araştırma için bir yanak enjeksiyon modeli yarar gösterir.
Kaşıntı aslında cilt yüzeyinden zararlı maddeleri kaldırmak için çizilme davranışları neden olan bir duygu olarak karakterize edildi. Ancak, kaşıntı atopik dermatit, nörojenik lezyonlar ve kolestaz gibi birçok hastalığın neden olduğu hoş olmayan duyumlar için tedavilerin odak noktası olmuştur1. Bu gibi durumlarda, kaşıntı ağrı benzer ciddi bir tatsız hissi. Bu nedenle, kaşıntı önemli bir araştırma hedefini temsil eder. Çizilme davranışı hayvan deneylerinde kaşıntı birincil göstergesidir, ve çizilme davranışları boyun 2 deriiçine pruritogens enjekte ederek farelerde indüklenebilir2,3. Ancak, Bir önceki çalışmada kapsaisin gösterdi, bir algojen, Ayrıca bir boyun enjeksiyonu modelinde çizilme davranışları neden4, zor bu modelde ağrı kaşıntı ayrımcılık yapma. Buna karşılık, kapsaisin bir boyun enjeksiyon modelinde çizilme davranışları azaltılmış bulunmuştur, çizilme davranışları üzerinde ağrı etkisi karmaşık olduğunu gösteren ve deneysel koşullara bağlıdır. Bu nedenle, ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışların eşzamanlı ölçümlerpruritogens ve algojenlerin kesin analizi sağlayacaktır. Steven G. Shimada ve Robert H. LaMotte yanağa boyun enjeksiyon sitesi değiştirerek ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışların eşzamanlı ölçümleri başarılı4. Yanak enjeksiyon modelinde, kapsaisin silme neden, ama davranışları çizilme değil, histamin, bir pruritogen, sadece çizilme davranışları indüklenen. Bu nedenle, Bu model kaşıntı ve ağrı bağımsız değerlendirilmesi sağlar, yanak enjeksiyonu kaşıntı araştırma için yararlı bir model yapma. Bir test maddesinin pruritojen ve/veya algojen olup olmadığını belirlemeye çalışırken, bu model boyun enjeksiyon modelinden daha fazla bilgi sağlar. Bu makalede, yanak enjeksiyonu yapmak ve çizilme veya silme nöbetlerini saymak için pratik bir yöntem açıklanmaktadır ve lisofosfatidik asit (LPA) tarafından indüklenen çizilme davranışlarını değerlendirmek için bu yöntemin yararını göstermektedir.
Bu makalede, bir yanak enjeksiyon modeli tanıtıldı ve ağrı ve kaşıntı ile ilgili davranışların analizi için yararlı olduğu gösterilmiştir.
Bir önceki rapor algesic maddelerin bir fare boyun enjeksiyonu modeli4çizilme davranışları neden olduğunu gösterdi . Buna karşılık, kapsaisin diğer boyun enjeksiyonu deneylerinde azaltılmış çizik davranışları(Şekil 3). Bu nedenle, kaşıntı davranışı üzerinde ağrı etkisi belirsizliğini koruyor. Bu nedenle aynı anda ağrı ve davranış testleri ile kaşıntı araştırmak için bir yöntem geliştirmek için gereklidir. Bir yanak enjeksiyon modeli kullanılarak, ağrı ve kaşıntı hem de bir maddenin etkisi değerlendirilebilir.
Daha önce hücre içi LPA doğrudan LPA kaynaklı kaşıntı bir mekanizma olarak TRPV1 ve TRPA1 aktive bildirilmiştir5. Buna göre, LPA kaynaklı kaşıntı histamin bağımsız olabilir. Bir önceki çalışmada da bir yanak enjeksiyon modeli histamin bağımsız kaşıntı16değerlendirilmesi için kullanılabilir gösterdi. Bu nedenle, bu model hem histamin bağımlı hem de -bağımsız kaşıntı için kullanılabilir.
Bu deneydeki kritik adımlardan biri enjeksiyondur. Bu akut bir davranış testi olduğundan, bu davranışları etkileyebileceğinden enjeksiyon aşamasında anestezi kullanılamaz. Bu nedenle, fare nin hassas bir enjeksiyon yapabilmesi için güvenli bir şekilde tutulması gerekir. Hayvan üzerinde tutun güvenli olmadığında, özellikle güçlü algojenler enjekte ederken, fareler mücadele edebilir, yanlış bir enjeksiyon hacmi ve derinliği yol, sonuçları yorumlamada zorluk takip. Fareyi kullanırken, farenin hareketini engellemek için başparmak ve işaret parmağı arasındaki ense deki deriyi çekin.
Bir diğer kritik adım da davranış analizidir. Çizilme çok hızlı olduğundan, video dikkatle izlenmesi gerekir. Ayrıca, silme damat ayırt etmek zor olabilir. Bu nedenle, kapsaisin gibi pozitif kontrol kimyasallarının kullanımı ilk deney sırasında tavsiye edilir. Kayıt ve yeniden oynatma koşulları da her iki davranışın sayma etkileyebilir. Davranışları net bir şekilde gözlemlemek zorsa, aynalar kafeslerin etrafında görüntüleme açılarını geliştirmek için kullanılabilir4.
Bu yanak enjeksiyon modeli boyun enjeksiyon modelidaha test edilen kimyasallar için azaltılmış kantitatif doğruluk gösterebilir unutulmamalıdır. Şekil 3 ve Şekil 4’tegösterildiği gibi , aynı miktarda histamin, boyun modelinde yanak modeline göre daha fazla çizilme davranışına neden olmuş ve boyun enjeksiyon modelinde daha küçük bir varyasyon göstermiştir. Test edilmiş bir maddenin yanak enjeksiyon modeli ile düşük ajezik etkiye sahip bir pruritojen olduğu kanıtlandıktan sonra, boyun enjeksiyonu modeli ek kantitatif analiz için tavsiye edilir. Bu sınırlamalar bile, yanak enjeksiyon modeli test maddelerin hassas değerlendirilmesi için yararlıdır, kaşıntı araştırma alanında özellikle.
The authors have nothing to disclose.
Dr. Steven G. Shimada ve Robert H. LaMotte’a (Yale Üniversitesi Tıp Fakültesi, Connecticut) yöntemleri (referans 4) bu tekniğin uyarlanmış olmasına müteşekkiriz. Ayrıca fare çizimleri oluşturmak için Bay Kentaro Miyahara teşekkür ederiz. Bu çalışma, Japonya’da Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı (Nos. 15H02501 ve 15H05928 to M.T., no. 16K21691 to H.K.) ve Uehara Memorial Foundation (H.K.’ye) bilimsel araştırma için hibe desteği ile desteklenmiştir. Yale Üniversitesi’nden Prof. LaMotte’un yanak enjeksiyonu yöntemini uygulamaya girişini takdir ediyoruz.
capsaicin | Sigma | M2028 | |
diphenhydramine hydrochloride | Wako | 044-19772 | |
histamine | Sigma | H7125 | |
iMovie | Apple | ||
lysophosphatidic acid | Avanti Polar Lipids | 325465-93-8 | |
myjector | Terumo | ss-05M2913 | |
tween-80 | Sigma | P4780 | |
video camera | Panasonic | VX985M |