Summary
Murine blære tumorer er induceret med N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) Nitrosamin kræftfremkaldende (BBN). Blæren tumor generation er heterogene; Derfor, en nøjagtig vurdering af tumor byrde er nødvendig inden randomisering til eksperimentel behandling. Her præsenterer vi en hurtig, pålidelig Mr protokol for at vurdere tumorstørrelse og tidspunkt.
Abstract
Murine blære tumor modeller er afgørende for vurderingen af nye terapeutiske muligheder. Blære tumorer induceret med N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) Nitrosamin (BBN) kræftfremkaldende er fordelagtige over celle linje-baserede modeller, fordi de nøje replikere de genomiske profiler af menneskelige tumorer, og i modsætning til cell modeller og xenografts, giver de en god mulighed for undersøgelse af immunoterapi. Men blære tumor generation er heterogene; Derfor, en nøjagtig vurdering af tumor byrde er nødvendig inden randomisering til eksperimentel behandling. Beskrevet her er en BBN musemodel og protokollen til at evaluere blære cancer tumor byrde i vivo ved hjælp af en hurtig og pålidelig magnetisk resonans (MR) sekvens (sand FISP). Denne metode er enkel og pålidelig fordi, i modsætning til ultralyd, hr. er operatør-uafhængig og giver mulighed for enkel efter købet billedbehandling og anmeldelse. Brug af aksial billeder af blæren, analyse af regioner af interesse langs blærevæggen og tumor mulighed for beregning af blæren væg og tumor område. Denne måling korrelerer med ex vivo blære vægt (rs= 0,37, p = 0,009) og tumorstatus (p = 0,0003). Afslutningsvis BBN genererer heterogene tumorer, der er ideelle til evaluering af immunoterapi, og Mr kan hurtigt og pålideligt vurdere tumor byrde inden randomisering til eksperimentel behandling våben.
Introduction
Blærekræft er den femte mest almindelige kræftform samlede, ansvarlig for cirka 80.000 nye tilfælde og 16.000 dødsfald i USA i 20171. Efter omkring 30 år uden væsentlige fremskridt inden for systemisk behandling af blære kræft2, har seneste anti-PD-1 og anti-PD-L1 checkpoint hæmmer forsøg vist spændende og lejlighedsvis holdbare svar hos patienter med fremskreden Urothelial karcinom3,4,5. Men kun omkring 20% af patienter viser et objektivt svar på disse behandlinger, og yderligere undersøgelser er nødvendige for at udvide den effektive brug af immunterapi på patienter med blærekræft.
Murine blære cancer modeller er vigtige værktøjer i prækliniske vurdering af nye behandlinger6,7. For at kontrollere for tumorstørrelse når randomizing mus til forskellige behandlinger, skal tumor byrde vurderes og styres mellem behandlingsgrupper. Tidligere undersøgelser har brugt ultralyd eller bioluminescens for at evaluere orthotopic celle linjebaseret blære cancer modeller8,9,10,11. Begge teknikker fremsætte flere ulemper. Ultralyd målinger kan påvirkes af færdigheder af operatoren og mangler tre-dimensionelle funktioner og høj rumlige opløsning. Bioluminescens metoder kan kun levere semi-kvantitative evaluering af tumorcellerne og tillader ikke for visualisering af blæren anatomi og morfologi. Derudover kan bioluminescens kun bruges med celle linje-baserede modeller, som udtrykker en bioluminescerende gener i hairless mus eller mus med hvide Kitler.
Magnetisk resonans imaging (MR), på den anden side tilbyder unikke fleksibilitet i erhvervelse af anatomiske højopløsningsbilleder, udstiller en bred vifte af væv kontrast, som giver mulighed for nøjagtig visualisering og kvantitativ vurdering af tumor byrde uden at skulle udtrykke en bioluminescerende egenskaber. Hr. billeder er mere let at reproducere med relevant analyse rørledninger og garanteret 3D-visualisering af blæren. De største begrænsninger af Mr er længden af nødvendige tid til en undersøgelse og høje omkostninger, der begrænser høje overførselshastighed assays. Men flere undersøgelser har vist, at hr. sekvenser kan give høj kvalitet diagnostiske billeder, der kan bruges til effektivt at registrere og overvåge celle linjebaseret blære tumorer; de kan således anvendes til høj overførselshastighed analyse9,12.
Her, beskriver vi en non-invasiv hr.-baseret metode til at pålideligt og effektivt karakterisere kræftfremkaldende stof-induceret blære tumorer hos mus. For at opnå dette, bruger vi en hurtig billedbehandling med steady state præcession hr. teknik (sand FISP), som garanterer kort scanning sessioner samtidig med, at høj kvalitet og høj rumlige opløsning (~ 100 mikron) til påvisning og måling af blæren tumorer13. Desuden, for at bekræfte rigtigheden af denne ikke-invasive Mr assay, vi beskriver sammenhængen mellem Mr-afledte parametre samt ex vivo blære vægt og patologisk bekræftet tumorstatus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle metoder beskrevet her er blevet godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalg (IACUC) fra Northwestern University.
1. induktion af tumorer med BBN
- Få mandlige C57/BL6 mus, hver mindst 6 uger gamle.
Bemærk: Mandlige mus udvikler blærekræft i, hurtigere og mere konsekvent end hunmus14,15. - Tilføje N-nitrosobutyl(4-hydroxybutyl) Amin (BBN) i en dosis på 0,05% til drikkevand. Opbevar det i en uigennemsigtig beholder og give det ad libitum som drikkevand til mus16.
Bemærk: Lagring BBN løsning i en klar beholder vil forringe kræftfremkaldende17. - Ændre 0,05% BBN vandet to gange om ugen.
- Overvåge dyrene ved inspektion for tegn på angst forbundet med blære tumorer herunder hæmaturi, fast blære og masserne. Inspicere mus to gange om ugen eller i overensstemmelse med lokale retningslinjer for IACUC.
- Forvent tumorer udvikle mellem 16 og 24 uger eksponering18.
2. Mr setup
- Udføre en subkutan injektion af sterilt saltvand (0,1-0,2 mL ved hjælp af en 25-27 G nålen og 1 mL sprøjte) 10 min før Mr til at lette blære påfyldning.
- Bedøver hver mus med en gasblanding af 100% O2 og isofluran (2 – 4% som nødvendigt). Kontrollere en passende plan for anæstesi ved at teste tilbagetrækning refleks (tå knivspids), før du fortsætter. Anvende sterile øjet salve til dyret.
- Føre musen til billedbehandling indehaver outfitted med en nosecone for levering af inhaleret isofluran (0,5%-3%).
- Overvåge kropstemperatur og respiration ved hjælp af en rektal temperatur sonde er tilsluttet fysiologiske optagelse computer.
Bemærk: Normale kropstemperatur (36-37 ° C) vedligeholdes ved hjælp af recirkulerende varmt vand kredsløbet indbygget i animalsk hr. indehaveren. Temperatur er målt gennem en rektal sensor og indspillet på den fysiologiske overvågning computer bruger dedikeret fysiologiske overvågningssoftware. Det samme system bruges til at registrere respiration og elektrokardiogram signalerne målt ved hjælp af en pneumatisk pude placeret under brystkassen og via 3-bly elektrokardiogram elektroder. Respiration signal bruges også til udløser Mr erhvervelse og reducere artefakter tilknyttet respiration bevægelse.
3. Mr billede erhvervelse
- Udnytte en kvadratur krop spole for excitation.
- Placer en 4-kanals modtager spole på underlivet med musen at blive scannet for at aktivere optimeret påvisning af signaler fra det pågældende område.
- Indlede automatiske justeringer via den integrerede billedbehandlingsprogrammer at erhverve en tredimensional sæt af billeder af hele musen krop. Fra denne reference sæt billeder, identificere region af interesse (i dette tilfælde, blære-regionen).
- Erhverve tre sæt af ortogonale skiver billeder langs aksial, koronale, og sagittal fly ved hjælp af radiologiske referencerammer.
- Udnytte den sande FISP imaging sekvens (inkluderet som en af funktionerne i den integrerede billedbehandlingsprogrammer) med følgende hr. parametre: TR = 900 msek, TE = 2 ms, FA = 70, 14 gennemsnit.
Bemærk: Dette sæt af parametre giver mulighed for hurtig billedbehandling med høj kvalitet af diagnostiske, herunder T1/T2 vægtning i < 10 min pr. mus. - Rumlig opløsning og skive tykkelse bestemmes af geometriske parametre valgt af brugeren via den grafiske grænseflade af den integrerede imaging platform. Dette resulterer i en serie af skiver på tværs af hele blæren af 0,5 mm tykkelse med en i-fly opløsning af 0.148 mm.
4. hr. billedanalyse
- Identificere sættet af skiver af 0,5 mm tykkelse og i flyet opløsning af 0.148 mm som dækker hele blæren.
- Eksportere til medicinske billede analyse software ved at vælge mappen med tilsvarende billeder i ANALYZE format.
- Vælg "repræsentative aksial visning" i midten af blæren for kvantitativ analyse ved at rulle gennem de genererede billeder og at identificere en skive ved midtpunktet af blæren, som giver mulighed for visualisering af blærevæggen og lumen.
Bemærk: Center skive skal være den valgte, der har den største diameter. - Omhyggeligt afgrænse region af interesse (ROI) ved at manuelt spore grænser omkring den ydre kant af blæren (BLAud) og omkring den indre lumen (BLAi) af blæren (Se skematisk og repræsentative tallene i figur 2) i den valgte repræsentative aksial.
- Subtraher det indre lumen fra den yderste kant til at beregne arealet af blærevæggen.
BLAvæg = BLAud - BLAi
Bemærk: Areal af en kontrol blære med ingen tumor forventes at være mindre end det med en blære tumor.
5. aktiv dødshjælp og dissektion af blæren
- Efter 20 ugers BBN eksponering, aflive de mus ved hjælp af standardforskrifter i overensstemmelse med lokale retningslinjer for IACUC.
- Rense området i snit med 70% ethanol, så tag fat og løfte bugvæggen hud med pincet.
- Gøre en midterlinjen snit fra pubica formet som et sværd proces.
- Skarpt incise bughulen af grådige med pincet og incising med saks.
- Identificere blæren, som ligger i midterlinjen underlivet.
- Identificere og skære den mediane umbilical ligament forbinder kuplen af blæren til navlen og bugvæggen.
- Forstå kuplen af blæren med pincet til at give countertraction og dissekere blære fra omkringliggende strukturer, herunder Sædblærer, endetarmen og fedt.
- Identificere urinlederne ind i blæren og skæres med en saks tæt på blæren.
- Løft blæren cephalad, skær urinrøret med saks og fjern blæren.
- Vejes straks blæren efter skylning det med PBS.
6. histologisk undersøgelse af blæren væv
- Fix blære væv i 10% neutrale bufferet formalin i 36-48 timer ved stuetemperatur (RT).
- Integrere vævet i paraffinblokke, skære dias for efterfølgende undersøgelse og plette dias med hæmatoxylin og eosin til mikroskopisk undersøgelse som tidligere beskrevet19,20.
- Udføre en mikroskopisk undersøgelse af mus blæren på lav (2,5 x og 10 x) og høj (20 x og 40 x) forstørrelser, undersøge for makroskopisk læsioner, hyperplasi, karcinom i situ, papillomer, papillær tumorer og invasive neoplasmer19 , 21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved hjælp af protokollen beskrevet (figur 1), blev blære tumorer induceret i C57/B6 mandlige mus. Mr blev udført på 16 uger, og mus blev aflivet på 20 uger. Ex vivo blære vægte (BW) for hver mus blev registreret. Dias var plettet med hæmatoxylin og eosin, og alle histologi dias blev gennemgået for tumorstatus.
For at analysere den tumor byrde ved hjælp af hr., blære væg indre lumen (BLAi) blev trukket fra den blære væg ydre lumen (BLAud) til at beregne tykkelsen af blærevæggen (BLAvæg) (figur 2). Repræsentative sande FISP hr. billeder, blære væg 3-D rekonstruktioner og patologiske billeder af en kontrol mus (dvs. ingen tumor) er vist i figur 3A-F, og en mus med en stor tumor er vist i figur 3 g-L.
Parameteren Mr-afledte BLAvæg korreleres svagt med ex vivo BW (rs = 0,37, p = 0,009; Figur 4). Undersøgelse af Mr-afledte BLAvæg parameter og BW data viser en forening med tumorstatus (Kruskal-Wallis test Mr p = 0,0003, figur 5A; BW p = 0.0006; Figur 5B), samt en sammenslutning, når stratifying patologi af ikke-muskel-invasiv blærekræft og muskel-invasiv blærekræft (Mann-Whitney U test Mr p = 0.0002, figur 5 c; BW p < 0,0001, fig. 5 d). Udførelsen af BLAvæg og BW at bestemme muskel-invasiv blærekræft er vist i figur 5E. Arealet under kurven (AUC) for BLAvæg (AUC = 0,81, 95% CI 0,68-093) er statistisk ligner AUC for BW (AUC = 0,89, 95% CI 0,80-0,98; p = 0,30).
Figur 1: skema til blæren tumor induktion med BBN og timing af Mr og dødshjælp. BBN er administreret ad libitum i en koncentration på 0,05% i drikkevand. Mus gennemgå Mr på 16 uger. Mus er euthanized på 20 uger og blærer af hver er undersøgt med Immunhistokemi. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Skematisk grafisk visning af metode til at opnå BLAvæg og repræsentant hr. billede med tilsvarende skitserer. Ved hjælp af intensiteten af Mr billeder, den ydre væg af en blære blev identificeret og en disposition blev trukket i rød (BLAud). Hyperintense blære lumen blev skitseret i grøn (BLAi), og den tilsvarende blære lumen område blev opnået. Subtraktion af disse to mængder givet parameteren BLAvæg , som svarer til det lys grå disk i det grafiske billede. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: repræsentant sande FISP hr. billeder, blære væg 3-D rekonstruktioner og patologiske billeder af en kontrol mus (dvs. ingen tumor) (A-F) og en mus med en stor tumor (GL). (A) repræsentant hr. billede af en mus med ingen tumor. (B) segmentering af blæren væg område (BLAvæg), skitseret i rød, defineret som området mellem blære lumen (BLAi) og udvendige blærevæggen (BLAud). (C) 3D-rendering af blærevæggen fra en kontrol mus, genereres ved at definere BLAvæggen på hver skive gennem blæren. Grønne pile illustrerer blæren på et 2D-billede oversat til 3D-rendering. (D) 3D-gengivelse af en cut-out af BLAvæg fra en kontrol mus. (E) lavt strømforbrug (2,5 x) og (F) høj effekt (10 x) billeder af den samme mus blære. (G) repræsentant hr. billede af en mus med en stor tumor. (H) segmentering af blæren væg område (BLAvæg), skitseret i rød, defineret som området mellem blære lumen (BLAi) og udvendige blærevæggen (BLAud). (I) 3D-rendering af blærevæggen af en mus med en stor tumor. (J) 3D-gengivelse af en cut-out af en mus med en stor tumor, genereres ved at definere BLAvæggen på hver skive gennem blære blære. Grønne pile illustrerer blæren på et 2D-billede oversat til 3D-rendering. (K) lavt strømforbrug (2,5 x) og (L) høj effekt (10 x) billeder af den samme mus blære. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Spearman korrelation mellem Mr-afledte BLAvæg og endelige blære vægt. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Sammenligninger af patologiske fase og Mr-afledte parameter BLAvæg i 47 mus. (A) sammenligning af alle patologiske faser og Mr BLAvæg (Kruskal-Wallis test). (B) en sammenligning af alle patologiske faser og blære vægt (Kruskal-Wallis test). (C) sammenligning af ikke-muskel-invasiv blærekræft (fase ≤T1) og muskel-invasiv blærekræft (fase ≥T2) med Mr BLAvæg (Mann-Whitney U test). (D) sammenligning af ikke-muskel-invasiv blærekræft (fase ≤T1) og muskel-invasiv blærekræft (fase ≥T2) med blæren vægt (Mann-Whitney U test). (E) ROC kurve af Mr-afledte blære område og endelige blære vægt ved fastsættelsen af muskel-invasiv blærekræft (fase ≥T2). Børsnoterede p-værdien er forskellen mellem de to AUCs. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Nøjagtig afbildning af tumor modeller er nødvendig for passende pre eutanasi iscenesættelse og animalske randomisering forud for indledningen af eksperimentel behandling. Ved hjælp af den procedure, der præsenteres her, vise vi metode til at (1) generere blære tumorer ved hjælp af BBN kræftfremkaldende og (2) stratificere blære tumor byrde ved hjælp af MR. en hr.-afledte område måling (BLAvæg) korrelerer betydeligt med ex vivo blære vægt og er associeret med patologisk tumorstatus.
Ved at vedtage en hurtig billedbehandling tilgang med korte erhvervelse gange på høj rumlige opløsning (sand FISP) og høj diagnostiske kvalitet, foretager vi høj overførselshastighed assays af mus på mellemliggende stadier af tumor udvikling, før behandling randomisering. Vores betænkning er i overensstemmelse med tidligere betænkninger af hr. billeddannelse af celle linjebaseret tumor implantater9,12 og bekræfter sit potentiale som et redskab til at optimere store emne nummer drug undersøgelser.
I protokollens Mr er det kritisk at billede mus med en fuld blære til at opnå høj kvalitetsbilleder og afgrænse forskelle mellem tumor og blære lumen. Vi finder, at indsprøjte hver mus med saltvand 10 minutter før imaging giver mulighed for tilstrækkelig billeddannelse af blæren. Kritiske trin omfatter desuden pålidelige udløsning af Mr erhvervelse ved hjælp af respiration signalet registreres med en pneumatisk pude placeret under musen brystkassen og erhvervelse af et passende antal hr. skiver, der giver mulighed for dækning af hele blæren.
Andre muligheder for billedbehandling udvikling og progression af murine blære tumorer omfatter ultralyd8 og bioluminescens10,11. Mikro-ultralyd billeddannelse af implanterede MBT-2 celler opdaget tumorer i 15 mus, 13 som var histologisk bekræftet for at have tumorer8. Ultralyd volumen korreleret betydeligt med stereoskopisk volumen af tumor, men tumor vægt og scenen var ikke undersøgte8. Bioluminescens er blevet brugt til nøjagtigt overvåge celle linjebaseret tumor implantater, men det kan ikke bruges til at overvåge kræftfremkaldende stof-induceret kræft uden omplantning kræftfremkaldende-afledte tumorer fra en mus til en anden. Evne til nøjagtigt overvåge kræftfremkaldende stof-induceret kræftformer er kritisk, da disse modeller har flere fordele frem for celle linje modeller. Cell line-baserede modeller er genetisk homogene og afledt af tumorer, der allerede har unddraget sig immunosurveillance, og implanteret tumorer vokser hurtigt uden en kronisk inflammatorisk mikromiljø22. BBN-model har været anvendt med succes i over 30 år, og det er stadig en kritisk model for forståelsen af blære kræft udvikling og behandling23,24,25. Derudover BBN-model viser mutationsmønstre og genekspression profiler ligner menneskelige blærekræft, samtidig stadig bevare intakt immunsystemet til at give mulighed for undersøgelse af potentielle immunterapeutisk agenter26,27 .
Tilgængelighed af dedikerede små dyr MRIs som delte ressourcer på flere institutioner gør denne teknikker fordelagtigt og praktisk for grundforskning og screening af nye behandlingsformer. Der er dog nogle begrænsninger. Mus blev afbildet kun på et tidspunkt, ikke løbende under udviklingen af tumorer. Men, baseret på vores statistiske resultater, vi foreslår, at enkelt tidspunkt værdien er i stand til præcist stratificere mus i grupper af tumorstørrelse og tidspunkt, og det repræsenterer en ideel, ikke-invasiv parameter til at klassificere og tildele emner til forskellige grupper. Flere tumor faser blev genereret ved hjælp af BBN, lige fra Ta til T4. Men, disse kan være stratificeret (som foreslået i figur 5 c-D) som muskel-invasive (T2 eller større) og ikke-muskel invasive (T1 eller mindre), da dette er standard management i menneskelige blære cancer28.
En anden potentiel begrænsning er, at parameteren BLAvæg stammer ved hjælp af en enkelt skive gennem hver blære og ikke alle tilgængelige skiver dækker det. Disse kriterier er valgt for at reducere analyse pipeline krav (dvs. krav om tegning flere ROIs på tværs af flere udsnit) og blev anset for tilstrækkeligt til en hurtig, kvantitativ analyse. Mere komplekse volumetrisk analyse kan gennemføres på emnerne (dvs. vist til orientering i figur 3), men vil uundgåeligt kræve mere indsats og omkostninger. Automatiseret billedbehandling algoritmer kan bruges til automatisk afgrænsning af blæren region; men disse metoder lider under iboende variation af blæren form og størrelse blandt individuelle mus og kræver betydelige test og validering før pålidelige vedtagelse i en prækliniske undersøgelse29.
Kvalitativ vurdering af volumetriske data tyder på, at dette enkelt skive metode er tilstrækkeligt for denne type af assay. Det er imidlertid muligt, at mere avancerede analyser kan kræve denne yderligere dataafbildning behandlingstrin. Fra erhvervelse synspunkt er der flere yderligere scanninger, der kunne erhverves, som kan øge evnen til at forudsige progression af tumorer mens også afsløre mere subtile tumor mikromiljø ændringer. Disse supplerende teknikker omfatter dynamiske kontrastfremhævede MRI, diffusion vægtet Mr og andre sekvenser30 , der aktiverer en omfattende, multi parametrisk karakterisering af blærevæggen. Men hensyn til omkostninger og effektivitet førte os begrænse vores analyse til den, der er beskrevet i denne protokol.
Afslutningsvis vil beskrive vi metodologien for T1/T2-vægtet hurtig billedbehandling hr. sekvenser (sand FISP) at erhverve flere udsnit billeder der dækker hele musen blæren. Vi demonstrere, at disse billeder kan bruges til at bestemme omfanget af tumor i et kræftfremkaldende stof-baseret model for murine blærekræft. Mr data korrelerer med blæren væv vægte og er forbundet med tumorstatus. Disse resultater understøtter brugen af denne hurtige og pålidelige Mr assay at stratificere mus forud for eksperimentel behandling randomisering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
J. J. M. er finansieret af veteraner sundhed Administration Merit give BX0033692-01. J. J. M. understøttes også af John P. Hanson Foundation for kræftforskning ved Robert H. Lurie omfattende Cancer Center af Northwestern University. Vi takker Center for Translationel Imaging for at levere Mr erhvervelse og forarbejdning. Finansieringskilder spillede ingen rolle i skrivning af håndskriftet eller beslutningen om at indsende til offentliggørelse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 664 | Mice |
| N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine carcinogen (BBN) | TCI American | B0938 | Carcinogen |
| 0.9% normal saline | Hospira, Inc | NDC 0409-488-02 | |
| Isoflurane | Piramal HealthCare | 60307-120-25 | Anesthetic |
| 7Tesla ClinScan MRI | Bruker | NA | Dedicated Small Animal Imaging MRI |
| Syngo | Siemens | NA | MR Integrated Imaging Software |
| Model 1030 Monitoring & Gating System | Small Animal Instruments, Inc. (SAII) | NA | Small animal physiologic monitoring |
| Formalin, Neutral Buffered, 10% | Sigma | HT501128 | Fixative |
| Eosin Y | Fisher Scientific | NC1093844 | Histologic staining agent |
| Hematoxylin | Fisher Scientific | 23-245651 | Histologic staining agent |
| Jim7 | Xinapse Systems | NA | Medical image analysis software |
| GraphPad Prism v7.04 | Graphpad | NA | Graphing software |
| R v3.4.2 | The R Project for Statistical Computing | NA | Statistical software |
| R package pROC v1.10.0. | The R Project for Statistical Computing | NA | ROC analysis |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).
- Abdollah, F., et al. Incidence, survival and mortality rates of stage-specific bladder cancer in United States: a trend analysis. Cancer Epidemiology. 37 (3), 219-225 (2013).
- Rosenberg, J. E., et al. Atezolizumab in patients with locally advanced and metastatic urothelial carcinoma who have progressed following treatment with platinum-based chemotherapy: a single-arm, multicentre, phase 2 trial. The Lancet. 387 (10031), 1909-1920 (2016).
- Sharma, P., et al. Nivolumab monotherapy in recurrent metastatic urothelial carcinoma (CheckMate 032): a multicentre, open-label, two-stage, multi-arm, phase 1/2 trial. The Lancet Oncology. 17 (11), 1590-1598 (2016).
- Bellmunt, J., et al. Pembrolizumab as Second-Line Therapy for Advanced Urothelial Carcinoma. New England Journal of Medicine. 376 (11), 1015-1026 (2017).
- Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. Mouse orthotopic models for bladder cancer research. BJU International. 104 (9), 1286-1291 (2009).
- Zhang, N., Li, D., Shao, J., Wang, X. Animal models for bladder cancer: The model establishment and evaluation (Review). Oncology Letters. 9 (4), 1515-1519 (2015).
- Patel, A. R., et al. Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study. Urology. 75 (4), 799-804 (2010).
- Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants. The Journal of Urology. 145 (6), 1297-1301 (1991).
- Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model. BJU International. 101 (1), 120-124 (2008).
- Vandeveer, A. J., et al. Systemic Immunotherapy of Non-Muscle Invasive Mouse Bladder Cancer with Avelumab, an Anti-PD-L1 Immune Checkpoint Inhibitor. Cancer Immunology Research. 4 (5), 452-462 (2016).
- Kikuchi, E., et al. Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging. Journal of Urology. 170, 1375-1378 (2003).
- Chung, H. W., et al. T2-weighted fast MR imaging with true FISP versus HASTE: comparative efficacy in the evaluation of normal fetal brain maturation. American Journal of Roentgenology. 175 (5), 1375-1380 (2000).
- Miyamoto, H., et al. Promotion of bladder cancer development and progression by androgen receptor signals. Journal of the National Cancer Institute. 99 (7), 558-568 (2007).
- Bertram, J. S., Craig, A. W. Specific induction of bladder cancer in mice by butyl-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine and the effects of hormonal modifications on the sex difference in response. European Journal of Cancer. 8 (6), 587-594 (1972).
- Nagao, M., et al. Mutagenicity of N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine, a bladder carcinogen, and related compounds. Cancer Research. 37, 399-407 (1977).
- Hirose, M., Fukushima, S., Hananouchi, M., Shirai, T., Ogiso, T. Different susceptibilities of the urinary bladder epithelium of animal species to three nitroso compounds. Gan. Gann; The Japanese Journal of Cancer Research. 67 (2), 175-189 (1976).
- Shin, K., et al. Cellular origin of bladder neoplasia and tissue dynamics of its progression to invasive carcinoma. Nature Cell Biology. 16 (5), 469-478 (2014).
- Epstein, J. I. Chapter 17: Immunohistology of the Bladder, Kidney, and Testis. Diagnostic Immunohistochemistry. , Fifth Edition, 624-661 (2019).
- Cohen, S. M., Ohnishi, T., Clark, N. M., He, J., Arnold, L. L. Investigations of rodent urinary bladder carcinogens: collection, processing, and evaluation of urine and bladders. Toxicologic Pathology. 35 (3), 337-347 (2007).
- Wood, D. P. Jr Tumors of the bladder. Campbell-Walsh Urology. 11 (92), 2184-2204 (2016).
- Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillere, R., Smyth, M. J., Kroemer, G. Mouse models in oncoimmunology. Nature Reviews Cancer. , (2016).
- Kaneko, S., Li, X. X chromosome protects against bladder cancer in females via a KDM6A-dependent epigenetic mechanism. Science Advances. 4 (6), eaar5598 (2018).
- Smilowitz, H. M., et al. Biodistribution of gold nanoparticles in BBN-induced muscle-invasive bladder cancer in mice. International Journal of Nanomedicine. 12, 7937-7946 (2017).
- Dai, Y. C., et al. The interaction of arsenic and N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine on urothelial carcinogenesis in mice. PLoS One. 12 (10), e0186214 (2017).
- Williams, P. D., Lee, J. K., Theodorescu, D. Molecular Credentialing of Rodent Bladder Carcinogenesis Models. Neoplasia. 10 (8), (2008).
- Fantini, D., et al. A Carcinogen-induced mouse model recapitulates the molecular alterations of human muscle invasive bladder cancer. Oncogene. 37 (14), 1911-1925 (2018).
- Network, N. C. C. NCCN Guidelines in Clinical Oncology - Bladder Cancer 5.2018. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/bladder.pdf (2018).
- Costa, M. J., Delingette, H., Novellas, S., Ayache, N. Automatic segmentation of bladder and prostate using coupled 3-D deformable models. Medical Image Computing and Computer-Assisted Intervention. 10 (Pt 1), 252-260 (2007).
- Rosenkrantz, A. B., et al. Utility of quantitative MRI metrics for assessment of stage and grade of urothelial carcinoma of the bladder: preliminary results. American Journal of Roentgenology. 201 (6), 1254-1259 (2013).
