Summary
التصوير المقطعي المحوسب بالأشعة السينية الدقيقة فعال في الحصول على معلومات ثلاثية الأبعاد من عينات بشرية غير تالفة ولكن له نجاح محدود في مراقبة الأنسجة الرخوة. استخدام عامل تباين حمض فوسفوستجينستيك يمكن حل هذه المشكلة. نفذنا هذا العامل التباين لفحص الأنسجة الليفية الحساسة البشرية (الرباط الاحتفاظ orbicularis).
Abstract
تشريح يدوي والمراقبة النسيجية هي الأساليب الشائعة المستخدمة للتحقيق في الأنسجة البشرية. ومع ذلك، يمكن أن يضر التشريح اليدوي الهياكل الحساسة، في حين أن المعالجة والمراقبة النسيجية توفر معلومات محدودة من خلال التصوير المقطعي. التصوير المقطعي المحوسب بالأشعة السينية الدقيقة (microCT) هو أداة فعالة للحصول على معلومات ثلاثية الأبعاد دون عينات ضارة. ومع ذلك، فإنه يظهر كفاءة محدودة في التمييز بين أجزاء الأنسجة الرخوة. استخدام عوامل تعزيز التباين، مثل حمض فوسفيوالتنغستن (PTA)، يمكن أن يحل هذه المشكلة عن طريق تحسين تباين الأنسجة الرخوة. قمنا بتنفيذ microCT مع PTA للتحقيق في الرباط الاحتفاظ orbicularis الإنسان (ORL)، وهو هيكل دقيق في منطقة المدار. في هذه الطريقة، يتم إصلاح العينات التي تم حصادها في formalin، المجففة في حلول الإيثانول التسلسلي، وملطخة بمحلول PTA. بعد تلطيخ، يتم إجراء المسح الضوئي microCT، وإعادة الإعمار 3D، والتحليل. الجلد, الأربطة, والعضلات يمكن تصورها بوضوح باستخدام هذه الطريقة. حجم العينة ومدة تلطيخ هي السمات الأساسية للطريقة. وكان سمك العينة المناسب حوالي 5-7 ملم، والتي تباطأت فوقها العملية، وكانت المدة المثلى 5-7 أيام، والتي تحدث تحتها ثقب فارغ في المنطقة الوسطى في بعض الأحيان. للحفاظ على موقع واتجاه القطع الصغيرة أثناء القطع، ينصح الخياطة على نفس المنطقة من كل جزء. وعلاوة على ذلك، هناك حاجة إلى تحليلات أولية للهيكل التشريحي لتحديد كل قطعة بشكل صحيح. يمكن استخدام Parafilm لمنع التجفيف، ولكن ينبغي توخي الحذر لمنع تشويه العينة. وأظهرت ملاحظتنا متعددة الاتجاهات أن ORL يتكون من شبكة متعددة الطبقات من لوحات مستمرة، بدلا من الألياف مثل الخيط، كما ذكر سابقا. وتشير هذه النتائج إلى أن المسح المجهري مع PTA مفيد لفحص مقصورات محددة داخل الهياكل المعقدة للأنسجة البشرية. قد يكون من المفيد في تحليلات أنسجة السرطان, أنسجة الأعصاب, وأجهزة مختلفة, مثل القلب والكبد.
Introduction
عادة ما يستخدم التشريح اليدوي والمراقبة النسيجية لفحص الأنسجة البشرية، مثل العضلات والأنسجة الضامة. ومع ذلك، يمكن أن يؤدي التشريح اليدوي بسهولة إلى تلف الهياكل الحساسة، وتوفر المراقبة النسيجية معلومات محدودة حول الأسطح المسطحة المقطعية1و2. لذلك، هناك حاجة إلى أساليب محسنة لفحص الأنسجة بشكل أكثر دقة وكفاءة.
يستخدم التصوير المقطعي المحوسب التقليدي (CT) بشكل عام في الممارسة السريرية، ولكنه يفتقر إلى القدرة على التمييز بين الهياكل الصغيرة2،3. التصوير المقطعي المحوسب (microCT) هو أداة فعالة للحصول على معلومات ثلاثية الأبعاد (ثلاثية الأبعاد) للهياكل الصغيرة من العينات، دون تدميرها. ومع ذلك، microCT لديها تطبيقات محدودة لأنه يمكن تصور الأنسجة الكثيفة فقط بوضوح. لا يمكن استخدامه للتمييز بين الأنسجة الرخوة. للتغلب على هذا القيد، يمكن استخدام عوامل تلطيخ. عوامل تعزيز التباين، مثل حمض فوسفيوالتنغستن (PTA)، وحمض فوسفلوميبديك، واليود لوغول، وتحسين معدل تباين الأنسجة الرخوة أثناء المسحالضوئي 4،5. العديد من الدراسات مقارنة هذه العوامل تشير إلى أن PTA يدل على الأداء الجيد وسهلة للتعامل مع6،7،8.
الأربطة الاحتفاظ orbicularis (ORL) هو بنية حساسة حول المدار، والتي يمكن أن تتلف بسهولة خلال المراقبة التقليدية9. قمنا بفحص واسترداد بنجاح المعلومات 3D على هذا الهيكل باستخدام microCT مع PTA كعامل تباين. ويمكن تطبيق هذه الطريقة على الدراسات على الأنسجة البشرية الأخرى، مثل القلب والكبد، مع التعديلات المناسبة10،11،12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم التبرع بصورة قانونية لجميع الجثث المستخدمة في هذه الدراسة إلى مركز تعليم التشريح الجراحي في كلية الطب بجامعة يونسي.
1. الحصول على عينات
- رسم خط شق على الجثة مع قلم رصاص ملون للإشارة إلى منطقة القطع لحصاد العينة. تحقق من أن خط الشق المرسوم يمتد ميديا إلى canthus الوسيطة، أفقيا إلى canthus الجانبية، متفوقة على حدود متفوقة من الجفن السفلي، وأدنى إلى 1 سم تحت الخط من الحافة المدارية.
ملاحظة: خذ بعينة الحجم استناداً إلى الحد الأقصى لحجم المسح الضوئي لمعدات التصوير المقطعي المحوسب (يمكن لمعداتنا الحصول على صورة ذات بعد كائن أقصى قدره 7 × 7 سم). هنا، تم حصاد عينة حوالي 1 سم في العرض، 3 سم في الطول، و 1.25 غرام من الوزن من منطقة ORL. - قطع أنسجة الوجه بعد خط الشق مع شفرة. تأكد من أن القطع عميق بحيث يلامس طرف النصل العظم. يجب أن تشمل العينة الجلد والأنسجة تحت الجلد والعضلات والدهون وperiosteum.
- إصلاح العينة في شكلي 10٪ على الفور والحفاظ عليه لمدة 5 إلى 7 أيام في درجة حرارة الغرفة(الشكل 1A).
ملاحظة: يمكن استخدام كل من الجثث المحفورة والجثث الطازجة لهذه الدراسة. ومع ذلك، قد يختلف حل التثبيت للجثث قليلاً عن الحل المستخدم في التجربة البيولوجية. لذلك، نقترح إصلاح العينة مع 10٪ فورمالين مرة أخرى حتى بعد الحصول على عينة من الجثث المحفورة.
2. التحضير للتلطيخ
- بعد التثبيت، قم بتقطيع العينة إلى 3 قطع (5-7 مم في سمكها). لا تفقد موقع واتجاه كل قطعة خلال هذه العملية.
ملاحظة: الماسح الضوئي microCT نستخدميمكن أن تغطي الحد الأقصى لحجم 7 سم³، ولكن الحل PTA لا يمكن اختراق العينة بنجاح إذا كان سميكا جدا. - خياطة الجانب superolateral من كل قطعة باستخدام إبرة والخيط الأسود بحيث يمكن التحقق من اتجاه العينة في وقت لاحق.
- تجفيف العينة في سلسلة من 30٪، 50٪، و 70٪ حلول الإيثانول لمدة يوم واحد لكل منهما.
- وضع العينة في الإيثانول 70٪ حتى تلطيخ.
3- إعداد منطقة التجارة التفضيلية
- ابدأ عملية تلطيخ PTA قبل أسبوع واحد من جدولة المسح المجهري.
- إعداد 210 مل من محلول الإيثانول 70٪ وإضافة 2.1 غرام من الطاقة PTA لذلك. مزيج جيدا باستخدام شاكر في 55-60 دورة في الدقيقة.
ملاحظة: يجب أن يكون تركيز حل منطقة التجارة التفضيلية 1٪ في الإيثانول. - إعداد ثلاث حاويات بلاستيكية 70 مل لكل قطعة شرائح. ملء الحاويات مع الحل PTA. نقع العينات في الحاويات ووضعها على شاكر لاختراق فعال. ترك العينات لمدة 5-7 أيام(الشكل 1B).
- عند الانتهاء من تلطيخ، تخزين العينة في الإيثانول 70٪ للتحضير للمسح الضوئي.
ملاحظة: يمكن الحفاظ على العينات الملونة لعدة أشهر، ولكن من المستحسن أن يتم مسح العينات في أقرب وقت ممكن لضمان تلطيخ كامل.
4. ميكروت المسح الضوئي
- التفاف العينة مع parafilm لمنع التجفيف. لا التفاف العينات ضيقة جدا، لأن ذلك قد يؤدي إلى تشوه.
- فتح الماسح الضوئي ووضع العينة على علبة(الشكل 2).
- تعيين معلمات المسح الضوئي على النحو التالي: الجهد المصدر (كيلوفولت) = 70، مصدر الحالي (μA) = 114، مرشح Al = 0.5 ملم، حجم بكسل الصورة (ميكرومتر ²) = 20، بكسل = 2240 × 2240، التعرض (مللي ثانية) = 500، خطوة دوران (deg) = 0.3.
ملاحظة: قد يتم تعديل المعلمات وفقًا للعينات و/أو الماسحات الضوئية المستخدمة. - بدء المسح الضوئي.
ملاحظة: يستغرق المسح الضوئي 30 إلى 60 دقيقة استناداً إلى الدقة المقصودة وسرعة الماسح الضوئي.
5 - إعادة بناء البيانات والاستفادة منها إلى أقصى حد
- تشغيل برنامج إعادة الإعمار. حدد فتح مجموعة البيانات في القائمة إجراءات لتشغيل الملفات الممسوحة ضوئيًا.
- حدد علامة التبويب إعدادات في إطار إعادة الإنشاء. تعيين المعلمات كما يلي: تقليل قطع الحلقي = 7، تصحيح تصلب الحزمة (٪) = 40.
ملاحظة: يمكن تعديل المعلمات استناداً إلى العينة. - ابدأ إعادة الإنشاء بتحديد البدء في علامة التبويب ابدأ. سيتم تخزين البيانات النهائية في المجلد المعين.
- تشغيل برنامج تغيير حجم الملف. حدد مجموعة بيانات المصدر لتشغيل الملفات التي تم إعادة بنائها.
- حدد jpg في علامة التبويب مجموعة البيانات الوجهة.
- اختر خيار تغيير الحجم 1/2 مع خيار الجودة من لا الاستيفاء (سريع).
- ضبط شريط الشرائح إلى 100 (أعلى) في علامة التبويب ضغط الصورة.
ملاحظة: خيار تغيير الحجم لتجنب إبطاء سرعة الكمبيوتر عند تقديم 3D; ومع ذلك، يمكن أن يؤدي إلى دقة أقل عند تغيير حجمها على نطاق واسع. ونقترح تغيير الحجم إلى النصف من أجل التوصل إلى حل مقبول مع معالجة أفضل.
6. إعادة الإعمار 3D
- تشغيل برنامج تقديم وحدة التخزين ثلاثية الأبعاد.
- حدد الإجراءات > تحميل بيانات وحدة التخزين لتشغيل مجموعة البيانات.
- ضبط مستوى السطوع والتباين عن طريق تعديل وظيفة نقل الشكل في الرسم البياني في علامة التبويب محرر وظيفة النقل.
- حدد خيارات > إضاءة.
- حدد رموز الظلال وإضاءة السطح. هذه الآثار توفر لهجة النمذجة واقعية.
- العثور على أفضل طريقة عرض عن طريق التحرك(انقر واسحب)،والدورية(انقر بزر الماوس الأيمن واسحب)،والتكبير أو التصغير من (التمرير) النموذج.
- حرك المستوى(التحول + انقر واسحب في الاتجاه الداخلي) لإظهار الصور المقطعية(الشكل 3).
- قم بتشغيل رمز الضوء. ضبط شريط إشارة الإضاءة والعثور على أفضل الإضاءة للعرض. ثم قم بإيقاف تشغيل الرمز وإغلاق علامة التبويب الإضاءة.
- حدد خيارات > إظهار > مربع القطع لإخفاء المربع للصورة النهائية.
- حدد الإجراءات > حفظ الصورة لتخزين الصورة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وقد تم تحقيق إعادة بناء مفصلة من ORL عن طريق microCT مع إعداد PTA(الشكل 4). وقد لوحظ بوضوح الهيكل العضلي الليفي الأربطة التي تمتد بشكل غير مباشر بين الأدمة وperiosteum(الشكل 4A). في وجهة النظر الإكليلية(الشكل 4B)،زادت كمية وتعقيد الألياف أفقيا. في الرؤية الأفقية(الشكل 4C)،لوحظ وجود شبكة مفصلة مع تشكيل مشتل. لاحظنا شكل يتميز لوحات مستمرة، بدلا من الألياف مثل الخيط، كما ذكر سابقا. في طريقة عرض sagittal(الشكل 4D)،انخفض سمك ألياف ORL أقل من ذلك. عموما، أثبتت هذه الملاحظة متعددة الاتجاهات أن ORL يتكون من شبكة متعددة الطبقات من لوحات مستمرة مع اختلاف في العدد وسمك اعتمادا على الموقع.
الشكل 1 تم حصاد العينات ومن ثم ملطخة مع حل PTA.
(أ)تم إصلاح العينات في شكلي 10٪ بعد الحصاد. (ب)تم قطع العينات إلى قطع أرق لتعزيز الاختراق ثم وضعت في حل PTA. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2 الماسح الضوئي microCT.
يشير السهم إلى الدرج حيث يتم وضع العينة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3 إعادة الإعمار ثلاثية السنوات.
حرك الطائرة في الاتجاه الداخلي لعرض الصور المقطعية في الداخل. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4 صور ثلاثية الأبعاد لـ ORL.
(أ). الصورة العامة لـ ORL. (ب)وجهة النظر الإكليلية. (C). (د)رأي ساجيدال. S، متفوقة؛ A، الأمامية؛ L، الجانبي؛ P، الخلفي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 5 تحليل هياكل ORL.
الأصفر والأحمر والأخضر تشير إلى الجلد والعضلات والرباط، على التوالي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل التكميلي 1. مقارنة بين الصور ثلاثية الأبعاد والصور ثلاثية الأبعاد. (أ). (B). شريط مقياس = 1 ملم.
الشكل التكميلي 2. التفاف وتحديد parafilm. (A). . (ب). بارافيلم يساعد على إصلاح العينة بحزم على الماسح الضوئي. (ج). بارافيلم غير مرئي على المسح الضوئي microCT ويمكن طرحها بسهولة. الرجاء النقر هنا لتحميل الرقم.
الشكل التكميلي 3. تلطيخ غير كاف من PTA. مساحة جوفاء في المركز يظهر حيث لم يتم اختراق حل PTA بما فيه الكفاية. (أ). (B). شريط مقياس = 1 ملم.
الشكل التكميلي 4. مقارنة بين الجثث الطازجة والجثث المحفورة. لم يتم العثور على أي اختلافات بين الجثث الطازجة وتحنيط لتطبيق البروتوكول. تظهر الصورة ميزة أخرى يمكن التقاطها بنفس الطريقة أيضاً. (أ). (ب). . الرجاء النقر هنا لتحميل الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نفذنا microCT مع إعداد PTA في فحص الأنسجة الرخوة البشرية. باختصار، يتم حصاد العينات وثابتة في formalin لبضعة أيام، تليها الجفاف في حلول الإيثانول المسلسل. وضع العينة في حل PTA مباشرة بعد تثبيت formalin يمكن أن يؤدي إلى بعض تكسير الأنسجة بسبب الجفاف السريع. لذلك، هناك حاجة إلى الجفاف التسلسلي قبل تلطيخ PTA. بعد ذلك، يتم تلوين العينات باستخدام حل PTA لمدة أسبوع تقريبا. ويمكن بعد ذلك إجراء المسح الضوئي المجهري، وإعادة البناء ثلاثيالأبعاد، والتحليل. وكان هدفنا مراقبة ORL والهياكل المجاورة باستخدام هذه الطريقة. قدمنا بنجاح الأنسجة كنموذج 3D. تم تصور الجلد والأربطة والعضلات بشكل واضح(الشكل 5).
وينبغي النظر في عدة نقاط أثناء معالجة العينات. حجم العينة ومدة تلطيخ هي الشواغل الرئيسية. بعد العديد من الدراسات التجريبية، وجدنا أن سمك العينة المناسب حوالي 5-7 ملم والمدة المناسبة للتلطيخ هي 5-7 أيام. في هذه الظروف، واختراق حل PTA العينة بمعدل 1 ملم تقريبا / يوم. إذا كان سمك يتجاوز 7 ملم، يزيد وقت المعالجة. عندما تكون مدة تلطيخ غير كافية بالمقارنة مع حجم العينة، قد تتضمن الصورة النهائية ثقب فارغ في المنطقة الوسطى من العينة. يحدث هذا في كثير من الأحيان، وخاصة على مستوى الجلد، وإزالة الجلد لا لزوم لها يمكن أن تحسن كفاءة تلطيخ. عندما تكون المدة طويلة جداً، فإن العينة بأكملها تكون ملطخة، مما يجعل من الصعب تحديد كل حجرة. ويمكن أن تكون دراسة أخرى عن المدة المثلى لتلطيخ العينات الأكبر حجما مفيدة.
عادة، يتم تقسيم العينة إلى قطع لتعزيز الاختراق. من المهم أن نتذكر موقع واتجاه كل عينة خلال هذه العملية. للحفاظ على هذه المعلومات، ينصح الخياطة على نفس المنطقة من كل جزء. سيتم مشاهدة مؤشر الترابط في الصورة النهائية، ويجب أن يكون المرء حذراً من أن مؤشر الترابط لا تتداخل مع المنطقة الرئيسية. على سبيل المثال، قد يكون الخياطة على المنطقة الفائقة من كل قطعة مفيدة. وبالإضافة إلى ذلك، هناك حاجة إلى تحليلات أولية للبنية التشريحية للتعرف على كل جزء من الأنسجة بسبب تعقيدها.
وتستخدم بارافيلم وغيرها من المواد لمنع العينات من الجفاف. ومع ذلك، يمكن أن تحدث تشوهات طفيفة عند التفاف العينات. من المهم الحفاظ على الشكل الأصلي إلى أقصى حد ممكن. في بعض الأحيان يتم استخدام أنبوب سائل، بدلا من parafilm. ومع ذلك، حتى أدنى يرتجف من آلة لديه القدرة على التأثير على الأنبوب أثناء المسح الضوئي، وقد يقلل من وضوح الصورة النهائية.
وهناك عدة قيود على هذا النهج. أولاً، لا يمكن أن يتم هذا البروتوكول بكائن حي. وعلاوة على ذلك، يتم تقييد حجم العينة من قبل الحد الأقصى لحجم المسح الضوئي للماسح الضوئي microCT. يمكن أن تكون هناك أخطاء أثناء تحليل الصورة المقدمة بالعين المجردة. لذلك، قد تكون هناك حاجة إلى تجارب نسيجية إضافية لتأكيد النتائج. قد يكون هناك تشويه طفيف الأبعاد أثناء التحضير; ومع ذلك، نعتقد أن هذا لا يؤثر بشكل كبير على نتيجة الدراسة.
المسح المجهري مع إعداد PTA مفيد لفحص مقصورات محددة داخل هيكل معقد. وركزت هذه الدراسة على وضع طريقة لتعزيز معدل التباين باستخدام إعداد منطقة التجارة التفضيلية، وأشير بإيجاز إلى سمات أخرى، مثل عمليات المسح وإعادة البناء. ومع ذلك، يجب أن يكون القراء قادرين على الحصول على نفس النتيجة إذا كانوا يستخدمون الماسحات الضوئية الدقيقة المعاصرة وبرامج تحليل الصور بعد عملية تلطيخ الصور. هذه الطريقة يمكن أن تكون مفيدة في تحليلات أنسجة السرطان وهياكله، ومساهمة الأعصاب في مناطق محددة، والهياكل التشريحية عالية الدقة من الأعضاء، مثل القلب والكبد13،14،15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
تم دعم هذه الدراسة من قبل هيئة التدريس منحة البحوث من كلية الطب جامعة يونسي (6-2018-0099). ويشكر المؤلفون الأشخاص الذين تبرعوا بسخاء كبير بأجسادهم إلى كلية الطب بجامعة يونسي. ونحن ممتنون لجون هو كيم وجونغ هو بانغ على دعمهما التقني (الموظفون في مركز تعليم التشريح الجراحي في كلية الطب بجامعة يونسي). ونحن ممتنون أيضا لGenoss المحدودة لنظام المسح الضوئي microCT عالية الجودة المستخدمة في هذا البحث.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 12 Tungsto(VI)phosphoric acid n-hydrate Phosphotungstic acid |
Junsei | 84220-0410 | PTA powder |
| CTvox | Bruker | ver 2.7 | 3D recon software |
| Nrecon | Bruker | ver 1.7.0.4 | Reconstruction software |
| Skyscan | Bruker | 1173 | MicroCT scanner |
| Tconv | Bruker | ver 2.0 | File resizing software |
References
- Nierenberger, M., Remond, Y., Ahzi, S., Choquet, P. Assessing the three-dimensional collagen network in soft tissues using contrast agents and high resolution micro-CT: Application to porcine iliac veins. Comptes Rendus Biologies. 338 (7), 425-433 (2015).
- Vymazalová, K., Vargová, L., Zikmund, T., Kaiser, J. The possibilities of studying human embryos and foetuses using micro-CT: a technical note. Anatomical Science International. 92 (2), 299-303 (2017).
- Tesařová, M., et al. Use of micro computed-tomography and 3D printing for reverse engineering of mouse embryo nasal capsule. Journal of Instrumentation. 11 (3), 1-11 (2016).
- Nemetschek, T., Riedl, H., Jonak, R. Topochemistry of the binding of phosphotungstic acid to collagen. Journal of Molecular Biology. 133 (1), 67-83 (1979).
- Rao, R. N., Fallman, P. M., Falls, D. G., Meloan, S. N. A comparative study of PAS-phosphotungstic acid-Diamine Supra Blue FGL and immunological reactions for type I collagen. Histochemistry. 91 (4), 283-289 (1989).
- Metscher, B. D. MicroCT for comparative morphology: simple staining methods allow high-contrast 3D imaging of diverse non-mineralized animal tissues. BMC Physiology. 9 (11), (2009).
- Metscher, B. D. MicroCT for Developmental Biology: A Versatile Tool for High-Contrast 3D Imaging at Histological Resolutions. Developmental Dynamics. 238 (3), 632-640 (2009).
- Nieminen, H. J., et al. Determining collagen distribution in articular cartilage using contrastenhanced micro-computed tomography. Osteoarthritis Cartilage. 23 (9), 1613-1621 (2015).
- Kwon, O. J., Kwon, H., Choi, Y., Cho, T., Yang, H. Three-dimensional structure of the orbicularis retaining ligament: an anatomical study using micro computed tomography. Scientific Reports. 8 (1), 17042 (2018).
- Dullin, C., et al. μCT of ex-vivo stained mouse hearts and embryos enables a precise match between 3D virtual histology, classical histology and immunochemistry. PLoS One. 12 (2), e0170597 (2017).
- Zikmund, T., et al. High-contrast differentiation resolution 3D imaging of rodent brain by X-ray computed microtomography. Journal of Instrumentation. 13 (2), 1-12 (2018).
- Anderson, R., Maga, A. M. A novel procedure for rapid imaging of adult mouse brains with MicroCT using iodine-based contrast. PLoS One. 10 (11), e0142974 (2015).
- Nieminen, H. J., et al. 3D histopathological grading of osteochondral tissue using contrast-enhanced micro-computed tomography. Osteoarthritis Cartilage. 26 (8), 1118-1126 (2018).
- Greef, D. D., Buytaert, J. A. N., Aerts, J. R. M., Hoorebeke, L. V., Dierick, M., Dirckx, J. Details of Human Middle Ear Morphology Based on Micro-CT Imaging of Phosphotungstic Acid Stained Samples. Journal of Morphology. 276 (9), 1025-1046 (2015).
- Sutter, S., et al. Contrast-Enhanced Microtomographic Characterisation of Vessels in Native Bone and Engineered Vascularised Grafts Using Ink-Gelatin Perfusion and Phosphotungstic Acid. Contrast Media & Molecular Imaging. 2017, (2017).
