Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

שונה הטרולנושא הגפיים האוסטאופהעורית מודל החולדה על השתלת ואסימטיקה מורכבת מחקר האלוגרפט

Published: April 26, 2019 doi: 10.3791/59458
Automatic Translation
1, 2,3, 2,3, 2,4, 2,4, 1, 2,4
1Christine M. Kleinert Institute for Hand and Microsurgery, 2Cardiovascular Innovation Institute, University of Louisville, 3Kentucky Spinal Cord Injury Research Center, University of Louisville, 4Department of Physiology, University of Louisville

Summary

השתל המורכב של vascularized מציע יתרונות משנים חיים לנמעני ההשתלה, אך הגורמים הביולוגיים לדחיית השתל והעיקור נשארים ברורים לקוי. המודל הכירורגי מכרסם הציג כאן מציע המודל הרלוונטי קלינית של השתלת, המאפשר לחוקרים להעריך את אירועי דחייה ואסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות כדי למנוע את התרחשותן.

Abstract

השתלת ואסיקלבית (VCA) היא שדה חדש יחסית בניתוח השיחזור. הישגים קליניים ב VCA האנושית כוללים השתלות יד ופנים, לאחרונה, קיר הבטן, הרחם, השתלות אורואיברי. התוצאות הפונקציונליות חרגו מציפיות ראשוניות, ורוב הנמענים נהנים מאיכות חיים משופרת. עם זאת, כאשר התנסות קלינית מצטברת, יש לטפל בדחייה כרונית ובסיבוכים מדיכוי החיסוני. במקרים רבים שבהם השתלים נכשלו, הפתולוגיה הסיבתי הייתה איסכמי ואסקולופתיה. המנגנונים הביולוגיים של הדחייה החריפה והכרונית הקשורים ל-VCA, בעיקר לאיסכמי האנקולוטיה, הם תחומים חשובים של מחקר. עם זאת, בשל מספר קטן מאוד של חולי VCA, הערכה של מנגנונים מוצעים ממוען טוב יותר במודל ניסיוני. קבוצות מרובות השתמשו במודלים לבעלי חיים כדי לטפל בכמה מהשאלות הרלוונטיות שאינן פתורות בדחיית VCA ו-vasculopathy. בספרות מתוארות מספר עיצובים הכרוכים במגוון מינים. כאן אנו מציגים מודל הנחודש של VCA הטרולנושא המפרק האוסטאופהאיבר בתוך החולדה כי ניתן לעשות שימוש עבור מחקר VCA טרנסמטריקה. מודל זה מאפשר הערכה טורית של השתל, כולל ביופסיות ושיטות דימות שונות, תוך שמירה על רמה נמוכה של תחלואה.

Introduction

ניתוח שחזור לאובדן הרקמות הקטסטרופלי מקטיעה, פציעות הפיצוץ, ממאירות ופגמים מולדים מוגבלים על-ידי זמינות הרקמה מהמטופל והתחלואה הנוספת הנגרמת באתר התורם. במקרים מסוימים, כגון נפגעי כוויות או מארזים מרובע, רקמות קיימא עבור שחזור אינו זמין מהמטופל. בשנת 1964 בוצעה השתלת היד המודרנית הראשונה באקוודור. אמנם זו היתה הצלחה טכנית, דיכוי חיסוני זמין בזמן לא היה מספיק כדי למנוע דחייה, והשתל אבד בתוך פחות מ 3 שבועות1. ב 1998 ו 1999, השתלת היד הראשונה בעידן המודרני של דיכוי חיסוני בוצעו בליון, צרפת2 ו לואיוויל, קנטאקי, ארה ב3. בפעם הראשונה, מנתחים שיקומיים. יכולים להחליף כאילו השתלת פנים בוצעה לראשונה ב 20054, ומספר שתלי vca אחרים נמצאים כעת באופן שגרתי מבוצע, כגון קיר הבטן5, הרחם, השתלות אורואיברי6.

שלא כמו השתלת איברים מוצק, רוב הטכניקות vca לערב את הנוכחות של העור תורם מאוד העברה אנטיגנית. ניסיון קליני קבע כי דחייה חריפה של העור הוא יחסית קל לשלוט אבל יכול לתרום דחייה כרונית של הרקמות הבסיסיות וכלים, אשר לא מגיבים היטב לטיפול7. תפקוד כלי הדם הקשורים לתגובה alloimmune היא מכשול מבשר רעות יותר עבור שדה VCA7. מקרוסרקולופאאס מובילים לפראינפוזיה, מעכבים ריפוי ומצבים מודלקות. הן האנטי-שוטפת של כלי הקיבול הגדול והתוקפני והיפרפלזיה האנטי-ממוקד מתרחשים בשני מקבלי השתלת יד7. בנוסף, סביר להניח שתורמים לסיבוכים של VCA, וייתכן אפילו להוביל לאירועי דחייה. בעוד הגורמים החיסונית ולא החיסונית כנראה לשחק תפקיד בתוך התמיכה של השתלת יד הנמענים, המנגנונים הספציפיים לקדם את התפקוד הלקוי של כלי הדם ב VCA אינם ידועים, במיוחד בהקשר של כיתה נמוכה, דחייה כרונית. אלה שאלות שלא נענו מחייבים את התפתחותם של מודל VCA בעלי חיים אשר יאפשר הערכה הסדרתית של השתל במהלך הקורס הקליני של הדחייה VCA/תחזוקה ו vasculopathy. דגם מסוג זה יציע תובנות לדחייה ולסרקולוטיה בפני דיכוי חיסוני, אתגר מדבק ו/או פציעה טראומטית שלאחר הניתוח,9.

מוצג כאן הוא עכברוש אלוגנמית VCA הטרוטונושא מודל הטרוסקסואלים האוסטאופהאיבר. בהתבסס על דגמי VCA שפורסמו בעבר, הליך זה מבחינה טכנית קל לבצע, להציג במספר גדול, ומציג תחלואה מינימלית וחוסר נוחות לבעלי חיים של המטופל. מודל זה תוכנן כדי לאפשר הערכות קליניות והיפולוגיים של קבלה VCA לעומת דחייה, והוא מספק הזדמנות להעריך בבסיס המנגנון החיסונית לא חיסונית המעורבים דחייה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל הניתוחים בעלי חיים בוצעו בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים של אוניברסיטת לואיוויל (IACUC שאושרו על-ידי פרוטוקול 18198) ואת המכון הלאומי לבריאות (NIH) מדריך לטיפול ושימוש של חיות מעבדה10. ארבעה חודשים בן גבר בראון-נורבגיה (RT1. An) ו-4 חודשים בן לואיס (RT1. Al) חולדות שימשו התורמים vca והנמענים, בהתאמה.

1. הקציר האלושתל התורם

  1. משתמשים בחדר. באמצעות מתאדה
  2. גלח את אזור תרומת השתל (החוצה), כמו גם את אזורי המפשעה והבטן. לאחר מכן, לטפל עם קרם דפילציה כדי להפחית את כמות הפלומה שמאל על ידי קוצץ.
  3. בעלי חיים תורמים עמוקים באמצעות הצפק (IP) קטמין (60 mg/kg)/xylazine (15 מ"ג/ק"ג)/אספרומאזין (2 מ"ג/ק"ג). ניהול מנה ראשונית של 0.2 mL/100 גרם של משקל הגוף ומינונים נוספים של 0.2 mL כל h. לנוחיותכם, הוא אופציונלי לביצוע שלב זה לפני שלב 2.
  4. ברציפות לפקח על בעלי חיים בעוד תחת הרדמה עבור נשימה, טמפרטורת הגוף, עומק של הרדמה, באמצעות הבוהן צביטה בדיקת רפלקס.
  5. מנהל 30 U של הפארין פתרון תת-עורי (SC) באזור הגביל לפני הניתוח כדי למנוע קרישה.
  6. לבש מסכה, כיסוי ראש, שמלת בידוד חד פעמית וכפפות חד פעמיות.
  7. מניחים את החיה התורמת מספקת על כרית חימום. מייצרים שדה כירורגי סטרילי על ידי מכינים, קרצוף, ומאותת את האזור כירורגי, כולל ההיבטים הגוגטים והגוגלים של הרגל. . דון כפפות סטרילי
  8. לעשות חתך העור 3 ס מ בתוך המעטפת מפשעה באמצעות להב האזמל15 ומשקפים את משטח השומן האינבלילי באמצעות מספריים איריס.
  9. לחשוף את כלי הירך המשותפים ולמקם קרס חוט עם הגומייה לסגת שרירי הבטן.
  10. באמצעות מיקרוסקופ מבתר (40x), לנתח את הפרובאלי מתוך הופעתה של כלי הירך המשותפים מתחת לרצועה ההוליברית ובדילית למפגש של כלים popliteal לתוך השתל.
  11. באמצעות מיקרוקליפים ומלקחיים דו קוטבית של הצורפים, ליגייט ולחלק את הענפים הגדולים בעורקים ורידים, כגון כלים לרוחב הירך, כלים שטחיים caudal הקיבה, העורק saphenous, ואת כלי הירך האבודל הראשי, כדי לגייס כלי הירך הראשי. לצרוב ענפים קטנים באמצעות מלקחיים דו קוטבית משובחים.
  12. לעשות חתך העור ממרכז העור הקודם לחתוך לאורך הצד הגחוני של האיבר האחרון, לאזור הקרסול, באמצעות מספריים איריס.
  13. חותכים את השריר העדין, כמו גם את השרירים האחרים וני מתחתיו, בצורה אנכית כדי לחשוף ולהאריך את כלי הדם המדיליים ה, מסעף עמוק, כלי קטן הסתעפות, ואת העצב הגיד.
    הערה: בשלב זה, על שולחן ניתוחים נפרד, המנתח השני צריך לצנרור ולהרדמה (2.5% – 3% isofלאנה) בעל החיים של המטופל; זה מאפשר למנתחים להכין את האתר כירורגי הנמען בזמן למיקום השתל ולמזער את זמן האיסכמי של השתל.
  14. על בעל החיים תורם, לעשות חתכים העור ההיקפי ברמה של הברך והקרסול. לבטל את הברך ואת הקרסול, להסיר שרירים ורקמות זרות, ולעשות חתך העור האנכי על הצד השני של האיבר החוצה כדי לשחרר את השתל. בשלב זה, השתל (מורכב של פיבולה ושוקה, מכוסה עם שרירים ושרירי העור הניזונים על ידי הניקובים שלה) מחובר רק על ידי העוקץ.
  15. מניחים מלחציים קטנים ככל האפשר על עורק הירך והווריד, וחותכים את העוקץ ככל האפשר, בסמוך לרצועה המהתרית.
  16. כדי לרוקן את השתל של דם, להחדיר תמיסת מלח heparinized (30 U/mL) לתוך עורק הירך באמצעות 27 G הריקון בוטה צינורית.
    הערה: מאפשר גישה קלה להכנסת הצינורית לפני הפארין. בזמן הריקון, הדוק מקרוב את הזרימה היוצאת מווריד הירך. ברגע שנוזל הניקוי יוצא. מעורק הירך, עצור את הסומק
  17. עוטפים את השתל המבודד בגזה חמימה מלוחים, ומובילים אותו מיד לשולחן החיות של המטופל. בשלב זה, האתר כירורגי הנמען צריך כבר להיות מוכן לחיבור כלי הדם.
  18. לאחר הקציר השתל, מיד המתת את עכברוש התורם באמצעות חזה אוויר.

2. ניתוח השתלת הנמען

  1. בעקבות שימוש בהרדמה מעמיקה באמצעות מאדה שחלה בחדר, מורדם עמוקות על ידי בעל החיים המטופל באמצעות צינורית אנדוקנה מבוקרת, ו-2.5% – 3%.
    הערה: בשלב הזה, עכברוש התורמים. עדיין מורדם
  2. ברציפות לפקח על קצב הלב, קצב הנשימה, טמפרטורת הגוף, עומק של הרדמה של בעל חיים של המטופל, באמצעות צביטה בבוהן בדיקת רפלקס.
  3. על מנת למנוע התייבשות והיפוגליקמיה, להזריק 2 מ ל של הפתרון של הפקודה לייזר ו 2.5% דקסטרוז תת-עורי בתחילת ועוד 2 mL בסוף הניתוח.
  4. לגלח את אזור המפשעה, ולאחר מכן לטפל עם קרם דפילציה כדי להפחית את כמות הפלומה שמאל על ידי קוצץ.
  5. לבש מסכה, כיסוי ראש, שמלת בידוד חד פעמית וכפפות סטריליות.
  6. מניחים את החיה מספקת על כרית חימום. החלת משחה אופטלמולוגית כדי למנוע שריטות הקרנית במהלך ההרדמה. מייצרים שדה כירורגי סטרילי על ידי מכין, קרצוף, ומאותת את האזור כירורגי.
  7. לעשות חתך העור 3 ס מ בתוך המעטפת מפשעה באמצעות להב האזמל15 ומשקפים את משטח השומן האינרירינאלי באמצעות מספריים איריס.
  8. לחשוף את כלי הירך המשותפים ולמקם קרס חוט עם הגומייה לסגת שרירי הבטן.
  9. . ליגייט ותחלק ענפים של מרפי
  10. שימוש 10-0 ניילון הפריעו תפרים, כלי תורם אנסטוכי לכלי הנמען באמצעות טכניקה הקצה לצדדים ובטכניקה מקצה לקצה עורקים. שחררו בהדרגה את התפסים מעורק העורקים ואז את הווריד. נטר את האתרים הanastomotic לדימום והוסף תפרים נוספים במידת הצורך.
  11. באופן חזותי להעריך את החיבור כלי הדם כדי להבטיח reperfusion השתל יעיל.
  12. שיבוץ את השתל לתוך הכיס האינשאני והוא הפוך אותו למטה, עם הקרסול משותף משותפת מפרק הברך נחות.
  13. באמצעות תפרים להכניס, לאבטח את השתל לתוך השרירים הסמוכים. סגור את העור באמצעות המזרן מקוטע העור האופקי נספג 4-0 תפרים.
  14. הסר את בעל החיים של המטופל מהרדמה וגמול אותו ממכונת ההנשמה. מניחים את החיה על משטח חימום לתמיכה תרמית.
    הערה: זמן הפעולה הכולל הוא בין 3 ל -4 שעות, בהתאם לניסיון המנתח ולהיכרות עם ההליך הכירורגי.
  15. מלוקסיעם (1 מ"ג/ק"ג) תת-עורי לדיכוי כאב ולניטור עד שבעל החיים התאושש והנייד.

3. ניטור הנמען VCA

  1. הבית המטופל חולדות ביחידים ולנטר אותם מדי יום עבור סימנים קליניים של כאב, התייבשות, ירידה במשקל, ירידה בפעילות בנוסף כישלון כירורגי (עבור הראשון 48-72 h) או דחייה. מנהל תת-עורי מלוקסיאם (1 מ"ג/ק"ג) מדי יום עבור 3 הימים הראשונים לדיכוי הכאב.
  2. בהתבסס על נקודת הקצה של המחקר, לבחור תרופה מדכא חיסוני להיות מנוהל.

4. היסטולוגיה

  1. בהרדמה מרבית (2.5% – 3%), השג את העור הסדרתי ואת ביופסיות השרירים הבסיסיים משתל התורם בנקודות הזמן הרצויות. העור צריך להיות מקורצף ומכוסה לפני קבלת ביופסיה, ותחום סטרילי טכניקה צריך להתבצע.
  2. סגרו את הפצע באחד משני התפרים, תוך שימוש בתפרים 4-0. להחזיר את החיה לכלוב שלה ולאפשר לו להתאושש מההרדמה.
  3. . בצינורות נפרדים ב -10% פורמאלין
  4. בנקודת הזמן של הטרמינל ותחת שאיפה ההרדמה (2.5%-3%), קחו ביופסיה גדולה יותר לעור המתפרס על גבול התורם/המטופל. אתר בזהירות את זוג הרצועה של הכלי באתר של האנסטוסים; האתר המתאים יהיה גלוי עקב התפרים. קח את דגימות כלי הקיבול. הרצויות מעורק העורקים ו/או הווריד תקן את כל הדגימות בנפרד ב -10% פורמאלין. לאחר איסוף דגימות רקמות, ובעוד החיה עדיין תחת הרדמה isof לוריאן, מיד המתת החיה באמצעות חזה אוויר.
  5. באמצעות מעבד רקמה (או טכניקה אחרת הטבעה מועדף), פרפין-להטביע כל ביופסיה לתוך הבלוק שלה. עבור דגימות העור, האוריינט הרקמה כך כל השכבות באפידרמיס העור יכול להיראות בפרוסה אחת. לדגימות כלי קיבול, כוון את כלי הקיבול כך שניתן יהיה להשיג מקטעים צולבים.
  6. באמצעות מיקרוטומה, גזור 6 מקטעי μm-עבה ולהחיל אותם על שקופיות עבור המטאוקסילין ו אאוזין (H & E) כתמים.
  7. כתם עבור H & E באמצעות פרוטוקול סטנדרטי.
  8. השיגו תמונות מייצגות של כל דגימות הרקמה הרצויה באמצעות טכניקות מיקרוסקופ ברייטפילד.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

מודל vca חולדה הטרומאת המודל האוסטאופמעורית מדגם מאפשר לטווח ארוך הישרדות השתלת תחת דיכוי חיסוני. המודל מהימן, מתוכשל ופשוט לביצוע. הכנף מוסתרת היטב באזור המפשעה ומהווה תחלואה וחוסר נוחות מינימליים לבעל החיים. מצגת העור הוא ביטוי קליני של הישרדות ודחייה של allograft (איור 1). עיצוב הכנף מאפשר ניטור קליני ברוטו ויוצר הזדמנות לטכניקות דימות שונות, כגון דופלר לייזר (איור 2). ביופסיות סדרתיות של העור, השריר והעורקים מאפשרים להגיע לטיפול וניתוח בשלבי דחייה שונים (איור 3).

Figure 1
איור 1 : תמונות מייצגות מבעלי חיים מושתלים. (א) syngeneic vca הישרדות לטווח ארוך, ללא טיפול חיסוני לדיכוי, ביום לאחר (POD 45); שימו לב להבדל בכיוון צמיחת הפרווה בשל אוריינטציה הפוכה של השתל. (ב) אלוגנאית vca, מטופלים מדי יום עם סם מדכא חיסוני, על POD 5. (ג) allogeneic vca הישרדות לטווח ארוך, מטופלים מדי יום עם תרופה מדכא חיסוני, על POD 40; הערה צמיחה פרווה נורמלית המציינת זלוף נכונה של השתל, ללא סימנים של דחייה. (ד) אלוגנאית VCA בדחייה על POD 33. הטיפול בדיכוי חיסוני הופסק לחלוטין על POD 14; שימו לב לסימנים הקליניים של דחייה (ניוון עור, השתקה, אובדן פרווה). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2 : דופלר לייזר מערכת הדמיה כדי לפקח על העור שטחית revascularization של allograft. השתל המוצג היה מפוקח על הימים הפוסט 4, 14, ו 64. הלוחות בצד שמאל להראות דם היתוך כפי שנמדד על ידי הדמיה דופלר, בעוד לוחות על הזכות להראות את האזור הדמיה על ידי דופלר. שימו לב למעבר מהפיוז של דם מינימלי מיד פוסט-VCA ועד לחידוש מלא של הכנף ביום 64. השתל הזה נשמר תחת דיכוי. חיסוני מתאים ללא סימני דחייה אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3 : H &Amp; E histopathology של אלושתל באמצעות השתלות אלוגנמית לעומת . (א) העור ביופסיה של אלוגנאית השתל על POD 45 (הגדלה 10x); שימו לב למבנה הרגיל של מרכיבי העור (אפידרמיס, adnexa, ואין סימן לחדירת תאים מוננאברור). (ב) עור ביופסיה של אלוגנאית השתלת בדחייה על POD 75, מטופלים מדי יום עם מינון נמוך יותר של מדכא חיסוני (הגדלה 10x); הערה ניוון באפידרמיס, ניוון adnexa, הסתננות תא מוננארור, הסתננות של כלי הדם, ופקקת נימי. (ג) ביופסיה שרירים של אלוגנאית השתל על POD 45 (הגדלה 10x); שימו לב למבנה הטבעי של השריר הסטרינטי. (ד) ביופסיה שרירים של אלוגנאית השתלת בדחייה על POD 98, מטופלים מדי יום עם מינון נמוך יותר של מדכא חיסוני (הגדלה 10x); שימו לב לניוון השרירים. וחדירת התאים המונחדשים (E) ביופסיה של עורק הירך של השתלת האלוגנאית על POD 45 (הגדלה 20x); . שימו לב למבנה הרגיל של העורק (ו) עורק הירך ביופסיה של אלוגנאית השתלת בדחייה על POD 98, התייחס מדי יום עם מינון נמוך יותר של מדכא חיסוני (20x הגדלה); הערה היפרפלזיה האינטימיות, לומן הצר, ו הסתננות של כלי הדם. סרגל קנה מידה = 200 יקרומטר (A–D); 100 יקרומטר (E ו- F). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

בפיתוח מודל זה של VCA, כמה בעיות חשובות נחשבו. ראשית, זה היה חשוב לכלול עצם שלם (שוקה ושבולה), מח עצם, ועור בשתל. בעוד השתלות יד קלינית של תורמים מבוגרים לא להעביר כמויות משמעותיות של מח המטפי פעיל, מחקרים של התפקיד של נישה מח העצם משתקף טוב יותר באמצעות עצם שלמה, במקום עצם לחתוך ארוך, אשר התוצאות פיברוזיס של מח העצם החשוף. יתר על כן, העצם סגורה האוסטאופהעורית עיצוב כנף מפחית את הסיכון של זיהום ודימום. גם מח העצם וגם העור הם רקמות חיסוני מאוד, אשר עשוי לשמש כדי לעורר תגובה חיסונית אם תרצה. שנית, זה לא היה הכרחי עבור השתל להיות פונקציונלי, ביטול הצורך מודל אורתוטופית שדורש אוסטסינתזה מורכבת ומחדש השתלת השתל. זה גם מונע כמה ההשלכות המטרידות ידועים של מודלים אורתוטופית, כגון הליך כירורגי ממושך וחוסר נוחות בעלי חיים11,12. עם זאת, חשוב לציין כי עיצוב הטרוסקסואלים אינו מאפשר מדדי תוצאה תפקודית של העצם ואת הסחוס, כמו גם תפקוד שרירים, כולם הם בעלי עניין משמעותי במחקר VCA. שלישית, השתל צריך להיות נגיש למערכות דימות, מעקב קליני, וביופסיות סדרתית. לבסוף, למטרות תפוקה, ניתוחי השתלה הדרושים לביצוע בקלות ללא סיבוכים. עם שיקולים אלה במוח, מודל שונה של עכברוש אוסטאופהעורית של vca פותחה שבו האיבר המרוחק, בין הברך והקרסול של התורם (חום-נורבגיה), כולל את העור הנמצא והקשור ובקרה הקשורים, היה מושתלים לתוך ה האזור בנמען (לואיס). במקרה זה, אספקת כלי הדם לשתל התרחשה דרך עורק הירך ואת הווריד.

בגלל העור הוא גורם מפתח חשוב לפקח על דחיית VCA, טיפול ספציפי נלקח בהכנת השתל כדי לשמר את מנקב העורק הקטן תומך perfusion העור. כאשר הקמת מודל זה, ביצעת ניסויים ראשוניים באמצעות האנגיוגרפיה ירוקה (ICG) (תוצאות לא מוצגות) כדי לאשר את עיצוב העור של המודל.

כיוון שהשתל מכוון הפוך, כך שהחלק המרוחק של השתל הוא מעולה והחלק הקרוב ביותר של השתל הוא נחות, העוקץ ארוך נדרש כדי למנוע kinking. לכן יש להדגיש כי יש לחלק את כלי הירך של התורם כניתן לחלוקה בעלת הסדר האפשרי ושעורק הירך של המטופל צריך להיות מחולק ככל האפשר.

השתתפות בו של שני מנתחים מומלצת במהלך ההכנה/בידוד הסופי של שתל התורם; מנתח אחד צריך לסיים את בידוד השתל, בעוד המנתח השני מורדם ובייטס בעלי חיים המטופל ומתחיל להכין את כלי הקיבול לאנסטוסים. אם החלל והציוד זמינים, מנתח שלישי יכול להכין בעל חיים הנמען השני ואת שתי הרגליים תורם ניתן להשתמש עבור שתלי VCA. מנתחים חייבים לתאם אחד עם השני כדי להבטיח השתלה מינימלית זמן השתל לפני anastomoses. מניסיוננו, רוב מורטלי הניתוח מיוחסות לטכניקת ההרדמה. במידת האפשר, מומלץ לחבר שונה בצוות להיות אחראי על ניטור ההרדמה במהלך הניתוח. למותר לציין, כדי לבצע את המודל הזה בהצלחה, מנתח מיומן עם טכניקות מיקרוכלי בסיסיות נדרש. בהתאם לניסיון של המנתח, המודל יכול להיות מושגת בהצלחה לאחר שישה ניסיונות ניתוח.

חולדות syngeneic ניתן להשתמש כקבוצת שליטה כדי להסביר את הדינמיקה ריפוי לא קשור דחייה. הרגל הצלעות של חולדה המטופל יכול לשמש גם כפקד, במיוחד בעת ביצוע הדמיה וביופסיות.

לצמיחה מחודשת פרווה מעל העור המושתל הוא אחד הסימנים הטובים ביותר של perfusion מוצלחת השתלת. מצד שני, אובדן פרווה, אודם עור, ו-de-אפיתל עשוי להצביע על אירוע דחייה ולהקטין את אספקת הדם לחלקים מסוימים של הכנף. בשלב הדחייה מאוד מתקדם, העור עשוי להראות נמק והקילוף. ירידה במסת השריר השתלת מוצג בשלב מתקדם בגלל ניוון הדבציה. בעלי חיים בדרך כלל לאבד משקל הגוף (עד 10%) ב -7 – 10 ימים, אבל אז להתאושש ולשגשג. אנו ממליצים להוסיף ג'ל מים מבוצר מבחינה תזונתית (g., DietGel Recovery) בימים הראשונים שלאחר הניתוח כדי לתמוך בתזונה עכברוש המטופל. במספר קטן מאוד של בעלי חיים (שניים מתוך מעל 50 בעלי חיים ניסיוניים), היינו עדים לזיהום העור ולבחירה אוטומטית.

לסיכום, המודל שונה של הטרוטויום, השתלת VCA האוסטאופתית המושתל הציג כאן מציעה הפרדיגמה, השתלת תכליתי התפיסה. ביופסיות טוריות והדמיה מציעים מידע על הזמן של אירועי דחייה. מגוון של סימפטומים קליניים שניתן ללמוד עם שיטה זו להפוך אותו מודל טרנסלפורמציה מאוד להתאמה עם פוטנציאל של גילויים תובנה רבים בשנים לבוא.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

. למחברים אין מה לגלות

Acknowledgments

עבודה זו נתמכת על ידי המשרד של עוזר מזכיר ההגנה לענייני בריאות באמצעות Congressionally בימוי רפואי תוכנית מחקר תחת הפרס לא. W81XWH-13-2-0057. דעות, פרשנויות, מסקנות והמלצות הן אלה של המחברים ואינן בהכרח מיוחסות על-ידי משרד ההגנה.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acepromazine Henry Schein 5700850
Adventitia Scissors ASSI  SAS15R8
Approximator Clamp (Double) ASSI ABB2V, ABB22V
Approximator Clamp (single) FST 00398-02
Clamp Applying Forceps ASSI  CAF4
Dissecting Scissors ASSI SDS18R8
Flushing blunt needle 27 G SAI
Heparin Sodium Sagent 25021-400-30
Isoflurane Patterson Veterinary 14043-704-06
Jewelers Bipolar ASSI 103000BPS03
Jewelers forceps #3 FST 11231-30
Ketamine HCl 100 mg/mL Zoetis 043-304 DEA License required
Lactated Ringer Solution Hospira 0409-7953-03
Lactated Ringer Solution + 5% Dextrose Hospira 0409-7953-09
Meloxicam Henry Schein 11695-6925-2
Micro forceps ASSI  JFAL3
Micro needle holder ASSI B138
Prograf (Tacrolimus) 5 mg/mL Astellas 0469-3016-01
Suture, 10-0 Prolene Ethicon W2790 or 10-0 Ethilon (2830)
Suture, 4-0 Coated Vicryl Ethicon J714D
Vessel Dilator Forceps ASSI D5AZ
Xylazine VetOne 13985-612-50

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gilbert Fernandez, J. J., Febres-Cordero, R. G., Simpson, R. L. The Untold Story of the First Hand Transplant: Dedicated to the Memory of one of the Great Minds of the Ecuadorian Medical Community and the World. Journal of Reconstructive Microsurgery. , (2018).
  2. Dubernard, J. M., et al. Human hand allograft: report on first 6 months. Lancet. 353 (9161), 1315-1320 (1999).
  3. Jones, J. W., Gruber, S. A., Barker, J. H., Breidenbach, W. C. Successful hand transplantation. One-year follow-up. Louisville Hand Transplant Team. The New England Journal of Medicine. 343 (7), 468-473 (2000).
  4. Devauchelle, B., et al. First human face allograft: early report. Lancet. 368 (9531), 203-209 (2006).
  5. Broyles, J. M., et al. Functional abdominal wall reconstruction using an innervated abdominal wall vascularized composite tissue allograft: a cadaveric study and review of the literature. Journal of Reconstructive Microsurgery. 31 (1), 39-44 (2015).
  6. Kollar, B., et al. Innovations in reconstructive microsurgery: Reconstructive transplantation. Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 800-806 (2018).
  7. Kaufman, C. L., et al. Graft vasculopathy in clinical hand transplantation. American Journal of Transplantation. 12 (4), 1004-1016 (2012).
  8. Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation. Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).
  9. Kaufman, C. L., et al. Immunobiology in VCA. Transplantation International. 29 (6), 644-654 (2016).
  10. Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Institute for Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition. , National Academies Press. Washington, DC. (2011).
  11. Nazzal, J. A., Johnson, T. S., Gordon, C. R., Randolph, M. A., Lee, W. P. Heterotopic limb allotransplantation model to study skin rejection in the rat. Microsurgery. 24 (6), 448-453 (2004).
  12. Ulusal, A. E., Ulusal, B. G., Hung, L. M., Wei, F. C. Heterotopic hindlimb allotransplantation in rats: an alternative model for immunological research in composite-tissue allotransplantation. Microsurgery. 25 (5), 410-414 (2005).

Tags

רפואה סוגיה 146 מודל חולדה השתלת מרוכבים מורכבים השתלת allorejection וצאה כירורגית מודל ניתוח microvascular
שונה הטרולנושא הגפיים האוסטאופהעורית מודל החולדה על השתלת ואסימטיקה מורכבת מחקר האלוגרפט
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Fleissig, Y., Reed, R. M., Beare, J. … More

Fleissig, Y., Reed, R. M., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Williams, S. K., Kaufman, C. L., Hoying, J. B. Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research. J. Vis. Exp. (146), e59458, doi:10.3791/59458 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter