Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Применение технологии Microfluidic биочип обнаружить сыворотке Аллерген конкретных иммуноглобулина е (sIgE)

doi: 10.3791/59100 Published: April 21, 2019
* These authors contributed equally

Summary

Этот документ представляет протокол обнаружения сыворотки специфические антитела с системой на основе картриджа хемилюминесценции microfluidic и оценки его полезность в специальные диагнозы.

Abstract

Аллергические заболевания встречается у взрослых и детей. Выявления причинных аллергенов значительное заболеваниями и профилактике. Однако в материковой части Китая, особенно в первичной медицинской помощи больницы отсутствует систему измерения конкретных иммуноглобулина Е (IgE) с коэффициентом высокая цена производительность. Этот документ описывает принцип и операции процедур с использованием системы на основе картриджа хемилюминесценции microfluidic для выявления аллергенов специфических IgE в сыворотке. Результаты были по сравнению с теми, от ImmunoCAP (система 1), промышленный стандарт, и оценивается воспроизводимость системы для выявления больных, сенсибилизированных к аллергенов. Результаты показали, что по сравнению с ImmunoCAP (система 1), BioIC системы (System 2) имеет хорошую точность и чувствительность в выявлении сыворотки специфических IgE против различных аллергенов летучими и продовольствия, но с значительно более низкой стоимости. Это может служить хорошей альтернативой для системы 1 в первичной медицинской помощи больницы в материковой части Китая, которые имеют меньше финансовой доступности.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Распространенность аллергии неуклонно растет в течение последних десятилетий и затрагивает 20% - 30% от общей численности населения1. Выявления причинных аллергенов имеет важное значение в управлении заболеваний. В Китае поскольку зарегистрированные в естественных условиях кожи укол тесты доступны не в стране, в пробирке определения IgE сыворотки конкретных является наиболее важным и широко используемым инструментом для Аллергия типа диагнозов2. Это похоже на практике в западном мире, но хотя флуоресценции иммуноферментного базовой системы, ImmunoCAP системы (система 1), рассматривается как золотой стандарт в пробирке специальные диагноза3, его использование в Китае весьма ограничены из-за для его высокой стоимости оборудования и реагентов. Поэтому крайне необходима новая система диагностики альтернативные аллергии с коэффициентом высокая цена производительность.

BioIC системы (System 2) является microfluidic картридж на основе системы, основанной на принципе хемолюминесценции для мультиплексных анализы сыворотки специфических IgE. С размером 7 см х 4 см, картридж microfluidic состоит из трех слоев инъекции формованных пластиковых. Верхняя часть — 3 мм прозрачного поликарбоната, которая осуществляет хорошую стабильность во время процессов тепловой сборки. Вместе с 3 мм толщиной нижнего слоя построены из сополимер акрилонитрила, бутадиена и стирола (ABS) она бутерброды 0,5 мм толстой средний слой, сделанный из силиконового каучука. Черный цвет, средний слой предлагает более низкая предпосылка обнаружением хемолюминесценции. На вершине силикагель тонкий слой мембраны нитроцеллюлозы (NC мембраны) распыляется в позиции, соответствующей зоне реакции, которая позволяет кровянистые выделения различных аллергенных белков. Цель этого исследования заключается в оценке клинической эффективности microfluidic системы для мультиплексных определения Аллерген специфических IgE в сыворотке.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Это исследование и использование образцов сыворотки крови человека были утверждены Этический Комитет первым филиалом больница из Гуанчжоу медицинского университета (GYYY-2016-73). Все участники дали свое письменное согласие, самостоятельно или через своих родителей (в случае детей).

1. Основная информация о группе исследования

Примечание: Специальные хранилища информации состояния ключа Лаборатория респираторных заболеваний (AIR-SKLRD) является большой сыворотки банком создан внутри Guangzhou Институте респираторных больницы (GIRH). Начатый в последнее десятилетие, воздух-SKLRD уже начали собирать и хранить образцы сыворотки у пациентов с аллергическими заболеваниями, вместе с их клинической информации (Таблица 1)4,5. Текущее исследование было проведено с сера из воздуха-SKLRD.

  1. Поиск базы данных SKLRD воздуха для сыворотки, собранных с января 2015 года до июня 2018 и выберите больных аллергическим заболеванием, которые были найдены быть чувствительным к аллергенов в регионе.
  2. Обеспечить всех выбранных пациентов аллергических заболеваний, таких, как аллергический ринит и астма, аллергический дерматит, или крапивница, а у этих больных сыворотка несколько сыворотки Аллерген специфические антитела (sIgE) Почему аллергенов в этом регионе, обнаруженных в системе 1.
  3. Исключать пациентов с неполной медицинские записи, погибших в последующей деятельности, те, которые отказываются дать осознанное согласие относительно использования их образцов сыворотки для научных целей, те с выявленными иммунодефицита, те в настоящее время на иммунотерапию или иммуномодулирующих агентов, или те обнаружены паразитарные инфекции.
  4. Убедитесь, что без рецепта лечения или наркотиков было дано до сбора сыворотки с тем, чтобы свести к минимуму вмешательство в результаты лабораторных исследований. Все образцы сыворотки, которые не удовлетворяют критериям, были отклонены.

2. Исследование потока и измерения интереса

Примечание: Система microfluidic нуждается 100 мкл сыворотки для определения 19 аллергенов. Венозная кровь (5 мл) была собрана из каждого пациента, с помощью вакуума кровеносный сосуд, содержащий отделяя гель. После центрифугирования 10 мин на 1000 x g, верхний слой была собрана для тестирования. Неиспользуемые сыворотка хранятся при температуре-80 ° C. До начала испытаний, сыворотка хранится при комнатной температуре в течение 30 мин и был потрясен с вихревой смеситель. Удалось избежать повторных циклов замораживания и оттаивания.

  1. Главным образом пробы сыворотки для sIgEs всего аллергенов Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), cat перхоть (e1), перхоть собаки (Е5), трава Бермудских островов (g2), Тимоти трава) G6), тараканы (i6), Aspergillus fumigatus (м3), Candida albicans (m5), Амброзия (w1), яичного белка (f1), молоко (f2), пшеницы (f4), арахиса (f13), сои (f14), миндаль (f20), краб (f23) и креветки (f24). Следуйте инструкциям, приведенным в разделе 3.
    Примечание: sIgE определение было сделано с Аллерген специфических IgE assay комплекта (см. Таблицу материалы) и измеряется хемилюминесцентного анализатора.
  2. Случайно выберите три пробы из числа образцов с достаточно сыворотки (по крайней мере 900 мкл) для воспроизводимости результатов исследования. Сохраняя все условия без изменений, измерить три sera для аллерген sIgEs ежедневно, за 9 дней подряд (т.е. в общей сложности 100 x 9 = 900 мкл сыворотки).

3. полу автоматизации процедуры испытания системы microfluidic

Примечание: 2 системы заключается в интеграции технологии автоматического microfluidic microarray протеина, холодный свет анализа, параллельного анализа МГЭ и технологии обработки изображения. Протокол испытаний разделена на четыре части: подготовка оборудования, образец загрузки, инкубации и измерения.

  1. Подготовка оборудования
    1. Включите ПК и анализатор мощности.
      Примечание: Выключатель питания находится на левой стороне основания.
    2. Запустите программу Лабит на ПК. Если всплывающее окно предупреждения Темного кадра , нажмите кнопку ОК , чтобы запустить тест утечки. После этого нажмите на логотип центра ввести операции интерфейс.
      Примечание: Система будет напоминать пользователю запускать испытание на герметичность , если она находится в состоянии простоя для более чем 24 часа.
    3. Проверьте реакцию Temp и ПЗС (зарядовой) Temp в правом нижнем углу экрана. Temp реакции должно возрасти до 37 ° C ± 1 ° C около 10 мин, и Temp КБО должен упасть до-15 ° C ± 1 ° C.
    4. Запустить проверку утечки после CCD температура упала до-15 ° C ± 1 ° C. Перед запуском теста утечки, убедитесь Есть не другие вещи, оставленные внутри инструмента и закройте дверцу. Нажмите инструменты | Испытание системы | Испытание на герметичность. Во время тестирования не открывать дверь. Когда тест завершен, появится всплывающее окно отчета.
  2. Пример загрузки
    1. Мкл 620 мыть буфера, 120 мкл блокировки буфера, 60 мкл конъюгатов A и B, 60 мкл субстрат A и B и 100 мкл образцов сыворотки в соответствующий реагент бак на microfluidic картриджа.
  3. Инкубация
    1. Нажмите на Картридж ID, используйте штрих-код сканер для сканирования серийный номер картриджа, введите идентификатор образца, вставьте картридж в анализаторе и закрыть дверь и нажмите кнопку анализатор и запустить , чтобы начать анализ.
  4. Измерение
    1. Экспортируйте результаты статистического программного обеспечения (например, Excel) после измерения.
      Примечание: После 30 минут инкубации, анализатор автоматически выполняет измерения и сообщает результат.
  5. Отключения анализатор
    1. Для текущего ремонта, после окончания теста выньте картридж и протрите анализатор внутреннего обогрева железа и электромагнитом слегка с 75% алкоголя.
      Примечание: Не нажимайте жесткий или встряхнуть электромагнита.
    2. Закройте окно Лабит А.о. Появится всплывающее окно контроля температуры. Он автоматически закроется, когда КБО нагревается до 5 ° C режим защиты. К тому времени это будет безопасно выключить питание анализатора и ПК.
      Примечание: Не закрыть вручную контроля окно, прежде чем CCD Temp возросла до 5 ° C температуры и не выключите анализатор ни ПК во время разминки CCD.

4. Определение sIgE реактивности

Примечание: Для образца неразбавленном сыворотки, дальность обнаружения системы 2 — 0,21 – 100 МЕ/мл.

  1. Основываясь на пороговое значение 0.35 МЕ/мл, рассмотрим sIgE уровень более 0,35 МЕ/мл быть позитивные6,7. Оценить реактивности sIgE тестов как8: класс 1 (≥0.35 и < 0,70 МЕ/мл), класс 2 (≥0.70 и < 3,50 МЕ/мл), класс 3 (≥3.50 и < 17,50 МЕ/мл), класса 4 (≥17.50 и < 50.00 МЕ/мл), 5-го класса (≥50.00 и < 100.00 МЕ/мл) и класс 6 (≥100.00 МЕ/мл).

5. Статистический анализ

  1. Используйте гистограмму чтобы показать положительные темпы 19 аллергенов (рис. 1) и использовать Levey-Дженнингс кривой, чтобы продемонстрировать повторяемость обнаружения системы (рис. 2)9.
  2. Выберите три наиболее распространенных вдыхаемые аллергены и пищевых аллергенов (в общей сложности шесть аллергены) и сравнить результаты я 1 системы для оценки ее клинической диагностики производительности10,11. Включать уровень согласования, чувствительность, специфичность, положительной и отрицательной прогностической ценности и площадь под приемник операционной характеристика (ROC) кривой (AUC) как критерии оценки.
  3. Примените корреляции Спирмена анализ12 для описания взаимосвязей между двумя системами и использовать Каппа значение для обеспечения согласованности. Классифицировать Каппа значение как почти идеальный (0,8-1,0), существенные (0,6 – 0,8), умеренную (0,4 – 0,6), ярмарка (0,2 – 0,4) или бедных (< 0,2)13. Использовать SPSS 23,0 и MedCalc 11.0 статистический анализ и определить P < 0,05 как статистической значимости.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Положительные темпы для 19 аллергенов
Результаты на 293 сера показаны на рисунке 3. Среди всех вдыхаемые аллергены, D. farinae имели положительный показатель (80.89%, 273/293), а затем D. pteronyssinus (78,84%, 231/293). Среди пищевых аллергенов, краб имеет высокий положительный показатель (20.48%, 60/293), а затем 13,65% (40/293) для креветок. Общая частота положительных на вдыхаемые аллергены был выше, чем для пищевых аллергенов.

Повторяемость microfluidic системы
Повторяемость результатов для cat перхоть, перхоть собаки и таракана, основанные на девяти раундов испытаний, были 32.98 ± 8.94, 1,61 ± 0,48 и 0.76 ± 0,18, соответственно, и уровни согласованности были 100% (9/9), 100% (9/9) и 67% (6/9). С Levey-Дженнингс кривая на рисунке 2показано распределение результатов. Все данные находятся в диапазоне X ± 2 x SD, которая согласуется с максимально допустимый клинических ошибка14.

Сравнение двух систем
Качественные результаты показали, что кошки перхоть имели наивысший согласование системы 1 (95.33%, 243/150). Низкие согласования был замечен в креветок (40,75%, 88/216). Общее согласование вдыхаемые аллергены, варьировались от 92,00% до 95.33%. Для пищевых аллергенов согласование диапазон был 40.74 – 72.39%. Высокая чувствительность для ингаляционных был замечен в Dermatophagoides farinae (93.94%), с 100% точностью. Среди пищевых аллергенов высокая чувствительность был замечен в арахиса (54.55%), с специфичность 80.65%. Таблица 2 показывает также, что все результаты оценки для вдыхаемые аллергены превосходили пищевых аллергенов. Поскольку значения AUC показан диапазон от 0,613 до 0,984 и AUC для трех вдыхаемые аллергены больше 0.950, можно сделать вывод, что системы 2 имеет высокую точность со ссылкой на системы 1.

Анализ последовательности для двух систем показал, что Каппа значения для трех ингалянты между 0,727 – 0.876, с самым высоким значением, видели в cat перхоть, как 0.876 (95% CI, 0,786 – 0.965). Они были все лучше, чем Каппа значения для пищевых аллергенов, которые, в общем, упал < 0.400. Наименьшее значение Каппа было 0,112 креветок (95% CI, 0,062 – 0.162) (Таблица 3). Анализ корреляции Спирмена показал, что лучшее соотношение был замечен в арахиса и cat перхоть, с коэффициентами корреляции как r = 0,942 (95% CI, 0.907 – 0.965; p < 0.0001) и r = 0.927 (95% CI, 0.900 – 0.947; p < 0.0001), соответственно.

На рисунке 3, точечная построен с системой 2 результаты вдоль x-оси и системы 1 вдоль y-ось, чтобы показать распределение sIgE концентрации результаты из двух систем для D. pteronyssinus, D. Фарина, cat перхоть, молоко, креветки и арахиса. Для анализа и отсутствие согласованности, аллергенов, которые показали ± 1 класса разница были D. pteronyssinus (91,60%, 229 против 250), D. farinae (81,25%, 91 — 112), cat перхоть (98.00%, 147-150), молоко (83.58%, 112 против 134), креветка (59.72%, 129 — 216) и арахиса (76.56%, 49 против 64). Общая частота согласования был 81,75% (757 против 926).

Figure 1
Рисунок 1: позитивность темпы обнаружения 19 аллергенов в microfluidic assay. D1 - Dermatophagoides pteronyssinus, d2 - Dermatophagoides farinae, d201 - Blomia tropicalis, e1 - cat перхоть, e5 - перхоть собаки, g2 - трава Бермудских островов, g6 - тимофеевка, i6 - тараканы, м3 - Aspergillus fumigatus, m5 - Candida albicans, w1 - амброзию, f1 - яичный белок, f2 - молоко, f4 - пшеница, f13 - арахис, f14 - соя, f20 - миндаля, f23 - Краб и f24 - креветки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2: Леви-Дженнингс графики трех аллергенов, неоднократно обнаруженных системой microfluidic. (A) Cat волос, волосы собаки (B) и (C) таракана были отобраны для оценки воспроизводимости. Черный, зеленый, желтый и красный линии представляют собой среднее значение (X), среднее ± стандартное отклонение (X ± SD), среднее + стандартное отклонение раза два (X ± 2SD) и средняя + стандартное отклонение раза три (X ± 3SD) из нескольких измерений, соответственно. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3: точечные участки шести sIgE концентрации аллергенов, измеряется Система 1. Система 1 (Y-ось) и системы 2 (X-оси). Каждая линия на графике представляет класса предохранители (класс 0: 0.35, класс 1: 0.35 – 0,7, класс 2: 0.7-3.5, класс 3: 3.5 – 17,5, класс 4: 17,5 – 50, класс 5:50 – 100 и класс 6: > 100 МЕ/мл). Затененные ячейки являются совпадающих областей в классе концентрации. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Характеристика No.(%)
Пол, n(%)
Девушки 123(41.98%)
мужчины 170(58.02%)
Возраст, год, n(%)
Медиана (25%, 75%) 23(8,36)
КРУПНОСТЬЮ ДО 10 97(33.11%)
11-20 37(12.63%)
21-40 101(34.47%)
> 41 58(19.80%)
Диагноз, n(%)
Аллергический ринит 92(31.40%)
Аллергическая астма 117(39.93%)
Аллергический ринит с астмой 36(12.29%)
Другие 48(16.38%)

Таблица 1: пациент демографические характеристики. В общей сложности 293 предметы были найдены, кто соответствует критериям включения, средний возраст составляет 23 (межквартильный диапазон от 8 до 36 лет). Среди них, 170 (58.02%) были мужчины и 123 (41.98%) составляли женщины. Кроме того 92 (31.40%) из них имел аллергический ринит, 117 (39,93%) была аллергическая астма, 36 (12.29%) имел сопутствующие заболевания ринит и астма, и 48 (16,38%) были другие аллергические заболевания, например пищевая аллергия или аллергии кожи.

Размер выборки CAP + КАП- Общее соглашение SE SP PPV NPV AUC (95% CI)
BioIC + BioIC- BioIC + BioIC-
D1 250 196 20 0 34 92,00% 90.74% 100.00% 100.00% 62.96% 0.975 (0.947 0.991)
D2 112 93 6 0 13 94,64% 93.94% 100.00% 100.00% 68.42% 0,984 (0.941 до 0,999)
E1 150 34 5 2 109 95.33% 87,18% 98,20% 94.44% 95.61% 0.968 (0.925 до 0.990)
F2 134 16 27 10 81 72.39% 37.21% 89.01% 61,54% 75.00% 0.744 (0.661 0.815)
F13 64 18 15 6 25 67.19% 54.55% 80.65% 75.00% 62.50% 0.731 (0.606 0.834)
F24 216 36 127 1 52 40.74% 22.09% 98.11% 97.30% 29.05% 0,613 (0.545 0.678)
D1-дер p1, d2-дер f1, e1-Cat перхоть, f2-молоко, f13-арахис, f24 креветки. Кап-ImmunoCAP, + позитивных, –-отрицательные, SE-чувствительность, SP-специфика, прогностическое значение PPV-позитивных, прогностическое значение NPV-отрицательные, AUC-площадь под кривой ROC. Для значений АУК значение интервал 95% (95% CI) также показано в таблице.

Таблица 2: клинические производительности между двумя системами. D1 - D. pteronyssinus, d2 - D. Фарина, e1 - cat перхоть, f2 - молоко, f13 - арахис и f24 - креветки. Кап - ImmunoCAP, + - позитивные, – - отрицательный, SE - чувствительность, SP - PPV - специфика, предсказательная ценность положительного результата, NPV - отрицательные прогностическое значение, AUC - площадь под кривой ROC. Для значений АУК значение интервал 95% (95% CI) также показано в таблице.

Kappa(95%,CI) Spearman'rho(95%,CI)
D1 0,727 (0,617 0.838) 0.896 (0.869 0.918)
D2 0.783 (0,617 до 0.948) 0.731 (0.631 0.807)
E1 0.876 (0,786 0.965) 0.927 (0.900 до 0.947)
F2 0,293 (0.122 0.463) 0.681 (0.579 до 0.763)
F13 0.349 (0.129 до 0.569) 0,969 (0.949 0,981)
F24 0,112 (0,062 0.162) 0.833 (0.788 0.870)

Таблица 3: корреляция и соглашение между двумя системами. D1 - D. pteronyssinus, d2 - D. Фарина, e1 - cat перхоть, f2 - молоко, f13 - арахис и f24 - креветки. Каппа и в Спирмена Rho значений значение интервал 95% (95% CI) также показано в таблице.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Аналогичные результаты многих других исследований15,16,17, результаты от microfluidic системы на основе сыворотки от 293 аллергия больных показал, что дом пылевых клещей (включая D. pteronyssinus, D. farinaeи B. tropicalis) являются основными вдыхаемые аллергены, ведущих к аллергических заболеваний в южном Китае, тогда как для пищи, молоко, арахис, креветки и крабы являются наиболее распространенными аллергенов, которые вызывают аллергические симптомы. Что касается воспроизводимость результатов исследования, проведенного на три аллергенов все из них показал хорошие результаты, с общий показатель повторения 88.89%, что означает, что он встретил максимально допустимая ошибка.

С помощью системы 1 как ссылка, настоящее исследование оценку клинической диагностики эффективности системы 2. С уровнем sIgE сыворотки 0,35 МЕ/мл как среза2образец с sIgE > 0,35 МЕ / мл подразумевает, что пациент чувствителен к аллергена и тем выше титр, лучше корреляцию с пациента симптомы18. Результаты показывают, что уровень согласования трех вдыхаемые аллергены были все более чем на 90%. В дополнение к результатам для пищевых аллергенов, которые имели согласования ~40.74%-72.39%, общее согласование был 81,75% (757/926). Значение Каппа D. pteronyssinus, D. Фаринаи перхоть кошки были 0.778, 0.663 и 0.860 (p < 0,001), соответственно. Каппа значения для пищевых аллергенов были все ниже 0,4. Для трех основных летучими и пищевых аллергенов между двумя системами (rСпирмена ≈ 0.681 0,969, p < 0.01) был замечен существенная корреляция количественных результатов.

Было отмечено, что хотя коэффициент rS арахиса был 0,969, Каппа значение индекса оценки согласованности было только 0.349 (95% CI, 0.129-0.569). Такое несоответствие может быть обусловлено низкой распространенности арахиса чувствительность в регионе и, следовательно, большинство набранных sera были отрицательными для этой конкретной IgE. Многие исследования показали, что существует значительное расхождение может рассматриваться между sIgE титр и клинические симптомы пищевых аллергенов. Использование анализа различных систем для пищи специфических IgE определение может создать большие вариации19. Это может быть связано с тем, что это не сырая пища попадает, который вызывает аллергические симптомы, но измененные компоненты, созданные во время приготовления пищи или пищеварения. Использования различных сырьевых материалов различных производителей, чтобы сделать аллергенов может также способствовать несоответствие результата20.

Microfluidic картридж состоит из пяти основных частей: пять резервуаров, пять каналов доставки реагента, пять однонаправленный насосов, один реакционной зоны, в которой аллергенов может быть иммобилизованным экстрактов и отходов бак для сбора всех побочных реакции. Исходя из необходимости анализа, до 40 аллерген, точечно экстрактов в зоне реакции. Контролируется ПК, пять однонаправленный насосы направлять и координировать поток образцы сыворотки, Отмывающий буфер, блокирующий реагента, конъюгаты и вычитает, чтобы закончить двухэтапный энзим соединенный assay иммуносорбента. После завершения реакции, хемилюминесценция реакции изображения захватываются разрешением Охлаждаемый ПЗС и сигналы обрабатываются PC учредить калибровочной кривой и для вычисления результатов количественного и полуколичественный sIgE.

Текущее исследование показывает, что две системы продемонстрировать хорошие последовательности. Однако по сравнению с системы 1, 2 системы проще в использовании и имеет меньше спрос на обучение оператора. Поскольку каждый microfluidic картридж имеет свой собственный контроль качества кривой, надежность системы значительно возрастает. Другие преимущества системы включают в себя свет и небольшой след, расширяемой модульной установки и легкость, с которой он подключен к ПК для операции управления. Все эти преимущества значительно уменьшить установки и эксплуатационные расходы, и в то же время, они не ставят под угрозу точность и скорость требования в повседневной клинической практике, что делает особенно подходит для скрининга специальные системы в больницах первичной медицинской помощи в Китае. Тем не менее один из основных недостатков microfluidic системы является, что это не полностью автоматическая система, и в ходе операции требуется частое вмешательство. Она до сих пор не может заменить систем, которые необходимо обработать большое количество образцов ежедневно.

Из-за отсутствия достаточно позитивным Сера на определенные аллергены это исследование не охватывает всех 19 аллергенов, доступных в microfluidic картридж, но только шесть общих имеющихся в южном Китае. Больше исследования необходимо остановиться на ли оценки применяется также для других аллергенов.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgments

Авторы благодарят профессор Mei Jiang за ее помощь в рамках статистического анализа и г-н Цуй молот в подготовке рукописи. Это исследование было поддержано Гуанчжоу науки и технологий фонд (201804020043) и Национальный фонд Китая естественных наук (NSFC 81572063 и NSFC 81802076). Финансирование группы согласились с дизайна исследования, анализ данных, подготовка рукописи и решение опубликовать. Никаких других средств была получена для этого исследования.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agnitio BioIC Analyzer Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) BA-G2000
BioIC Allergen specific-IgE Detection Kit Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DR17A12
BioIC Cartrideg Placement plate Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) T20SET
BioIC Reagent Dispenser Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DS-1
Image two-dimensional barcode machine Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) NLS-HR200
Software Package, LabIT Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) Version 2.4.12
VORTEX-5 Vortex Mixer Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd. VORTEX-5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kamble, S., Bharmal, M. Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States. Journal of Asthma Research. 46, (1), 73-80 (2009).
  2. Paganelli, R., et al. Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics. Allergy. 53, (8), 763-768 (1998).
  3. Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121, (5), 1219-1224 (2008).
  4. Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China. PLoS ONE. 9, (5), e94776 (2014).
  5. Zeng, G., et al. Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort. Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25, (5), 343-351 (2015).
  6. Luo, W., et al. grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma. Molecular Immunology. 78, (2016), 105-112 (2016).
  7. Zeng, G., et al. Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children. Molecular Immunology. 74, (2016), 1-9 (2016).
  8. Lee, J. H., et al. Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients. Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).
  9. Eckels, J., et al. Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform. Bmc Bioinformatics. 14, (1), 145 (2013).
  10. Bland, J. M., Altman, D. G. Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement. Lancet. 327, (8476), 307-310 (1986).
  11. Carletta, J. Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic. Computational Linguistics. 22, (2), 249-254 (1996).
  12. Shyur, S. D., et al. Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings. Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).
  13. Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods. Intensive Care Medicine. 37, (6), 1038-1040 (2011).
  14. Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy. Annals of Laboratory Medicine. 38, (1), 23-31 (2018).
  15. Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up. Allergy. 66, (8), 1123-1125 (2011).
  16. Fischer, J., et al. Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters. Allergy. 72, (10), 1540-1547 (2017).
  17. Li, J., et al. A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China. Allergy. 64, (7), 1083-1092 (2009).
  18. Ahlstedt, S. Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy. Clinical & Experimental Allergy. 32, (1), 11-16 (2002).
  19. Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. Accuracy of IgE antibody laboratory results. Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100, (2), 288-289 (2008).
  20. Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards. International Archives of Allergy & Immunology. 108, (1), 82-88 (1995).
Применение технологии Microfluidic биочип обнаружить сыворотке Аллерген конкретных иммуноглобулина е (sIgE)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).More

Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter