Summary
Murina urinblåsan tumörer induceras med den N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamin cancerframkallande (BBN). Urinblåsan tumör generation är heterogen; Därför behövs en korrekt bedömning av tumör börda före randomisering till experimentell behandling. Här presenterar vi en snabb, tillförlitlig MRI-protokoll för att bedöma tumörens storlek och scenen.
Abstract
Murina urinblåsan tumör modeller är kritiska för utvärdering av nya behandlingsalternativ. Urinblåsan tumörer inducerad med den N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamin (BBN) cancerframkallande är fördelaktiga över cell linje-baserade modeller eftersom de nära replikera de genetiska profilerna av tumörer, och, till skillnad från cellmodeller och xenograft, de ger en bra tillfälle för studien av immunterapi. Men är blåsan tumör generation heterogen; Därför behövs en korrekt bedömning av tumör börda före randomisering till experimentell behandling. Beskrivs här är en BBN musmodell och protokoll att utvärdera urinblåsan cancer tumör börda i vivo med en snabb och tillförlitlig magnetresonans (MR) sekvens (sant FISP). Denna metod är enkel och tillförlitlig eftersom, till skillnad från ultraljud, MR är operatörsoberoende och kan enkelt efter förvärvet bildbehandling och granskning. Använder axiella bilder av blåsan, analys av regioner av intresse längs blåsväggen och tumör möjliggör beräkning av urinblåsan vägg och tumör område. Denna mätning korrelerar med ex vivo urinblåsan vikt (rs= 0,37, p = 0,009) och tumörstadium (p = 0.0003). Sammanfattningsvis, BBN genererar heterogena tumörer som är idealiska för utvärdering av immunterapier, och MRI kan snabbt och tillförlitligt bedöma tumör bördan före randomisering till experimentella behandlingsarmarna.
Introduction
Cancer i urinblåsan är den femte vanligaste cancerformen övergripande, ansvarig för cirka 80 000 nya fall och 16.000 dödsfall i USA i 20171. Efter ungefär 30 år utan betydande framsteg vid Systemisk behandling av urinblåsan cancer2visat senaste checkpoint anti-PD-L1- och anti-PD-1 hämmare prövningar spännande och ibland hållbara svar hos patienter med avancerad Urothelial cancer3,4,5. Dock endast cirka 20% av patienterna visar ett objektivt svar på dessa behandlingar, och ytterligare studier behövs för att expandera en effektiv användning av immunterapi hos patienter med cancer i urinblåsan.
Murina urinblåsan cancer modeller är viktiga verktyg i preklinisk utvärdering av nya behandlingar6,7. För att kontrollera för tumörens storlek när randomisera möss till olika behandlingar, måste tumör börda bedömas och kontrolleras mellan behandlingsgrupperna. Tidigare studier har använt ultraljud eller mareld för att utvärdera ortotop cell linje-baserade urinblåsan cancer modeller8,9,10,11. Men presenterar båda teknikerna flera nackdelar. Ultraljud mätningar kan påverkas av kompetensen hos operatören och saknar tredimensionella funktioner och hög rumslig upplösning. Mareld metoder kan endast ge semikvantitativt utvärdering av tumörcellerna och möjliggör inte visualisering av urinblåsan Björndjurens. Mareld kan dessutom bara användas med cell linje-baserade modeller, som uttrycker självlysande gener hos hårlösa möss eller möss med vita rockar.
Magnetisk resonanstomografi (MRT), däremot, erbjuder unika flexibilitet i förvärvet av högupplösta anatomiska bilder, uppvisar ett brett spektrum av vävnad kontrast som möjliggör korrekt visualisering och kvantitativ bedömning av tumör börda utan att behöva uttrycka självlysande boenden. Herr bilderna lättare reproducerbara med lämplig analys rörledningarna och garanteras 3D-visualisering av blåsan. De största begränsningarna av MRI är tidsperiod som är nödvändig för en granskning och höga kostnader som begränsar hög genomströmning analyser. Flera studier har dock visat att MR ordnar kan ge hög kvalitet diagnostiska bilder som kan användas för att effektivt identifiera och övervaka cell linje-baserade urinblåsan tumörer; Således kan de användas för hög genomströmning analys9,12.
Här, beskriver vi en icke-invasiv herr-baserad metod för att tillförlitligt och effektivt präglar cancerframkallande-inducerad urinblåsan tumörer hos möss. För att åstadkomma detta använder vi en snabb bildbehandling med distansträning precession herr teknik (sant FISP), vilket garanterar korta skanning sessioner samtidigt som det ger hög kvalitet och hög rumslig upplösning (~ 100 mikrometer) för detektering och mätning av urinblåsan tumörer13. Dessutom för att bekräfta riktigheten av denna icke-invasiva MRI analys, beskriver vi sambandet mellan MRI-derived parametrar och ex vivo urinblåsan vikt samt patologiskt-bekräftade tumörstadium.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla metoderna som beskrivs här har godkänts av den institutionella djur vård och användning kommittén (IACUC) av Northwestern University.
1. induktion av tumörer med BBN
- Få manliga C57/BL6 möss, varje minst 6 veckor gamla.
Obs: Manliga möss utvecklar cancer i urinblåsan snabbare och mer konsekvent än honmöss14,15. - Lägga till N-nitrosobutyl(4-hydroxybutyl) Amin (BBN) vid en dos på 0,05% i dricksvattnet. Förvara det i en ogenomskinlig behållare och tillhandahålla ad libitum som dricksvatten till möss16.
Obs: Lagra BBN lösningen i en tydlig behållare kommer att försämra den cancerframkallande17. - Byta 0,05% BBN vatten två gånger per vecka.
- Övervaka djuren genom inspektion för tecken på ångest som förknippas med blåsan tumörer inklusive hematuri, fast blåsan och massorna. Inspektera mössen två gånger per vecka eller i enlighet med lokala IACUC riktlinjer.
- Räkna med tumörer att utveckla mellan 16 och 24 veckors exponering18.
2. MRI setup
- Utföra en subkutan injektion med steril koksaltlösning (0,1 – 0,2 mL med en 25 – 27 G nål och 1 mL spruta) 10 min före Magnetkamera för att underlätta urinblåsan fyllning.
- Söva varje mus med en gasblandning av 100% O2 och isofluran (2 – 4% så behövs). Verifiera en adekvat planet av anestesi genom testning tillbakadragande reflexen (tå nypa) innan du fortsätter. Gäller sterila ögonsalva för djuret.
- Flytta musen till innehavaren imaging utrustad med en noskon för leverans av inhalerade isofluran (0,5% – 3%).
- Övervaka kroppstemperatur och respiration använder en rektal temperatursond ansluten till fysiologiska inspelning datorn.
Obs: Normal kroppstemperatur (36 – 37 ° C) upprätthålls med hjälp av den återcirkulerande varmvatten krets inbyggd i djurens herr innehavaren. Temperaturen mäts genom en rektal sensor och registreras på fysiologiska övervakning datorn använder dedikerade fysiologiska övervakning programvara. Samma system används för att registrera andning och elektrokardiogram signalerna mätt genom en pneumatisk kudde placeras under revbenen och via 3-avlednings EKG elektroder. Respiration signalen används också för att utlösa MRI förvärv och minska artefakter som är associerad med respiration rörelse.
3. MRI bild förvärv
- Utnyttja en kvadratur kropp spole för magnetisering.
- Placera en 4-kanals mottagare spole på nedre delen av buken musklick skannas för att aktivera optimerad signaler från regionen av intresse.
- Initiera automatiska justeringar genom integrerad avbildningsprogrammet att förvärva en tri-axial uppsättning bilder av hela musen kroppen. Från denna referens uppsättning bilder, identifiera regionen av intresse (i detta fall, urinblåsan regionen).
- Förvärva tre uppsättningar av rätvinkliga-skivad bilder längs de axiella, koronala och sagittalt plan med hjälp av radiologiska referensramar.
- Utnyttja den sanna FISP imaging sekvens (ingår som en av funktionerna i integrerade avbildningsprogrammet) med följande herr parametrar: TR = 900 MS, TE = 2 ms, FA = 70, 14 medelvärden.
Obs: Denna uppsättning parametrar kan för snabb avbildning med hög diagnostisk kvalitet, inklusive T1/T2 viktning i < 10 min per mus. - Rumslig upplösning och skiva tjocklek bestäms av geometriska parametrar valts av användaren genom grafiska gränssnittet för integrerad imaging plattformen. Detta resulterar i en rad skivor över hela blåsan 0,5 mm tjocklek med en i-plane upplösning på 0.148 mm.
4. Herr bildanalys
- Identifiera uppsättningen skivor av 0,5 mm tjocklek och i-plane upplösning på 0.148 mm som täcker hela blåsan.
- Exportera till medicinsk bild analys programvara genom att välja mappen med motsvarande bilder i analysera format.
- Välj ”representativa axiella vy” i mitten av urinblåsan för kvantitativ analys genom att bläddra igenom de genererade bilderna och identifiera en bit vid mittpunkten av urinblåsan, som möjliggör visualisering av blåsväggen och lumen.
Obs: Center skiva bör vara utvalde med den största diametern. - Noggrant avgränsa regionen av intresse (ROI) genom att manuellt spåra gränser runt den yttre kanten av urinblåsan (BLAut) och runt inre lumen (BLAi) av blåsan (se Schematisk och representativa siffrorna i figur 2) i den valda representanten axiella vyn.
- Subtrahera inre lumen från yttre kanten att beräkna ytan av blåsväggen.
BLAvägg = BLAut - BLAi
Obs: Ytan på en kontroll urinblåsan med ingen tumör förväntas vara mindre än den med en tumör i urinblåsan.
5. dödshjälp och dissektion av urinblåsan
- Efter 20 veckor av BBN exponering, eutanasi mössen använder standardrutiner i enlighet med lokala IACUC riktlinjer.
- Rengör området i snitt med 70% etanol, och sedan greppa och lyfta bukväggen huden med pincett.
- Gör en mittlinjen snitt från blygdbenssammanfogningen till den xiphoid processen.
- Kraftigt incisionsfilm i bukhålan av greppa med pincett och öppning med sax.
- Identifiera urinblåsan, som ligger i mittlinjen nedre delen av buken.
- Identifiera och skär den median navelsträngen ligament ansluta kupolen på blåsan till naveln och bukväggen.
- Greppa kupolen i blåsan med pincett att tillhandahålla countertraction och dissekera urinblåsan bort från omgivande strukturer, inklusive sädesblåsorna, ändtarmen och fett.
- Identifiera uretersna in i urinblåsan och klipp med sax nära urinblåsan.
- Lyft blåsan kraniellt, klipp urinröret med en sax och ta bort blåsan.
- Omedelbart väga blåsan efter skölja det med PBS.
6. histologisk undersökning av urinblåsan vävnad
- Fixa urinblåsan vävnaden i 10% neutral buffrad formalin för 36 – 48 h i rumstemperatur (RT).
- Bädda in vävnaden i paraffinblock, skära glasen för efterföljande undersökning och färga bilderna med hematoxylin och eosin för mikroskopisk undersökning som tidigare beskrivits19,20.
- Utföra en mikroskopisk undersökning av mus urinblåsan vid låga (2,5 x och 10 x) och hög (20 x och 40 x) förstoringar, att undersöka för makroskopiska lesioner, hyperplasi, carcinoma i situ, papillom, papillära tumörer och invasiva tumörer19 , 21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Urinblåsan tumörer förmåddes i C57/B6 hanmöss och använder protokollet beskrivs (figur 1). Mr utfördes på 16 veckor, och möss var euthanized på 20 veckor. Ex vivo urinblåsan vikter (BW) för varje mus registrerades. Bilderna var färgas med hematoxylin och eosin och alla histologi bilder granskades för tumörstadium.
För att analysera tumör bördan med herr, urinblåsan vägg inre lumen (BLAi) var subtraheras från urinblåsan vägg yttre lumen (BLAut) att beräkna tjockleken på blåsväggen (BLAvägg) (figur 2). Representativa sant FISP herr bilder, urinblåsan vägg 3D-rekonstruktioner och patologiska bilder av en kontroll mus (dvs ingen tumör) visas i figur 3A-F, och en mus med en stor tumör visas i figur 3 g-L.
Parametern MRI-derived BLAvägg korrelerar svagt med ex vivo BW (rs = 0,37, p = 0,009; (Se figur 4). Undersökning av MRI-derived BLAvägg parametern och BW data visar en association med tumörstadium (Kruskal-Wallis test MRI p = 0.0003, figur 5A; BW p = 0,0006; Figur 5B), samt en sammanslutning när stratifiera patologi av icke-muskel-invasiv urinblåsecancer och muskel-invasiv urinblåsecancer (Mann-Whitney U test MRI p = 0,0002, figur 5 c; BW p < 0,0001, figur 5 d). Utförandet av BLAvägg och BW att bestämma muskel-invasiv urinblåsecancer visas i figur 5E. Arean under kurvan (AUC) för BLAvägg (AUC = 0,81, 95% CI 0,68-093) statistiskt liknar AUC för BW (AUC = 0,89, 95% CI 0,80-0,98, p = 0,30).
Figur 1: Schema för urinblåsan tumör induktion med BBN och tidpunkten för MRI och eutanasi. BBN är administrerade ad libitum vid en koncentration på 0,05% i dricksvatten. Möss genomgå Mr på 16 veckor. Möss är euthanized på 20 veckor och blåsor varje undersöks med immunhistokemi. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Schematisk grafisk skildring av metoden att få BLAvägg och representativ herr bild med motsvarande konturer. Med intensitet av MRI-bilder, den yttre väggen av en blåsa identifierades och en disposition drogs i rött (BLAut). Hyperintensiva urinblåsan lumen sammanfattades i grönt (BLAi), och motsvarande urinblåsan lumen området erhölls. Subtraktion av dessa två kvantiteter gav parametern BLAvägg , vilket motsvarar ljus grå disken i den grafiska bilden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: representativa sant FISP herr bilder, urinblåsan vägg 3D-rekonstruktioner och patologiska bilder av en kontroll mus (dvs ingen tumör) (A-F) och en mus med en stor tumör (G-L). (A) representant herr bilden av en mus med ingen tumör. (B) segmentering av urinblåsan vägg område (BLAvägg), röd, definieras som området mellan urinblåsan lumen (BLAi) och yttre blåsväggen (BLAut). (C) 3D-rendering av blåsväggen från en kontroll mus, genereras genom att definiera BLAvägg vid varje segment via urinblåsan. Gröna pilar illustrerar blåsan på en 2D-bild översatt till 3D-rendering. (D) 3D-rendering av en Utskärning av BLAvägg från en kontroll mus. (E) låg effekt (2,5 x) och (F) hög effekt (10 x) bilder av samma mus blåsan. (G) representant herr bilden av en mus med en stor tumör. (H) segmentering av urinblåsan vägg område (BLAvägg), röd, definieras som området mellan urinblåsan lumen (BLAi) och yttre blåsväggen (BLAut). (I) 3D-rendering av blåsväggen av en mus med en stor tumör. (J) 3D-rendering av en Utskärning av blåsan av en mus med en stor tumör, genereras genom att definiera BLAvägg vid varje segment via urinblåsan. Gröna pilar illustrerar blåsan på en 2D-bild översatt till 3D-rendering. (K) låg effekt (2,5 x) och (L) hög effekt (10 x) bilder av samma mus blåsan. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: Spearman korrelation mellan MRI-derived BLAvägg och slutliga urinblåsan vikt. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5: Jämförelse av patologiska scenen och MRI-derived parametern BLAvägg i 47 möss. (A) jämförelse av alla patologiska stadier och MRI BLAvägg (Kruskal-Wallis test). (B) jämförelse av alla patologiska stadier och urinblåsan vikt (Kruskal-Wallis test). (C) jämförelse av icke-muskel-invasiv urinblåsecancer (skede ≤T1) och muskel-invasiv urinblåsecancer (skede ≥T2) med MRI BLAvägg (Mann-Whitney U-test). (D) jämförelse av icke-muskel-invasiv urinblåsecancer (skede ≤T1) och muskel-invasiv urinblåsecancer (skede ≥T2) med blåsan vikt (Mann-Whitney U-test). (E) ROC kurva av MRI-derived bladder område och slutliga urinblåsan vikt att fastställa muskel-invasiv urinblåsecancer (skede ≥T2). Det börsnoterade p-värdet är skillnaden mellan de två AUCs. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Korrekt avbildning av tumör modeller är nödvändigt för lämplig före dödshjälp Förproduktion och djur randomisering innan experimentell behandling. Använda proceduren presenteras här, visar vi metod för att (1) generera urinblåsan tumörer med hjälp av BBN cancerframkallande och (2) stratifiera urinblåsan tumör bördan med hjälp av Mr An herr-derived området mätning (BLAvägg) korrelerar signifikant med ex vivo urinblåsan vikt och associeras med patologisk tumörstadium.
Genom att anta en snabb imaging strategi med kort anskaffningstid på hög rumslig upplösning (sant FISP) och hög diagnostisk kvalitet, kan vi genomföra hög genomströmning analyser av möss i mellanliggande faser av tumörutveckling, före behandling randomisering. Vår rapport är förenligt med tidigare rapporter för MR avbildning av cell linje-baserade tumör implantat9,12 och bekräftar dess potential som ett verktyg för att optimera stora antal drog ämnesstudier.
I detta MRI protokoll är det viktigt att bilden musen med en full blåsa att få högkvalitativa bilder och beskriva skillnaderna mellan tumör och urinblåsa lumen. Finner vi att injicera varje mus med saltlösning 10 minuter innan imaging möjliggör tillräcklig avbildning av blåsan. Ytterligare omfattar kritiska steg pålitlig utlösning av MRI förvärv med av andning detekteras med en pneumatisk kudde placeras under musen revben bur och förvärv av ett tillräckligt antal herr skivor som gör att täckning av hela blåsan.
Andra alternativ för tänkbar utveckling och progression av murina urinblåsan tumörer inkluderar ultraljud8 och mareld10,11. Micro-ultraljudsundersökningar av implanterade MBT-2-celler upptäckts tumörer i 15 möss, 13 som var histologiskt bekräftat för att ha tumörer8. Ultraljud volym korrelerade signifikant med stereoskopisk volym av tumör, men tumör vikt och scenen var inte undersökta8. Mareld har använts för att noggrant övervaka cell linje-baserade tumör implantat, men det kan inte användas för att övervaka cancerframkallande-inducerad cancer utan omplantering cancerframkallande-derived tumörer från en mus till en annan. Möjlighet att noggrant övervaka cancerframkallande-inducerad cancer är kritisk, eftersom dessa modeller har flera fördelar över cell linje modeller. Cell linje-baserade modeller är genetiskt homogen och härledda från tumörer som undandrar redan immunosurveillance och implanterade tumörer växa snabbt utan en kronisk inflammatorisk mikromiljö22. BBN modellen har använts framgångsrikt i över 30 år, och det är fortfarande en viktig modell för förståelsen av urinblåsan cancerutveckling och behandling23,24,25. Dessutom BBN modellen visar mutationsanalys och genuttryck profiler liknar mänskliga blåscancer, samtidigt behålla intakt immunsystemet att möjliggöra studiet av potentiella immunoterapeutisk agenter26,27 .
Tillgängligheten av dedikerade små djur MRI som delade resurser vid flera institutioner gör denna teknik fördelaktiga och praktiska för grundforskning och screening av nya terapier. Det finns dock vissa begränsningar. Möss var avbildade endast vid en tidpunkt, inte kontinuerligt under utvecklingen av tumörer. Men föreslår baserat på vår statistiska resultat vi att enda tidpunkt värdet är kunna korrekt stratifiera möss i grupper av tumörens storlek och scenen, och det utgör en idealisk, icke-invasiv parameter för att klassificera och tilldela patienter till olika grupper. Flera tumör stadier genererades med hjälp av BBN, alltifrån Ta till T4. Men dessa kan vara skiktade (som föreslås i figur 5 c-D) så muskel-invasiv (T2 eller större) och icke-invasiv (T1 eller mindre), eftersom detta är standard management i human bladder cancer28.
En annan potentiell begränsning är att parametern BLAvägg härrörde med hjälp av en cirkelsektor genom varje blåsan och inte alla tillgängliga skivor som täcker den. Dessa kriterier valdes att minska analys pipeline krav (dvs. krav för ritade flera ROIs över flera segment) och ansågs tillräckliga för en snabb, kvantitativ analys. Mer komplexa volymetrisk analys kan utföras på ämnen (dvs visas för illustrativa syften i figur 3) men skulle oundvikligen kräver mer ansträngning och kostnader. Automatiserad bildbehandling algoritmer kan användas för automatisk avgränsning av urinblåsan regionen. men dessa metoder lider inneboende variabilitet av urinblåsan form och storlek bland enskilda möss och kräver betydande testning och validering före tillförlitlig antagandet i en preklinisk studie29.
Kvalitativ bedömning av volymetriska data tyder på att denna cirkelsektor metod är tillräckligt för denna typ av analys. Det är dock möjligt att mer avancerade analyser kan kräva detta ytterligare data/bild bearbetningssteg. Från förvärvet synvinkel finns det flera ytterligare genomsökningar som kunde förvärvas, vilket ytterligare kan öka förmågan att förutse utvecklingen av tumörer medan också avslöjar mer subtila tumör mikromiljö förändringar. Dessa ytterligare tekniker inkluderar dynamisk kontrast enhanced MRI, diffusion vägt MRI och andra sekvenser30 som möjliggör en omfattande, multi parametriska karakterisering av blåsväggen. Men lett hänsyn till kostnads- och Effektivitetsprogrammet oss att begränsa vår analys som den som beskrivs i detta protokoll.
Sammanfattningsvis beskriver vi metoden för T1/T2-vägd snabb bildbehandling herr sekvenser (sant FISP) att förvärva flera segment bilder som täcker hela musen blåsan. Vi visar att dessa bilder kan användas för att fastställa omfattningen av tumör i en cancerframkallande-baserad modell av murina blåscancer. MRI data korrelerar med blåsan vävnad vikter och är associerad med tumörstadium. Dessa resultat stöder användningen av denna snabba och pålitliga MRI analys att stratifiera möss före experimentell behandling randomisering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
J. J. M. finansieras av Veterans Health Administration förtjänsten bevilja BX0033692-01. J. J. M. stöds också av John P. Hanson Foundation för cancerforskning vid Robert H. Lurie omfattande Cancer Center i nordvästra universitetet. Vi tackar centrum för translationell Imaging för MRI förvärvet och handläggning. Finansieringskällor hade ingen roll i skrivandet av manuskript eller beslutet att publicera.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 664 | Mice |
| N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine carcinogen (BBN) | TCI American | B0938 | Carcinogen |
| 0.9% normal saline | Hospira, Inc | NDC 0409-488-02 | |
| Isoflurane | Piramal HealthCare | 60307-120-25 | Anesthetic |
| 7Tesla ClinScan MRI | Bruker | NA | Dedicated Small Animal Imaging MRI |
| Syngo | Siemens | NA | MR Integrated Imaging Software |
| Model 1030 Monitoring & Gating System | Small Animal Instruments, Inc. (SAII) | NA | Small animal physiologic monitoring |
| Formalin, Neutral Buffered, 10% | Sigma | HT501128 | Fixative |
| Eosin Y | Fisher Scientific | NC1093844 | Histologic staining agent |
| Hematoxylin | Fisher Scientific | 23-245651 | Histologic staining agent |
| Jim7 | Xinapse Systems | NA | Medical image analysis software |
| GraphPad Prism v7.04 | Graphpad | NA | Graphing software |
| R v3.4.2 | The R Project for Statistical Computing | NA | Statistical software |
| R package pROC v1.10.0. | The R Project for Statistical Computing | NA | ROC analysis |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).
- Abdollah, F., et al. Incidence, survival and mortality rates of stage-specific bladder cancer in United States: a trend analysis. Cancer Epidemiology. 37 (3), 219-225 (2013).
- Rosenberg, J. E., et al. Atezolizumab in patients with locally advanced and metastatic urothelial carcinoma who have progressed following treatment with platinum-based chemotherapy: a single-arm, multicentre, phase 2 trial. The Lancet. 387 (10031), 1909-1920 (2016).
- Sharma, P., et al. Nivolumab monotherapy in recurrent metastatic urothelial carcinoma (CheckMate 032): a multicentre, open-label, two-stage, multi-arm, phase 1/2 trial. The Lancet Oncology. 17 (11), 1590-1598 (2016).
- Bellmunt, J., et al. Pembrolizumab as Second-Line Therapy for Advanced Urothelial Carcinoma. New England Journal of Medicine. 376 (11), 1015-1026 (2017).
- Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. Mouse orthotopic models for bladder cancer research. BJU International. 104 (9), 1286-1291 (2009).
- Zhang, N., Li, D., Shao, J., Wang, X. Animal models for bladder cancer: The model establishment and evaluation (Review). Oncology Letters. 9 (4), 1515-1519 (2015).
- Patel, A. R., et al. Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study. Urology. 75 (4), 799-804 (2010).
- Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants. The Journal of Urology. 145 (6), 1297-1301 (1991).
- Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model. BJU International. 101 (1), 120-124 (2008).
- Vandeveer, A. J., et al. Systemic Immunotherapy of Non-Muscle Invasive Mouse Bladder Cancer with Avelumab, an Anti-PD-L1 Immune Checkpoint Inhibitor. Cancer Immunology Research. 4 (5), 452-462 (2016).
- Kikuchi, E., et al. Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging. Journal of Urology. 170, 1375-1378 (2003).
- Chung, H. W., et al. T2-weighted fast MR imaging with true FISP versus HASTE: comparative efficacy in the evaluation of normal fetal brain maturation. American Journal of Roentgenology. 175 (5), 1375-1380 (2000).
- Miyamoto, H., et al. Promotion of bladder cancer development and progression by androgen receptor signals. Journal of the National Cancer Institute. 99 (7), 558-568 (2007).
- Bertram, J. S., Craig, A. W. Specific induction of bladder cancer in mice by butyl-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine and the effects of hormonal modifications on the sex difference in response. European Journal of Cancer. 8 (6), 587-594 (1972).
- Nagao, M., et al. Mutagenicity of N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine, a bladder carcinogen, and related compounds. Cancer Research. 37, 399-407 (1977).
- Hirose, M., Fukushima, S., Hananouchi, M., Shirai, T., Ogiso, T. Different susceptibilities of the urinary bladder epithelium of animal species to three nitroso compounds. Gan. Gann; The Japanese Journal of Cancer Research. 67 (2), 175-189 (1976).
- Shin, K., et al. Cellular origin of bladder neoplasia and tissue dynamics of its progression to invasive carcinoma. Nature Cell Biology. 16 (5), 469-478 (2014).
- Epstein, J. I. Chapter 17: Immunohistology of the Bladder, Kidney, and Testis. Diagnostic Immunohistochemistry. , Fifth Edition, 624-661 (2019).
- Cohen, S. M., Ohnishi, T., Clark, N. M., He, J., Arnold, L. L. Investigations of rodent urinary bladder carcinogens: collection, processing, and evaluation of urine and bladders. Toxicologic Pathology. 35 (3), 337-347 (2007).
- Wood, D. P. Jr Tumors of the bladder. Campbell-Walsh Urology. 11 (92), 2184-2204 (2016).
- Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillere, R., Smyth, M. J., Kroemer, G. Mouse models in oncoimmunology. Nature Reviews Cancer. , (2016).
- Kaneko, S., Li, X. X chromosome protects against bladder cancer in females via a KDM6A-dependent epigenetic mechanism. Science Advances. 4 (6), eaar5598 (2018).
- Smilowitz, H. M., et al. Biodistribution of gold nanoparticles in BBN-induced muscle-invasive bladder cancer in mice. International Journal of Nanomedicine. 12, 7937-7946 (2017).
- Dai, Y. C., et al. The interaction of arsenic and N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine on urothelial carcinogenesis in mice. PLoS One. 12 (10), e0186214 (2017).
- Williams, P. D., Lee, J. K., Theodorescu, D. Molecular Credentialing of Rodent Bladder Carcinogenesis Models. Neoplasia. 10 (8), (2008).
- Fantini, D., et al. A Carcinogen-induced mouse model recapitulates the molecular alterations of human muscle invasive bladder cancer. Oncogene. 37 (14), 1911-1925 (2018).
- Network, N. C. C. NCCN Guidelines in Clinical Oncology - Bladder Cancer 5.2018. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/bladder.pdf (2018).
- Costa, M. J., Delingette, H., Novellas, S., Ayache, N. Automatic segmentation of bladder and prostate using coupled 3-D deformable models. Medical Image Computing and Computer-Assisted Intervention. 10 (Pt 1), 252-260 (2007).
- Rosenkrantz, A. B., et al. Utility of quantitative MRI metrics for assessment of stage and grade of urothelial carcinoma of the bladder: preliminary results. American Journal of Roentgenology. 201 (6), 1254-1259 (2013).
