Aqui, apresentamos um protocolo para produzir soluções de proteína de seda de aranha recombinante solúvel em água e as formas materiais que podem ser formadas a partir dessas soluções.
Muitas aranhas produzem sete tipos de sedas. Seis das sedas são fibra na forma quando produzidas pelas aranhas. Estas fibras não são solúveis em água. A fim reproduzir as propriedades mecânicas notáveis de sedas da aranha, devem ser produzidas em anfitriões heterólogo porque as aranhas são territoriais e Cannibalistic. Os análogos sintéticos da seda da aranha igualmente tendem a ser insolúveis em soluções aquosas. Assim, uma grande percentagem de investigação em sedas de aranha recombinante dependem de solventes orgânicos que são prejudiciais para a produção em grande escala de materiais. O método do nosso grupo força a solvação dessas sedas de aranha recombinante em água. Notavelmente, quando essas proteínas são preparadas usando este método de calor e pressão, uma ampla gama de formas materiais pode ser preparada a partir da mesma solução de proteínas de seda de aranha recombinante (rSSp), incluindo: filmes, fibras, esponja, hidrogel, lyogel, e adesivos. Este artigo demonstra a produção do rssp solvatados e dos formulários materiais em uma maneira que seja compreendida mais facilmente do que dos materiais e dos métodos escritos sozinho.
As sedas de aranha ganhou o interesse de cientistas materiais para sua combinação impressionante de força, elasticidade, e biocompatibility. Recriando fibras tem sido tradicionalmente o impulso da pesquisa. Este esforço foi dificultado pela insolubilidade recombinante da proteína de seda da aranha (rssp) na água assim como a incapacidade de técnicas tradicionais do solvatação (agentes e detergentes de chaotropic) para conseguir o solvatação aquoso. Além disso, as técnicas que foram desenvolvidas para as versões de altamente fácil do rssp não trabalham em todas as variantes do rssp e também requerem manipulação substancial e tempo que muitas vezes resulta em perda de proteína1,2. Isto conduziu pela maior parte no campo que utiliza 1, 1, 1, 3, 3, 3-hexafluoroisopropanol (HFIP) como um solvente de que para formar fibras, e outras formas materiais limitadas. A vantagem é que todos os rSSp conhecidos são solúveis em HFIP, proporcionando uniformidade de dados entre cada grupo de pesquisa. A desvantagem é que HFIP é um solvente tóxico que é caro e impraticável a escala devido a preocupações de saúde e considerações ambientais.
Uma aproximação nova à solvação do rssp foi desenvolvida que ponte a abertura tecnológica entre o solvente orgânico áspero hfip e as outras técnicas que trabalharam seletivamente para o solvatação do rssp. A combinação de aquece e de pressões específicos foi aplicada às suspensões do rssp e da água. Os resultados foram próximos de 100% de solvação e recuperação do rSSp, bem como altas concentrações protéicas; uma variedade de formas de materiais foi determinada para ser possível a partir dessas formulações que não eram todas realizáveis usando hfip ou outros solventes orgânicos3,4,5,6. O objetivo desta abordagem é a solubilizar eficientemente e facilmente proteínas de aranha recombinante purificada e seca em uma solução aquosa que pode então ser utilizada para a produção de uma variedade de formas materiais.
Fibras, filmes, revestimentos, adesivos, hidrogéis, lyogels, microesferas e materiais de esponja são prontamente conseguíveis a partir da mesma solução aquosa de rSSp usando este método. A continuação da evolução deste método, não apenas com o rSSp adicional, mas com outras proteínas, pode levar a novas formas materiais e vias alternativas de purificação e solubilização de proteínas.
Depois que as proteínas de seda da aranha de recombinação são purified têm que então ser preparadas em uma solução que possa ser usada para a formação material. Misturando a proteína de seda da aranha liofilizada com água e expondo esta mistura à irradiação da microonda, para gerar o calor e a pressão, é possível preparar uma solução do rSSp. Uma grande variedade de formas materiais pode ser produzida a partir deste método simples e eficiente de solubilização de rSSp. Cada material tem que ser prep…
The authors have nothing to disclose.
Os autores gostariam de agradecer com gratidão o financiamento da iniciativa de pesquisa de ciência e tecnologia de Utah (USTAR).
3 mL Syringe with Luer-Lok Tip | BD | 309657 | Other size syringes can be used but to keep the tips on, it is advised to use luer-lok tips |
4 mL culture vial, clear with rubber lined cap | Wheaton | 225142 | Minimum dope volume is 1mL, max is 2mL |
8 mL culture vial, clear with rubber lined cap | Wheaton | 225144 | Minimum dope volume is 2mL, max is 4mL |
99% Isopropyl Alcohol, Reagent ACS/USP Grade | Pharmco-Aaper | 231000099 | |
Freezone 4.5 Plus | Labconco | 7386030 | Freeze Dryer |
Luer Adapter Female Luer x 10-32 Female, Tefzel (ETFE) | IDEX | P-629 | |
Microwave | Magic Chef | HMD1110B | 120V, 60Hz AC; 1000 watts; 1.1 cu. ft. capacity; with glass turn table |
One-Piece Fingertight 10-32 Coned, for 1/16" OD | IDEX | F-120X | |
PEEK Tubing 1/16" OD x 0.010" ID | IDEX | 1531B | |
Sprayer: Master Airbrush | Master Airbrush | TC-60 |