Summary
Kliniske lineære acceleratorer kan anvendes til at bestemme biologiske virkninger af en bred vifte af dosishastigheder på cancerceller. Vi diskuterer, hvordan man oprette en lineær accelerator for celle-baserede assays og assays for kræft stamceller, der dyrkes som tumorspheres i suspension og cellelinjer dyrket som overtrædende kulturer.
Abstract
Strålebehandling er fortsat en af hjørnestenene i kræftbehandling. For de fleste kræftformer, det er den mest effektive, ikke-kirurgisk behandling til debulk tumorer. Her beskriver vi en metode til at irradiere kræftceller med en lineær accelerator. Udviklingen af lineær accelerator teknologi har forbedret præcisionen og effektiviteten af strålebehandling. De biologiske virkninger af en lang række strålingsdoser og dosishastigheder er fortsat et intenst undersøgelsesområde. Brug af lineære acceleratorer kan lette disse studier ved hjælp af klinisk relevante doser og dosishastigheder.
Introduction
Strålebehandling er en effektiv behandling for mange typer af kræft1,2,3,4. Ekstra høj dosishastighed bestråling er relativt nyt i strålebehandling og er muliggjort af de seneste teknologiske fremskridt i lineære acceleratorer5. De kliniske fordele ved en ekstra høj dosishastighed på bestråling med standard dosishastighed omfatter kortere behandlingstid og forbedret patientoplevelse. Lineære acceleratorer giver også en klinisk indstilling for cellekultur baseret stråling biologi undersøgelser. De biologiske og terapeutiske konsekvenser af strålingsdosis og dosis satser har været et fokus af interesse for stråling onkologer og biologer i årtier6,7,8. Men radiobiologi af ekstra høj dosis sats bestråling og flash bestråling-en ekstremt høj dosishastighed af stråling-er endnu ikke grundigt undersøgt.
Gamma stråle bestråling er meget udbredt i cellekultur baseret stråling biologi9,10,11. Stråling opnås ved gammastråler, der udsendes fra rådnende radioaktive isotop kilder, typisk cæsium-137. Anvendelse af radioaktive kilder er meget reguleret og ofte begrænset. Med kilde baseret bestråling er det udfordrende at teste en bred vifte af dosishastigheder, hvilket begrænser dets anvendelighed i analysen af de biologiske virkninger af klinisk opnåelige dosishastigheder12.
Der har været flere undersøgelser, der illustrerer både dosis og dosis sats effekter12,13,14,15,16,17. I disse undersøgelser blev der anvendt både gammabestråling fra radioaktive isotoper eller røntgenstråler genereret af lineære acceleratorer. En række cellelinjer, der repræsenterer lungekræft, livmoderhalskræft, glioblastoma, og melanom blev brugt. Strålingsvirkninger på celle overlevelse, celle cyklus anholdelse, apoptose og DNA-skader blev evalueret som udlæsninger12,13,14,15,16,17 . Her beskriver vi en metode til at definere de biologiske virkninger af klinisk relevant strålingsdosis og dosishastigheder ved at levere røntgenbaseret stråling ved hjælp af en lineær accelerator. Disse undersøgelser bør udføres med tæt samarbejde mellem biolog, stråling onkolog og medicinsk fysiker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. celle forberedelse til suspension cellekultur
- Culture gliom Stem-lignende celler i stamcelle kultur medier på ca. 5 x 106 celle/10 cm plader i en cellekultur inkubator med 5% Co2, 95% relativ luftfugtighed ved 37 °c.
Bemærk: tilstanden for cellekulturen er den samme i alle procedurer. De medier, der bruges i protokollen, er komplette medier. - To dage før planlagt bestråling opsamles gliom Stem-lignende celler fra kultur pladen med en steril 5 ml pipette i et 15 ml centrifugeglas i en kultur hætte.
- Centrifugeres de indsamlede celler ved 200 x g i 3 minutter i en bordplade centrifuge.
- Supernatanten kasseres, og celle pellet (ca. 1 x 107 celler) fordøje med 1 ml trypsin-EDTA ved stuetemperatur i 5 minutter for at lave en enkelt cellesuspension i TRYPSIN-EDTA. Ryst forsigtigt bunden af centrifugeglasset hver 2 minutter under fordøjelsen for at sikre, at cellerne bliver fordøjet grundigt.
- Tilsæt 3 mL stamcelle kultur medier (Se tabellen over materialer) for at slukke trypsin. Centrifugeres de indsamlede celler ved 200 x g i 3 minutter i en bordplade centrifuge. Kassér supernatanten og Gem celle pellet.
- Resuspension cellerne med 5 mL cellekultur medier og tælle cellerne med en hemocytometer.
- Plade 5 x 106 celler i 2 10 cm plader indeholdende 10 ml cellekultur medier.
- Før den planlagte bestråling opsamles cellerne, og supernatanten kasseres efter centrifugering som beskrevet i trin 1,3. Re-suspendere celle pellet med 5 mL cellekultur medier. 1 mL cellesuspension overføres til en 35 mm plade, der indeholder 2 mL celledyrkningsmedier.
Bemærk: den totale volumen af mediet er 3 mL i 35 mm pladen for at gøre væsken 1 cm i højden i pladen. - Overføre de belagte celler i en sekundær beholder, såsom en plastik-eller skum boks, for at reducere risikoen for kontaminering og bringe cellerne i beholderen til bestrålingsanlægget på forsynings vognen.
- Strålings cellerne som beskrevet i trin 4.
2. celle forberedelse til vedhæftet cellekultur
- En dag før bestråling, i cellen kultur hætte, fjerne DMEM medierne fra cellen kultur plade af den vedlagte cellelinje, såsom HEK-293 celler. Mediet kan suses ved hjælp af en Pasteur-pipette, der er sluttet til et vakuum.
- Vask cellerne med 5 mL steril PBS til kultur skålen for at skylle de resterende medier af.
- Der afpipetteres 1 mL trypsin-EDTA i dyrknings skålen, og kultur pladen afvippes forsigtigt for at sikre, at hele skålen er dækket med trypsin-EDTA.
- Trypsinize celler ved stuetemperatur i 5 min. slukker for trypsin-EDTA-reaktionen med 3 mL DMEM-medier og samler celler med en 5 mL pipette i 15 mL centrifugeglas i dyrknings hætten.
- Centrifugeres de indsamlede celler ved 200 x g i 3 minutter i en bordplade centrifuge. Kassér supernatanten og Gem celle pellet.
- Resuspender cellerne med 5 mL DMEM-medier og Tæl cellerne med et hemocytometer.
- Plade 2 x 105 celler i en 35 mm plade ved hjælp af 3 ml cellekultur medier til en højde på 1 cm af medierne.
- Efter 24 timers cellekultur i inkubator ved 37 °C overføres de belagte celler i en sekundær beholder (dvs. en isoleret skum boks) til bestrålingsanlægget på en brugs kurv.
- Irradiatceller som beskrevet i trin 4.
3. celle klargøring til immun farvning efter bestråling
- Tø kommerciel ekstrellulær protein matrix på is ved 4 °C natten over. Før chill 200 μL pipettespidser og 1,5 mL centrifugeglas ved 4 °C natten over.
- Aliquot ekstracellulær protein matrix med forkølede pipettespidser og 1,5 mL centrifugeglas ved 200 μL pr. tube.
- 200 μL ekstracellulær protein matrix fortyndes i forkølet 20 mL celledyrkningsmedier for at fremstille 1% ekstracellulært protein matrix-medie.
- Anbring en steriliseret dækseddel (22 mm x 22 mm) i en 35 mm plade. Placer 400 μL af 1% ekstracellulært protein matrix medie på dæksedlen.
- Placer 35 mm pladen i celle kulturinkubator ved 37 °C i 1 time for at tillade, at den ekstracellulære protein matrix polymeriserer på dæksedlen.
- Når du bruger suspension cellekultur, skal du foretage en enkelt cellesuspension som beskrevet i trin 1,1 til 1,5.
- Plade 5 x 104 celler på en ekstracellulær protein matrix-belagt Cover seddel placeret i en 35 mm plade. Returner belagte celler til cellen kultur inkubator natten over for at sikre, at cellerne understøttes af protein matrixen. Den totale volumen af medierne i pladen skal være 3 mL for at gøre højden af medierne nå 1 cm i kulturen skålen.
- Observere cellerne under en lys felt mikroskop med 10x forstørrelse objektiv linse. Cellerne skal spredes ud på dæksedlen i stedet for at flyde. Overfør kultur skålen med belagte celler til en sekundær beholder, såsom en skum boks til bestrålingsanlægget på en brugs kurv, og udstråle cellerne som beskrevet i trin 4.
- Når du bruger tilknyttede cellekulturer (f. eks. HEK-293-celler), skal du fordøje cellerne som beskrevet i trin 2,1 til 2,6. Placer 5 x 104 celler på en steril dækseddel i en 35 mm plade en dag før bestrålingen for at sikre, at cellerne er fuldt fastgjort til dækglidens overflade ved at observere dem under et mikroskop som i trin 3,9. Brug 3 mL DMEM-medier til at gøre væsken 1 cm i højden i pladen.
- Efter dyrkning af celler på coverglider natten over eller op til en dag, Overfør dyrknings skålen med belagte celler i en sekundær beholder til bestrålingsanlægget. En Utility Cart kan bruges til at reducere risikoen for spild. Irradiatceller som beskrevet i trin 4.
4. bestråling med en lineær accelerator (LINAC)
- Ved hjælp af linacs konsolsoftware skal du indstille acceleratoren Gantry og kollimator til 0 °, åbne X-og Y-kæberne til en symmetrisk 20 X 20 cm2 -Feltstørrelse og trække multi-Leaf kollimatorer (mlcs) tilbage, hvis de findes.
Bemærk: LINACs kan have en udfladning filter fri (FFF) tilstand, så meget høje dosishastigheder. Som navnet antyder, er denne stråling ikke ensartet (flad), og den høje dosishastighed opnås kun i midten af strålen. I dette tilfælde anvendes et 7 x 7 cm2 felt. - Placer mindst 5 cm vandækvivalent materiale på behandlingen sofaen. Placer den celle parabol, der skal bestråles, ved 400 Me/min (standard dosishastighed) på det tilsvarende vand materiale, og centrer det på LINAC-trådkorset.
- Placer cellerne, der skal bestråles, i en dybde af maksimumdosis i en 6 MV røntgenstråle, omkring 1,5 cm. Anbring yderligere 1 cm vandækvivalent materiale oven på skålen. Kombineret med de 1 cm medium, som cellerne er suspenderet i, placerer det cellerne i en gennemsnitlig dybde på 1,5 cm.
- Fastgør front markøren til lederen af LINAC. Forlæng front markøren, indtil den kontakter overfladen af oprustning materiale og notere afstanden. Juster bordhøjden, indtil afstanden fra kilden til oprustning overfladen er 100 cm.
Bemærk: afstanden kan bekræftes med indikatoren for optisk afstand. Alternativt kan indikatoren for optisk afstand bruges i stedet for den forreste markør til at indstille kilden til oprustning overflade til 100 cm. - Beregn det passende antal Monitor enheder (MU) til at levere den ønskede dosis af stråling til cellerne og programmere speederen til at levere på 400 MU/min.
Bemærk: for kilden til Surface distance (SSD) setup på en LINAC kalibreret til at levere 1 cGy/MU på dybden af maksimal dosis, det nødvendige antal Monitor enheder beregnes ved hjælp af MU = dosis (cGy)/(1 cGy/MU)/af (20x20), hvor af stande for output faktor. Denne beregning skal ændres for LINACs ved hjælp af alternative kalibrerings opsætninger. - Forlad behandlings boksen og Bekræft, at alle andre personer har forladt. Vrify, at der ikke er andre celler i rummet, eller de vil modtage lave doser af stråling. Luk Vault-døren.
- Bekræft feltstørrelsen, MU og MU/min ved konsollen, og Aktivér derefter strålen.
- Gentag trin 4.3-4.8 for de celler, der skal bestråles ved højere eller lavere dosishastigheder.
- For at opnå højere dosishastigheder (f. eks. 2100 MU/min eller højere) med acceleratoren, skal du sænke SSD for at øge den effektive dosishastighed til cellerne i henhold til den inverse kvadratiske lov: Doserateeffektiv = Doserat * (100 cm/SSD_New)2.
- Ved lave dosishastigheder (f. eks. 20 MU/min) skal du øge kilden til overflade afstanden (SSD_New) for at nedsætte dosishastigheden. For eksempel kan den cellekultur parabol placeres på gulvet i behandlingsrummet.
- Genberegn Monitor enhedens indstilling på speederen, hvis dette setup er nødvendigt, ved hjælp af MU = dosis (cGy)/(1 cGy/MU)/af (20x20)/(100 cm/SSD_New)2. For yderligere information om MU beregninger henvises til reference af McDermott og Orton18.
- Bestem dosishastigheden i Gy/minut ved Doserat (Gy/min) = dosis (Gy) * (MU/min)/MU. fx, 4 Gy leveret på 400 MU/min kræver 380 MU, så 4 * 400/380 = 4,2 Gy/min. Se tabel 1.
Figur 1 : Opsætning af cellekultur skålen på lineær accelerator. A) der vises en klinisk lineær accelerator. B) 5 cm vandækvivalent materiale anbringes på behandlings sofaen. C) en cellekultur skål anbringes på materialets overflade. (D) skålen er centreret ved hjælp af speederen trådkorset i feltet behandling, der vises af feltet firkantet lys. (E) 1 cm vandækvivalent materiale er placeret oven på cellen kultur parabol. Kilden til overflade afstanden (SSD) kontrolleres ved hjælp af en optisk afstands indikator (F, G) eller en forreste markør (H, I). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
5. biologiske assays efter bestråling
- Efter bestråling skal cellerne returneres til celle kulturinkubator på samme måde som beskrevet ovenfor (trin 1,9, 2,8 og 3,10).
- Efter behov skræddersys en række biologiske analyser, så de passer ind i forskningsprojektet.
Bemærk: her viser vi en repræsentativ celle cyklus analyse16 som et eksempel på en biologisk analyse efter bestråling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For at undersøge den celle cyklus effekt af standard dosishastighed og ekstra høj dosis rate bestråling af en lineær accelerator, tre prøver af gliom Stem-lignende celler blev udarbejdet ved hjælp af denne protokol og indsamlet 24 h efter bestråling17: en kontrolprøve , som ikke var bestrålet (figur 2A), en prøve, der var bestrålet med 400 Me/min (Monitor enhed, 4,2 Gy/min standard dosishastighed, figur 2B) til 4 Gy, og en anden prøve bestrålet med 2100 mu/min (21,2 Gy/min ekstra høje dosishastighed, Figur 2 C) til 4 Gy. Celle cyklus profiler vises med procentdelene af celler i forskellige faser af cellecyklussen.
Figur 2 : Eksempel på celle cyklus analyse efter 4 Gy bestråling af lineær accelerator. G2 celle cyklus anholdelse blev observeret efter bestråling af gliom-stamceller med enten en standard dosishastighed (400 Me/min) (B) eller en ekstra høj dosishastighed (2100 mu/min) (C) sammenlignet med ikke-bestrålede kontrol celler (a). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| DoseRate (MU/MIN) | SSD (CM) | Energi | Mu |
| 20 | 250 | 6X | 2380 * |
| 400 | 100 | 6X | 390 * |
| 2100 | 80 | 6FFF | 260 * |
Tabel 1: opsætning for dosishastigheder, der anvendes i forsøg, forudsat 4 Gy dosis. MU kan skaleres lineært til andre påkrævede doser. * Disse er eksempel MU for LINAC vi brugte. MU skal beregnes for brugerens specifikke LINAC ved hjælp af ligningen ovenfor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Strålebehandling er en integreret del af kræftbehandling. Igangværende bestræbelser søger at forbedre effektiviteten og effektiviteten af strålebehandling. Fremskridt inden for lineær accelerator teknologi har givet mulighed for at behandle patienter med hidtil uset nøjagtighed og sikkerhed. Da de fleste patienter behandles med røntgenstråler af høj energi fra lineære acceleratorer, kan undersøgelser, der undersøger de biologiske virkninger af et stort udvalg af dosishastigheder, der udføres på lineære acceleratorer, let anvendes på patienter. Der har været flere rapporter anvender lineære acceleratorer til stråling biologi forskning, men resultaterne er blandet og yderligere undersøgelser er nødvendige13,14,15,16,19.
Lineære acceleratorer er relativt sikre i den forstand, at efter den foreskrevne dosis er leveret vil der ikke være røntgenstråler produceret. Dette er i modsætning til radioisotoper, hvor strålingen konstant udsendes. Desuden tillader brug af lineære acceleratorer til at levere stråling brug af sofistikerede stråle arrangementer til at styre formen af målvolumen med et stort udvalg af doser og dosishastigheder. Ulempen ved denne metode er, at tilgængeligheden af den lineære accelerator kan være begrænset på grund af patientens brug og derfor kræver Avanceret planlægning med klinikere og medicinske fysikere.
I vores protokol beskriver vi den grundlæggende procedure for bestråling af celler. Denne metode kan skræddersys til at opfylde andre forskningsbehov. For eksempel kan det kombineres med stofbehandling for at undersøge effekten af kombineret kemoterapi og strålebehandling. Ved anvendelse af denne metode på en bestemt cellelinje eller analyse efter strålingen, bør nogle ændringer forventes. For eksempel, for at undersøge tidlige ændringer i biomarkører efter bestråling, kan cellerne indsamles kort efter bestråling.
Fordi den leverede dosis er afhængig af stråleenergi og den deponerede dosis varierer som en funktion af dybden af penetration, mængden af medier og vand-ækvivalent bolte nødvendig for at opnå den ønskede dosis er kritisk. I den ovenfor beskrevne metode bruger vi 6 MV-fotoner i en enkelt anterior-posterior stråle og sikrer, at celle mediet er på 1 cm i højden i kultur skålen. Vi bruger en ekstra 1 cm vand-ækvivalent materiale på toppen af cellen kultur parabol til at opbygge dosis til cellerne. For at opnå meget høje dosishastigheder, vi hæve sofaen, hvor cellerne er placeret. Da feltstørrelsen bliver mindre, når sofaen er hævet, bruger vi en 35 mm kultur skål og sikrer, at hele skålen er inden for bestrålings området, som afgrænset af lysfeltet. For at opnå lave dosishastigheder sænker vi behandlingen sofaen eller placerer cellekultur skålen på gulvet i rummet for at øge kilden til overflade afstanden. Design af behandling felter for dyr, som er mere kompleks, er uden for rammerne af denne artikel. De teknikker, der er beskrevet her, vil hjælpe forskerne med at forstå, hvordan man bruger en lineær accelerator til biologiske assays med cellelinjer, der dyrkes i suspension eller fastgjort til retter. Tæt samarbejde mellem biologer, klinikere og medicinske fysikere vil sikre en vellykket gennemførelse af stråle undersøgelserne.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Vi takker Cleveland Clinic Department of Radiation Oncology for brug af de lineære acceleratorer. Vi takker Dr. Jeremy rig for hans gavmilde gave af gliom Stem-lignende celler. Denne forskning blev støttet af Cleveland Clinic.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material | |||
| glioma stem-like cell 387 | gift from Dr. Jeremy Rich | ||
| 293 cells | ATCC | CRL-1573 | |
| neuron stem cell culture media | Thermo Fisher Scientific | 21103049 | NeurobasalTM media |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 10569044 | |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | 16000044 | |
| Penicillin/Streptomycin | Thermo Fisher Scientific | 15140-122 | |
| Recombinant Human EGF Protein | R&D Systems | 236-EG-01M | |
| Recombinant Human FGF basic | R&D Systems | 4114-TC-01M | |
| B-27™ Supplement | Thermo Fisher Scientific | 17504044 | |
| Sodium Pyruvate | Thermo Fisher Scientific | 11360070 | |
| L-Glutamine | Thermo Fisher Scientific | 25030164 | |
| Tripsin-EDTA | Thermo Fisher | 25200056 | |
| extracellular proten matrix | Corning | 354277 | MatrigelTM |
| Ethanol | Fisher chemical | A4094 | |
| Equipment | |||
| 10 cm cell culture dish | Denville | T1110 | |
| 3.5 cm cell culture dish | USA Scientific Inc. | CC7682-3340 | |
| 22x22mm glass cover slip | electron microscopy sciences | 72210-10 | |
| 15 ml centrifuge tube | Thomas Scientific | 1159M36 | |
| 50 ml centrifuge tube | Thomas Scientific | 1158R10 | |
| 5 ml Pipette | Fisher Scientific | 14-955-233 | |
| pipet aid | Fisher Scientific | 13-681-06 | |
| Vortex mixer | Fisher Scientific | 02-215-414 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5810R | |
| Linear Accelerator | Varian | n/a | |
| water equivalent material | Sun Nuclear corporation | 557 | Solid waterTM |
| Reagent preparation | |||
| DMEM media | 10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 µg/mL streptomycin in 500 ml DMEM media | ||
| stem cell culture media | 10 ml B27 supplement, 20 µg hFGF, 20 µg hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 µg/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media |
References
- Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).
- Stupp, R., et al. Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial. The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).
- Tao, R., et al. Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy. Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).
- Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle. Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).
- Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P.
- Hall, E. J. Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy. The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).
- Steel, G. G., et al. The dose-rate effect in human tumour cells. Radiotherapy & Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).
- Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux. Radiotherapy & Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).
- Castro, G., et al. Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease. Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).
- Gaddini, L., et al. Exposing primary rat retina cell cultures to γ-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses. Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).
- Simara, P., et al. DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing. Stem Cell Research & Therapy. 8 (1), 73 (2017).
- Wang, Z., et al. A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells. PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).
- Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival. Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).
- Karan, T., et al. Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams. Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).
- Sarojini, S., et al. A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes. Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).
- Hao, J., et al. The effects of extra high on glioma stem-like cells. PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).
- Liu, J., et al. Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells. International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).
- Mcdermott, P., et al. The Physics and Technology of Radiation Therapy. , Medical Physics Pub Corp. Madison WI. (2010).
- Lohse, I., et al. Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival. Radiotherapy & Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).
