Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

מודל הסרטן רירית הרחם אורתוטופית עם לימפדנופתיה הצפק מתוצרת ב Vivo מופץ ומתורבת VX2 תאים

Published: September 12, 2019 doi: 10.3791/59340
Automatic Translation
1,2, 3, 4, 5, 6, 5,6, 5,7,8, 7,9,11, 10, 5,11
1Institute of Medical Science, University of Toronto, 2Department of Obstetrics and Gynecology, University of Toronto, 3Guided Therapeutics Laboratory, TECHNA Institute, University Health Network, 4Department of Pathology, Princess Margaret Cancer Center, University Health Network, 5Department of Medical Biophysics, University of Toronto, 6Princess Margaret Cancer Center, University Health Network, 7Techna Institute, University Health Network, 8Department of Surgery, University of Toronto, 9Department of Otolaryngology, Head and Neck Surgery, University of Toronto, 10Division of Gynecologic Oncology, University of Toronto /Princess Margaret Cancer Center, University Health Network, 11Princess Margaret Cancer Center, University Health Network

Summary

פרוטוקול זה מציג שיטה סטנדרטית לגדל תאים VX2 בתרבות וכלה ליצור מודל אורתוטופית VX2 של סרטן רירית הרחם עם הלימפה הצפק הצומת גרורות בארנבים. אורתובנושא מודלים סרטן רירית הרחם חשובים למחקר טרום קליני של הדמיה הרומן שיטות לאבחון של הלימפה הצומת גרורות.

Abstract

סרטן רירית הרחם הוא ממאירות גניקולוגיות הנפוצים ביותר בצפון אמריקה ושכיחות עולה ברחבי העולם. הטיפול מורכב מניתוח עם או בלי טיפול שפיטה תלוי במעורבות הלימפה כפי שנקבע על ידי lymphadenectomy. Lymphadenectomy הוא הליך חולני, אשר לא הוכחו יש תועלת טיפולית בחולים רבים, ולכן שיטה חדשה כדי לאבחן את הלימפה גרורות הכרחי. כדי לבדוק את סוכני הדמיה הרומן, מודל אמין של סרטן רירית הרחם עם הלימפה הצפק הצומת גרורות נדרש. מודל סרטן רירית הרחם VX2 תוארה לעתים קרובות בספרות; עם זאת, וריאציה משמעותית קיימת ביחס לשיטת המודל. יתר על כן, מחקרים לא דיווחו על השימוש בתאים VX2 תרבותי כדי ליצור מודל זה כמו רק תאים המופצות ב vivo כבר שימשו בעבר. בזאת, אנו מציגים שיטה כירורגית סטנדרטית לאחר הניתוח שיטת ניטור להקמת מודל סרטן רירית הרחם VX2 ולדווח על השימוש הראשון של תאים VX2 תרבותי כדי ליצור מודל זה.

Introduction

סרטן רירית הרחם, או סרטן הציפוי הרירית של הרחם, הוא ממאירות גניקולוגיות השני הנפוצים ביותר ברחבי העולם ואת הגידול השכיח ביותר במדינות מפותחות1. השכיחות של סרטן רירית הרחם גדל בהתמדה, עולה על ידי 2.3% בשנה בין 2005-2013 עם המקבילה 2.2% העלייה בתמותה1,2,3. האבחנה של הלימפה בצומת גרורות הוא העליונה כמו נוכחות של בלוטות לימפה חיוביות הוא מנבא שלילי חזק של הישרדות4,5,6,7 והוא יכול להנחות את הניהול של , טיפול בהאדג '8,9,10.11,12,13 הלימפה בצומת גרורות מאובחנים כיום על ידי בניתוח הסרת רקמת הלימפה על גבי כלי הדם העיקריים באגן ובבטן. הליך זה, המכונה lymphadenectomy, הוא שנוי במחלוקת עקב נתונים הישרדות סותרות משני ניסויים גדולים14,15,16,17,18 ואת הידוע סכנת התחלואה של15,19,20 ולאחר שלאחר הניתוח21,22,23. כמו הנוכחי שאינם פולשנית הדמיה שיטות אין להם את הרגישות הנדרשת ספציפיות כדי להחליף את הצומת לימפה לנתיחה24, יש כבר דחיפה לפתח טכניקות אבחון הדמיה חדשה. כדי לבדוק את הטכניקות האלה הרומן בהגדרה טרום קלינית, מודל אמין של סרטן רירית הרחם עם הלימפה הצפק הצומת גרורות נדרש.

VX2 ארנב מודל הגידול הוא מודל מבוסס היטב אשר נעשה שימוש נרחב כדי ללמוד מספר רב של האדם גידולים איברים מוצק25 כולל ריאה26, ראש וצוואר27,28, כבד29, כליה30, עצם31,32, מוח33, לבלב34 ורחם35,36,37. המודל VX2 פותחה במקור ב 1940 על ידי קיד וראוו38 על ידי שתילת בהצלחה ארנב הזנב כותנה וירוס הפפילומה שהתגלו על ידי shope ב 193339. מאז אותו זמן, המודל VX2 נשמר בvivo, המחייב מעבר טורי השריר הארבע ראשי של הארנבונים ניו זילנד לבן40. לאחרונה עם זאת, קבוצות מרובות גדלו בהצלחה VX2 תאים ב מבחנה40,41,42 והפגינו השמור השמור השמור של קו התא התרבותי31, 42,43. VX2 גידולים הם מוגדרים היסטולוגית כמו אנפלסטית תא קשקש קרצינומות44 ומכילים תכונות הבלוטות הדומות אדנוקרצינומה26. גידולים מאופיינים בקלות של השרשה, צמיחה מהירה ו-hyper-vascularity44,45 ו גרורות מהימן, הנפוץ ביותר לבלוטות לימפה אזוריות ורחוקות45. קווי דמיון של כלי דם הרחם ואנטומיה הלימפה46 , כמו גם באתר הצמיחה אורתוקרפית להבטיח כי דפוס גרורתי של ארנב VX2 קרצינומה מחקה את זה של סרטן רירית הרחם האנושי, מה שהופך את מודל VX2 מודל אמין לחקר האדם . מחלה גרורתית יתר על כן, תכונות היסטולוגית כגון התפשטות מיקרוכלי לא נורמלי47 , כמו גם אימונולוגיים48 ודמיון גנטי49,50 בין בני אדם וארנבים להציע כי הגידול מיקרוסביבה עשוי לשקף את זה של סרטן רירית הרחם האנושי.

קבוצות מרובות דיווחו על השימוש VX2 כדי ליצור מודל של סרטן רירית הרחם עם גרורות בטן עם שיעור גבוה מדווח של הצלחה36,51,52; עם זאת, וריאציה משמעותית קיימת בתוך הספרות הנוכחית עם כיבוד השיטה של יצירת מודל. תא ההשעיה מינונים נמוכה כמו 4 x 105 תאים/קרן הרחם51 ו גבוה כמו 5 x 109 תאים/הרחם קרן37,53 דווחו ללא קונצנזוס רגיל על המינון הנייד הנדרש VX2. כמו גם, מגוון של שיטות חיסונים דווחו כולל השתלת מיקרו כירורגי של הגידול לתוך myometrium הרחם36, הזרקה של VX2 cell ההשעיה37,44,52 , 53 ובמקרים מסוימים, תוספת של צופר הרחם לפני innoculation52. לבסוף, אף קבוצה לא דיווחה על השימוש בתאים VX2 מתורבתים כדי ליצור מודל זה. כך, מטרת מחקר זה היא להפגין שיטה סטנדרטית מוצלחת של יצירת מודל VX2 ולדווח על השימוש הראשון של תאים VX2 תרבותי כדי ליצור מודל של סרטן רירית הרחם עם גרורות הצפק בתוך ארנב.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הסגר קיר עמוק בבטן: לזהות את קודקוד החתך הצפק ולתפוס את צפק, השריר rectus ו fascia עם מלקחיים רקמות. כל מחקרים בעלי חיים נערכו בבית משאבים בעלי חיים מרכז (ARC) אישר מתקנים של רשת הבריאות של האוניברסיטה, בהתאם לשימוש בעלי חיים ופרוטוקולים טיפול מאושר (AUP #3994/#4299). VX2 קו התא הושג מהמעבדה של ד ר Aken ברשת הבריאות של האוניברסיטה.

1. יצירה של קו VX2 מחוץ לתחום

  1. לקצור את הגידול VX2 מן השריר הארנב השרירים והגדילה באגף העכבר.
    1. ההפשרה קפואים VX2 בלוקים הגידול (1 ס מ x 1 ס מ), האוהב על צלחת התרבות באמצעות להב אזמל ולזן באמצעות פילטר יקרומטר 70 על ידי הוספת כמויות קטנות של תמיסת מלח הנקס מאוזן (hbss) ברציפות כדי להבטיח את כל התאים מתוחים עבור נפח סופי של 1 mL.
    2. ספירת תאים ולדלל עם 0.9% פוספט באגירה מלוחים פתרון לריכוז של 1 x 107/mL ומקום על הקרח בצינור סטרילי.
      הערה: בלוקים הגידול הושגו מתוך מעבדה משתף פעולה התפשטות קודמת של VX2 גידולים בשרירים הארנב הראשי.
    3. להוריד את הארנב הלבן הנשי ניו זילנד (משקל 2.5-3.5 ק ג) עם 2-5% השאיפה, להסיר את הפרווה על גבי האתר ההזרקה לטהר את האתר הזרקה עם הפתרון povidone-יוד. הכנס 500 μL של השעיית התא VX2 מוכן (5 x 106 תאים/mL) לתוך השריר הארבע-ראשי של הארנב. ניטור הארנב קלינית לגידול הגידול החל ביום 10.
    4. המתת חסד לאחר גידולים להגיע 1-1.5 ס מ בקוטר (נמדד חיצוני עם מחוגות) באמצעות שיטת וטרינר אושרה. מאשרים המתת חסד על ידי בדיקת סימנים חיוניים כולל קצב הלב וקצב הנשימה. בלו את הגידול באמצעות מכשירים סטריליים לאחר ניקוי האזור עם פתרון betadine.
    5. בארון בטיחות ביולוגי באמצעות מכשירים סטריליים, הגוף הגידול לחתיכות קטנות (0.2 ס מ) על מאכל 10 ס מ התרבות רקמה באמצעות להב אזמל. להעביר את שברי הגידול באמצעות מסננת תא 70 יקרומטר באמצעות 1 mL של hbss כפי שמתואר בשלב 1.1.1. ספירת תאים ולדלל באמצעות 0.9% תמיסת מלח להשיג 7.5 x 105 תאים ב 200 μl.
    6. באמצעות 4% isofלילה ב-1 L/min ושמירה על הרדמה באמצעות 2%. פעם עכברים מורדם, להזריק 200 μL של הפתרון משלב 1.1.5 לתוך הרקמה התת עורית של האגף העכבר באמצעות מחט למדוד 27.
  2. קצירת תאים VX2 בתוך מבחנה
    1. הצג הצמיחה של מבע קלינית פעמיים בשבוע עד גידולים להגיע 1 ס מ קוטר באמצעות מחוגות.
    2. להרוג את העכברים על ידי הצבת בחדר CO2 או ביצוע נקע בצוואר הרחם לאחר להרדים עם 4% isofלוריאן גז. גידולים בבלו בתנאים סטריליים בארון בטיחות ביולוגי.
    3. הגון גידולים עם אזמל לתוך 1-2 mm חתיכות במנה 6 ס מ התרבות רקמות המכיל 3 מ ל של מדיום הנשר שונה של Dulbecco (DMEM)/Ham ' s F12 + 10% סרום של שור עוברי (FBS) מדיה.
    4. להשאיר שברי הגידול מופרעת בחממה 37 ° c עם 5% CO2 עבור יומיים עד התאים מתחילים לצמוח מתוך חתיכות הגידול. לאחר מכן, בדוק צלחות מתורבתות מדי יום על ידי מיקרוסקופ אור לשטף תאים. עם הגעה 70% שליטה, טריזיסיזציה של תאים על ידי הוספת 1 מ ל 0.05% טריפסין לבקבוקון והנחת בחממה 37 ° c עבור 5 דקות.
    5. לנטרל טריפסין עם 6 מ ל של DMEM/Ham ' s F12 + 10% FBS בינונית, לאסוף תאים צנטריפוגה ב 4 ° צ' עבור 5 דקות ב 300 x g. הסר supernatant ו להשעות מחדש את הגלולה ב 3.5 mL של החדש DMEM/Ham ' s F12 + 10% FBS מדיה. זרעים טריים 6 ס מ קולגן אני מצופה צלחות עם 1.6 x 106 תאים לצלחת כדי להשיג כ 50% צפיפות תא זריעת.
      הערה: 50% צפיפות התא מתייחסת לתאים הנוטלים 50% משטח המשטח של הלוח כאשר הם מחוברים.
    6. שלב מוקדם של הזדקנות: חזור על התהליך הנ ל (טריזילזציה, זריעה) עד התאים כבר מעבר 5 פעמים ולאחר מכן להעריך את קו הטוהר התאים עם ה-PCR באמצעות שיטת PCR כמותי כדי להבחין ארנבת גנומית של הארנב מ-DNA העכבר גנומית (ראה שלב 1.3.1-1.3.4).
      הערה: לאחר 8 מעברים, התאים יכולים להיות מופץ על שאינם קולגן מצופה לוחיות התרבות רקמה רגילה.
    7. מעבר, טריזיסיזציה והקפאה של תאים ב-Dמאמ/האם F12 + 30% FBS + 10% DMSO בריכוז של 2 x 106 לכל בקבוקון. אחסן תאים בחנקן נוזלי עד לצורך ניסויים.
  3. אישור מקור VX2 של תאים ששרדו:
    1. ליצור תרופה סטנדרטית מתוך העכבר גנומית מטוהרים ו-DNA ארנב (Step 1.3.2 ו Step 1.3.3). השתמש בתחל שתשמש את המינים הספציפיים למין בתוך מסגרת הקריאה הפתוחה השנייה של אלמנט הרטרוטרנספסון של קו 1.
      הערה: פריימר רצפים עבור CRPV E6 הם: 5 '-GATCCTGGACCCAACCAGTGand ו 5 '-CCTGCCGGTTCA. שימשו את האלמנטים הרטרוכימיים של קו 1 רצפים פריימר עבור הארנב-1 הם: 5 '-TCAGGAAACCCCAGAAAGTATGC ו-5 '-ברצף כגון רצפים של העכבר קו-1 הם: 5 '-AATGGAAACCTG ו-5 '-הגנה מפני שורת המידע של מדיה והכל
    2. כדי ליצור עקומה סטנדרטית עבור CRPV E6, לטהר VX2 תא הגידול ליפוסט (שלב 1.1.1) באמצעות ערכה מסחרית לאחר פרוטוקול היצרן. לכמת את הדנ א הזה באמצעות שיטת מסחרית. בצע 6 מדלל סדרתי מ 225 pg/μL עד 0.925 pg/μL במאגר מאגר האטה נמוך. כדי ליצור עיקול רגיל עבור העכבר DNA גנומית, לדלל 100 μg של מסחרי העכבר DNA גנומית במאגר נמוך EDTA-TE ב 5 לדלל מ 125 pg/μL למטה כדי 0.0125 pg/μL.
    3. מקום 4 μL מכל פתרון מדולל מדגימות משלב 1.3.2 בבארות ולהפעיל דגימות ב-PCR התרמוטרטרנר. השתמש בערכי Cq מכל הפעלה ביחד עם כמויות ה-DNA לצורך חישוב עקומה סטנדרטית באמצעות הגדרות הסף האוטומטי של התוכנה התרמוציקלורית.
    4. השתמש בנהלי qPCR סטנדרטיים כדי לבצע PCR עם 40 מחזורים של 2-step רכיבה על אופניים (98 ° c ו-60 ° c) על הציקל1. לבסס ערכי הסף, ולהגדיר ערכי דלתא Ct ב > 35 כדי להבטיח שיש זיהום עכבר מינימלי בקו VX2 הארנב. הנפח הכולל של כל תגובה היה 10 μL, המורכב 5 μL של 2x Mastermix, 1 μL של קדימה + הפוך התחל עם ריכוז פריימר הסופי בתגובה ב 250 nM, ו 4 μL של דגימת DNA.
      הערה: נא לראות הפניות54,55 לפרטים על ביצוע PCR. ערכי הסף מבוססים, וערכי דלתא Ct מוגדרים ב-> 35 כדי להבטיח שיש זיהום עכבר מינימלי בקו VX2 הארנב. הרמה המומלצת של VX2 DNA לאיתור אמין על ידי qPCR הוא 1-10 pg.

2. VX2 תרבות התאים ויצירת ההשעיה של התא

  1. הפשרת מבחנות המכילה תאים VX2 (קפוא בשלב 1.2.7) באמבט מים ב 37 ° c עבור דקה אחת ותאי העברה לצינור צנטריפוגה חרוטי עם 10 מ ל של התרבות בינונית (1:1 Dמאמ/F-12 + 10% FBS ו 1% פניצילין-סטרפטומיצין). צנטריפוגה עבור 8 דקות ב 107 x g, למחוק את supernatant ולהשעות מחדש את הגלולה בתא 9 מ ל של מדיה.
  2. העבר תאים שהושעו מחדש לבקבוקון תרבות גדול. מודטה תאים מבלי לרעוד ב 37 ° c. בידקו תאים מדי יום למפגש בעזרת מיקרוסקופ קל ומחליפים מדיה תרבותית כל שלושה ימים.
  3. יצירה של הבולם הVX2 של תאים מתורבתים להזרקה
    1. טריזילזציה של תאים על-ידי הוספת 3 מ ל של 0.25% טריפסין לבקבוקון פעם בתאים הגיעו 80% המפגש. מניחים בקבוקון בחממה (37 ° c) עבור 5 דקות. העברה פתרון לצינור צנטריפוגה חרוטי ו צנטריפוגה עבור 8 דקות ב 107 x g ולאחר מכן להסיר supernatant.
    2. לשטוף את כדורי תא 3 פעמים עם 9 מ ל של פוספט מאגור מלוחים, צנטריפוגה ולהסיר supernatant כמו לעיל. לספור את התאים ולדלל עם 0.9% פוספט באגירה מלוחים פתרון לריכוז של 4 x 107 תאים/mL ומקום בצינור צנטריפוגה חרוטי סטרילי על הקרח.
  4. יצירה של בvivo מופץ VX2 תא הבולם להזרקה
    1. ההפשרה קפואים VX2 בלוקים הגידול (1 ס מ x 1 ס מ), האוהב על צלחת התרבות באמצעות להב אזמל ולהתאמץ באמצעות מסנן 70 יקרומטר כמו בשלב 1.1.1. הוסף כמויות קטנות של HBSS ברצף כדי לוודא שכל התאים מתוחים לנפח סופי של 1 mL. לספור תאים ולדלל עם 0.9% פוספט באגירה מלוחים לריכוז של 1 x107/ml ומקום על הקרח בצינור סטרילי.
      הערה: בלוקים הגידול הושגו מתוך מעבדה משתף פעולה התפשטות קודמת של VX2 גידולים בשרירים הארנב הראשי.

3. הקמת מודל כירורגי

  1. הקמת הרדמה כירורגית והכנה לפני הניתוח
    1. טרום התרופות נקבה לבן הארנבונים ניו זילנד (2.5-3.5 ק ג) 1 h לפני ההליך הכירורגי המתוכנן באמצעות זריקות של איזופרומאזין (1 מ"ג/ק"ג IM) ו מלוקסיאם (0.2 מ"ג/ק"ג). להוריד את הארנב הלבן הנשי ניו זילנד (משקל 2.5-3.5 ק ג) עם 2-5% השאיפה, להסיר את הפרווה על גבי האתר ההזרקה לטהר את האתר הזרקה עם הפתרון povidone-יוד.
    2. באמצעות מסכה מתחת למים (lma) ומאובטחת במקום עם קלטת, שמירה על הרדמה מעמיקה באמצעות הדלקת המינון של מינון איזופלוריין בין 2-5%. ניטור הרדמה כירורגית באופן סדיר במהלך ההליך על ידי בדיקת סימנים חיוניים (שיעור הנשימה, מילוי קפילר, רווית חמצן אם זמין) וניטור עבור שלטים רמז של כאב (תנועה, נסיגה מגירויים, רעשים) או אור הרדמה (תנועה, לעיסת צינור LMA).
      הערה: יש לעשות זאת על ידי אדם בעל ניסיון ניטור הרדמה כירורגית.
    3. הניחו צנתר שולי אוזן בקוטר 22 בתוך הווריד השולי. מנהל (20 מ"ג/ק"ג) באופן פנימי 10 דקות לפני חתך העור כירורגי.
    4. מחסנית שיער על האגן והבטן לפני הצבת הארנב על שולחן הניתוחים, ואז למקם ארנבים בעמדה על גבי שולחן הניתוחים. לנקות את השדה כירורגי באמצעות 3-צעד העור כירורגי ההכנה (סבון בטאדין, כלורהקאיטין פתרון, בבטאדין פתרון). לעטוף את השדה כירורגי עם וילונות לפרוטומיה לאחר הקרקע-סימון החלק העליון של עצם החיק, השארת שטח 5 ס"מ x 5 ס מ של הבטן התחתונה נחשף.
  2. יצירת החתך וזיהוי קרני הרחם
    1. . תלבש כובע ומסכת פנים לקרצף את הידיים באמצעות כלורקסדין או בטאדין הפתרון ניתוח ניתוח. שימוש בטכניקה סטרילית, לשים על שמלה סטרילית וכפפות ניתוח סטרילי.
    2. באמצעות הסכין 11-להב, לעשות 2.5 ס"מ חתך ארוך 1 ס מ הגולגולת לתוך העצם הערווה באמצעות העור הרקמה התת עורית של הבטן ארנב. מfascia את השרירים ומנתחים את שרירי הרייקי לחשיפת הצפק המשמשות כבסיס. הזן את צפק בחדות לאחר הקפדה על פני השטח הוא ברור של המעיים או איברי הבטן אחרים.
    3. לאתר את קרני הרחם המזהה את שלפוחית השתן ולטאטא אצבע כדורית האגודל, מעבר לקודקוד ולאורך הפיסגה של שלפוחית השתן.
      הערה: במידת הצורך, ניתן לרוקן את שלפוחית השתן המלאה באמצעות לחץ דיגיטלי. ממוקם פעם, להביא את קרני הרחם דרך חתך הבטן כדי לנוח על קיר הבטן.
    4. שימוש בתפר בתוספת קלועה 3-0, ביצוע תפר בודד של כל קרן רחם בקירוב 1.5-2.0 ס מ לקרוקס. הניחו את התפר האמצעי בדיוק לעורקי הרחם, הרצים לאורך ההיבט הרוחבי של כל צופר. קשור את התפרים בקלות לסגר את קרני הרחם המרוחק (איור 1).
  3. המשפט המיקומאני VX2 חיסון
    1. באמצעות מחט 27, להזריק 0.5 mL של הבולם הקודם VX2 cell הוכנו משני 2.3.2 שלב (עבור מודל VX2 תרבותי) או 2.4 (עבור במודל vivo מופץ VX2) לתוך myometrium של כל קרן רחם האבובית לאתר תפר (בין האתר תפר וצוואר הרחם). הכנס מעל 1 דקה וודא כי התאים אינם מוזרקים לתוך חלל הרחם המשמש כבסיס. בעלי חיים מורדם (2-5%) ומכונת הרדמה. עם מעגל ביין
    2. החל לחץ על אתר myometrial שפט הזרקת עבור 30 s לאחר ההזרקה כדי למזער את הדליפה של תאים. בדוק את ההזרקה ואת אתרי תפר עבור הומוקיפאון ומניחים את קרני הרחם בחזרה לתוך הבטן.
  4. סגירת החתך הכירורגי
    1. הסגר קיר עמוק בבטן: לזהות את קודקוד החתך הצפק ולתפוס את צפק, השריר rectus ו fascia עם מלקחיים רקמות.
      1. כדי לעשות זאת, עוגן את התפר בקודקוד אחד של החתך על ידי תפירה שטחי עמוק בצד אחד של החתך ועמוק לשטוליות מצד שני. . תקשור קשר באמצעות תפר המצורפת, להפוך את התפרים לרוץ בניצב לחתך דרך שכבות של קיר הבטן עובד בשלב חכם לאורך החתך מצד לצד. . תקשור את התפר ותחתוך
    2. סגירת קיר בבטן שטחית: לזהות את הקודקוד של חתך העור ותפר את עור הבטן באמצעות קבור מופעל בפועל שנספג 3-0 התפר פולי. החלת דבק כירורגי על החתך סגור כדי להתנגד לקצוות העור.
      1. כדי לעשות זאת, עוגן את התפר בקודקוד אחד של החתך, על ידי שקוע עמוק עד שטחי בצד אחד של החתך ושטחי עמוק על השני. . תקשור קשר באמצעות התפרים המצורפת, לעשות התפרים הפעלה בשכבה העורי במקביל החתך העבודה צעד חכם לאורך החתך מצד לצד. . תקשור את התפר ותחתוך
  5. טיפול שלאחר הניתוח
    1. התעוררות מן ההרדמה: לכבות את isof, לאחר החתך סגור ולתת הארנב נשימה חמצן על ידי מסכה תוך כדי ניטור סימנים של התעוררות (למשל, תנועות ספונטניות, פתיחת עיניים וללעוס תנועות על נתיב הנשימה מסכה הלוע). לאחר ששלטים אלה מצביעים ומספקים חמצן על ידי מסכה ושמיכה חמה עד שהארנבים ערניים ומסוגלים לשבת באופן עצמאי.
    2. ניטור לאחר הניתוח: ארנבים מוניטור פעמיים ביום במשך 4 ימים ויום עבור 10 ימים נוספים לאחר הפעילות. כדי לפקח, להעריך את המצב הכללי שלהם, צריכת המזון והמים, השתן והצואה פלט, הערכת הכאב, משקל, סימנים חיוניים (קצב הלב, קצב הנשימה) ואת האתר הכירורגי שלהם מחפש נפיחות, אודם, פריקה או dehiscence.
    3. שליטה בכאב לאחר הניתוח: מנהל מלוקסיאם (0.2 מ"ג/ק"ג) עבור 48 h לאחר מכן, ולאחר מכן לפי הצורך על הערכת כאב. ניהול בופרנורפין מיד אחרי הניתוח וכל 12 h (0.01-0.05 מ"ג/ק"ג) עבור 24 שעות ולאחר מכן לפי הצורך על בסיס הערכת כאב
    4. אנטיביוטיקה (enrofloxacin 5mg/ק"ג IM) עשוי להינתן מדי יום למשך שבעה ימים אחרי הניתוח כדי למנוע זיהום הפצע כפי שמומלץ על ידי הוטרינר שלך. ניהול נוזלים תת עורית (15 מ"ל של SQ) פעמיים ביום לפי הצורך עבור התייבשות ומזון רך או תוספי תזונה אחרים מסופקים מדי יום לפי הצורך לירידה במשקל.

4. הגידול ניטור הגידול

  1. ניטור קליני: ארנבים לפקח כל 2 ימים עבור סימנים קליניים של גידול הגידול החל ביום אחרי הניתוח 14. סימנים קליניים של גידול הגידול יכול לכלול צריכת אוראלי ירידה, עייפות, רכות בטן, מסה בטן ממשית ואובדן של גביע cecotrophy
  2. הדמיה וניטור פולשנית
    1. CT הדמיה: ביום שלאחר הניתוח 21-28, טרום התרופה, מורדם, ואת הארנבונים הצנרור כפי שתוארו בעבר 3.1.1-3.1.2. מיקום ארנבים בתנוחה מראש בסורק CT טרום-קליני ולקבל תמונות של האגן והבטן לאחר מתן 10 מ ל של סוכן הניגודיות של היוקסנול.
    2. ניטור כירורגי: ארנבים להעביר לחדר הניתוח לאחר הדמיה תוך עדיין תחת הרדמה כללית. מיקום, להכין ולעטוף ארנבים כפי שתוארו בעבר שלב 3.1.4 ולבצע חתך לחזור לפני הניתוח בקירוב כ 1.5 ס מ אורך דרך החתך הקודם. לזהות את הקרניים ואת הרחם לבדוק בזהירות לגידול. סגור את החתך ולספק טיפול שלאחר הניתוח כפי שמתואר קודם לכן בשלב 3.5.2-3.5.4.
    3. מודל הארנב להשתמש: אם הארנבים נמצאים יש גידולים בזמן של ניטור כירורגי, השתמש במודלים של סרטן רירית הרחם הארנב עבור ניסויים מתוכננים. שימוש בארנבים שנוצרו בתאים vivo שעברו הופץ לניסויים נוספים ב -4 שבועות פוסט-החיסון והשתמש במודלים של ארנבת שנוצרו מתאי VX2 מתורבתים ב-5-6 שבועות לאחר שלאחר החיסון כדי לזכות בגידול איטי יותר. המתת חסד לאחר גידולים להגיע 1-1.5 ס מ בקוטר (נמדד חיצוני עם מחוגות) באמצעות שיטת וטרינר אושרה. מאשרים המתת חסד על ידי בדיקת סימנים חיוניים כולל קצב הלב וקצב הנשימה. בלו את הגידול באמצעות מכשירים סטריליים לאחר ניקוי האזור עם פתרון betadine.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

עשרים ושמונה ארנבים שימשו להקמת המודל לסרטן רירית הרחם. לארנבים היה משקל ממוצע של 2.83 ק ג (2.71-3.58 ק"ג) בזמן הניסוי. גידולי הרחם גדלו בהצלחה 21 ארנבים לשיעור הצלחה כולל מודל של 75%. לפני כלילת הרחם בפרוטוקול, שיעור ההצלחה היה 57% לעומת 81% לאחר הוספה של הרחם. תפירה הרחם נוספה לפרוטוקול לאחרהארנב 7 בתגובה לשיעור הראשוני מודל נמוך הצלחה. חמישה מודלים נוצרו VX2 תאים מתורבתים (ניסיון 8 ארנבים, 63% שיעור הצלחה) ו -16 מודלים ארנב נוצרו מתוך vivo תאים שעברו בירושה (ניסיון בשנת 22, 73% שיעור הצלחה). במודלים שנוצרו מתוך vivo VX2 תאים מופצים, מינון תא של 5 x 106 לכל קרן הרחם היה בשימוש בכל בעלי החיים ואת המספר הממוצע של ימים מן החיסונים לניסוי היה 29 ימים (טווח 24-31). במודלים שנוצרו מתאי VX2 מתורבתים, השתמשו בפרוטוקול מינון מחמיר כדי לקבוע את המינון המתאים לחיסון. מינונים של 2.5 x 106 תאים ו 5 x 106 תאים לקרן הרחם היו מוצלחים ומינון של 10 x 106 תאים לכל קרן הרחם היה מוצלח בארנב אחד עם זאת, גידול הגידול היה איטי ב 57 ימים מן החיסון לניסויים. מנה של 20 x 106 תאים לכל קרן הרחם היה מוצלח 4 ארנבות בזמן ממוצע של 45 ימים (טווח 36-51 ימים) מחיסונים להתנסות ובכך נקבע כמינון הזריקה האופטימלית. נתונים אלה מסוכמים בטבלה 1. ב-PCR ניתוח לאחר מעבר 5, התאים VX2 תרבותי היו חיוביים מאוד עבור שני הארנב קו -1 ו CRPV-E6 עם כמויות מעקב רק של העכבר לי NE-1 זוהה (< 0.01 pg/μL). תאים גדלו לאחר מכן בתרבות התא עם זאת, הצמיחה היה איטי עם זמן ממוצע של 7 ימים (6-9 d) כדי להשיג שליטה בקבוקון.

כל הדגמים הביאו בהצלחה את הטרנספורמציה גרורתית של בלוטות הלימפה הרטרוצפק (איור 2). 19 ארנבים היו בצומת לימפה מאומת באופן פתולוגי גרורות ו -11 היו מאושרות באופן פתולוגי גרורות הבטן nodal. ארנב אחד לא בלוטות לימפה ברורה הוסרו; עם זאת, היה זה נטל גבוה של מחלת פנים-בטן שבה הניח גרורות הלימפה, וארנב אחד מת לפני הניסוי. גידולים ובלוטות לימפה גרורתית מן התאים VX2 תרבותי הופיעו דומה לגידולים מתוך vivo VX2 הופץ תאים על היסטולוגיה (איור 3), עם המטאוקסילין צפוף תאים השרירים הפולשים ויוצרים מבנים כמו הבלוטות עם רבים דמויות mitotic פתולוגיים.

באמצעות סוכן הדמיה הרומן, פורחלק, 81 בלוטות הלימפה זוהו בתוך הניתוח והוסר כירורגית לניתוח היסטולוגית. 74 בלוטות הלימפה נותרו בלוטות הלימפה האגן, 5 היו מימין בלוטות הלימפה האגן 2 היו ימניים בלוטות הלימפה העורקים. בלוטות הלימפה הוסרו מארנבים עם vivo הופץ VX2 גידולים היו גדולים באופן משמעותי נמק יותר מאשר אלה הוסרו מארנבים עם גידולים מVX2 תרבותי עם נפח ממוצע של 0.99 ס"מ3 (טווח 0.12-3.89) לעומת 0.59 ס"מ3 (0.01- 2.92) (p = 0.037). כמו גם, ארנבים עם בvivo להפיץ גידולים היו גדולים יותר נמק גידולים ברחם מאשר ארנבים עם גידולים תא מתורבת עם אורך ממוצע 5.6 ס"מ (4-6.8 ס"מ) ורוחב ממוצע של 5.2 ס מ (3.3-9 ס"מ) לעומת 3.6 ס"מ (2-5 ס"מ) ו של 4.56 ס"מ (3-7 ס"מ) בהתאמה. בסופו של דבר, מודלים ארנב שנעשו מתוך vivo VX2 תאים היו יותר אקסטרה-הבטן גרורות מאשר מודלים ארנב שנעשו מתאים מתורבתים עם 91% של גרורות כל שנמצאו ב vivo מופץ ארנבים.

Figure 1
איור 1: suturing הרחם. חץ שחור = תפרים, חץ אדום = קרניים הרחם. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: VX2 הגידול (א) גידול תוך רחמי. חץ שחור = גידול, חץ אדום = קרניים הרחם (ב) שמאל גרורתית בלוטות הלימפה. חץ שחור = בלוטות לימפה גרורתית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: היסטולוגיה של תאים מתורבתים VX2 הגידול (A) H & הצביעת E מדגים חדירת הגידול של השריר שמסביב (הגדלה10x, סרגל קנה מידה = 300 μm) (ב) הצביעת pancytokeratin מדגים בצפיפות תאים סרטניים המתאימים לאזורים של גידול ב-H & E (10x הגדלה, קנה מידה = 300 μm). חץ שחור = VX2 גידול. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

סוג דגם במודל הגידול vivo VX2 מודל גידול VX2 מתורבת
מספר המודלים המצליחים 16 מיכל 5
מספר נסיונות למודלים 22 8
מודל שיעור הצלחה 73% 63%
זמן מחיסונים לניסוי 29 ימים (24-31) 45 ימים (36-51)
מינון הזרקה מוצלחת 1 x 107 40 x 106
(5x106 לכל קרן הרחם) (20 x 106 לכל קרן הרחם)
שיעור הצלחה כולל 75%
שיעור הצלחה כולל לפני בעלי הרחם 57%
שיעור הצלחה כולל לאחר שיעורי הרחם 81%

טבלה 1: נתוני מודל כולל תנאים ניסיוניים, מספר בעלי החיים המשמשים ושיעור הצלחה. 2 הארנבים השתמשו בתחילה עבור מודלים של תאים מתורבתים בגידולים שבהם הצמיחה לא הצליחה שימשו לאחר מכן במודלים סרטניים vivo

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

להלן, אנו דיווחו על שיטה כירורגית סטנדרטית להקמת מודל סרטן רירית הרחם VX2 ודיווח על השימוש הראשון של תאים VX2 תרבותי כדי ליצור מודל זה. הגידול לקחת שיעור של 75% הוא נמוך יותר שיעור 100% אחוז שדווחו בעבר בספרות35,37,53,56; עם זאת, thw 90% שיעור של צומת לימפה מאומת פתולוגית הוא עקבי עם מחקרים קודמים של מודל זה35,53.

הכללת תפירה הרחם הגדילה באופן משמעותי את שיעור ההצלחה של המודל מ 57% כדי 81% ואנחנו מחשיבים את השלב הזה להיות חלק אינטגרלי של הפרוטוקול הכירורגי. תפירה הרחם לא בוצעה בתחילה עקב דיווחים סותרים של השימוש תפירה בספרות וחששות בנוגע קרן הרחם devascularization של עורק הרחם הדו. בהינתן שיפור משמעותי בשיעור לקחת את התוספת של הרחם, אנחנו ההשערה כי דליפה של השעיית התא הרחק מאתר ההזרקה אולי תרמו לשיעור הצלחה הראשונית נמוך. מבחינה אנטומית המכילה את ההשעיה התא בחלק קטן של קרן הרחם מבטיח ריכוז מקומי גבוה של תאים נחשף ואצלב של myometrium אשר כנראה משפר את הגידול הסרטן. יתרה מזאת, לא צוינו מקרים של נמק בכלי הרחם בניסוי. להבטיח כי ההשעיה התא מוזרק לתוך myometrium חשוב גם כמו פנים הרחם או אקסטרה משפט זריקות יכול גם להגביר את האובדן של השעיית התא. Myometrium הרחם בארנבים הוא דק מאוד ונכון הזרקת פנים-myomeis קשה. בשל כך, אנו מגדלים את ההשערה כי השימוש בפיגום של מטריצה תאית כגון מטריקס עשוי לשפר את שיעור התאים המוזרקים בשוגג לתוך חלל הרחם. למרות מגבלות פוטנציאליות אלה, אנו מאמינים כי שיטת ההשעיה התא הוא מעולה על דיווח בעבר מיקרו שיטות36 שבו בלוקים הגידול מושתלים על myometrium הרחם כמו שיטה זו היא מאתגרת מבחינה טכנית. בהשוואה, השיטה כאן היא פשוטה, משלבת טכניקות נפוצות והוא מסיבות אלה, אנו מאמינים כי היא להיות מאוד שניתן לשימוש.

ב vivo הופץ VX2 מודלים ארנב הוזרק במינון סטנדרטי של 5 x 106 תאים לכל קרן הרחם אשר התבססה על הניסיון של משתף פעולה עם מודלים VX2 ארנבות. מינון זה נמוך באופן משמעותי מאשר דווח בספרות שבה מינונים תא גבוה כמו 1 x 108 על ידי harima et al.52 ו 5 x 109 על ידי שני Huang37,53 ו-Xu35 שימשו. בהינתן מסגרת זמן קצר שבו המודל הוקם ואת הקצב הגבוה של שני הלימפה וגם גרורות nodal, אנחנו לא מאמינים כי השימוש במינון גבוה יותר היה שיפור המודל. מינון גבוה יותר יכול לקדם עוד יותר מהירה ואגרסיבית התפשטות הגידול אשר יפגע בכלי השירות של המודל. 83% של vivo מופץ VX2 מודלים היו מחלות אקסטרה-nodal בזמן הניסוי וזה מפתיע כי קבוצות אחרות לא דיווחו על התפתחות גרורות בבטן ב 30 ימים. הסבר אפשרי להבדל זה יכול להיות בטעות פנים-כלי דם החיסוןעקב לחץ גבוה או הזרקת מהירות גבוהה אשר יכול לגרום להתפשטות מהירה יותר גרורתית מרחוק. לפיכך, ההשערה היא שמהירות ההזרקה יכולה להיות גורם בשיעור גרורות ולכן אנו ממליצים על מהירות הזרקה איטית בפרוטוקול.

יחסית, למרות מינון ההזרקה גבוה יותר (20 x 106 לכל קרן הרחם), רק 40% הארנבונים תרבותי VX2 מודל פיתח מחלה נוספת-nodal וכל פיקדונות גרורתי היו קטנים יותר נמק פחות נקרוטיים אלה ארנבים. אין לנו כל הספרות שבה כדי להשוות ישירות את התוצאות כפי שהוא השימוש הראשון שדווחו של תאים VX2 תרבותי כדי ליצור מודל זה. עם זאת, הממצאים עקביים עם מחקרים של גידולים VX2 מתורבתים אחרים בהם נדרשו מינונים גבוהים וצמיחה הגידול היה אמור להיות איטי27,31. באמצעות ניסוי זה, זיהינו את מינון ההזרקה האופטימלי של 20 x 106 תאים לכל קרן הרחם אשר הביא צמיחה אמינה גרורות ב 80% של ארנבים באמצעות פרוטוקול מינון הסלמה. ייתכן כי מינון גבוה אפילו יותר של התאים VX2 תרבותי יגרום התפשטות גרורתי מהיר עם זאת כמו תאים VX2 גדל לאט בתרבות, זה היה מאתגר התרבות מספיק תאים כדי לנסות מינון גבוה יותר. זוהי הגבלה של המחקר וזיהו את זה כאזור פוטנציאלי לחקירה עתידית. עם זאת, אנו מחשיבים את שיעור הצמיחה איטי יותר במודל התא התרבותי כדי להיות יתרון כפי שאנו מאמינים שזה עשוי לשכפל את התרחיש הקליני של סרטן רירית הרחם יותר אמין, כמו סרטן רירית הרחם היא בדרך כלל מחלה הגוברת איטית כי גרורות הראשון ל בלוטות הלימפה ותוצאות בסוף גרורות רחוקות. הבחירה הראשונית להפיץ את התאים הVX2 בעכברים המותרים לטיפול מהיר יותר, ועלויות תחזוקה פחות יקרות; אולם לחילופין, התאים יכלו להיות נגזרים ישירות מן השריר הארבע ראשי של ארנבים.

אנו מאמינים כי סגירה לאחר הניתוח בניטור סימנים ותסמינים של גידול הגידול הוא היבט חשוב של הפרוטוקול. בניסיון שלנו, פעם ארנבים לפתח מחלה גרורתית, הם התקדמות במהירות להיות חולה קלינית, בעיקר בקבוצה vivo הופץ. זו צמיחה מהירה, אגרסיבי הודגש על ידי מותו של ארנב אחד ממחלה גרורתית לאחר עיכוב של רק 2 ימים מיום הניסוי המתוכנן. בעוד המהירות של מודל VX2 נחשב כוח, כמו מודלים העכבר דומים (כלומר, HEC-1 קרצינומה של רירית הרחם עם צומת לימפה גרורות בעכברים) יכול לקחת עד כפליים זמן כדי להקים57, ממצאים אלה גם להדגים שקביעת העיתוי הניסיוני האופטימלי היא החשובה ביותר. הממצאים לתאם עם בעבר למחקרים שבהם גידול הגידול לימפה הגדלת הלימפה גדל באופן משמעותי לאחר יום שלאחר הניתוח 2137,53; עם זאת אנו מאמינים כי יהיו שינויים ביחס לקו התא VX2 בשימוש ולעודד קבוצות להבין את העיתוי הניסיוני הספציפי שלהם. ציר הזמן הזה אינו קיים נכון עבור מודלים VX2 שלנו תרבותי וזיהו את זה כאזור הדורש לימוד נוסף. כדי להיות בטוח על גידול בגידול, בחרנו להשתמש בשני שאינם פולשנית ופולשני בניטור הגידול במהלך הפרוטוקול. עם זאת, כיוון אחר בעתיד יכול להיות כדי לחדד את פרוטוקול ההדמיה שלאחר הניתוח כדי למנוע את הצורך עבור הליך פולשני שני.

בסך הכל, אנו דיווחו על שיטה פשוטה, סטנדרטית כדי ליצור מודל של סרטן רירית הרחם עם לימפדנופתיה הצפק בארנבים. באמצעות פרוטוקול זה, התייחסו לשונות המשמעותית בתוך הספרות הVX2 ביחס למינון התאים, טכניקה כירורגית וניטור מודל שלאחר הניתוח. אנו מכירים כי הגבלה נוספת של המחקר הוא כי באמצעות קו התא VX2 במקום השתלת מבע אנחנו לא לגמרי לחקות את ביולוגיה הגידול מיקרוסביבה של סרטן האדם. עם זאת, אנו מקווים קבוצות אחרות ישתמשו בתאי VX2 התרבותי כדי ליצור מודלים שלהם כפי שאנו מאמינים סוג תא זה עשוי לדגמן סרטן רירית הרחם האנושי מהימן יותר באמצעות הצמיחה האיטית שלה ירידה הנטייה גרורות. אנו מעודדים קבוצות אחרות זה מודל מהיר וקל של הרחם שנגזר הלימפה הצפק הצומת גרורות כדי ללמוד הדמיה הספר טיפולים כדי לעזור לחולים עם סרטן רירית הרחם גרורתי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

. למחברים אין מה לגלות

Acknowledgments

מחקר זה מומן על ידי מכון טרי פוקס מחקר (PPG 1075), המכון הקנדי של מחקר הבריאות (קרן גרנט #154326), המכון הקנדי לחקר החברה לסרטן (704718), מדעי הטבע והמועצה לחקר ההנדסה של קנדה, קרן сanada לחדשנות והנסיכה מרגרט סרטן קרן.

אני רוצה להודות ד ר מרגרט Akens על מתן תאים VX2 הראשונית להקמת הדגם הראשוני VX2 ובלוקים הגידול הקפואים VX2. אני רוצה להודות מרקו דיגראפה על סיוע לבצע ניסויים הראשונית VX2 התרבות התא לילי דינג לעזור עם תרבות VX2 תאים.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
11-blade scalpel, Sterile, Disposible Aspen Surgical (VWR) 80094-086
22-gague ear vein catheter CDMV 14332
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb) Covidien 356718
3-0 braided absorbable suture (Polysorb) Covidien 356718
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon Falcon 352350
Acepromazine (Atravet) CDMV 1047
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%) CDMV 4363
Betadine solution (Poviodone iodine 10%) UHN Stores 457955
Buprenorphine McGill University
Cefazolin UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Chlorhexidine solution CDMV 119872
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes Corning 354450 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates Corning 354408 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates Corning 354400 brand not important
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL Corning 354234
DMEM/HAM F12 1:1 Life Technologies 11320 brand not important
DMSO Caledon Lab Chem 1/10/4100
Enrofloxacin (Baytril injectable) CDMV 11242
Falcon Tube Corning Centri-Star 430828
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml Life Technologies 12483020 brand/source not important
Isoflurane UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Isohexol contrast GE Healthcare 407141210
Meloxicam (Metacam 0.5%) CDMV 104674
Normal Saline House Brand (UofT Medstore) 1011
PBS Multicell or Sigma 331-010-CL or D8537-500mL
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin) Corning-Cellgro CA45000-652
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red) T.C.M.F (Dr Bristow) 28-Jan-11
Surgical Glue (Tissue Adhesive) 3M Vetbond 14695B
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade Sigma T-6567-5X20UG
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml Wisent Inc 325-542-EL brand not important

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic cancer. , (2017).
  3. Siegel, R. Cáncer Statistics. Cáncer Journal. 67, 7-30 (2017).
  4. Creasman, W. T., et al. Surgical pathologic spread patterns of endometrial cancer. A Gynecologic Oncology Group Study. Cancer. 60, 2035-2041 (1987).
  5. Morrow, C. P., et al. Relationship between surgical-pathological risk factors and outcome in clinical stage I and II carcinoma of the endometrium: A gynecologic oncology group study. Gynecologic Oncology. 40, 55-65 (1991).
  6. Hicks, M., et al. The National Cancer Data Base report on Endometrial carcinoma in African-American women. Cancer. 83, 2629-2637 (1998).
  7. Barrena Medel, N. I., et al. Comparison of the prognostic significance of uterine factors and nodal status for endometrial cancer. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 204, 1-7 (2011).
  8. Randall, M. E., et al. Randomized phase III trial of whole-abdominal irradiation versus doxorubicin and cisplatin chemotherapy in advanced endometrial carcinoma: A gynecologic oncology group study. Journal of Clinical Oncology. 24, 36-44 (2006).
  9. Galaal, K., Al Moundhri, M., Bryant, A., Lopes, A. D., Lawrie, T. A. Adjuvant chemotherapy for advanced endometrial cancer. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2014, 2-4 (2014).
  10. Orr, J. W., Holimon, J. L., Orr, P. F. Stage I corpus cancer: is teletherapy necessary? American Journal of Obstetrics and Gynecology. 176, discussion 788-789 777-788 (1997).
  11. Ng, T. Y., Perrin, L. C., Nicklin, J. L., Cheuk, R., Crandon, A. J. Local recurrence in high-risk node-negative stage I endometrial carcinoma treated with postoperative vaginal vault brachytherapy. Gynecologic Oncology. 79, 490-494 (2000).
  12. Mohan, D. S., et al. Long-term outcomes of therapeutic pelvic lymphadenectomy for stage I endometrial adenocarcinoma. Gynecologic Oncology. 70, 165-171 (1998).
  13. Straughn, J. M., et al. Stage IC adenocarcinoma of the endometrium: Survival comparisons of surgically staged patients with and without adjuvant radiation therapy. Gynecologic Oncology. 89, 295-300 (2003).
  14. Panici, P. B., et al. Systematic pelvic lymphadenectomy vs no lymphadenectomy in early-stage endometrial carcinoma: Randomized clinical trial. Journal of the National Cancer Institute. 100, 1707-1716 (2008).
  15. ASTEC study group,, et al. Efficacy of systematic pelvic lymphadenectomy in endometrial cancer (MRC ASTEC trial): a randomised study. The Lancet. 373, 125-126 (2009).
  16. Kilgore, L., et al. Adenocarcinoma of the Endometrium: Survival comparisons of patients with and without pelvic node sampling. Gynecologic Oncology. 56, 29-33 (1995).
  17. Trimble, E. L., Kosary, C., Park, R. C. Lymph node sampling and survival in endometrial cancer. Gynecologic Oncology. 71, 340-343 (1998).
  18. Chan, J. K., et al. The outcomes of 27,063 women with unstaged endometrioid uterine cancer. Gynecologic Oncology. 106, 282-288 (2007).
  19. Cragun, J. M., et al. Retrospective analysis of selective lymphadenectomy in apparent early-stage endometrial cancer. Journal of Clinical Oncology. 23, 3668-3675 (2005).
  20. Piovano, E., et al. Complications after the treatment of endometrial cancer: A prospective study using the French-Italian glossary. International Journal of Gynecological Cancer. 24, 418-426 (2014).
  21. Abu-Rustum, N. R., et al. The incidence of symptomatic lower-extremity lymphedema following treatment of uterine corpus malignancies: A 12-year experience at Memorial Sloan-Kettering Cancer Center. Gynecologic Oncology. , 714-718 (2006).
  22. Todo, Y., et al. Risk factors for postoperative lower-extremity lymphedema in endometrial cancer survivors who had treatment including lymphadenectomy. Gynecologic Oncology. 119, 60-64 (2010).
  23. Beesley, V., Janda, M., Eakin, E., Obermair, A., Battistutta, D. Lymphedema after gynecological cancer treatment: Prevalence, correlates, and supportive care needs. Cancer. 109, 2607-2614 (2007).
  24. Haldorsen, I. S., Salvesen, H. B. What Is the Best Preoperative Imaging for Endometrial Cancer? Current Oncology Reports. 18, 1-11 (2016).
  25. Aravalli, R., Cressman, E. Relevance of Rabbit VX2 Tumor Model for Studies on Human Hepatocellular Carcinoma: A MicroRNA-Based Study. Journal of Clinical Medicine. 4, 1989-1997 (2015).
  26. Kreuter, K. A., et al. Development of a rabbit pleural cancer model by using VX2 tumors. Comparative Medicine. 58, 287-293 (2008).
  27. Li, S., Ren, G., Jin, W., Guo, W. Establishment and characterization of a rabbit oral squamous cell carcinoma cell line as a model for in vivo studies. Oral Oncology. 47, 39-44 (2011).
  28. Muhanna, N., et al. Multimodal Nanoparticle for Primary Tumor Delineation and Lymphatic Metastasis Mapping in a Head-and-Neck Cancer Rabbit Model. Advanced Healthcare Materials. 4, 2164-2169 (2015).
  29. Tong, H., Duan, L., Zhou, H., Feng, S. Modification of the method to establish a hepatic VX2 carcinoma model in rabbits. Oncology Letters. 15, 22-23 (2018).
  30. Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11, 1-8 (2016).
  31. Handal, J. A., et al. Creation of rabbit bone and soft tissue tumor using cultured VX2 cells. Journal of Surgical Research. 179, e127-e132 (2013).
  32. Pezeshki, P. S., et al. Bone targeted bipolar cooled radiofrequency ablation in a VX-2 rabbit femoral carcinoma model. Clinical and Experimental Metastasis. 32, 279-288 (2015).
  33. Wang, Y., et al. Magnetic resonance imaging-navigated argon-helium cryoablation therapy against a rabbit VX2 brain tumor. Experimental and Therapeutic. 9, 2229-2234 (2015).
  34. Zhang, W., et al. Laparotomy cryoablation in rabbit VX2 pancreatic carcinoma. Pancreas. 46, 288-295 (2017).
  35. Xu, L. -Q., Huang, Y. -W., Luo, R. -Z., Zhang, Y. -N. Establishment of the retroperitoneal lymph node metastasis model of endometrial VX2 carcinoma in rabbits and observation of its metastatic features. World Journal of Surgical Oncology. 13, 109 (2015).
  36. Duan, P., Lü, J. Q., Tu, Q. M., Yu, Z. K. Magnetic resonance evaluation of transplanted endometrial carcinoma and its lymph node metastasis in rabbits. Chinese Journal of Cancer Research. 19, 201-205 (2007).
  37. Huang, Y. -W., et al. VEGF-c expression in an in vivo model of orthotopic endometrial cancer and retroperitoneal lymph node metastasis. Reproductive Biology and Endocrinology. 11, 49 (2013).
  38. Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. J Exp Med. 71 (6), 813-838 (1940).
  39. Shope, B. R. E., Hurst, B. E. W. Infectious papillomatosis of rabbits. , (1933).
  40. Galasko, C. S. B., Haynes, D. W. Survival of VX2 carcinoma cells in vitro. European Journal of Cancer. 12 (1965), 1025-1026 (1965).
  41. Osato, B. Y. T., Ito, Y. In vitro Cultivation And Immunofluorescent Studies Of Transplantable Carcinomas Vx2 And Vx7. , Laboratory of Viral Oncology, Research Institute, Aichi Cancer Center. Nagoya, Japan. (1967).
  42. Easty, D. M., Easty, G. C. Establishment of an in vitro cell line from the rabbit VX2 carcinoma. Virchows Archiv B Cell Pathology Including Molecular Pathology. 39, 333-337 (1982).
  43. Liu, X., et al. Establishment and characterization of a rabbit tumor cell line VX2. Zhonghua bing li xue za zhi Chinese Journal of Pathology. 34, 661-663 (2005).
  44. Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: a pictorial primer and “how to” guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20, 335-340 (2014).
  45. Pascale, F., et al. Modified model of VX2 tumor overexpressing vascular endothelial growth factor. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23, 809-817 (2012).
  46. Oshiro, H. The role of the lymphatic system in rabbit models for cancer metastasis research a perspective from comparative anatomy. Okajimas Folia Anatomica Japonica. , 6-7 (2014).
  47. Guan, L., Xu, G. Destructive effect of HIFU on rabbit embedded endometrial carcinoma tissues and their vascularities. Oncotarget. 8, 19577-19591 (2017).
  48. Oshiro, H., et al. Establishment of successively transplantable rabbit VX2 cancer cells that express enhanced green fluorescent protein. Medical Molecular Morphology. 48, 13-23 (2015).
  49. Graur, D., Duret, L., Gouyt, M. Phylogenetic position of the order Lagomorpha (rabbits, hares and allies). Nature. 379, 333-335 (1996).
  50. Bõsze, Z., Houdebine, L. M. Application of rabbits in biomedical research: A review. World Rabbit Science. 14, 1-14 (2006).
  51. Kyotani, S., et al. A study of cis-diamminedichloroplatinum(II) suppositories for the treatment of rabbit uterine endometrial carcinoma. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 16, 55-58 (1993).
  52. Harima, Y., Harima, K., Hasegawa, T., Shikata, N., Tanaka, Y. Histopathological changes in rabbit uterus carcinoma alter transcatheter arterial embolization using cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 38, 317-322 (1996).
  53. Huang, Y. W., et al. Tumor-induced VEGF-C overexpression in retroperitoneal lymph nodes in VX2 carcinoma-bearing rabbits. Drug Design, Development and Therapy. 9, 5949-5956 (2015).
  54. Bio-Rad. Real-Time PCR Applications Guide. , Bulletin 5279 (2006).
  55. Taylor, S., et al. A practical approach to RT-qPCR—publishing data that conform to the MIQE guidelines. BioRad Bulletin. , 5859 (2009).
  56. Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18, 411-418 (2007).
  57. Takahashi, K., et al. Development of a mouse model for lymph node metastasis with endometrial cancer. Cancer Science. 102, 2272-2277 (2011).

Tags

סרטן מחקר סוגיה 151 סרטן רירית הרחם אורתוקרביט דגם סרטן VX2 cell קו לימפדנופתיה מודל ארנב מודל כירורגי תרבות התא
מודל הסרטן רירית הרחם אורתוטופית עם לימפדנופתיה הצפק מתוצרת ב Vivo מופץ ומתורבת VX2 תאים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Philp, L., Chan, H., Rouzbahman, M., … More

Philp, L., Chan, H., Rouzbahman, M., Rostami, A., Ding, L., Bratman, S. V., Akens, M. K., Irish, J. C., Bernardini, M. Q., Zheng, G. An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells. J. Vis. Exp. (151), e59340, doi:10.3791/59340 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter