Summary
Текущий протокол описывает комплексный метод исследования миграции клеток рака и вторжения на единой платформе в режиме реального времени, обеспечивая легко воспроизводимые и время эффективный вариант для изучения клеток мобильность и морфологии.
Abstract
Рак клеток мобильность имеет решающее значение для начала метастазов. Таким образом исследование клеточного движения и инвазивного потенциала имеет большое значение. Анализов миграции обеспечивают основные понимание клеточного движения на 2D уровне, тогда как вторжения анализов более физиологически важны, подражая в естественных условиях раковых клеток выскальзывание из оригинального сайта и вторжение через внеклеточного матрикса. Текущий протокол обеспечивает один рабочий процесс для миграции и вторжения анализов. Вместе с комплексной автоматизированной микроскопических камеры для реального времени изображения HD и модуль встроенного анализа это дает исследователи время эффективный, простой и воспроизводимые экспериментальный вариант. Этот протокол также включает замены расходных материалов и методов альтернативного анализа для пользователей, чтобы выбрать из.
Introduction
Миграции клеток и вторжения являются важные биологические процессы, которые позволяют нормальных функций в теле человека, таких, как закрытие раны, вторжение плаценты в матки и молочной железы морфогенеза1,2,3. Человеческое тело имеет точного и строгого контроля этих биологических событий; Однако есть некоторые исключения. Злокачественные опухоли, например, возможность избежать этой гарантии, демонстрируют ненормальное распространения и вторгнуться в соседние ткани, которая называется метастазированием. Метастазирование является главной причиной смертности, связанной с раком4.
Рак молочной железы является наиболее часто диагноз рака у женщин и является вторым по величине причиной связанных с раком смерти среди женщин в развитых странах во всем мире5. Рак молочной железы происходит от протоки или долек, которые состоят из одного или нескольких слоев эпителиальных клеток. В нормальной груди эпителиальные клетки придерживаться друг с другом и базальной мембраны через мембранных белков, таких как E-Кадгерины и интегринов6. Однако инвазивным молочной железы клетки рака потеряли их полярность и клеток клеточной адгезии и классически пройти переходного эпителия мезенхимы (EMT) и получить возможность перемещения. После кровоподтек эти клетки пересекают внеклеточного матрикса (ECM) и введите кровеносного сосуда или лимфатической системы, затем следуют intravasation и метастатические роста7. Понимание механизмов, посредством которых это происходит, имеет большое значение, поскольку метастаз является наиболее распространенной причиной смертности, связанных с раком и тесно связана с раком клетки миграции/вторжения. Чтобы визуализировать движение раковых клеток, миграции и вторжения анализов являются идеальной модели для изучения 2D и 3D клеточного движения, соответственно. Миграции непосредственно оценивает движение клеток, тогда как вторжения включает в себя взаимодействие с микроокружения и способность к разложению биологические барьеры. Эти два процесса не являются полностью независимыми друг от друга, как миграция является требованием вторжения.
Несколько методов были разработаны для изучения миграции и вторжения. Как рассмотрено, Крамер et al., анализов миграции как ранозаживляющее, забор и микро перевозчик анализов генерировать клетки свободно OBLASTь разрешить клетки переехать в, оценка изменения площади; в то время как transwell и капиллярной анализы основаны на количество клеток, которые двигаться в сторону аттрактанта8. Для вторжения анализов, ECM среды должен быть установлен с ECM гель или коллагена например, и 3D движения могут быть оценены путем наблюдения за вторжения области, расстояние и клеток обвинения (например, transwell проба, Утконос пробирного)8. Другой тип вторжения пробирного является объединить инвазивных клетки с неинвазивные клеток и оценить поведение инвазивных клеток (например, assays сфероида). Эти методы имеют свои плюсы и минусы и путь, это простой подход, легко повторить и объединить assay переноса и пробирного вторжения в рабочем процессе подобных преференций в экспериментальный дизайн.
Этот протокол описывает измерение миграции клеток и вторжения, с помощью томографа живой клетки. Это реальном времени ячейки, мониторинга системы, установленной в инкубатор культуры стандартной ячейки. Он принимает изображения высокой четкости согласно сканирование интервалы и измерения, применяя соответствующие маски в клетки или флуоресцентные целей. Модуль миграции/вторжения пробирного включает в себя использование 96-контактный скретч инструмент, который подходит для создания однородной скретч раны на монослое клеток в 96-луночных пластине. Этот механизм основан на в пробирке рану исцеление анализов, мониторинг 2D клеточного движения на пластиковом или с покрытием поверхности. Можно также оценить вторжения или 3D движение через дополнительные ECM в пределах нуля раны. Краткий рабочий процесс проиллюстрирован на рисунке 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Примечание: Две линии клетки должны обрабатываться отдельно. Следующие процедуры должны применительно к одной строке одну ячейку, если не указано.
1. оптимизировать плотность клеток до ранения
- Культура адэрентных клеток в колбах культуры ткани2 см T75, около 80% слияния в фенол красный бесплатно Дульбекко изменение Eagle среднего (DMEM) с 10% плода бычьим сывороточным (ФБС), 200 мм L-глютамина и 2 мкг/мл инсулина при 37 ° C с 5% CO2 ( стандартные инкубационных условий для большинства рак клеточных линий, культура формулировки являются клетки линии зависимых).
- Удалите медиа культуры, дозирование Выкл в контейнер для отходов. Пипетки 2 мл подогретым 0,1% трипсина-ЭДТА в кратко смыть монослоя клеток и пипетки. Добавить еще 2 мл 0,1% трипсина-ЭДТА и место колбу в условиях стандартного инкубации при 37 ° C за 5 мин.
- Аккуратно коснитесь Фляга для обеспечения отряд клеток, а затем добавить 10 мл подогретым культуры средств массовой информации, чтобы остановить протеолитических реакции.
- Перенесите суспензию клеток в 15 мл пластиковых пробирок и спин вниз на 200 x g 5 мин при комнатной температуре (RT). Тщательно удалить супернатант без агитацию Пелле клеток и Ресуспензируйте с другой 10 мл подогретым Культура СМИ.
2. Подсчет количества клеток, используя счетчик автоматизированных клеток (или любых методов подсчета)
- Разбавить 200 мкл суспензии ресуспензированы клеток с 800 мкл 1 x Дульбекко фосфат буфер солевой (DPBS) в пластиковых пробирок 1.5 мл.
- Прикрепите датчик количество клеток 60 мкм счетчик соматических клеток, удерживая переключатель и объединить кончик в суспензию клеток. Медленно отпустите рычаг до тех пор, пока суспензию клеток успешно обращается в датчик. Концентрация ячейки отображается в кл/мл.
- Расчет количества клеток в суспензии клеток 10 мл.
3. клетки плакировка
- Пластина ячейки в диапазоне плотностей клеток (40 000-90 000 клеток/а) в трех экземплярах в 96-луночных пластине.
-
Место пластину в тепловизор клеток и запланировать сканирование каждые 2 ч за 24 ч.
- В программном обеспечении нажмите сканирует расписание из списка задач. В панели настройки ящик определить положение пластины, нажмите кнопку Добавить судна и выберите тип пластины. В панели Настройки сканирования выберите или редактировать схему сканирования по данным экспериментальных плиты установки и задайте Тип сканирования как стандарт.
- Щелкните правой кнопкой мыши на временной шкале и выберите Задать интервалы. Установите Добавить сканирует каждый 2 ч в 24-h расписание. Нажмите кнопку Применить.
4. Определите оптимальное ячейки посева плотности для Assay переноса
- STсоч сканирования после 24 ч, применить слияния обработки инструмент анализа на HD-фаза контраст изображения автоматически собраны и генерировать кривой распространения клеток против времени.
- Определить 3-6 представитель изображения и разместить их в новой Коллекции изображений.
- Определите маску надлежащей Обработкиопределения.
- Запустите задание анализа.
- Определить плотность оптимизированный клеток согласно слияния против времени (примерно 100% слияния в течение 6-18 ч в зависимости от того, когда начинается assay переноса).
Примечание: Количество времени, необходимое для роста клетки до слияния варьируется в зависимости от заполнения разрежения.
5. дни 1 и 2: подготовка к миграции и вторжения анализов
-
В день 1 Пальто пластину для вторжения assay.
Примечание: гель ECM всегда должны обрабатываться на льду и с советами, которые были помещены в холодильник на ночь.- Разбавить ECM гель с ледяной культуры СМИ до 100 мкг/мл и 50 мкл разбавленного ECM гель/СМИ в назначенный скважины.
- Место пластину на стандартных инкубационных условий на ночь.
- На 2 день аккуратно удалить избыток средств массовой информации. Пластина клетки с плотностью оптимизированный клеток в 2 96-луночных плит, предназначенных для assay переноса (без покрытия) и вторжения assay (с покрытием) в triplicates следующие разделы 1-3 в конце дня (в текущий протокол, оптимизированный плотности посева для Были ZR75-1 и MDA-MB-231 90000/Ну и 50000/Ну, соответственно).
- Поместите пластины на стандартных инкубационных условий на ночь.
6. день 3: Рана нуля
- Спрей и протрите скретч инструмент и 2 мытья лодки с 70% этанол до размещения их в области биобезопасности кабинета. Заполните Стиральная лодка 1 и 2 с точно 45 мл стерильного (газобетона) дистиллированной воды и 70% этанола соответственно.
- Для стерилизации место нуля инструмент контактный блок (вверху) на промывку лодка 1 и 2 для 5 мин.
-
Начните с пластину пробирного миграции.
- Переместить пластину, содержащие клетки из инкубатора и убедитесь, что нет ну сухой, чтобы избежать повреждения царапины инструмента. Снять крышку плита и вставьте в основание держатель рабочего инструмента и осторожно поместите верхнюю часть на базовой части, направляя дюбели. Нажмите и удерживайте рычаг черный, тем временем, осторожно поднимите блок PIN-код. Пробелы в каждой скважины обычно видны невооруженным глазом и под микроскопом.
- Быстро смочите булавки в воде; Это достаточно, чтобы очистить средство нуля до царапин пластину пробирного вторжения, если плита установки идентичны. В противном случае повторите шаги стерилизации с стерильной дистиллированной водой, а затем 70% этанола за 5 мин.
- Мыть плиты 1 или 2 раза с подогретым культуры средств массовой информации, чтобы избежать отдельные ячейки или ячейки листов, повторное присоединение к колодцу.
- 100 мкл свежий теплый СМИ, в назначенный скважины с или без лечения.
-
Дополнительные шаги для вторжения assay.
- Место пластину пробирного вторжения на 4 ° C за 5 мин сбалансировать и тщательно аспирационная холодной средства массовой информации.
- Разбавить ECM гель с ледяной культуры СМИ до 5 мг/мл, 50 мкл разбавленного ECM геля в назначенный скважины и место под стандартные инкубации за 30 мин.
- 100 мкл подогретой СМИ с или без проверки соединений.
- Место пластину в живой клетки тепловизор и дайте ему сбалансировать на 5 мин Типа судна как imagelock пластины. Задать Тип сканирования как Скретч раны, выбрать или изменить Шаблон проверки согласно экспериментальной плиты установки (1 изображение/Ну и широкоэкранный режим) и расписание 24-h повторить сканирование каждые 1-2 ч за 72 ч до заживления раны.
- Чтобы очистить скретч инструмент, поместить верхнюю ось блока в каждом из следующих решений (45 мл в мытья лодки) за 5 мин: 0,5% моющего средства 1 моющего средства 1% (см. Таблицу материалы), 2 (см. Таблицу материалы), стерильной дистиллированной водой и 70% этанола. Место нуля инструмент обратно на его основание и магазин в среде пыли.
7. анализ данных
- Остановите сканирование пластину назначенный после того, как все раны зажили, выбрав экспериментальной пластины на Ящик установки и Удаления судна.
- Соберите 3-6 представитель изображения, охватывающих широкий спектр звука проценты, включая изображения прямо после того, как рана был достигнут, ушивание раны на 10% и 50%.
- Определение надлежащей обработки, используйте Настройки сегментации, очистки и фильтры , чтобы применить соответствующие Поцарапать раны маски и Маски слияния. Используйте Предварительный просмотр текущего/все для просмотра точности маски.
- Запустите задание анализа.
- Данные можно проанализировать в рамках программного обеспечения или экспортированы для дальнейшего анализа. Три метрики, предоставляемый программное обеспечение может использоваться для оценки изображения HD-фаза: ширина (мкм), раны слияния (%) и относительной рану плотность (%). Сравнение будет обсуждаться в следующем разделе.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Этот assay переноса/вторжения основан на исцеление assay рану, которая оценивает уровень клеток в клетки свободно OBLASTь, созданный инструментом скретч 96-контактный. Разница между миграцией и вторжения анализов, что миграция assays клетки мера, движущихся на ткани Культура лечение пластиковые поверхности и вторжения меры клетки перемещение через гель ECM.
Царапинам инструмент предназначен для сделать последовательное царапин ран в назначенный пластины и клеток тепловизор предназначен для реального времени изображения с высоким разрешением с нуля раны в середине. Две груди раковых клеток, что линии, используемые в текущем протоколе ZR75-1 и MDA-MB-231, отнесены Люминал B и тройной отрицательный подтипы соответственно9. Царапин РАН, созданным инструментом скретч 96-контактный обыкновенно между 700-900 мкм, но может варьироваться среди различных клеточных линий (рис. 2).
Для миграции assay, предоставляются три метрики: (1) Ширина раны (мкм) является среднее расстояние между листами ячейку рядом с раны (рис. 3). (2) рану слияния (%)-это слияния в пределах области ранения (рис. 3). Идеальной начальной рану слияния должна быть близка к 0%. (3) раны относительная плотность (%) — это алгоритм, фон вычитается [раны % относительная плотность = 100 * (w(t) - w(0)) / (c(t) - w(0)), t = в момент времени t, w = плотность рану региона c = плотность клеток региона], измерение плотности рану региона по отношению к плотности клеток региона.
Три право метрик может быть достигнуто на основе потребностей. Рана слияния и относительной рану плотность подразумевает скорость клеток, занимая области скретч раны, и они почти совпадают в обоих клеточных линий. Но два мобильных линий показали очень разные ранозаживляющее способности, где в связи с завершением (около 50 h) раны заживление процесс MDA-MB-231 клеток, клеток ZR75-1 около 50% рана покрытия (две метрики выше) и более чем 400 мкм оставшиеся раны ширина, указанием Нижняя способность миграции клеток ZR75-1 (рис. 4).
Перенос поведение типов двух клеток были различными и можно сравнить на основе записанных изображений. Lamellipodia (блеббинг выступы) наблюдались в MDA-MB-231 клеток в начале миграции в начале миграции, который был типичный знак цитоскелета перегруппировки, направляя клеток движение в сторону клетки свободный регион10 (Рисунок 5 ). ZR75-1 клетки показали никаких признаков миграции клеток в той же время точке (рис. 5).
Метрические относительная плотность раны рекомендуется заводом-изготовителем для ячейки вторжения, как это 3D анализа и анализа на основе слияния не применяется. В пределах 50 h относительной рану плотность клеток MDA-MB-231 был насыщенный (100%), тогда как относительная рану плотность клеток ZR75-1 не меняется со временем, указанием очень инвазивных фенотипа клетки MDA-MB-231 и не инвазивность клеток (ZR75-1 Рисунок 6).
MDA-MB-231 клетки также себя по-разному во время вторжения через ECM гель (рис. 7). По сравнению с клетки с пузырь на фронте миграции, вторгаясь клетки показали удлиненные морфология с ведущими выступов.
Рисунок 1 : Рабочий процесс миграции и вторжения пробирного в текущем протоколе. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Производительность скретч инструмента на груди раковых клеток линии ZR75-1 и MDA-MB-231 (Верхняя панель) с шириной измеренных первоначальной раны и первоначальной раны слияния (Нижняя панель). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3 : Миграция пробирного иллюстрируется HD фазы контраст изображения и смешанный режим с масками в MDA-MB-231. Синий, нуля раны; желтый, клеток, окружающих нуля раны; розовый, клетки, которые переехали в рану на 24 ч после нуля нуля. Масштаб баров = 300 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4 : Сравнение трех алгоритмов (ширина раны, относительной рану плотность и раны слияния линий клеток рака молочной железы ZR75-1 (слева) и MDA-MB-231 (справа). Все эксперименты представляют собой среднее значение трех независимых экспериментов, ± с.д. Шкала баров = 300 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5 : Миграция передней ZR75-1 и MDA-MB-231 клетки 4 h после нуля. Стрелки, lamellipodia на фронте миграции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 6 : Количественная оценка вторжения с использованием метрических раны плотность (%) линии клеток рака молочной железы ZR75-1 (слева) и MDA-MB-231 (справа). Все эксперименты представляют собой среднее значение трех независимых экспериментов, ± с.д. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 7 : Различных клеточных характеристики MDA-MB-231 клеток в миграции (слева) и вторжения (справа). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 8 : Пример нуля рана, который не может быть проанализирован модулем комплексной миграции из 96-луночных плиты. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Миграция и вторжения являются важными параметрами для оценки подвижности раковых клеток. Используя инструмент скретч 96-pin, это возможно для проведения анализов в 2D и 3D ранозаживляющее одновременно. Помимо содействия автоматическое сканирование, обеспечение стабильной клетки культуры среды с минимальными нарушениями, скретч assay проводились с использованием скретч инструмент 96-pin обеспечивает последовательное скретч раны, позволяя эксперименты, которые являются более надежными и воспроизводимость. Формат пластин 96-луночных дает дополнительные опции либо увеличения числа клеточных линий или различных лекарств. Кроме того изменения морфологии клеток и динамичного движения могут быть записаны для дальнейшего анализа.
Assay переноса/вторжения предназначен для легко применяться с немного предпосылки. Вырожденная клетки однослойная важно до ранения обеспечить движение направлено клеток к разрыв. Поэтому настоятельно рекомендуется оптимизировать посева плотность клеток, и сроки между 6-18 h обычно идеально. Способность клеток экспериментальной, придавая поверхности и уровень распространения будут влиять на этот срок. Продлен инкубации время может привести к сильной клеток клеточной адгезии и генерировать фронтах криво двусторонних клеток за счет удаления ячеек листов. Биоматрикс покрытие будет полезным с менее клей клеточных линий, чтобы уменьшить время ожидания. Клетки могут морили голодом до ранения. Сроки голодания схож с нуля времени, который при впадении достигает почти 100%, и голод СМИ и продолжительность зависит от типа ячейки. Можно также transfected клеток, но плотность посева должен быть определен на длительное время до ранения, учитывая время инкубации трансфекции процесса. Ранение может быть достигнуто в течение нескольких секунд, с использованием скретч инструмент 96-pin. Определенных размеров булавки гарантируют точное миграции/вторжения стартовой линии и расстояния. Главное верхней и нижней секции должны быть хорошо согласованы для завершения полного нуля через скважины, так что изображения клеток не включают либо терминал царапин ран. Царапин РАН можно легко наблюдать через невооруженным глазом на монослое вырожденная клеток и можно быстро проверить под микроскопом светлые области. Промывка скважины должны быть выполнены немедленно и осторожно, чтобы избежать приложения выбили клетки и удаление двусторонних клеток. Если одной стирки достаточно очистить требуемой зоны, свободной от клеток, нет необходимости для дополнительной стирки.
Миграция может быть завершен, добавив культуры СМИ с или без лечения и готов к работе, тогда как несколько дополнительных шагов необходимо принимать во внимание для assay вторжения. В отличие от миграции клеток вторгшиеся клетки проникают через ЭВМ, которая более точно отражает в естественных условиях клеточного движения лучше. Текущего протокола является создание ECM-окружении среды с помощью ECM гель. Клетки являются семенами на ECM гель покрытием скважин и после ранения, ECM гель накладывается на клетки и скретч рану. При обработке ECM гель, это лучше, чтобы сохранить все, что холодно, чтобы избежать гелеобразование. Неравномерно ECM гель может вызвать проблемы при фокусировке Микроскоп. Благодаря вязкий характер ECM гель, это позволяет создавать пузыри, но пузыри могут быть легко удалены аспирационных 70% этанол через распылитель. Для формирования тонкой, но не чрезмерной спрей, просто отвинтите колпачок бутылку спрей и спрей от избыточного 70% этанола в пределах соломы, указывая в другом месте. Путем распыления на расстоянии выше и горизонтальной пластине, тонкой 70% этанол спрей достаточно для ликвидации пузыри.
Первая проверка должна начаться как можно скорее после ранения, для захвата области первоначального свободных клеток рану, и это имеет важное значение для установления критериев для анализа. Интервалы проверки зависят от типа клеток, как более инвазивных клеточные линии имеют более быстрые темпы закрытия раны.
Эта миграция/вторжения приложения является относительно простым, и, используя модуль встроенного анализа, клеточного движения можно графике кинетически 3 метрики: ширина раны, рана слияния и относительной рану плотности (рис. 3). Все три может использоваться для оценки миграции. Рану ширина описывает среднее расстояние в мкм, когда двусторонние ячеек листов двигаться относительно параллельно и независимо от границы первоначальной раны. Рану слияния и относительной рану плотность, напротив, требуют границы первоначальной раны в расчет и описывают слияния в области раны и плотность ячеек относительно области разматывать, соответственно. Для вторжения assay относительной рану плотность рекомендуется, так как он вычисляет область раны со ссылкой на двусторонних ячеек листов. Читатели могут выбрать тот, который лучше всего отражает их потребности.
Этот assay переноса/вторжения скретч раны может быть удобно, но она требует скретч инструмент 96-pin, назначенный пластины и клеток Тепловизор с модулем комплексной миграции/вторжения воспроизвести типичные результаты, представленные в настоящем Протоколе, и они могут быть дорогими. Экономически эффективные замены как плоским дном multiwell 96-луночных пластины могут быть использованы и может генерировать достойной царапин РАН (данные не показаны). Однако производительность рабочего инструмента был не так хорошо, как когда назначенный плита была использована, и некоторые раны может не быть подхвачена режим сканирования (рис. 8), таким образом не удается правильно определить области первоначальной раны. Кроме того скретч инструмент может использоваться для создания царапин РАН, с анализом либо вручную, программ обработки изображений, или с помощью других инструментов визуализации и анализа конечной точки. Они предоставляют большую гибкость, чтобы найти первоначальной раны и поэтому не ограничиваются назначенным пластины. С другой стороны в сочетании с живой клетки изображений в текущий протокол assay миграции/вторжения меньше времени и меньше ошибок. Это может быть особенно полезным для экспериментальных согласованности и повышение эффективности.
В заключение этот assay переноса/вторжения, быстрый, простой и надежный. Пользователи могут выбрать из нашего протокола и другие на основе их потребностей и бюджета.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.
Acknowledgments
Мы хотели бы отметить нашу финансовую поддержку Фонда группы Блумфилд через охотник медицинский научно-исследовательский институт (КЖДИ 13-02). X.Z поддерживается АПА стипендии через университета Ньюкасла и HCRA биомаркеров флагман PhD стипендии.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5% trypsin-EDTA solution (10x) | ThermoFisher Scientific | 30028-02 | Dilute to 2x in DPBS |
| Countess II FL Automated Cell Counter | ThermoFisher Scientific | AMQAX1000 | Automated cell counter |
| Detergent 1 (Alconox) | Sigma-Aldrich | 242985 | 0.5% working concentration |
| Detergent 2 (Virkon S) | VetProduct DIRECT | 1% working concentration | |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium, no phenol-red | ThermoFisher Scientific | 21063-045 | Supplimented with 10% FBS, 200 mM L-glutamine, 2 μg/ml insulin |
| ECM Gel (matrigel) | Sigma-Aldrich | E6909 | Growth-factor reduced, phenol red free |
| Essen ImageLock 96-well plate, flat bottom | Essen | 4379 | |
| EVE Counting slides | BioTools | EVS-50 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Bovogen Biologicals | SFBS-F-500ml | |
| IncuCyte 96-well scratch wound cell invasion accessories | Essen | 4444 | Including CoolBox, 2x CoolSink |
| IncuCyte Cell migration kit | Essen | 4493 | Including the 96-well pin block, 2x wash boats and the software |
| IncuCyte ZOOM | Essen | Live cell analysis system | |
| Insulin solution human | Sigma-Aldrich | 19278-5ML | |
| L-glutamine solution (100x) | ThermoFisher Scientific | 25030-091 | |
| Tissue culture flask, 75 cm2 growth area | Greiner Bio-One | 658175 |
References
- Graham, C. H., Lala, P. K. Mechanisms of placental invasion of the uterus and their control. Biochemistry and Cell Biology. 70, 867-874 (1992).
- Affolter, M., Zeller, R., Caussinus, E. Tissue remodelling through branching morphogenesis. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10, 831-842 (2009).
- Brugues, A., et al. Forces driving epithelial wound healing. Nature Physics. 10, 683-690 (2014).
- Weigelt, B., Peterse, J. L., van't Veer, L. J. Breast cancer metastasis: markers and models. Nature Reviews Cancer. 5, 591-602 (2005).
- Breast Cancer: Estimated Incidence, Mortality and Prevalence Worldwide in 2012. GLOBOCAN. , Available from: http://globocan.iarc.fr/Pages/fact_sheets_cancer.aspx (2012).
- Kalluri, R., Weinberg, R. A. The basics of epithelial-mesenchymal transition. Journal of Clinical Investigation. 119, 1420-1428 (2009).
- Scully, O. J., Bay, B. H., Yip, G., Yu, Y. Breast cancer metastasis. Cancer Genomics Proteomics. 9, 311-320 (2012).
- Kramer, N., et al. In vitro cell migration and invasion assays. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 752, 10-24 (2013).
- Holliday, D. L., Speirs, V. Choosing the right cell line for breast cancer research. Breast Cancer Research. 13, 215 (2011).
- Clark, A. G., Vignjevic, D. M. Modes of cancer cell invasion and the role of the microenvironment. Current Opinion in Cell Biology. 36, 13-22 (2015).
