Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Behavior

Avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante

Published: February 7, 2020 doi: 10.3791/59837

Summary

Protocolos são apresentados para avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em roedores usando movimento vertical do elevador e rotação de roda gigante.

Abstract

O objetivo geral deste estudo é avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em roedores usando o movimento vertical do elevador e dispositivos de rotação de rodas gigantes. Esses ensaios podem ajudar a confirmar a integridade e o funcionamento normal do sistema nervoso autônomo. Eles são associados a medidas quantitativas baseadas na contagem de defecações, exame de campo aberto e cruzamento de feixes de equilíbrio. As vantagens desses ensaios são sua simplicidade, reprodutibilidade e medidas comportamentais quantitativas. As limitações desses ensaios são de que as reações autônomas podem ser epifenômenos de transtornos não vestibulares e que é necessário um sistema vestibular funcional. O exame de transtornos como o enjoo será muito auxiliado pelos procedimentos detalhados desses ensaios.

Introduction

A doença de movimento (Esms) devido à estimulação visuo-vestibular anormal leva à reação autônoma, provocando sintomas como desconforto epigárrico, náusea e/ou vômito1. De acordo com as teorias atuais, a doença do movimento pode ser causada por um conflito sensorial ou incompatibilidade neuronal de receber informações de movimento integradas que diferem do modelo interno previsto do ambiente2,3 ou instabilidade postural como ocorreria em um navio de reboque4,5. Apesar dos avanços significativos no campo da doença do movimento e do funcionamento da autonomia vestibular6,7,8,9,10,11,12,futuras pesquisas podem ser auxiliadas por protocolos de avaliação padronizados. Avaliar os efeitos autônomos das moções passivas padrão beneficiará muito as investigações sobre as causas e a prevenção do enjoo. O objetivo geral deste estudo é avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo nos roedores. Modelos animais, como roedores, permitem fácil manipulação experimental (por exemplo, movimento passivo e farmacêutico) e avaliação comportamental, que pode ser usada para estudar a etiologia da doença do movimento. Aqui, apresentamos uma bateria detalhada para testar os efeitos do movimento passivo e a integridade do funcionamento vestibular.

O presente estudo detalha dois ensaios, movimento vertical do elevador (EVM) e rotação de roda gigante (FWR), que induzem reações autônomas ao movimento passivo. Os ensaios são acoplados a três medidas comportamentais quantitativas, o feixe de equilíbrio (em camundongos13 e ratos14,15,16,17), exame de campo aberto e contagem de defecações. O EVM (semelhante ao arremesso e rolo de um navio encontrando uma onda) avalia o funcionamento vestibular estimulando os órgãos sensoriais otolitos que codificam acelerações lineares (ou seja, o saccule que responde aos movimentos no plano vertical)18. O dispositivo FWR (rotação centrífuga ou movimento sinusoidal) estimula os órgãos otolitos por aceleração linear e pelos canais semicirculares por aceleração angular19,20. O dispositivo de rotação roda gigante/centrífuga é único em sua avaliação autônoma. Até o momento, o único dispositivo semelhante na literatura é o toca-eixo off-vertical (OVAR), que é usado para examinar o reflexo vestibulo-ocular (VOR)18,21,22, evitar condicionado23,24, e os efeitos da hipergravidade25,26,27. O ensaio EVM e o ensaio do dispositivo FWR induzem estimulação vestibular levando a reações autônomas. Acopladomos o EVM e a FWR a medidas quantitativas como feixe de equilíbrio, contagem de defecações e análise de campo aberto28,29,30,para garantir resultados robustos e reprodutíveis. Semelhante ao descrito anteriormente em camundongos13 e ratos14,15,16,17, o ensaio de feixe de equilíbrio é um feixe de 1,0 m de comprimento suspenso 0,75 m do chão entre dois bancos de madeira usando uma simples modificação de caixa preta na extremidade do gol (acabamento). O feixe de equilíbrio tem sido usado para avaliar a ansiedade (caixa preta obscura)14,17, lesão traumática15,16,17, e aqui, reações autônomas que afetam o equilíbrio. Realizamos a contagem de defecações para avaliar a resposta autônoma no modelo de enjoo de movimento anteriormente, e é uma medida quantitativa confiável que é facilmente realizada e avaliada inequivocamente6,8,9,11. A análise de campo aberto emprega uma simples avaliação de comportamento em campo aberto da caixa preta usando Ethovision28, Bonsai30, ou uma simples análise de vídeo no Matlab29 para quantificar comportamentos como movimento. No protocolo atual, usamos a distância total percorrida, mas notamos que existem vários paradigmas diferentes (por exemplo, alongamento, zona de movimento, velocidade, etc.) 28,29,30. Coletivamente, esses procedimentos formam uma pequena bateria de avaliações para o exame e avaliação de reações autônomas ao movimento passivo, por exemplo, em doença social6,7,8,9,10,11. Os ensaios atuais podem ser adaptados para uma variedade de modelos animais.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

O presente estudo e os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética para Experimentação Animal da Segunda Universidade Médica Militar (Xangai, China), de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais De Laboratório (Conselho Nacional de Pesquisa dos EUA, 1996).

1. Animais

  1. Use ratos Sprague-Dawley (SD) de dois meses (200-250 g). Para cada ensaio comportamental, use um grupo separado de ratos. Use sempre o controle separado e grupos experimentais.
    NOTA: Houve dois testes autônomos: EVM e FWR. O EVM tinha três condições além de um grupo controle (= 4) com três ensaios comportamentais (feixe de equilíbrio, contagem de defecação e campo aberto = 3) com 8 ratos em cada um para um total de 96 ratos (4 x 3 x 8). A FWR tinha uma condição além de um grupo controle (= 2) com três ensaios comportamentais (feixe de equilíbrio, contagem de defecações e campo aberto = 3) com 8 ratos em cada um para um total de 48 ratos (2 x 3 x 8). No total, reportamos 144 ratos.
  2. Roedores de gaiola uma temperatura constante de 25 °C e 60%-70% de umidade.
  3. Casa roedores em 12 h/12 h ciclos claro/escuro com acesso a alimentos e água potável ad libitum.
    NOTA: Uma vez que os seguintes protocolos são experimentos comportamentais, os ratos devem ser tratados suavemente. O manuseio dos animais deve estar com as duas mãos com suporte corporal e traseiro, para não induzir ansiedade.
  4. Realizar experimentos (EVM e FWR) e ensaios de avaliação (feixe de equilíbrio e avaliação de campo aberto) na escuridão para minimizar as pistas visuais.

2. Dispositivo de movimento vertical do elevador

  1. Realize os procedimentos de movimento vertical do elevador em completa escuridão para minimizar as pistas visuais.
  2. Coloque os roedores na caixa plexiglas (22,5 cm x 26 cm x 20 cm). Aqui a caixa Plexiglas pode acomodar quatro roedores (dispositivo feito medida).
  3. Certifique-se de que a caixa está fechada e fechada com segurança para evitar que roedores caiam. Coloque a caixa plexiglass na almofada do elevador do dispositivo de movimento vertical do elevador (dispositivo personalizado).
  4. Ligue o dispositivo de movimento vertical do elevador para a configuração mais baixa para aclimatação.
  5. Defina a amplitude como 22 cm para cima e 22 cm abaixo do neutro. Alterar gradualmente o movimento vertical do elevador da seguinte forma:
    1. Definir os períodos iniciais como 2.500 ms para 5 min, 2.000 ms para 5 min e 1.500 ms por 5 min.
    2. Use um período de teste de 1000 ms por 2 h.
    3. Desacelere o dispositivo ao contrário usando períodos de 1500 ms por 5 min, 2000 ms por 5 min e 2500 ms por 5 min.

3. Dispositivo de rotação de roda gigante

  1. Configuração do dispositivo de rotação de roda gigante
    1. Coloque o recipiente de plexiglass (22,5 cm x 26 cm x 20 cm) em um banco de madeira (dispositivo personalizado).
    2. Coloque os roedores no recipiente de plexiglass com o longo eixo do corpo perpendicular à haste de rotação horizontal da roda gigante (dispositivo feito medida).
      NOTA: A colocação com o corpo perpendicular à haste horizontal garante a estimulação dos órgãos de otolito (direção anterior-posterior e vertical) durante a rotação.
    3. Feche a caixa de plexiglass com segurança.
    4. Coloque o segundo conjunto de roedores no recipiente de plexiglass com o longo eixo do corpo perpendicular à haste de rotação horizontal no segundo braço do dispositivo de rotação da roda gigante. Use um segundo conjunto de roedores com massa semelhante para equilibrar a roda gigante.
    5. Feche com segurança a caixa de plexiglass e coloque no dispositivo de rotação da roda gigante.
  2. Procedimento de rotação da roda gigante
    1. Realize os procedimentos de rotação da roda gigante em completa escuridão para minimizar as pistas visuais.
    2. Inicie a roda gigante girando em sentido horário a 16°/s2 para atingir uma velocidade angular de 120°/s, e depois comece a desacelerar a 48°/s2 para atingir 0°/s. Após uma pausa de 1 s, faça com que o recipiente continue girando em direção anti-horário da mesma forma que acima (aceleração a 16°/s2 para atingir uma velocidade angular de 120°/s e, em seguida, desaceleração a 48°/s2 para chegar a 0°/s). O ciclo no sentido horário-counter-clock requer aproximadamente 10 s para atingir sua posição inicial.
    3. Continue a rotação no sentido horário para 2 h por sessão para aproximadamente 720 rotações.

4. Avaliação de EVM e FWR

NOTA: A avaliação do dispositivo de rotação de roda gigante e o movimento vertical do elevador é feita por três procedimentos: testes de feixe de equilíbrio, contagem de defecações e exame em campo aberto. Procedimentos idênticos são usados para avaliar o movimento vertical do elevador. Esses procedimentos de avaliação devem ser feitos o mais rápido possível após a rotação da roda gigante ou o movimento vertical do elevador.

  1. Trave
    1. Configuração de feixe de equilíbrio
      1. Configure o balanço10,11,12 colocando dois banquinhos de madeira (aproximadamente 0,75 m de altura) no campo experimental, aproximadamente 110 cm de distância.
      2. Coloque uma caixa de plástico preta (15 cm x 15 cm x 8 cm) no banco de acabamento.
      3. Coloque um feixe de madeira estreito (2,5 cm x 130 cm) entre os dois bancos, deixando uma distância de 100 cm entre as bordas do banco, do banco de partida até o banco de acabamento.
        NOTA: A entrada da caixa de plástico preta deve estar na linha de chegada dos 100 cm.
      4. Coloque uma lâmpada no banco de partida. Ligue a lâmpada.
      5. Desligue as luzes da sala e certifique-se de que o quarto esteja o mais escuro possível. Isso garante que o roedor siga a direção do feixe de equilíbrio da região iluminada até a região obscurecida.
    2. Equilibrar procedimentos de feixe
      NOTA: O ensaio de coordenação motora do feixe de equilíbrio é avaliado medindo o tempo levado para atravessar o feixe de madeira elevado.
      1. Treine cada roedor diariamente por 3 dias consecutivos, antes do período de exame, a fim de alcançar um desempenho estável na viga de equilíbrio10. Treine introduzindo o rato no feixe no canto iluminado e levando-o a atravessar a viga. Eventualmente, o rato atravessará por sua própria vontade. Ratos no protocolo atual levaram 3,6 ± 0,9 segundos.
        NOTA: Alguns roedores não conseguem um desempenho estável durante o treinamento e devem ser excluídos. Alguns roedores não realizam a tarefa, enquanto outros não têm motivação para atravessar a viga. O desempenho estável foi de dois períodos consecutivos de teste de tempos de travessia inferiores a 4 segundos. Se um rato cair durante o treinamento ou avaliação, ele deve ser categorizado como um rato 'cair' e não avaliado mais adiante.
      2. Para o procedimento real, coloque o roedor treinado no banco de partida perto da luz e pressione simultaneamente comece em um cronômetro. O roedor deve cruzar o feixe de equilíbrio rapidamente e entrar na caixa preta no banco de acabamento.
      3. Pressione comece no cronômetro assim que o roedor estiver no lugar e pressione para quando o nariz entrar na caixa escura no banco de acabamento. O tempo para atravessar o feixe é do banco de partida até o fim do banco.
        NOTA: Uma vez treinado o roedor, você pode realizar uma intervenção ou manipulação, como induzir doença de movimento, antes da avaliação. Você também pode obter uma medição de linha de base, antes da intervenção, usando o tempo para atravessar a última sessão de treinamento.
  2. Contagem de defecações
    1. Coloque o recipiente de plexiglass contendo os quatro roedores em um banco após o período de teste da roda gigante.
    2. Remova os roedores e coloque em caixas individuais de campo aberto (abaixo).
    3. Conte o número de pelotas de fezes na caixa de plexiglass atribuída a cada roedor.
      NOTA: Uma medição de linha de base pode ser obtida, para comparação com a avaliação após o movimento do elevador, contando pelotas de fezes antes de passar pelo movimento vertical do elevador.
  3. Exame de campo aberto
    1. Coloque os roedores na caixa de campo aberto (40 cm x 40 cm x 45 cm).
    2. Registre o comportamento de campo aberto usando uma câmera de vídeo IR por 3 min28,29,30.
    3. Determine a distância total percorrida.
      NOTA: É muito importante NÃO colocar o roedor na caixa de campo aberto antes do movimento vertical do elevador. O ambiente deve ser novo para o roedor. Portanto, as medidas de linha de base NÃO devem ser tomadas para exame em campo aberto.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figura 2 demonstra resultados representativos do feixe de equilíbrio do tempo levado sem transversal. Os ratos foram treinados por 3 dias consecutivos para alcançar um desempenho estável na viga de equilíbrio10. No dia seguinte, os ratos foram avaliados para o desempenho do feixe de equilíbrio. No eixo y da figura, temos o número de segundos levados para os roedores cruzarem o feixe de equilíbrio para rodas gigantes, movimento vertical do elevador e grupos de controle para fins demonstrativos.

A Figura 3 demonstra resultados representativos da contagem de defecações. Para o movimento vertical do elevador, os ratos estavam em um dos três diferentes grupos de rotação de 0,8 Hz, 0,4 Hz e movimento vertical de 0,2 Hz, além de um grupo controle, chamado grupo estático. A equivalência aos nossos períodos de movimento é a seguinte: frequência = 0,8Hz = 1/0,8 = 0,1250s = 1250 ms, frequência = 0,4Hz = 1/0,4 = 0,2500s = 2500 ms, e frequência = 0,2Hz = 1/0,2 = 0,5000s = 5000 ms. O EVM aumentou significativamente a defecação (One way ANOVA, F(3,31) = 20,2306, p lt 0,00001). A mudança no movimento vertical hz aumentou a defecação para 0,4 Hz (t = 3,4064, df = 14, p = 0,0043) e 0,8 Hz (t = 10,6895, df = 14, p < 0,0001). Para rotação de roda gigante, os ratos foram girados em um ciclo no sentido horário que durava aproximadamente 10 s para atingir sua posição inicial. Toda a sessão de rotação durou 2h. O grupo de rotação de rodas gigantes foi comparado a um grupo controle, chamado grupo estático. O grupo de rotação de rodas gigantes aumentou a defecação conforme determinado por um t-test (t = 10,6895, df = 14, p < 0,0001).

A Figura 4 demonstra o exame em campo aberto dos resultados percorridos a distância total. Esses dados foram coletados usando software comercial de rastreamento de vídeo para análise de comportamento de campo aberto (Tabela de Materiais)28, mas existem vários pipelines de software de código aberto para análise de vídeo comportamental, como bonsai30 e um que nosso grupo desenvolveu com base no Matlab29. Além disso, aqui, a distância total percorrida foi avaliada como uma métrica, mas diferenças quadro a quadro podem ser usadas para determinar outros comportamentos, como o movimento vertical. Para o movimento vertical do elevador, os ratos estavam em um dos três diferentes grupos de rotação de 0,8 Hz, 0,4 Hz e movimento vertical de 0,2 Hz, além de um grupo controle, chamado grupo estático. O EVM diminuiu significativamente a distância de campo aberto percorrida (ANOVA, F(3,31) = 16,5994, p < 0,00001). A mudança no movimento vertical hz diminuiu a locomoção de campo aberto para 0,4 Hz (t = 3,1354, df = 14, p = 0,0073) e 0,8 Hz (t = 5,8929, df = 14, p < 0,001). Para rotação de roda gigante, os ratos foram girados em um ciclo no sentido horário que durava aproximadamente 10 s para atingir sua posição inicial. Toda a sessão de rotação durou 2h. O grupo de rotação de rodas gigantes foi comparado a um grupo controle, chamado grupo estático. O grupo de rotação de rodas gigantes diminuiu a locomoção de campo aberto conforme determinado por um teste t (t = 4,3341, df = 14, p = 0,0007).

Vários estudos publicados utilizaram os protocolos descritos aqui6,7,8,9,10,11,12. Um exemplo recente do nosso grupo estudou os mecanismos por trás da mecamina anticolaingênica e da escopolamina aliviando sintomas gastrointestinais induzidos por doença de movimento12.

Figure 1
Figura 1: Instrumentação usada. AViga de Equilíbrio. O feixe de equilíbrio é um feixe de madeira estreito (2,5 cm x 130 cm) entre as duas fezes colocadas a 100 cm (aproximadamente 0,75 m de altura) de distância. Uma lâmpada é colocada no banco de partida e uma caixa de plástico preta (15 cm x 15 cm x 8 cm) no banco de acabamento. bDispositivo de movimento vertical do elevador. A amplitude do dispositivo de movimento vertical do elevador é definida a 22 cm de altura e 22 cm abaixo do neutro. O movimento vertical de aquecimento consiste em 2500 ms por 5 min, 2000 ms por 5 min e 1500 ms por 5 min. O movimento de teste consiste em um período de 1000 ms por 2 h. O dispositivo de movimento vertical do elevador é desacelerado ao contrário usando um período de 1500 ms por 5 min, 2000 ms por 5 min e 2500 ms para 5 min. Ratos são colocados cabeça em direção à frente do dispositivo de movimento vertical do elevador. cDispositivo de rotação de roda gigante. A roda gigante gira em sentido horário a 16°/s2 acelerando para 120°/s, decelendo posteriormente a 48°/s2 para atingir 0°/s, parando para 1 s, e depois girando em um sentido anti-horário (16°/s2 acelerando para 120°/s, posteriormente desacelerando a 48°/s2 para chegar a 0°s). O ciclo no sentido horário-counter-clock requer ~10 s para atingir sua posição inicial. Ratos são colocados cabeça em direção ao centro do dispositivo de rotação de roda gigante. Clique aqui para ver uma versão maior deste valor.

Figure 2
Figura 2: Resultados de feixe de equilíbrio. Tempo levado para transversar o feixe (média ± desvio padrão). O eixo Y indica segundos levados para transversalrver o feixe. Os ratos foram treinados por três dias antes da avaliação, a fim de obter um desempenho estável no balanço da viga10. A avaliação prévia com o movimento vertical do elevador ou dispositivos de roda gigante aumenta significativamente o tempo de travessia. O teste estatístico foi realizado por teste t de duas caudas com correção de Bonferroni entre controle e todos os outros grupos. indica p < 0,001. Clique aqui para ver uma versão maior deste valor.

Figure 3
Figura 3: Resultados da contagem de defecação. Resultados de movimento vertical do elevador (a) Painel esquerdo – Contagem de defecação (média ± desvio padrão) por grupo para 0,8 Hz, 0,4 Hz e movimento vertical de 0,2 Hz, além de um grupo de controle, chamou o grupo estático de 0 Hz. Note o aumento significativo na defecação para 0,8 Hz e 0,4 Hz, conforme indicado pelos asteriscos. Resultados de rotação de roda gigante(b) Painel direito – Contagem de defecação (média ± desvio padrão) para grupo de ratos de rotação de roda gigante (ver descrição para paradigma de velocidade angular) e um grupo de controle (0 Hz), chamado de grupo estático. Observe o aumento significativo da defecação para o grupo de rotação, conforme indicado pelos asteriscos. Clique aqui para ver uma versão maior deste valor.

Figure 4
Figura 4: Distância total percorrida. aResultados de movimento vertical do elevador. Este painel consiste em distância total percorrida (média ± desvio padrão) por cm no teste de locomoção de campo aberto por grupo por grupo por 0,8 Hz, 0,4 Hz e movimento vertical de 0,2 Hz, além de um grupo de controle (estático). Observe a diminuição significativa da distância total percorrida por 0,8 Hz e 0,4 Hz, conforme indicado pelos asteriscos. O teste estatístico foi realizado por teste t de duas caudas com correção de Bonferroni entre controle e todos os outros grupos. ** indica p < 0,01 e *** indica p < 0,001. (b)Resultados de rotação de roda gigante. Este painel consiste em distância total percorrida (média ± desvio padrão) por cm no teste de locomoção de campo aberto para grupo de ratos de rotação de roda gigante e um grupo de controle (estático). Observe a diminuição significativa da distância total indicada pelos asteriscos. O teste estatístico foi realizado por teste t de duas caudas entre controle e grupo de rodas gigantes. indica p < 0,001. Clique aqui para ver uma versão maior deste valor.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

O presente estudo descreve a avaliação de respostas autônomas ao movimento passivo em roedores usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante. Esses equipamentos e procedimentos podem ser facilmente adotados para outros roedores e existem várias modificações dos ensaios para confirmar o funcionamento vestibular em diferentes circunstâncias, como durante o desafio farmacológico ou intervenções cirúrgicas. Pesquisas em MS provocadas pela estimulação vestibular levaram à teoria de que conflitos sensoriais ou incompatibilidade neuronal causados pelo recebimento de informações visuais que diferem do modelo interno antecipado do ambiente2,3 leva a reação autônoma que provoca sintomas como desconforto epigárrico, náusea e/ou vômito1. Outras teorias têm descrito que a instabilidade postural, como ocorreria em um navio de iaas4,5,provoca reação autônoma. Apesar desses avanços significativos, permanecem questões que podem ser auxiliadas por protocolos de avaliação, como movimento vertical do elevador e rotação de rodas gigantes.

Um passo crítico para o feixe de equilíbrio é o treinamento. Ratos devem ser motivados e ter confiança para atravessar a viga; caso contrário, o equilíbrio (ou seja, integridade vestibular) não é medido em um período de avaliação. Para pesquisadores interessados em examinar a ansiedade14,17 ou lesão traumática15,16,17, outros comportamentos durante o treinamento ou cruzamento de feixe de equilíbrio podem ser relevantes. Por exemplo, na pesquisa de ansiedade usando o feixe de equilíbrio, defecação, urinação, quedas e erros podem ser enumerados14. Também em algumas áreas de pesquisa, os roedores que não têm motivação para atravessar o feixe podem ser avaliados de forma diferente13,14,15,16,17. É fundamental durante o movimento vertical do elevador e rotação da roda gigante para garantir que a caixa seja fechada e fechada com segurança, já que roedores em uma caixa sem segurança podem ser impulsionados e feridos. Além disso, certifique-se de que os roedores sejam avaliados na caixa de campo aberto28,29,30 apenas uma vez e imediatamente após o movimento vertical do elevador e roda gigante para garantir a rápida avaliação dos efeitos vestibulares.

Os protocolos acima mencionados utilizam medidas quantitativas. Portanto, as limitações para o feixe de equilíbrio incluem roedores que não têm motivação para atravessar a viga, pois o equilíbrio é o comportamento que está sendo avaliado. As limitações para o movimento vertical do elevador e ensaios de defecação de rotação de rodas gigantes incluem a necessidade de um roedor bem alimentado. Isso é necessário; caso contrário, o roedor pode não experimentar uma reação autônoma robusta à estimulação vestibular. É uma boa prática observar a contagem de defecações da linha de base para um período normal/controle de 2,5 h de duração para fins comparativos.

Outra consideração importante ao usar os protocolos e interpretar resultados, são as diferenças nas respostas do enjoo em espécies. Em humanos, e também em outras espécies como cães e gatos, retching e vômitos são dois sintomas comuns31,32,33,34. Ratos, por outro lado, não podem vomitar. No entanto, os ratos apresentam sintomas de doença de movimento, como pica35,36, resposta de fecação37, e redução espontânea de locomoção35,38. Além disso, os seres humanos dependem principalmente da visão para entrada sensorial e doença de movimento provavelmente está relacionada ao conflito sensorial com o sistema vestibular2,39. Em ratos, especialmente ratos albinos (por exemplo, Sprague-Dawley), a visão não é tipicamente o sentido primário, mas sim somatosensorial (bigodes). Isso pode levar a diferenças entre espécies nas contribuições relativas de diferentes insumos sensoriais para o conflito. Por fim, há diferenças de espécies entre roedores na resposta à doença do movimento. Por exemplo, o rato de megera (Suncus murinus) é capaz de ter uma resposta emética40,41.

Coletivamente, os procedimentos descritos formam uma pequena bateria de avaliações para o exame e avaliação de reações autônomas em roedores durante a doença do movimento6,7,8,9,10,11. As técnicas atuais aliadas a medidas mais fisiológicas, como a eletrofisiologia, para determinar as consequências corticais durante a estimulação vestibular, seriam de grande interesse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Os autores não declaram conflitos financeiros ou não financeiros de interesses. O dispositivo FWR tem uma patente na China: ZL201120231912.1.

Acknowledgments

Este trabalho foi apoiado em parte pelo Conselho de Bolsas de Pesquisa de Hong Kong, Programa de Carreira Inicial, Projeto #21201217 para C. L. O dispositivo FWR tem uma patente na China: ZL201120231912.1.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Elevator vertical motion device Custom Custom-made Elevator vertical motion device to desired specifications
Ethovision Noldus Information Technology Video tracking software
Ferris-wheel rotation device Custom Custom-made Ferris-wheel rotation device to desired specifications
Latex, polyvinyl or nitrile gloves AMMEX Use unpowdered gloves 8-mil
Open field box Custom Darkened plexiglass box with IR camera
Rat or mouse JAX labs Any small rodent
Small rodent cage Tecniplast 1284L
Wooden beam and stools Custom Custom-made wooden beam and stools to specifications indicated

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Balaban, C. D. Vestibular autonomic regulation (including motion sickness and the mechanism of vomiting). Current Opinion in Neurology. 12, 29-33 (1999).
  2. Reason, J. T. Motion sickness adaptation: a neural mismatch model. Journal of the Royal Society of Medicine. 71, 819-829 (1978).
  3. Keshavarz, B., Hettinger, L. J., Kennedy, R. S., Campos, J. L. Demonstrating the potential for dynamic auditory stimulation to contribute to motion sickness. PLOS One. 9, 101016 (2014).
  4. Stoffregen, T. A., Chen, F. C., Varlet, M., Alcantara, C., Bardy, B. G. Getting your sea legs. PLoS One. 8, 66949 (2013).
  5. Smart, L. J. Jr, Pagulayan, R. J., Stoffregen, T. A. Self-induced motion sickness in unperturbed stance. Brain Research Bulletin. 47, 449-457 (1998).
  6. Wang, J. Q., et al. Temporal change in NMDA receptor signaling and GABAA receptor expression in rat caudal vestibular nucleus during motion sickness habituation. Brain Research. 1461, 30-40 (2012).
  7. Cai, Y. L., et al. Glutamatergic vestibular neurons express FOS after vestibular stimulation and project to the NTS and the PBN in rats. Neuroscience Letters. 417, 132-137 (2007).
  8. Cai, Y. L., et al. Decreased Fos protein expression in rat caudal vestibular nucleus is associated with motion sickness habituation. Neuroscience Letters. 480, 87-91 (2010).
  9. Wang, J. Q., Qi, R. R., Zhou, W., Tang, Y. F., Pan, L. L., Cai, Y. Differential Gene Expression profile in the rat caudal vestibular nucleus is associated with individual differences in motion sickness susceptibility. PLoS One. 10, 0124203 (2015).
  10. Zhou, W., et al. Sex and age differences in motion sickness in rats: The correlation with blood hormone responses and neuronal activation in the vestibular and autonomic nuclei. Frontiers in Aging Neuroscience. 9, 29 (2017).
  11. Wang, J., Liu, J., Pan, L., Qi, R., Liu, P., Zhou, W., Cai, Y. Storage of passive motion pattern in hippocampal CA1 region depends on CaMKII/CREB signaling pathway in a motion sickness rodent model. Scientific Reports. 7, 43385 (2017).
  12. Qi, R., et al. Anti-cholinergics mecamylamine and scopolamine alleviate motion sickness-induced gastrointestinal symptoms through both peripheral and central actions. Neuropharmacology. 146, 252-263 (2019).
  13. Luong, T. N., Carlisle, H. J., Southwell, A., Patterson, P. H. Assessment of motor balance and coordination in mice using the balance beam. Journal of Visualized Experiments. (49), e2376 (2011).
  14. Kalueff, A. V., Minasyan, A., Tuohimaa, P. Behavioural characterization in rats using the elevated alley Suok test. Behavioural Brain Research. 30 (1), 52-57 (2005).
  15. Piot-Grosjean, O., Wahl, F., Gobbo, O., Stutzmann, J. M. Assessment of sensorimotor and cognitive deficits induced by a moderate traumatic injury in the right parietal cortex of the rat. Neurobiology of Disease. 8 (6), 1082-1093 (2001).
  16. Goldstein, L. B., Davis, J. N. Beam-walking in rats: Studies towards developing an animal model of functional recovery after brain injury. Journal of Neuroscience Methods. 31 (2), 101-107 (1990).
  17. Sweis, B. M., et al. modified beam-walking apparatus for assessment of anxiety in a rodent model of blast traumatic brain injury. Behavioural Brain Research. 296, 149-156 (2016).
  18. Hess, B. J., Dieringer, N. Spatial organization of the maculo-ocular reflex of the rat: Responses during off-vertical axis rotation. European Journal of Neuroscience. 2, 909-919 (1990).
  19. Armstrong, P. A., et al. Preserved otolith organ function in caspase-3-deficient mice with impaired horizontal semicircular canal function. Experimental Brain Research. 233 (6), 1825-1835 (2015).
  20. Riccio, D. C., Thach, J. S. Jr Response suppression produced by vestibular stimulation in the rat. Journal of the Experimental Analysis of Behavior. 11 (4), 479-488 (1968).
  21. Rabbath, G., et al. Abnormal vestibular control of gaze and posture in a strain of a waltzing rat. Experimental Brain Research. 136, 211-223 (2001).
  22. Brettler, S. C., et al. The effect of gravity on the horizontal and vertical vestibulo-ocular reflex in the rat. Experimental Brain Research. 132, 434-444 (2000).
  23. Hutchison, S. L. Taste aversion in albino rats using centrifugal spin as an unconditioned stimulus. Psychological Reports. 33 (2), 467-470 (1973).
  24. Green, K. F., Lee, D. W. Effects of centrifugal rotation on analgesia and conditioned flavor aversions. Physiology & Behavior. 40 (2), 201-205 (1987).
  25. Tse, Y. C., et al. Developmental expression of NMDA and AMPA receptor subunits in vestibular nuclear neurons that encode gravity-related horizontal orientations. Journal of Comparative Neurology. 508 (2), 343-364 (2008).
  26. Lai, C. H., Tse, Y. C., Shum, D. K., Yung, K. K., Chan, Y. S. Fos expression in otolith-related brainstem neurons of postnatal rats following off-vertical axis rotation. Journal of Comparative Neurology. 470 (3), 282-296 (2004).
  27. Lai, S. K., Lai, C. H., Yung, K. K., Shum, D. K., Chan, Y. S. Maturation of otolith-related brainstem neurons in the detection of vertical linear acceleration in rats. European Journal of Neuroscience. 23 (9), 2431-2446 (2006).
  28. Aitken, P., Zheng, Y., Smith, P. F. Ethovision analysis of open field behaviour in rats following bilateral vestibular loss. Journal of Vestibular Research. 27 (2-3), 89-101 (2017).
  29. Gao, V., Vitaterna, M. H., Turek, F. W. Validation of video motion-detection scoring of forced swim test in mice. Journal of Neuroscience Methods. 235, 59-64 (2014).
  30. Lopes, G., et al. Bonsai: an event-based framework for processing and controlling data streams. Frontiers in Neuroinformatics. 9, 7 (2015).
  31. Conder, G. A., Sedlacek, H. S., Boucher, J. F., Clemence, R. G. Efficacy and safety of maropitant, a selective neurokinin 1 receptor antagonist, in two randomized clinical trials for prevention of vomiting due to motion sickness in dogs. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics. 31, 528-532 (2008).
  32. Percie du Sert, N., Chu, K. M., Wai, M. K., Rudd, J. A., Andrews, P. L. Telemetry in a motion-sickness model implicates the abdominal vagus in motion-induced gastric dysrhythmia. Experimental Physiology. 95, 768-773 (2010).
  33. Lackner, J. R. Motion sickness: more than nausea and vomiting. Experimental Brain Research. 232, 2493-2510 (2014).
  34. Lucot, J. B. Effects of naloxone on motion sickness in cats alone and with broad spectrum antiemetics. Autonomic Neuroscience. 202, 97-101 (2016).
  35. McCaffrey, R. J. Appropriateness of kaolin consumption as an index of motion sickness in the rat. Physiology & Behavior. 35, 151-156 (1985).
  36. Horn, C. C., et al. Why can't rodents vomit? A comparative behavioral, anatomical, and physiological study. PLoS One. 8 (4), 60537 (2013).
  37. Ossenkopp, K. -P., Frisken, N. L. Defecation as an index of motion sickness in the rat. Physiological Psychology. 10, 355-360 (1982).
  38. Ossenkopp, K. P., Rabi, Y. J., Eckel, L. A., Hargreaves, E. L. Reductions in body temperature and spontaneous activity in rats exposed to horizontal rotation: abolition following chemical labyrinthectomy. Physiology & Behavior. 56, 319-324 (1994).
  39. Oman, C. M. Motion sickness: a synthesis and evaluation of the sensory conflict theory. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 68, 294-303 (1990).
  40. Hu, D. L., et al. Emesis in the shrew mouse (Suncus murinus) induced by peroral and intraperitoneal administration of staphylococcal enterotoxin A. Journal of Food Protection. 62, 1350-1353 (1999).
  41. Ueno, S., Matsuki, N., Saito, H. Suncus murinus as a new experimental model for motion sickness. Life Sciences. 43, 413-420 (1988).

Tags

Comportamento Edição 156 doença de movimento feixe de equilíbrio roatação de roda gigante movimento vertical do elevador roedores exame de campo aberto
Avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Manno, F. A. M., Pan, L., Mao, Y.,More

Manno, F. A. M., Pan, L., Mao, Y., Su, Y., Manno, S. H. C., Cheng, S. H., Lau, C., Cai, Y. Assessing the Autonomic and Behavioral Effects of Passive Motion in Rats using Elevator Vertical Motion and Ferris-Wheel Rotation. J. Vis. Exp. (156), e59837, doi:10.3791/59837 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter